Órgão de divulgação científca e tecnológica do Hospital de Clínicas de Porto Alegre e da Faculdade de Medicina da Universidade Federal do Rio Grande do Sul.
PRODUZIDA COM APOIO DA FUNDAÇÃO MÉDICA DO RIO GRANDE DO SUL
Clinical & Biomedical Research – Volume 34(Supl) – setembro 2014 ISSN: 0101-5575 e-ISSN: 2357-9370
Indexada no LILACS e LATINDEX http://seer.ufrgs.br/hcpa HOSPITAL DE CLÍNICAS DE PORTO ALEGRE
Presidente
Prof. Amarilio Vieira de Macedo Neto Vice-presidente Médica
Profª. Nadine Clausell
Vice-presidente Administrativo Bel. Tanira Andreatta Torelly Pinto
Coordenador do Grupo de Pesquisa e Pós-graduação Prof. Eduardo Pandolfi Passos
Coordenadora do Grupo de Enfermagem Profª. Ana Maria Müller de Magalhães
UNIVERSIDADE FEDERAL DO RIO GRANDE DO SUL Reitor
Prof. Carlos Alexandre Netto
FACULDADE DE MEDICINA DA UFRGS Diretor
Prof. José Geraldo Lopes Ramos
ESCOLA DE ENFERMAGEM DA UFRGS Diretora
Profª. Eva Neri Rubim Pedro Editores Anteriores
Prof. Sérgio Menna Barreto – 1986 a 1992 Prof. Luiz Lavinsky – 1993 a 1996
Prof. Eduardo Pandolfi Passos – 1997 a 2003 Profª. Sandra Pinho Silveiro – 2004 a 2010
Prof. Francisco José Veríssimo Veronese – 2011 a 2012 Prof. Afonso Luís Barth - 2013
Editor Chefe
Prof. Alexandre Prehn Zavascki Editora Gerente
Bibl. Rosa Lúcia Vieira Maidana Editores Associados
Afonso Luís Barth (BR) André Kalil (USA)
Cleber Rosito Pinto Kruel (BR) Eliseu Alves Waldman (BR) Flávia Kessler Borges (BR) Gilberto Friedman (BR) Jason M. Pogue (USA) José Roberto Goldim (BR) Paulo F. Taitson (BR)
Renato Soibelmann Procianoy (BR) Tazio Vanni (BR)
Tyrone L. Pitt (UK) Ursula Matte (BR)
Comissão Editorial Adelino Leite-Moreira (PT) Andreia Biolo (BR) Antonina Wasuna (ZA) Aziz Khan (CN) Bruno Peixoto (PT) Chika Hayash i(CH) Clécio Homrich da Silva (BR) Cristiane Bauermann Leitão (BR) Daisy Crispim Moreira (BR) Eduardo Pandolfi Passos (BR) Felipe Dal Pizzol (BR)
Felipe Proenço de Oliveira (BR) Fernanda de Pinho Silveira (USA) Francisco José Veríssimo Veronese (BR) Gabriela Correa Souza (BR)
Gisele Alsina Nader Bastos (BR) Hector Eduardo Castro Jaramillo (CO) Joiza Lins Camargo (BR)
José Angel Lorente (ES) Juliana Avila Duarte (BR) Leonardo Modesti Vedolin (BR) Letícia Schwertz Weinert (BR) Lúcia Campos Pellanda (BR) Luciana Neves Nunes (BR) Luís Henrique Canani (BR) Marcelo Fernandes Capilheira (BR) Marcelo Rodrigues Gonçalves (BR) Marcelo Zubaran Goldani (BR) Marco Mesa-Frias (USA)
Maria de Lourdes Veronese Rodrigues (BR) Marino Muxfeldt Bianchin (BR)
Mauricio Kunz (BR) Nicolas Nin (UY) Otávio Berwanger (BR) Pablo Nery (CA) Rafael Roesler (BR) Rafael Selbach Schefel (BR) Ricardo Enrique Felberbaum (DE) Roberto Umpierre (BR)
Rodrigo Afonseca-Bressan (BR) Sandra Costa Fuchs (BR) Sandra Pinho Silveiro (BR) Tiago Chulan (BR)l Tiago Leal Ghezzi (BR) Yanti Lim (ID) Editoração Eletrônica Romilda Teofano
Bruna Michel Engel – Bolsista Laurence Pilati da Silva - Estagiário Capa
Luis Fernando Miguel
COMISSÃO ORGANIZADORA
Eduardo Pandolfi Passos: Coordenador Geral Ursula da Silveira Matte: Coordenadora Adjunta
Lilian Cordova do Espirito Santo: Coordenadora Adjunta
Aline Castello Branco Mancuso
Anne Marie Weissheimer Camila Caroline Barths Camila Schafer
Debora Feijo Villas Boa Vieira Eliane Reisdorfer
Elisa Kopplin Ferraretto Fabiola Schons Meyer José Roberto Goldim Leandro Totti Cavazzola Luciana Neves Nunes
Luciano Santos Pinto Guimarães Luis Fernando Miguel
Marcia Cristina Willer Gonzalez Marcia Mocellin Raymundo Maria Aparecida Lima da Silva Marta Justina Giotti Cioato Michael Everton Andrades Patrícia Ashton Prolla
Patricia Koehler Dos Santos Patricia Luciana da Costa Lopez Paula Aver Bretanha Ribeiro Paula Barros Terraciano
Paulo Roberto Stefani Sanches Querlei Scremin
Rafael Leal Zimmer Raquel Schneider
Renato Soibelmann Procianoy Romilda Aparecida Teofano Rosa Kucyk
Rosa Lucia Vieira Maidana Rosane Paixão Schlatter Silvia Brustolin Pitt Suzi Alves Camey Taiane Alves Vieira Vania Naomi Hirakata
Vera Lorentz de Oliveira Freitas
COMISSÃO CIENTÍFICA
Adriana Roese
Alessandro Bersh Osvaldt Alessandro Wajner Aletheia Peters Bajotto Alexandre Bacelar Alexandre Simões Dias Alice Manica Muller
Aline Castello Branco Mancuso Alvaro Macedo Laureano Amália de Fátima Lucena Ana Carolina Brusius Facchin Ana Claudia Schneider Ana Helena da Rosa Paz Ana Helena Garcia Pinho Ana Lucia Abujamra Ana Paula Alegretti
Ana Paula dos Santos Correa Ana Paula Vanz
Andreia Biolo Angela Sitta
Annelise de Carvalho Gonçalves Beatriz Antunes de Mattos Betina Soudateli Paim Bianca Hocevar de Moura Bianca Souza
Brasil Silva Neto Bruna Pasqualini Genro Camila Giugliani Carolina Bertoluci Carolina Nor Carolina Uribe Cruz Caroline Nespolo de David Célia Mariana Barbosa de Souza Clarissa Gutierrez Carvalho Claudia Hallal Alves Gazal Cristiano Feijó Andrade Cristiano Augusto Franke Cristina Dickie de Castilhos
Cristina Brinckmann Oliveira Netto Cristina Soares Melnik
Daisy Crispim Moreira Daniel Umpierre
Daniela Fernandes Marques
Débora Villas Boas Vieira Denise Entrudo Pinto Denise Tolfo Silveira
Desiree Luzardo Cardozo Bianchessi Diovane Ghignatti da Costa
Dória Migotto Leães Edimarlei Gonsales Valerio Eduardo Cremonese Filippi Chiela Eliana de Andrade Trotta
Elton Luiz Ferlin Fabiane Gonçalves Fábio Tremea Cichelero Fabiola Schons Meyer Félix Henrique Paim Kesler Fernanda Bender
Fernanda Camboim Rockett Fernanda d’Athayde Rodrigues Fernanda dos Santos de Oliveira Fernanda dos Santos Pereira Fernanda Endler Valiatti Fernanda de Souza Zamo Roth Fernanda Sales Luiz Vianna Fernanda Sperb Ludwig Filippo Pinto e Vairo Franciele Ramos Figueira Francisca Mosele Moutinho
Francisco Jorge Arsego Quadros de Oliveira
Gabriela Correa Souza Gabriela Pasqualim Gabriele Nunes Souza
Gabriella Rejane dos Santos Dalmolin Gilberto Schlatter
Gisela Maria Souto de Moura Gisele Gus Manfro
Graziella Badin Aliti Guilherme Baldo
Guilherme Becker Sander Guilherme da Silva Mazzini Guilherme Geib
Helena Ayako Sueno Goldani Helga Geremias Golveia Hugo Oliveira
Isabel Cristina Echer Jacó Fernando Schneider Jacqueline Kohut Martinbiancho Joanna D’ Arc Lyra Batista Joiza Lins Camargo Jonas Alex Morales Saute Keila Maria Mendes Cereser Kristiane Michelin Tirelli Leandro Barbosa de Pinho Leila Beltrami Moreira Lisiane Girardi Paskulin Lucas França Garcia Lucia Maria Kliemann Luciana dos Santos Luciana Giugliani Luciana Neves Nunes
Luciano Santos Pinto Guimarães Lucieli Ceolin
Luis Alberto dos Santos Maira Graeff Burin Manoel San’tana Filho Manoela Domingues Martins Marcia Camaratta Anton Márcia Koja Breigeiron Marcia Mocellin Raymundo Marcia Ziebel Ramos
Maria Aparecida Lima da Silva
Maria Elza kazumi Yamaguti Dorfmann Maria Teresa Vieira Sanseverino Marilise Oliveira Mesquita Mariluce Riegel Brechner Marina Siebert
Marli Maria Knorst
Mauricio Guidi Saueressig Mauricio Pimentel
Michael Everton Andrades Mirela Jobim de Azevedo Miriam Romiti
Monica Vinhas de Souza Murilo Foppa
Neusa Sica da Rocha Oly Campos Corleta Otávio Azeredo
Patricia Koehler dos Santos Patricia Luciana da Costa Lopez Patricia Gnieslaw de Oliveira
Paula Aver Bretanha Ribeiro Paula Figueiredo da Silva Paula Barros Terraciano Paulo Ricardo de Alencastro Paulo Jose Cardoso Vieira Paulo Jose Cauduro Marostica Paulo Roberto Stefani Sanches Pedro Magalhães
Pedro Schestatsky
Pedro Vieira da Silva Magalhães Priccila Zuchinali
Priscila Raupp da Rosa Rejane Gus Kessler
Renato Gorga Bandeira de Mello Ricardo de Souza Kuchenbecker Ricardo Rosito
Rodrigo Caprio Leite de Castro Rodrigo Minuto Paiva
Rosana Scalco Rosane Brondani Rosane Maria Nery Rosane Paixão Schlatter Ruy Silveira Moraes Filho Sandra Leistner Segal Sandra Pinho Silveiro Silvani Herber Silvia Brustolin Pitt Silvia Liliana Cossio Simone Augusta Finard Simone Capsi Pires Simone Silveira Pasin Suzana Müller
Taiane Alves Vieira Tassia Tonon Tatiele Nalin Temis Maria Felix Thais Lampert Monte Thais Ortiz Hammes Tiago Elias Rosito Valeska Lizzi Lagranha Vanessa Krebs Genro Vania Naomi Hirakata
Vera Lorentz de Oliveira Freitas Vinicius Coelho Carrard
Vitor Magnus Martins Wolnei Caumo
O estado da arte!
