3. Resultados e Discussão
3.8 HPLC
O pólen apícola é muito rico em compostos fenólicos, os quais são os principais responsáveis pelas suas atividades bioativas (Silva et al., 2006, Leja et al., 2007; Mărghitas et al., 2009).
Os compostos fenólicos foram identificados por HPLC/DAD. Os cromatogramas obtidos apresentam-se nas figuras 17 e 18. Os picos foram identificados por comparação do seu tempo de retenção com o tempo de retenção dos padrões utilizados. A identidade do pico foi confirmada através da sobreposição do espetro de cada pico com os padrões correspondentes. A numeração indica o composto fenólico ou a possível família identificada no pólen apícola.
Como foi referido no capítulo 2 secção 2.6.1, efetuaram-se dois métodos de extração dos compostos fenólicos; 1) utilização de Amberlite XAD-2 e; 2) extração metanólica.
Os resultados obtidos apresentam-se nas figuras 17 e 18 e nas tabelas 18 e 19 após extração com Amberlite XAD-2 e metanol, respetivamente.
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Figura 17. Compostos fenólicos identificados no pólen apícola desidratado e congelado após extração com amberlite.
Tabela 18. Tempo de retenção (T.r) e compostos fenólicos identificados por HPLC nas amostras de pólen apícola desidratado e congelado após extração com amberlite.
Amostras Pico T.r (min.) Compostos Fenólicos
B0 fresco 1 59,938 Quercetina
2 64,552 Campferol
B0 seco 1 60,345 Quercetina
B1 1 59,209 Quercetina
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Figura 18. Compostos fenólicos identificados no pólen apícola desidratado e congelado após extração metanólica.
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Tabela 19. Tempo de retenção (T.r) e possíveis famílias de compostos identificados por HPLC nas amostras de pólen apícola após extração com metanol.
Amostras Pico T.r (min.) Possível Família
B0 fresco 1 52,7 ± 4,08 Miricetina 2 54,4 ± 2,29 Quercetina 3 56,1 ± 0,89 Flavonas 56,4 ± 0,98 56,8 ± 1,10 57,6 ± 1,39 4 61,8 ± 1,95 Desconhecida 5 64,3 ± 2,13 Crisina B0 seco 1 50,5 ± 1,60 Flavonas 51,0 ± 1,81 51,4 ± 2,10 51,9 ± 2,19 2 61,0 ± 1,13 63,4 ± 2,32 Desconhecido 66,5 ± 1,74 3 69,9 ± 1,52 Crisina B1 1 49,5 ± 1,85 Miricetina 2 55,5 ± 0,03 Flavonas 55,9 ± 0,06 56,3 ± 0,13 56,7 ± 0,43 57,3 ± 0,56 3 62,0 ± 0,97 62,4 ± 1,04 Desconhecida 63,3 ± 1,16 4 67,5 ± 1,27 Crisina B2 1 52,3 ± 3,26 Flavonas 53,1 ± 3,31 54,1 ± 2,39 55,0 ± 1,88 55,9 ± 1,72 2 58,8 ± 2,69 60,9 ± 0,32 Desconhecida 61,9 ± 0,92 3 68,8 ± 0,98 Crisina
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Relativamente à extração metanólica, constatou-se que os compostos fenólicos presentes nas várias amostras desidratadas foram idênticas, à exceção da miricetina que apenas foi encontrada na amostra B1.
No que diz respeito à amostra que sofreu dois processos de conservação, verificou-se que a miricetina e a quercetina foram detetadas na amostra congelada e não na desidratada, ou seja, verifica-se que amostra de pólen congelado apresentou mais compostos, quando comparada com a amostra de pólen desidratado, sugerindo que a secagem pode influenciar a qualidade e a quantidade dos compostos fenólicos presentes no pólen apícola.
Da análise dos resultados após extração com Amberlite XAD-2, verificam-se diferenças nos compostos fenólicos nas várias amostras de pólen estudado, sendo que, apenas a quercetina foi encontrada em todos os extratos, à exceção da amostra B2. Verificou-se também, que a extração com metanol foi mais eficaz na extração dos compostos fenólicos do que a extração com Amberlite.
Os nossos resultados são corroborados pelas observações de Carpes et al. (2012). Este autor constatou que a quantidade de compostos fenólicos do pólen quando extraídos com etanol foi superior à obtida nas extrações utilizando com resina.
Da análise das tabelas 18 e 19, verifica-se na extração de compostos fenólicos com Amberlite, a quercetina foi o composto dominante. Enquanto que, na extração metanólica foram identificadas possíveis famílias de compostos fenólicos, sendo as flavonas e a crisina as predominantes.
76
Considerações finais
Com o presente trabalho pretendeu-se avaliar o efeito de diferentes condições de armazenamento nas caraterísticas nutricionais e microbiológicas, bem como, nas propriedades bioativas de pólen apícola biológico de diferentes origens botânicas.
Os resultados obtidos sugerem as seguintes considerações finais:
Rosaceae seguida da Fagaceae foram as famílias botânicas predominantes nas amostras de pólen analisadas.
Os vários parâmetros microbiológicos encontravam-se dentro dos limites estipulados nas especificações consultadas, indicando que o pólen apícola é seguro do ponto de vista microbiológico.
Os parâmetros físico-químicos apresentavam valores dentro do estipulado por lei, à exceção do teor de humidade, em todas as amostras de pólen desidratado, sendo necessário melhorar o processo de secagem e o armazenamento do pólen. Em todas as amostras de pólen analisadas quer sejam desidratadas ou
congeladas, o ácido gordo mais abundante foi o ácido linoleico (C18:2), seguido dos ácidos linolênico (C18:3) e oleico (C18:1).
Foram isoladas duas espécies de leveduras, Rhodotorula mucilaginosa no pólen desidratado e Cryptococcus laurentii no pólen congelado.
O teor de compostos fenólicos totais foi superior no pólen congelado, enquanto os flavonóides totais foram mais elevados no pólen desidratado.
O pólen congelado apresentou uma atividade antioxidante mais elevada e maior quantidade de compostos fenólicos, determinados por HPLC.
Todos os extratos de pólen apresentaram atividade antimicrobiana, a inibição dependeu do extrato e do microrganismo em estudo
O extrato de pólen congelado induziu uma inibição mais acentuada do que o desidratado, contra as bactérias Gram-negativas e Gram-positivas.
A congelação foi o processo que preservou melhor as caraterísticas nutricionais do pólen apícola. Contudo, os resultados obtidos no presente estudo demonstraram que o pólen apícola, independentemente do processo de conservação, constitui uma boa fonte de compostos fenólicos, sugerindo que este produto possa ser útil na prevenção de doenças. De facto, o pólen poderia ser usado em combinação com os antibióticos, uma vez que até ao momento não
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foram encontrados microrganismos resistentes a este produto, tendo sempre em atenção as reações alergícas em pessoas sensíveis.
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