A Semana Científica do Hospital de Clínicas de Porto Alegre, organizada pelo Grupo de Pesquisa e Pós-Graduação (GPPG), é um evento anual, de expressiva repercussão, com convidados nacionais e internacionais, e que tem por objetivo valorizar as atividades de ensino, pesquisa e inovação.
Este evento é realizado de forma ininterrupta desde 1981, estando atualmente na sua 34ª edição. Este ano, inscreveram-se 885 trabalhos, sendo aprovados 712 para pôster e 32 para apresentação oral.
Em 2014, a 34ª Semana Científica do HCPA tem como tema principal “O Estado da Arte”. Dessa forma, a Semana Científica promove a discussão e o estímulo a novas tecnologias assistenciais e de ensino, buscando formar recursos humanos, estimular experiências inovadoras no ensino, gerar e disseminar conhecimentos, e estimular o desenvolvimento científico e tecnológico na área da saúde do país.
É parte da responsabilidade institucional divulgar os resultados dos investimentos através da apresentação das pesquisas realizadas na instituição, principalmente. Desta forma, uma inovação voltada à popularização do conhecimento científico será a apresentação dos melhores trabalhos escolhidos em sessões prévias, em linguagem leiga, para uma banca de jornalistas. Com isso, pretende-se divulgar os trabalhos realizados no hospital também para a comunidade em geral.
Outra novidade é o convite a escolas públicas nas quais foram desenvolvidos projetos de pesquisa em colaboração com o HCPA. Nesta atividade, os pesquisadores farão a apresentação dos resultados para os estudantes e professores que participaram da pesquisa.
O programa científico do evento pretende apresentar um mapeamento do estágio
atual do conhecimento em áreas distintas, proporcionando pontos de discussão no
meio científico. Sendo assim, a programação conta com conferências de temas atuais, tais
como cirurgia robótica, genética do câncer, transplantes, além de mesas-redondas, cursos e
apresentação de temas livres e pôsteres.
A coordenação da 34ª Semana Científica do HCPA agradece a dedicação da comissão organizadora, aos apoiadores do evento, a Coordenadoria de Comunicação do HCPA e a toda comunidade científica participante.
Prof. Eduardo Pandolfi Passos Coordenador
Profª Lilian Cordova do Espírito Santo Coordenadora Adjunta
Profª Ursula da Silveira Matte
Coordenadora Adjunta
SUMÁRIO
CIÊNCIAS BIOLÓGICAS
BIOCIÊNCIAS
Biologia Celular ... 11
Biologia Molecular .... 21
Bioquímica ... 31
Morfologia e Fisiologia ... 45
Microbiologia ... 50
CIÊNCIAS DA SAÚDE EDUCAÇÃO FÍSICA ... 53
ENFERMAGEM Gestão em Saúde e Enfermagem e Organização do Trabalho ... 57
Políticas e Avaliação em Saúde e Enfermagem ... 63
Práticas e Cuidado de Enfermagem na Saúde da Mulher, Criança e Adolescente ... 66
Práticas e Cuidado de Enfermagem na Saúde do Adulto e do Idoso ... 71
Promoção em Saúde e em Enfermagem ... 76
Tecnologia do Cuidado em Enfermagem e Saúde ... 79
FARMÁCIA Análises Clínicas ... 82
Drogas, Fármacos e Medicamentos ... 83
Farmácia Geral ... 89
FISIATRIA/FISIOTERAPIA ... 91
FÍSICA MÉDICA ... 100
FONOAUDIOLOGIA ... 101
MEDICINA Anestesiologia ... 109
Cardiologia Cardiopatia Isquêmica ... 115
Cardiologia Geral ... 119
Hipertensão Arterial Sistêmica ... 127
Cirurgia Cirurgia do Aparelho Digestivo ... 128
Cirurgia Cardiovascular ... 131
Cirurgia Geral ... 133
Cirurgia Pediátrica ... 135
Cirurgia Plástica ... 136
Cirurgia Torácica ... 138
Dermatologia ... 141
Endocrinologia ... 141
Epidemiologia ... 151
Gastroenterologia ... 164
Genética Humana/Médica ... 169
Ginecologia/Obstetrícia ... 189
Hematologia ... 193
Nefrologia ... 197
Neurologia ... 199
Oncologia ... 202
Ortopedia/Traumatologia ... 208
Otorrinolaringologia/Oftalmologia ... 209
Pediatria Pediatria Geral ... 218
Neonatologia ... 226
Pneumologia ... 228
Psiquiatria Álcool e Drogas ... 233
Psiquiatria Geral ... 235
Psiquiatria Infantil ... 247
Radiologia ... 250
Reumatologia ... 251
Transplantes ... 257
Urgência e Emergência ... 260
Urologia ... 261
Nutrição Nutrição do Adulto ... 264
Nutrição Geral ... 272
Nutrição Infantil ... 277
ODONTOLOGIA ... 283
SAÚDE COLETIVA ... 286
CIÊNCIAS HUMANAS EDUCAÇÃO ... 298
PSICOLOGIA ... 299
CIÊNCIAS SOCIAIS APLICADAS ADMINISTRAÇÃO... 304
Gestão de Pessoas ... 306
ENGENHARIAS
Engenharia Biomédica ... 307
OUTRAS
Bioética e Direito em Saúde ... 310 ERRATA ... 316 ÍNDICE DE AUTORES ... 319
11
CIÊNCIAS BIOLÓGICAS
BIOCIÊNCIAS
Biologia Celular 222
AVALIAÇÃO DO POTENCIAL GENOTÓXICO DA GEOSMINA EM CÉLULAS DE MAMÍFEROS Aline Flor Silva, Rafael Rodrigues Dihl. Universidade Luterana do Brasil (ULBRA)
A poluição das águas superficiais e dos lençóis freáticos é causada principalmente pelas descargas de efluentes industriais, domésticos e agropecuários, não tratados ou insuficientemente tratados. Essa contaminação dos recursos hídricos acelera o processo de eutrofização que, consequentemente, aumenta o custo do tratamento da água de abastecimento, traz prejuízos relacionados à saúde humana e favorece o crescimento exagerado de cianobactérias, as chamadas florações. As cianobactérias são as principais produtoras de um metabólito, geosmina, que pode ser detectado em baixas concentrações pelos consumidores e que deixa a água com cheiro e gosto de terra e mofo.
Atualmente, grande parte das técnicas de tratamento aplicadas para a remoção total desse composto é ineficiente e de alto custo operacional, o que aumenta a preocupação quanto ao potencial tóxico-genético desse metabólito. Neste sentido, considerando a escassez de informações relacionadas à ação biológica deste composto, o presente estudo avaliou a genotoxicidade da geosmina nas concentrações de 7,5, 15, 30 e 60 ppm, em células de ovário de hamster Chinês (CHO) através do Ensaio Cometa. O Teste Cometa permite a avaliação de danos genômicos que se expressam na forma de quebras de cadeias simples e duplas do DNA em células individuais. A comparação estatística foi realizada por meio da análise da variância (one-way ANOVA) com teste post hoc de Dunnett para uma significância estatística p<0,05. Os resultados demonstraram que o composto foi genotóxico às células CHO expostas à concentração de 60 ppm após 4 e 24 horas de tratamento para todos os parâmetros avaliados, tail intensity, tail moment e tail length, quando comparadas ao controle negativo (metanol 0,5%). Somado a isso, a concentração de 30 ppm mostrou-se genotóxica às células CHO após 24 horas de tratamento, quando avaliada pelo parâmetro tail intensity. Com base neste resultado e considerando que as concentrações de geosmina avaliadas neste estudo estão muito acima daquelas observadas no ambiente aquático, em eventos de floração de cianobactérias, não é esperado que a exposição a este composto esteja associada a um risco genotóxico. Palavra-chave: Geosmina; Genotoxicidade;
Ensaio Cometa.
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DIFERENCIAÇÃO CELULAR NA LESÃO HEPÁTICA AGUDA: IDENTIFICAÇÃO DOS TIPOS CELULARES ENVOLVIDOS Virginia Andrea Angiolini, Laura Simon, Mónica Luján López, Carolina Uribe Cruz, Lucia Mariano da Rocha Silla, Ursula Matte. Hospital de Clínicas de Porto Alegre (HCPA)
Introdução: Células da fração mononuclear da medula óssea (FMMO) têm demonstrado capacidade de se diferenciar em células tipo hepatócitos e têm ganhado atenção como fonte promissora para terapia celular de doenças hepáticas, visto que o único tratamento disponível atualmente é o transplante hepático o qual, devido à falta de órgãos e complicações pós-cirúrgicas, está associado a uma alta mortalidade. Objetivos: Identificar a capacidade de diferentes populações de células da FMMO de se diferenciar em células tipo hepatócitos in vitro, a partir do co-cultivo com hepatócitos de animais com insuficiência hepática aguda (IHA). Métodos: Hepatócitos e células da FMMO foram isoladas de ratos Wistar adultos. A indução da IHA foi feita através da administração de Tetracloreto de Carbono (CCl4; 1,25 mL/Kg de peso do animal) e, após 24 horas, foi feita a perfusão hepática para obtenção dos hepatócitos. A FMMO foi obtida por gradiente de densidade com Ficoll e foi feita a depleção dos monócitos (ED1+) pelo sistema MACS (magnetic activated cell sorting). Prévio ao co-cultivo, a FMMO foi mantida em cultura por 72 horas para separação das frações aderente e não aderente. As frações aderentes e não aderentes da FMMO foram postas em co-cultivo com hepatócitos lesionados e normais (grupo controle) por 2, 6 e 24 horas, separadas por um inserto semipermeável. A análise da diferenciação foi feita por RT-PCR para avaliação da expressão dos genes hepáticos Albumina e Citoqueratina-18 assim como ensaio funcional de ureia que foram feitos para cada um dos tempos analisados. Resultados e conclusões: A análise da expressão gênica mostrou que somente as células da fração não aderente expressavam os genes hepáticos Albumina e Citoqueratina-18 depois de 24 horas de co-cultivo com hepatócitos lesionados. A produção de ureia pelas células da fração não aderente mostrou-se relativa ao tempo de exposição aos hepatócitos lesionados. Notavelmente, após 24 horas de co-cultivo a produção de uréia pelas células não aderentes foi maior que a de hepatócitos saudáveis usados como controle. As frações co-cultivadas com hepatócitos normais não mostraram sinais de diferenciação. Palavra-chave: Fração Mononuclear da Medula Óssea;
Diferenciação; Células Tipo Hepatócitos. Projeto 12-0208 500
PADRONIZAÇÃO DE METODOLOGIA PARA AVALIAR A CONCENTRAÇÃO DE ADENOSINA MONOFOSFATO CÍCLICA (AMPC) EM CÉLULAS HUMANAS DO SISTEMA IMUNE
Letícia Baggio, Theresa L. Whiteside, Lucia Silla, Álvaro Laureano, Annelise Pezzi, Bruna Amorin, Felipe Rodrigues, Ianaê Wilke, Maria Aparecida Lima da Silva, Vanessa Valim. Hospital De Clínicas De Porto Alegre (HCPA).
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Trabalho realizado durante o academic training no University of Pittsburgh Cancer Institute, onde a aluna, bosista CAPES de Graduação sanduíche pelo Programa Ciência Sem Fronteiras (Processo número 8148/11-2), trabalhou como intern. Introdução: A adenosina monofosfato cíclica (AMPc) desempenha papel fundamental em vários processos intracelulares complexos e o envolvimento desta molécula com o efeito imunossupressor mediado por células T regulatórias (Tregs) sobre as células T convencionais (Tconv) tem sido relatado. Considerando-se a participação de células Treg em vários processos patológicos, tais como tumores e doenças autoimunes, é necessário investigar os mecanismos de vias de AMPc em células Treg e Tconv humanas. Objetivo: Padronizar metodologia para avaliar a concentração de AMPc em células sanguíneas humanas utilizando o teste HitHunter®
cAMP II (DiscoverX). Metodologia: Bolsas de sangue foram obtidas do Banco de Sangue do University of Pittsburgh Medical Center e as células da camada mononuclear do sangue periférico (PBMC) foram isoladas por separação por gradiente Ficoll-Paque (GE Healthcare). Avaliou-se o número ideal de PBMC a ser utilizado e a necessidade de ciclos de congelamento e descongelamento para obter a concentração de AMPc pelo teste a ser padronizado. Células T CD4+, T CD8+, Treg e Tconv foram isoladas utilizando-se kits específicos e avaliadas quanto à pureza por citometria de fluxo, sendo posteriormente incubadas overnight ou por até 48 h sob condições controladas e na presença ou não de rhIL-2. A concentração de AMPc foi então mensurada utilizando-se o teste HitHunter® cAMP II (DiscoverX) e as leituras realizadas em contador de luminescência TopCount NXT. Resultados: O número ideal de PBMC foi de 100.000 células por poço e constatou-se que não há necessidade de submeter as amostras a ciclos de congelamento e descongelamento. Os resultados do ensaio realizado com células T CD4+, T CD8+, Treg e Tconv não foram satisfatórios, pois um número maior de células é necessário. Considerações finais: O teste HitHunter® cAMP II (DiscoverX) requer uma grande quantidade de células T purificadas. Sendo o objetivo principal deste estudo avaliar a concentração de AMPc em células Treg, uma população rara do sangue periférico, um ensaio mais sensível deve ser considerado. Palavra-chave: adenosina monofosfato cíclica (AMPc); células T humanas; padronização de metodologia.
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A CO-CULTURA COM CÉLULAS-TRONCO MESENQUIMAIS PODE PROMOVER A SOBREVIVÊNCIA DAS ILHOTAS PANCREÁTICAS HUMANAS IN VITRO
Liana Paula Abreu da Silva, Bianca Marmontel de Souza, Ana Paula Bouças, Fernanda dos Santos de Oliveira, Andrea Carla Bauer, Daisy Crispim. Hospital de Clínicas de Porto Alegre (HCPA)
Introdução: O transplante de ilhotas pancreáticas é um tratamento promissor para pacientes com diabetes mellitus tipo 1 (DM1) que possuem um controle metabólico instável. Entretanto, ele está ainda associado com algumas limitações, pois o rendimento de ilhotas viáveis isoladas de um único doador é afetado negativamente pelo estresse que essas ilhotas sofrem ao passar por diversos mecanismos desde a morte encefálica (ME) no doador de órgãos até o processo de isolamento em si. Para atenuar esses efeitos deletérios, a co-cultura in vitro das ilhotas com células- tronco mesenquimais (CTMs) pode ser uma tecnologia clínica segura para o receptor, visto que as CTMs podem atuar como citoprotetoras, atenuando processos inflamatórios e exercendo efeitos antiapoptóticos sobre ilhotas recém- isoladas de doador em ME. Objetivos: Investigar se a co-cultura, sem contato, de ilhotas humanas com CTMs adiposo derivadas melhora a viabilidade das ilhotas in vitro. Métodos: O isolamento de ilhotas humanas foi realizado de acordo com o método descrito por Ricordi (1989). As CTMs foram isoladas a partir do protocolo estabelecido por Zuk (2001), sendo provenientes de lipoaspirado de pacientes que foram submetidos à cirurgia não estética. Todas as amostras foram coletadas após assinatura do termo de consentimento livre e esclarecido pelo familiar do doador (para a obtenção do pâncreas) ou pelos pacientes (para a obtenção das CTMs). As ilhotas foram cultivadas sozinhas ou com CTMs previamente descongeladas nas passagens P5-P6 com a utilização de um inserto em placas de 6 poços. A viabilidade das ilhotas foi determinada pela avaliação da integridade da membrana celular através do uso dos corantes FDA e PI e observação em microscópio de fluorescência após 24h, 48h e 72h de cultura. Resultados: A viabilidade das ilhotas em 24h foi de 98,4±3,0 (grupo de co-cultura com CTMs) e 92,5±20,7 (ilhotas sozinhas); em 48h ficou em 93,6±16,6 e 88,9±22,0 e em 72h foi de 91,3±16,7 e 87,6±19,8, respectivamente. Conclusão: Nossos dados preliminares mostram que o pré-tratamento de ilhotas com CTMs adiposo derivadas pode promover uma melhora na viabilidade das ilhotas, podendo reduzir significativamente a perda dessas células e melhorar posteriormente o resultado do transplante de ilhotas. Palavra-chave: ilhotas pancreáticas humanas; células-tronco mesenquimais; co-cultura. Projeto 120289
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ESTUDO DA ATIVIDADE ANTIMUTAGÊNICA DO RESVERATROL EM CÉLULAS SOMÁTICAS DE DROSOPHILA MELANOGASTER
Mariana do Amaral Flores, Magnólia de Jesus Sousa Magalhães, Rafael Rodrigues Dihl, Mauricio Lehmann.
Universidade Luterana do Brasil (ULBRA)
Entre os diferentes elementos que compõem a dieta alimentar humana, o vinho desempenha um papel importante no que se refere à promoção de efeitos benéficos à saúde. Apesar da presença de outros compostos fenólicos nesta bebida, o resveratrol (RES) ganhou destaque na literatura científica nos últimos anos. Diversos estudos científicos mostram que o consumo do RES monomérico e/ou de alimentos contendo o RES está associado com melhorias nas condições de saúde. Estes benefícios estão relacionados com uma ampla variedade de atividades biológicas tais como, capacidade antioxidante, antidiabética, neuroprotetora, cardioprotetora, atividade anticarcinogênica e antimutagênica, efeitos anti-inflamatórios, propriedade estrogênica e antiestrogênica e modulação nas vias de transdução de sinais celulares. Entretanto, os estudos que envolvem a sua atividade antimutagênica vêm apresentando resultados conflitantes. Desta forma, com o objetivo de ampliar as investigações sobre o efeito
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modulador do RES o presente estudo avaliou a antimutagenicidade deste composto em três diferentes concentrações (0,01; 0,04 e 0,15 mM) sobre os danos genéticos induzidos pelo mutágeno etilmetanossulfonato (EMS), através do teste para detecção de mutação e recombinação somática (SMART) em Drosophila melanogaster. Para tanto, foram utilizados os protocolos de co-tratamento (EMS 5 mM) e pós-tratamento (EMS 46 mM). Através da análise do genótipo transheterozigoto (mwh/flr3) foram obtidos os seguintes resultados: (i) o RES foi capaz de reduzir, de forma fraco-positiva, os efeitos tóxico-genéticos induzidos pelo EMS em todas as concentrações avaliadas no protocolo de co-tratamento, e (ii) no protocolo de pós-tratamento o RES reduziu de forma fraco-positiva a frequência total de manchas mutantes apenas na concentração de 0,04 mM. Os resultados obtidos até o presente momento com o teste SMART, indicam que o RES é capaz de atuar como um agente desmutagênico, possivelmente através da sua capacidade antioxidante, impedindo a indução de danos genéticos, ao mesmo tempo em que atua como um agente bioantimutagênico, potencializando os mecanismos de reparação que atuam sobre os danos induzidos pelo EMS. O projeto dispensa aprovação do Comitê de Ética. Palavra-chave: resveratrol, antimutagenicidade, Drosophila melanogaster.
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VALIDAÇÃO DA TÉCNICA DE IMUNOCITOQUÍMICA PARA AVALIAÇÃO DA EXPRESSÃO DA PROTEÍNA S100A4 EM AMOSTRAS CERVICAIS
Débora Renz Barreto Vianna, Denise Wohlmeister, Andréia Buffon, Luciane Noal Calil, Patrícia Nardin, Carlos Alberto Saraiva Gonçalves, Diogo André Pilger. Universidade Federal do Rio Grande do Sul (UFRGS).
Introdução: O câncer de colo de útero é a terceira neoplasia mais frequente em mulheres no mundo e a quarta entre as brasileiras. A chance de cura dessa doença é promissora em pacientes que têm o diagnóstico precoce e são submetidas ao tratamento adequado. A S100A4 é uma proteína da família S100 e o aumento na sua expressão está relacionado à progressão e à metástase de diversos tipos de câncer, entre eles o cervical. A expressão dessa proteína em células epiteliais do colo uterino pode ser grande aliada na identificação da evolução da lesão tecidual e, consequentemente, possibilita um diagnóstico precoce da doença. Objetivo: Validar a metodologia imunocitoquímica para avaliar a expressão da proteína S100A4 diretamente de amostras de esfregaço cervical. Metodologia: As amostras foram coletadas com escova citobrush e dispostas em lâminas silanizadas para análise da expressão de S100A4. A técnica imunocitoquímica foi realizada através do kit Starr Trek Universal HRP Detection – Biocare Medical, incubando-se com enzima peroxidase, anticorpo primário Polyclonal Rabbit Anti-Human S100A4 e revelador com diaminobenzidina. Como controle positivo utilizaram-se linhagens celulares de tumor cervical e de queratinócitos. Como controle negativo da técnica, amostras e linhagens não foram incubadas com anticorpo primário. Após o procedimento, as amostras foram visualizadas microscopicamente e classificadas de acordo com a intensidade de coloração amarelo-dourado das células. Resultados: Observou-se que as duas linhagens expressaram a proteína, sendo que na tumoral houve expressão de moderada à intensa na maioria dos campos visualizados, enquanto que nos queratinócitos a expressão foi moderada. Dentre as amostras cervicais analisadas até o momento, que se enquadram como negativas para lesão intra-epitelial, constatou-se que a expressão da S100A4 varia de acordo com o grau de maturação das células do epitélio escamoso estratificado, sendo mais expressa nas células imaturas. Verificou-se ainda que a expressão da proteína é mais intensa na presença de alterações inflamatórias benignas. Conclusões: Os resultados obtidos poderão ser utilizados como padrão de comparação para futuras análises com pacientes, através das quais será possível estabelecer se a S100A4 poderá atuar como biomarcadora da progressão tumoral. Pesquisa aprovada pelo Comitê de Ética em Pesquisa da UFRGS sob nº 562.824. Palavra- chave: câncer cervical; S100A4; imunocitoquímica.
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AVALIAÇÃO DO EFEITO DE DIFERENTES CONCENTRAÇÕES DE VIDRO BIOATIVO COMO BIOMATERIAL PARA O CULTIVO DE CÉLULAS-TRONCO MESENQUIMAIS
Daniela Burguêz, Daniela Pavulack Pereira, Renato Luiz Siqueira, Oscar Peitl, Edgar Dutra Zanotto, Natasha Maurmann, Patrícia Pranke. Universidade Federal do Rio Grande do Sul (UFRGS)
Vidros bioativos são materiais inorgânicos que podem ser utilizados na engenharia de tecidos e medicina regenerativa devido às suas características de interação com os tecidos vivos. O presente trabalho objetivou avaliar o efeito de um vidro bioativo, sintetizado via sol-gel (2B), na viabilidade, citotoxicidade e liberação de fosfatase alcalina de células-tronco mesenquimais (CTMs), bem como nos conteúdos de cálcio e fósforo liberados pelo vidro. O pó de vidro bioativo 2B foi sintetizado em reações de hidrólise e policondensação ácidas de Si(OC2H5)4 e OP(OC2H5)3 com Ca(NO3)2.4H2O com tratamento térmico. As CTMs foram obtidas da polpa de dentes decíduos e caracterizadas como CTMs. Após a semeadura, as CTMs foram tratadas com o vidro 2B nas concentrações 0,125;
1,25; 12,50 e 125,00 mg/mL. Após 7 dias, a viabilidade celular foi avaliada por MTT ([3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,4- brometo difenil]). No sobrenadante foram realizadas análises dos eletrólitos cálcio e fósforo e análises bioquímicas da fosfatase alcalina e de citotoxicidade pelo teste de LDH (lactato desidrogenase). O pó de vidro 2B é composto de 80% de SiO2, 14,8% de CaO e 5,2% de P2O5 (% em mol), com tamanho de partícula <100 µm. Os resultados dos testes in vitro com CTMs mostraram que o vidro não afetou a viabilidade celular após 7 dias de tratamento. A concentração de cálcio e de fósforo detectada no sobrenadante das culturas contendo 12,50 e 125,00 mg/mL de 2B foi estatisticamente superior que o controle e as demais doses. Todos os tratamentos com concentrações do 2B aumentaram significativamente a liberação de fosfatase alcalina pelas células e nenhuma das concentrações do vidro foi citotóxica. Embora o vidro tenha liberado diferentes concentrações de cálcio e fósforo, elementos essenciais às funções biológicas das células, estes compostos não afetaram a viabilidade e a citotoxicidade celular. Neste estudo, foi demonstrado que o vidro 2B não afetou a viabilidade das CTMs, não apresentou citotoxicidade e houve aumento
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significativo da quantidade de fosfatase alcalina, o que indica a capacidade de diferenciação celular, mostrando ser um material com possíveis aplicações para a medicina regenerativa. Suporte Financeiro: CNPq, CAPES, FAPERGS e Instituto de Pesquisa com Células-tronco. Projeto aprovado pelo CEP da UFRGS. Palavra-chave: Células-tronco mesenquimais, medicina regenerativa, biomateriais.
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PLAQUETAS PROMOVEM UMA RESPOSTA ANTIOXIDANTE E A SÍNTESE HEPÁTICA APÓS HEPATECTOMIA PARCIAL Davi Fernandes Peralvo Vergara, Monica Lujan López, Carolina Uribe, Laura Simon, Carlos Kieling, Michael Andrades, Alessandro Osvaldt, Ursula Matte. Universidade Federal do Rio Grande do Sul (UFRGS). Hospital de Clínicas de Porto Alegre (HCPA)
Introdução: Em um estudo prévio foi demonstrado que as plaquetas (PLT) encapsuladas aumentam a sobrevida de ratos submetidos à insuficiência hepática aguda (IHA). Sabe-se que as PLT são ricas em enzimas antioxidantes e podem prevenir o dano celular através da neutralização de radicais livres, o que permitiria à célula realizar suas funções normais. Objetivo: Avaliar o efeito antioxidante de PLT e a síntese hepática em um modelo de IHA. Métodos:
PLT encapsuladas em alginato de sódio ou cápsulas vazias (EC) foram transplantadas no peritônio de ratos Wistar (n=15/grupo) imediatamente após hepatectomia parcial (HP) de 90%. Os animais foram eutanasiados às 6, 12, 24, 48 e 72 h após HP. O fígado remanescente foi coletado e as proteínas extraídas. Foram avaliadas as atividades enzimáticas de catalase, superóxido dismutase (SOD) e caspase 3. Para estudar dano celular foi realizado o ensaio de sulfidril total, grupos carbonila e oxidação lipídica. O RNA total foi extraído e foram avaliadas a expressão gênica do fator nuclear-kappaB (Nf-kB), fator V (Fv) e albumina (Alb). As análises estatísticas foram realizadas usando o teste t-Student. Resultados: O grupo PLT apresentou maior atividade de catalase e SOD em 12, 24 e 48 h comparado com o grupo EC (p ≤ 0,05). Níveis de grupo carbonila e sulfidril foram similares em ambos os grupos;
porém, a oxidação lipídica foi maior no grupo EC (p ≤ 0,05). A atividade de caspase 3 no grupo PLT apresentou um aumento nas 24 h (p=0,038) e uma diminuição nas 72 h (p= 0,001). A expressão gênica de Nf-kB foi maior no grupo PLT em cada tempo analisado (p≤ 0,05). Já, para Fv e Alb se observou uma maior expressão nas 24 e 48 h após HP no grupo PLT (p< 0,05). Conclusão: As PLT promovem uma resposta antioxidante contra o dano hepático e inibem a apoptose, provavelmente pela ação do Nf-kB. Além disso, foi observado que o grupo PLT apresentou um aumento da síntese hepática, o que sugere que a resposta antioxidante resulta em um fígado mais saudável.
Projeto aprovado pelo CEP HCPA. Palavra-chave: plaquetas; hepatectomia; resposta antioxidante. Projeto 130097
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CÉLULAS-TRONCO MESENQUIMAIS AGEM COMO ANTIOXIDANTE E ELEVAM OS NÍVEIS DE GLUTATIONA REDUZIDA EM MODELO EXPERIMENTAL DE COLITE ULCERATIVA
Fabiany da Costa Gonçalves, Natália Schneider, Mateus Grings, Fernanda Otesbelgue Pinto, Tuane Nerissa Alves Garcez, Eduardo Pandolfi Passos, Elizabeth Obino Cirne-Lima, Luíse Meurer, Guilhian Leipnitz, Ana Helena da Rosa Paz. Hospital de Clínicas de Porto Alegre (HCPA)
Introdução: As doenças inflamatórias intestinais, como a colite ulcerativa (UC), são desordens intestinais multifatoriais de etiologia desconhecida. Há evidências de que a formação de espécies reativas de oxigênio contribui para a fisiopatologia da UC. A inflamação colônica pode produzir altos níveis de produtos oxidantes que provavelmente excedem a capacidade dos mecanismos de defesa antioxidante e levam ao estresse oxidativo e à ruptura de células epiteliais. Considerando a capacidade de modular células do sistema imune e de regenerar tecidos, as células-troncomesenquimais (CTMs) podem ser consideradas uma alternativa para o tratamento da UC. Objetivo: O presente estudo investigou os efeitos de CTMs no tratamento da colite induzida por dextran sulfato de sódio (DSS), medindo parâmetros de estresse oxidativo no cólon. Materiais e Métodos: A colite aguda foi induzida em camundongos C57BL/6 pela administração de 2% DSS na água de beber por 7 dias. CTMs (1x106 células) foram transplantadas nos dias 2 e 5, e a atividade da doença foi aferida diariamente. No dia 8, os efeitos da colite foram investigados medindo parâmetros de estresse oxidativo no cólon, incluindo substâncias reativas do ácido tiobarbitúrico (TBA-RS), superóxido dismutase (SOD), catalase (CAT) e glutationa reduzida (GSH). Resultados: Os resultados demonstraram que as CTMs amenizaram significativamente a severidade da colite, diminuindo a perda de peso, diarreia e presença de sangue nas fezes. A administração de DSS resultou em aumento do nível de TBA-RS e diminuição significativa da atividade da SOD em comparação ao controle saudável. Por outro lado, nenhuma alteração foi encontrada na atividade da CAT. Verificou-se que a colite induzida por DSS diminuiu os níveis de GSH quando comparada ao controle saudável. No entanto, pode-se observar que as CTMs foram capazes de reverter os baixos níveis de GSH. Conclusão: Nossos resultados fornecem evidências de que o modelo de colite aguda induzida por DSS é suscetível ao stress oxidativo, e que CTMs desempenham papel importante na prevenção de danos oxidativos. De nosso conhecimento, este é o primeiro estudo que avalia CTMs e seu potencial antioxidante em modelo experimental de colite. Projeto aprovado pelo CEP/HCPA sob o número 11-0244 e financiado por FIPE e CAPES. Palavra-chave: Colite ulcerativa; células-tronco mesenquimais; estresse oxidativo. Projeto 11-0244
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O PAPEL DE NEUROTROFINAS SOBRE A PROLIFERAÇÃO CELULAR DE LEUCEMIAS PEDIÁTRICAS
Pietro Rebelo Casagrande, Rafael Pereira dos Santos, Marco Aurélio Silva Filho, Adriana Vanessa Santini Deyl, Tanira Gatiboni, Jiseh Loss, Algemir Lunardi Brunetto, Ana Lúcia Abujamra, Rafael Roesler, Caroline Brunetto de Farias.
Hospital de Clínicas de Porto Alegre (HCPA)
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As leucemias constituem 30% dos tumores pediátricos, sendo as neoplasias mais freqüentes em menores de 15 anos. Apesar da elevada taxa de cura, não é raro ocorrer resistência à quimioterapia. Além disso, efeitos colaterais tardios incluem déficit de crescimento, insuficiência cardíaca e danos neurocognitivos. Isto demanda novas terapias com ação seletiva sobre alvos moleculares específicos. As neurotrofinas e seus receptores de quinase relacionados à tropomiosina (Tropomyosin related kinase, ou Trk) são importantes reguladores da sobrevivência, desenvolvimento e plasticidade neuronais e estão grandemente envolvidas na oncogênese. O melhor entendimento do papel destas em leucemias poderá permitir o desenvolvimento de um tratamento mais eficaz, a adequação deste aos grupos de risco, a diminuição dos efeitos tardios e a identificação precoce dos pacientes com pior prognóstico. Este estudo visou avaliar os efeitos de neurotrofinas e seus antagonistas sobre a viabilidade e proliferação celulares de culturas primárias durante o período de indução (D0, D15, D35). Todos os pacientes assinaram Termo de Consentimento Livre e Esclarecido. As coletas de sangue periférico e/ou medula óssea ocorreram nas avaliações dos parâmetros clínicos dos pacientes, minimizando riscos e desconfortos. Estas aconteceram ao diagnóstico (D0) e nos dias 15 e 35.
Realizou-se a separação dos linfócitos pelo método de Ficoll-paque, seguido pelo tratamento das células com BDNF 50ng/mL (Sigma, B3795), NGF 50ng/mL (Sigma, SRP3015) e K252 a 100nM (Sigma, 05288) durante 72 horas.
Depois, avaliou-se, pelo método de contagem com exclusão por Trypan Blue (Freshney e colaboradores, 1994), a viabilidade e proliferação celulares. Até o momento, 8 pacientes foram incluídos no estudo. Os tratamentos com K100nM reduziram significativamente a viabilidade e proliferação celulares em comparação aos controles em D0 e D35. Os tratamentos com NGF 50ng/mL também reduziram a viabilidade e proliferação celulares em comparação aos controles em D15 e D35. Conclusões Nossos resultados preliminares demonstram que tanto neurotrofinas quanto antagonistas de seus receptores inibem a viabilidade e proliferação celulares dos cultivos primários de pacientes diagnosticados com leucemia linfocítica aguda. Mais estudos serão necessários para investigar as vias de sinalização envolvidas nestes processos, bem como o efeito das neurotrofinas combinadas a quimioterápicos utilizados na clínica médica. Palavra-chave: neurotrofinas; leucemia linfocítica aguda; viabilidade celular. Projeto 130023
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DEXAMETASONA E AZATIOPRINA PROMOVEM ALTERAÇÕES ESTRUTURAIS NO CITOESQUELETO E AFETAM O COMPORTAMENTO MIGRATÓRIO DE CÉLULAS-TRONCO MESENQUIMAIS
Natália Schneider, Fabiany da Costa Gonçalves, Fernanda Otesbelgue Pinto, Patrícia Luciana Lopez, Anelise Bergman Araújo, Bianca Pfaffenseller, Eduardo Pandolfi Passos; Elizabeth Obino Cirne-Lima, Luíse Meurer, Marcelo Lazzaron Lamers, Ana Helena da Rosa Paz. Universidade Federal do Rio Grande do Sul (UFRGS). Hospital de Clínicas de Porto Alegre (HCPA)
Glicocorticóides e drogas imunossupressoras são comumente utilizadas no tratamento de doenças inflamatórias, como por exemplo, as Doenças Inflamatórias Intestinais (DII). Apesar dos recentes avanços ocorridos nesta área, há a necessidade de novas abordagens terapêuticas. Nesse sentido, as células-tronco mesenquimais (CTMs) têm emergido como reguladoras da resposta imune, sendo responsáveis pela secreção de uma variedade de citocinas que atuam no controle da inflamação. Entretanto, pouco se sabe sobre a interação entre CTMs e as drogas de tratamento convencional. O objetivo deste estudo foi avaliar a viabilidade, a morfologia nuclear, a polaridade celular, a distribuição da actina F e a migração celular de CTMs na presença dos imunossupressores Azatioprina (AZA) ou Dexametasona (DEX). Após a caracterização, as CTMs foram tratadas com AZA (1 µM) ou DEX (10 µM) por 24h, 48h ou 7 dias e a viabilidade celular foi avaliada por MTT e NII (Nuclear Irregularity Index – Image J). A polaridade celular (PI – Polarity Index) foi analisada por microscopia de contraste de fase e os filamentos de actina F por microscopia confocal após coloração por Rodamina-Faloidina. O comportamento migratório foi avaliado por Time- Lapse Microscopy. Ambas as drogas não afetaram a viabilidade celular (P>0,05) ou a morfologia nuclear (P>0,05), mas induziram alterações estruturais. As células cultivadas com AZA apresentaram um formato alongado e aumento da presença de fibras de estresse, enquanto DEX foi associada a um arredondamento celular, maior presença de fibras de estresse e diminuição da formação de lamelipódios. Após 7 dias de tratamento, AZA aumentou a direcionalidade das CTMs assim como a velocidade de migração (24,35%; P<0,05), enquanto DEX diminuiu ambas nos tratamentos de 24h e 7 dias (-28,69% and -25,37%, respectivamente; P<0,05). Com base nos dados obtidos, podemos concluir que estas drogas imunossupressoras podem afetar diferentemente a morfologia e a capacidade de migração das CTMs, possivelmente impactando o sucesso da terapia celular. Este projeto foi aprovado pelo Comitê de Ética em Pesquisa HCPA sob o número 12-0082 e financiado por FIPE e CAPES. Palavra-chave: Células-tronco mesenquimais; Doenças inflamatórias intestinais; Imunossupressores. Projeto 12-0082
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RESVERATROL MODULA A RESPOSTA CELULAR EM CULTURA DE ASTRÓCITOS HIPOCAMPAIS DE RATOS WISTAR NEONATOS, ADULTOS E ENVELHECIDOS
Gabriela Bellaver, Bruna Bellaver, Débora Guerini de Souza, Diogo Onofre Gomes de Souza, André Quincozes dos Santos. Pontifícia Universidade Católica do Rio Grande do Sul (PUCRS). Universidade Federal do Rio Grande do Sul (UFRGS)
Os astrócitos são responsáveis pela modulação de neurotransmissores e processamento de informações sinápticas, homeostase iônica, metabolismo energético, manutenção da barreira sangue-cérebro e resposta antioxidante e inflamatória. Recentemente, nosso grupo padronizou um protocolo de cultura de astrócitos corticais de ratos Wistar adultos e envelhecidos, que apresentam significativa especialização celular comparado às culturas provenientes de animais neonatos. Visando obter um melhor entendimento de distintas regiões cerebrais e considerando a relevância da estrutura hipocampal em processos relacionados ao envelhecimento cerebral e também a fundamental importância dos astrócitos para manutenção das condições fisiológicas do sistema nervoso central, foi estabelecido,
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nesse estudo, um modelo in vitro de culturas de astrócitos hipocampais de ratos Wistar adultos (90 dias de idade) e envelhecidos (180 dias). O resveratrol, um polifenol encontrado em uvas e vinho tinto, exibe efeitos antioxidantes, anti-inflamatórios e neuroprotetores, sendo capaz de modular funções gliais. No presente trabalho, nós avaliamos os efeitos exercidos pelo resveratrol sobre parâmetros gliais como o conteúdo de glutationa (GSH), atividade da enzima glutamina sintetase (GS) e os níveis de TNF-α e IL-1β em astrócitos hipocampais de ratos Wistar neonatos, adultos e envelhecidos. Com isso, observamos uma diminuição da GS e GSH e um aumento na resposta inflamatória em cultura de astrócitos hipocampais de animais adultos e envelhecidos comparadas às culturas de astrócitos obtidas a partir de animais neonatos. O resveratrol foi capaz de prevenir esse efeito. Estes resultados evidenciam os efeitos neuroprotetores do resveratrol que são associados principalmente a atividades antioxidantes e anti-inflamatórias.
Projeto aprovado pela CEUA/UFRGS. Palavra-chave: astrócitos; envelhecimento; hipocampo.
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PADRONIZAÇÃO DO SECRETOMA DE CÉLULAS-TRONCO MESENQUIMAIS PARA TERAPIA CELULAR EM COLITE ULCERATIVA
Fernanda Otesbelgue Pinto, Fabiany da Costa Gonçalves, Natália Schneider, Aline Teichmann, Karina Mariante Monteiro, Ana Helena da Rosa Paz, Patrícia Luciana da Costa Lopes. Hospital de Clínicas de Porto Alegre (HCPA) Colite ulcerativa (UC) é uma doença inflamatória intestinal de etiologia desconhecida, caracterizada por inflamações crônicas que afetam a região do cólon e do reto. Pacientes com UC apresentam disfunção de células T, infiltração de leucócitos e alteração na produção de citocinas, levando a danos na mucosa intestinal. Além dos avanços no tratamento medicamentoso, a terapia celular tem surgido como uma nova abordagem no controle da inflamação intestinal. Nesse sentido, as células-tronco mesenquimais (CTMs) apresentam capacidade de modular as células do sistema imune inato e adaptativo através da secreção de fatores solúveis, os quais desencadeiam a diminuição da resposta inflamatória. Entretanto, pouco ainda se sabe sobre os fatores secretados pelas CTMs em condições normais ou diante de um insulto inflamatório. O objetivo deste estudo foi padronizar a análise do secretoma de CTMs através da técnica de espectrometria de massas. Para isso, CTMs foram isoladas de tecido adiposo de camundongos C57BL/6 GFP+ e cultivadas para coleta do sobrenadante. A caracterização das CTMs foi realizada por imunofenotipagem através de citometria de fluxo e pelo cultivo em meios de indução a diferenciação adipogênica e osteogênica. As CTMs foram utilizadas na passagem P4, e o sobrenadante foi separado após 24h de cultivo, centrifugado e filtrado. As amostras foram concentradas e o conteúdo de proteínas foi quantificado, sendo tratadas com agentes desnaturantes, purificadas e digeridas com tripsina para a espectrometria de massas. Os resultados demonstraram que a metodologia utilizada está adequada para avaliação em espectrometria de massas, uma vez que as CTMs apresentaram proteínas de matriz extracelular e proteínas de adesão celular característicos. Além disso, as amostras analisadas preservaram fenótipo característico de CTMs e capacidade de diferenciação. A mesma metodologia padronizada será utilizada em trabalhos futuros em que serão avaliados secretomas de CTMs em condições similares ao ambiente inflamatório e na presença de fármacos utilizados comumente na terapia de UC. As células utilizadas nesse trabalho foram extraídas de animais de projeto aprovado pelo CEUA-HCPA - 110244.
Palavra-chave: Células-tronco mesenquimais; secretoma; colite ulcerativa. Projeto 110244 1231
CARACTERIZAÇÃO DAS CÉLULAS-TRONCO MESENQUIMAIS DERIVADAS DE TECIDO ADIPOSO EXTRAÍDAS DE DUAS FONTES ANATÔMICAS DIFERENTES: RESULTADOS PRELIMINARES
Sabrina Beal Pizzato, Elizabeth Cirne-Lima, Kevin Yaneselli, Fernanda de Oliveira, Cristina Botelho Messias, Jacqueline Maisonnave. Hospital de Clínicas de Porto Alegre (HCPA)
Introdução: Células-tronco mesenquimais (CTM) são células multipotentes e exercem efeito parácrino, podendo inibir respostas imunológicas pela liberação de fatores anti-inflamatórios. As CTM não expressam antígenos passíveis de reconhecimento pelos linfócitos, evitando a rejeição ao transplante destas. As CTM podem ser obtidas de diferentes fontes, dentre elas de tecido adiposo (TA), células tronco mesenquimais adipoderivadas (CTMa). Da mesma forma, o estudo das características das CTMa obtidas de diferentes regiões anatômicas mostra-se importante, pois pode demonstrar vantagens de uma fonte de células em relação a outra, no que diz respeito à capacidade de proliferação e funcionalidade. Objetivo: comparar CTMa de duas fontes - gordura subcutânea (SC) e gordura visceral (VS) - em relação à: capacidade de multipotência, senescência, estabilidade cromossômica e capacidade imunomoduladora. Metodologia: CTMa foram obtidas a partir do tecido adiposo de 5 cães fêmeas jovens (6 -11 meses) submetidas à ovariectomia, a partir de duas regiões anatômicas: abdominal (SC) e periovariana (VS). As células foram expandidas, criopreservadas para análises. Células em P2 foram diferenciadas in vitro em adipócitos, condrócitos e osteócitos. As diferenciações foram comprovadas por coloração específica e imagens capturadas aleatoriamente, para análise e quantificação com ImageJ. Resultados: as células isoladas apresentaram-se com morfologia fibroblastóide, aderência ao plástico e capacidade de se diferenciar em adipócito, condrócito e osteócito.
As células da região subcutânea apresentaram maior capacidade de diferenciação em osteócitos (4,714 ± 2,313% de área) do que as viscerais (2,224 ± 1,627% de área), enquanto que a diferenciação em condrócitos foi semelhante para células obtidas das duas fontes. Demais ensaios estão em processo. Conclusão: os resultados mostram que o potencial de diferenciação pode ser influenciado pela fonte de extração. Entretanto, ainda são necessários mais estudos, para entender a interferência que a região de coleta de tecido adiposo, possa ter para posterior utilização terapêutica destas células. Os ensaios estão em andamento e pretende-se com esse estudo, otimizar a terapia celular a partir da escolha da melhor fonte de tecido adiposo. Palavra-chave: Célula-tronco mesenquimal; tecido adiposo; terapia celular. Projeto 130510
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AVALIAÇÃO DA PRODUÇÃO DE INSULINA POR CÉLULAS MURINAS DA LINHAGEM MIN6 EM ALTA PASSAGEM
Ketlen da Silveira Moraes, Tatiana Guerra Amaral, Florencia Barbé-Tuana, Nance Beyer Nardi, Fátima Theresinha Costa Rodrigues Guma, Elvira Alicia Aparicio Cordero. Universidade Federal do Rio Grande do Sul (UFRGS)
INTRODUÇÃO: O Diabetes mellitus (DM) compreende um conjunto de doenças metabólicas caracterizadas por altos níveis de glicose sanguínea, causados pela não produção, produção insuficiente ou falta de resposta à insulina produzida pelas células β-pancreáticas. A linhagem celular murina MIN6 assemelha-se qualitativamente e quantitativamente as células pancreáticas. Então, esta linhagem apresenta resposta à glicose em baixas passagens (p1 – p40), podendo crescer em monocamada ou tridimensionalmente formando as “pseudo-ilhotas” (PIs).
OBJETIVO: Avaliar a produção de insulina pelas células MIN6 em monocamadas e PIs em alta passagem (p47 – p52). METODOLOGIA: Utilizamos células MIN6 que variavam de p47 até p51 em monocamada ou em PIs. As células foram semeadas na densidade de 2x104cel/mL em garrafas de cultura (para monocada) e placas de petri (para formação de PIs), mantidas em estufa de 5% CO2 a 37ºC. A formação de PIs ocorre dentro de 6 a 8 dias. A produção de insulina por monocadas e PIs de MIN6 foi avaliada por: 1) Expressão do gene: após extração do RNA total pelo método do Trizol o cDNA foi sintetizado com a transcriptase reversa M-MLV e a síntese do mRNA avaliada por PCR, usando-se primers específicos; 2) Expressão da proteína: a síntese de insulina foi determinada por microscopia confocal. Monocamadas e PIs foram fixadas com paraformaldeido tamponado a 4%, os sítios inespecíficos bloqueados com albumina e a insulina imunodetectada com anticorpo específico e incubação com anticorpo secundário conjugado com Alexa Flúor 555. 3) Secreção de insulina e resposta à glicose: monocamadas e PIs foram mantidas em salina livre de glicose por 30min e depois incubadas com 2,8mM ou 28mM de glicose por 30min, a insulina presente no meio de cultura foi quantificada por ELISA. RESULTADOS: Por PCR, microscopia confocal e ELISA mostramos que monocamadas e PIs de MIN6 entre p47 – p51 sintetizam o mRNA, a proteína e secretam a insulina para o meio de cultura, respondendo a glicose. CONCLUSÕES: Nossos resultados mostram que diferente do descrito na literatura, células da linhagem MIN6 em passagens altas, tanto em monocamada como em crescimento tridimensional (PIs) continuam produzindo e secretando insulina em resposta a glicose. Projeto aprovado pelo CEP UFRGS. Palavra-chave: MIN6; pseudoilhotas; frutose.
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INFLUÊNCIA DO GRPR NA MALIGNIDADE DE GLIOMA A172
Pâmela Rossi Menegotto, Patrícia Luciana da Costa Lopez, Bárbara Kunzler Souza, Algemir Lunardi Brunetto, Gilberto Schwartsmann, Rafael Roesler. Hospital de Clínicas de Porto Alegre (HCPA)
Introdução: Gliomas são os tipos mais frequentes de tumores do sistema nervoso central em adultos e o glioblastoma multiforme (GBM), classificado como grau IV pela Organização Mundial de Saúde, é a manifestação mais agressiva desse tipo de tumor. Os GBMs são caracterizados pela sua proliferação excessiva, resistência a apoptose, invasibilidade e neovasculização. Além disso, há uma grande resistência à quimioterapia e recidiva após tratamento com radioterápico. O peptídeo liberador de gastrina (gastrin-releasing peptide, GRP) assim como receptor GRPR (gastrin-releasing peptide receptor) contribui para a malignidade de diversos tumores, incluindo gliomas. Esse receptor está relacionado a vias de proliferação e possivelmente atua com outros receptores responsivos a sinais de proliferação como EGFR (epidermal growth factor receptor). Objetivos: Entender o mecanismo molecular através do qual o GRPR influencia a malignidade de glioma em linhagem celular humana A172.
Métodos e resultados: O gene GRPR foi silenciado de forma estável através de vetor lentiviral contendo uma sequência de interferência short hairpin RNAi na linhagem celular de gliomas A172. As células silenciadas para GRPR apresentaram expressão reduzida de fosfo-PTEN e c-Raf em análise de Western Blot, indicando alterações nas vias de proliferação. No entanto, o silenciamento de GRPR não pareceu afetar a proliferação nessa linhagem, de acordo com ensaio clonogênico. Conclusões: GRPR foi estavelmente silenciado e isso afetou o status de PTEN e c-Raf nessas células. A falta de efeito no ensaio clonogênico pode ser relacionada a mecanismos compensatórios, como a superexpressão de EGFR que ocorre na linhagem A172. Perspectivas: Utilizar outros ensaios de proliferação, analisar o ciclo celular e PCR em tempo real para genes como EGFR para elucidar possíveis mecanismos envolvidos na malignidade de gliomas mediada por GRPR. O silenciamento de GRPR pode não ser o suficiente para reduzir a proliferação em gliomas com superexpressão de EGFR, mas pode potencialmente diminuir a resistência a quimioterápicos. Assim, tratamento dessas células silenciadas com quimioterápicos tem como alvo a via de EGFR, com a intenção de elucidar a relação entre esses dois receptores. Apoio financeiro: CNPq, INCT-TM, ICI-RS, SOAD, FIPE/HCPA. Palavra-chave: glioma; GRPR; EGFR.
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RECUPERAÇÃO SENSÓRIO-MOTORA DA LESÃO MEDULAR EXPERIMENTAL APÓS O TRANSPLANTE DE CÉLULAS- TRONCO
Luiza Peres de Castro, Fabrício Nicola, Luciano Rodrigues, Eduardo Sanches, Natasha Maurmann, Daniela Pavulack, Patrícia Pranke, Carlos Alexandre Netto. Universidade Federal do Rio Grande do Sul (UFRGS)
A lesão medular (LM) traumática resulta em déficits sensitivos e motores, acometendo milhares de indivíduos anualmente. Na busca de novos tratamentos para a LM, estudos com células-tronco (CT) têm sido realizados na tentativa de minimizar essa condição. O objetivo deste trabalho é avaliar a eficácia das diferentes vias de administração de células-tronco mesenquimais de dente decíduo humano sobre a recuperação funcional e sensibilidade dolorosa de ratos Wistar. Materiais e métodos: A laminectomia foi realizada entre T9 e T10, onde foi provocada uma lesão medular moderada por compressão por meio do aparelho NYU Impactor. Um total de 29 ratos
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Wistar foram distribuídos nos grupos sham (n=4), lesão+veículo (n=8), lesão+scaffold (n=6), lesão+scaffold+CT (n=7) e lesão+CT (n=4). As células-tronco mesenquimais de polpa de dente decíduo foram implantadas no local da lesão 1 hora após a lesão, em uma quantidade de 3x105 de células diluídas em 10μL de PBS ou em cultura com scaffold. Os scaffolds foram produzidos para atuar como suporte celular. A avaliação da função motora foi realizada por meio da escala de Basso, Beattie e Bresnahan (BBB), que gradua a atividade locomotora de 0 (paralisia) à 21 pontos (locomoção normal). A sensibilidade dolorosa foi avaliada com a utilização do equipamento Von Frey eletrônico (Insight, Brasil), que mede a reação de pressão aplicada às patas posteriores dos animais. Resultados: Os animais que receberam tratamento apenas com células-tronco mesenquimais obtiveram melhor desempenho na escala BBB em comparação ao grupo lesão+veículo, atingindo sete pontos de diferença na última semana. Os grupos lesão+scaffold e lesão+scaffold+célula permaneceram iguais ao grupo lesão+veículo apresentando apenas uma recuperação motora espontânea, característica do modelo. Os grupos lesão+veículo e lesão+scaffold apresentaram hiperalgesia na sexta semana. O transplante de células-troco foi capaz reduzir a hiperalgesia na sexta semana.
Conclusão: A injeção de células-tronco de dente decíduo humano promove a recuperação funcional, enquanto que o transplante de células por meio de scaffold não é eficaz. O transplante de células, por infusão ou com scaffolds, reduz a hiperalgesia após a lesão medular. O uso células-tronco mesenquimais de polpa de dente decíduo demonstra ser uma proposta terapêutica promissora para o tratamento da lesão medular experimental. Palavra-chave: lesão medular; células-tronco; terapia celular.
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AVALIAÇÃO DO PAPEL DE BDNF/TRKB EM PROCESSOS DE RESITÊNCIA EM CÉLULAS DE CÂNCER COLORRETAL HUMANO
Rafael Pereira dos Santos, Lilian Caesar, Tiago Elias Heinen, Algemir Lunardi Brunetto, Gilberto Shwartsman, Ana Lucia Abujamra, Caroline Brunetto de Farias, Rafael Roesler. Hospital de Clínicas de Porto Alegre (HCPA)
O câncer de cólon e reto (CCR) destaca-se como um dos principais em incidência e mortalidade, e representa cerca de um milhão de casos. O uso de quimioterápicos e, mais recentemente, a terapia molecular alvo-dirigida tem sido comumente usados no combate a essa enfermidade. Cetuximabe é um anticorpo monoclonal que se liga especificamente ao domínio extracelular do receptor do fator de crescimento epidérmico (EGFR), mas, muitas vezes, os pacientes apresentam resistência ao tratamento. TrkA, TrkB e TrkC são receptores quinase relacionados à tropomiosina. Seus ligantes são as neurotrofinas, dentre as quais destaca-se o Fator Neurotrófico Derivado do Cérebro (BDNF). Evidências que a via de sinalização BDNF / TrkB pode estar envolvida no crescimento celular, metástase e resistência à terapia tem sido recentemente relacionadas a diversos outros tipos de câncer, incluindo tumores de tecidos não-neuronais. Resultados do nosso grupo de pesquisa forneceram a primeira evidência de que BDNF/ TrkB possa desempenhar um papel na progressão da linhagem celular HT-29 de câncer colorretal e esteja envolvido em mecanismos de resistência a drogas antitumorais. O objetivo do presente trabalho foi induzir resistência à cetuximabe em células de câncer colorretal para analisar e comparar células HT-29 normais (controle) com células resistentes. As células foram plaqueadas e, 24 horas após, foram tratadas com Cetuximabe (0,5mg/mL, 1,0mg/mL e 2,0mg/mL) e K252a (10nM, 100nM e 1000nM). Após 48 horas do plaqueamento das células, tratou-se com BDNF humano recombinante (10ng/mL), EGF (2mg/mL), associados ou não a K252a. Para análise foram utilizadas as técnicas de MTT, contagem celular com exclusão por Azul de Tripam, RT-PCR e ensaio cometa alcalino.
A análise estatística foi realizada por análise de variância de uma via One-Way (ANOVA) seguida do teste post hoc Tukey. Valores de p <0,05 foram considerados estatisticamente significativos. As células HT-29 resistentes à cetuximabe responderam igualmente ao tratamento com K252a comparadas às células normais, sugerindo que este fármaco possa ser utilizado no futuro para o tratamento de câncer colorretal. As duas linhagens demonstraram diferenças na expressão de mRNA de BDNF, TrkB e EGFR e não exibiram diferenças ao analisar dano ao DNA. Além disso, BDNF e EGF não foram capazes de reverter o efeito antiproliferativo de K252a. Palavra-chave: câncer colorretal; BDNF; TrkB.
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ESTUDO IN VITRO DO EFEITO DO TETRACLORETO DE CARBONO EM LINHAGEM CELULAR HEPÁTICA (HUH7) E DO USO DE SILIBININA
Patricia Tacques Barreto, Laura Simon, Mónica Luján López, Ursula Matte. Hospital de Clínicas de Porto Alegre (HCPA)
Introdução: O fígado é o principal órgão envolvido na detoxificação de substâncias. A exposição ao tetracloreto de carbono (CCl4) pode causar lesão hepática aguda ou crônica pela formação do radical CCl3* e espécies reativas de oxigênio. Estas são capazes de ligar-se a biomoléculas, provocando danos a processos celulares importantes e esteatose. Algumas plantas, como a Silibinina (SBN), tem demonstrado propriedade hepatoprotetora, sendo uma alternativa para o tratamento de doenças hepáticas. Objetivo: Determinar a concentração de CCl4 que reduz a viabilidade de células HuH7 a 50% (EC50) in vitro e o efeito da SBN sobre a viabilidade celular. Materiais e métodos:
Células de hepatocarcinoma humano (Huh7) foram plaqueadas em placas de 96 poços (2x104/poço) e mantidas em cultura com meio DMEM low-glucose com 10% de soro fetal bovino e 1% de antibiótico (P/S), em incubadora a 37°C e 5% de CO2. As células foram tratadas com concentrações crescentes de SBN ou CCl4 diluídas em 1% de DMSO para avaliar a citotoxicidade e EC50, respectivamente, durante 24h. Para a determinação da ação hepatoprotetora da SBN, as células foram plaqueadas conforme citado acima com diferentes concentrações da mesma: 50 µM; 75 µM; 90 µM; 100 µM. Após 24h, foi adicionado CCl4 na concentração final de EC50. Em todos os casos foi avaliada a viabilidade celular pelo ensaio MTT. O controle positivo foram células sem tratamento e o negativo foram células com DMSO ou CCl4 de acordo com o experimento. Foi utilizado ANOVA para analise estatística.
