AVALIAÇÃO DO USO DO TESTE DE MICRÔNÚCLEO EM CÉLULAS ESFOLIADAS COMO BIOMARCADOR PARA DESENVOLVIMENTO DE CÂNCER ORAL EM USUÁRIOS DE BEBIDAS ALCOÓLICAS E ANTISSÉPTICOS Orais. 2.4- Detecção de dano genético _ Teste de micronúcleos em células esfoliadas 2.5- Aparecimento de micronúcleos em relação à ingestão de bebidas alcoólicas. A avaliação estatística dos resultados revelou que a ocorrência de dano cromossômico e apoptose foi significativamente maior nos indivíduos constituindo GE1 e GE3 em comparação ao GC (p<0,05 e p<0,001, respectivamente).
Nenhuma significância estatística foi detectada entre os grupos expostos quando comparados entre si quanto à incidência de danos cromossômicos e apoptose.
INTRODUÇÃO
Vários fatores de risco foram identificados em relação ao desenvolvimento do câncer bucal e dentre eles o hábito de fumar é o mais relatado de forma consistente, principalmente quando associado ao hábito de consumo de bebidas alcoólicas (BLOCHING et al., 2000; HINDLE et al., 2000; REIS et al., 2002; BLOCHING et al., 2008). Contudo, a relação entre a ingestão de álcool per se e o câncer bucal tem registro controverso na literatura, com muitos estudos relatando que o álcool por si só não promove o desenvolvimento desta neoplasia (JABER et al., 1998; DIETZ et al., 2000 BLOCHING e outros, 2000). Outros fatores identificados como fatores de risco para o desenvolvimento do câncer bucal incluem a infecção por tipos oncogênicos de HPV (SYRJÄNEN; SYRJÄNEN, 2000; HERRERO et al., 2003; XAVIER et al.
Micronúcleos, estruturas indicativas de dano cromossômico, são potencialmente de acordo com Holland et al. 2008), excelentes marcadores biológicos de risco de câncer e sua eficácia na avaliação de efeitos genotóxicos têm sido destacados por diversos autores (FREITA et al., 2005;.
- Considerações gerais
- Fatores de risco para o câncer oral
- Consumo de tabaco
- Ingestão de bebidas alcoólicas
- Infecção pelo HPV
- Uso de anti-sépticos bucais
- Irritação traumática da mucosa oral e Má higiene oral
- Genética e câncer
- Detecção de danos genéticos_ o Teste de Micronúcleo em células esfoliadas
- Ocorrência de micronúcleos em associação com a ingestão de bebidas alcoólicas
- Associação entre a ocorrência de micronúcleos e o uso de anti-séptico bucal
Também foi demonstrado que o uso de rapé, especialmente quando mascado, está associado ao desenvolvimento de câncer bucal (WINN et al., 1981; JOHNSON; Embora a maior parte do etanol ingerido (90%) seja secretado no fígado e processado , a parte do metabolismo que ocorre na mucosa oral está associada a efeitos mutagênicos porque o dano causado pelo acetaldeído ocorre em pequenas concentrações (40 µmol/l a 200 µmol/l) (SALASPURO et al., 2003 Triclosan, também amplamente utilizado, rompe a membrana celular das bactérias, inibindo sua ação enzimática (TORRES et al., 2000).
Recentemente, Holland et al. 2008), com o objetivo de estabelecer um protocolo para utilização do Teste de Micronúcleo em células esfoliadas, avaliou 149 estudos de laboratórios distribuídos em diversas partes do mundo. Sua ocorrência em níveis elevados pode ser indicativa de insulto genotóxico e estará relacionada ao início do processo de transformação maligna (TOLBERT et al., 1992). Necrose e queratinização são sinais de citotoxicidade e podem estar associadas à promoção de câncer via estimulação da proliferação celular (TOLBERT et al., 1992).
Diagrama ilustrando caminhos para produção de micronúcleos e alterações nucleares degenerativas (adaptado de Tolbert et al., 1992). Nos linfócitos, um aumento significativo na frequência de micronúcleos em fumantes foi descrito por Xue et al. Esses resultados foram confirmados por Castelli et al. 1999) em estudo que analisa, também em linfócitos, a ocorrência de micronúcleos e a frequência de cromossomos cromossômicos. anormalidades.
Efeitos da mastigação das folhas de Catha edulis; o consumo de cigarros industrializados e bebidas alcoólicas na indução de micronúcleos em células epiteliais orais foi investigado por Kassie et al. Por outro lado, Bloching et al. 2000) não encontraram maior ocorrência de MN associada ao consumo de bebidas alcoólicas. A falta de associação com aumento de micronúcleos confirma os resultados de outros autores de que o álcool por si só não causa genotoxicidade (STICH; ROSIN, 1983a; BLOCHING et al., 2000).
A relação entre o uso de enxaguatório bucal e a ocorrência de micronúcleos em células esfoliadas do epitélio bucal foi avaliada por Freita et al.
OBJETIVOS
MATERIAIS E MÉTODOS
- Amostra
- Caracterização da amostra
- Obtenção e preparo do material para estudo citológico (Danos cromossômicos e Apoptose)
- Análise microscópica
- Elaboração do Banco de Dados
- Análise estatística
- Aspectos éticos da pesquisa
Todas as análises citológicas foram realizadas em microscopia óptica (200X) e em teste cego de acordo com os dados obtidos no questionário. Os micronúcleos de Allen foram vistos como estruturas arredondadas, claramente separadas do núcleo, com bordas bem definidas, medindo cerca de 1/3 a 1/5 do tamanho do núcleo e possuindo estrutura e cor da cromatina semelhantes em relação ao núcleo. visualizado no mesmo plano (Figura 6a). De acordo com o protocolo de teste diferenciado de micronúcleos proposto por Tolbert; tímido; Allen, além dos micronúcleos, foram contadas células apresentando alterações nucleares degenerativas indicativas de apoptose: cariorexia, cromatina condensada e picnose (Fig. 6 b, c, d).
Um banco de dados contendo as informações coletadas no questionário e os resultados da análise citológica foi compilado em planilhas no Excel®. Os resultados da análise citológica foram avaliados com o teste condicional para comparação de proporções em situações de eventos raros (BRAGANÇA-PEREIRA, 1991), que é um teste de significância alternativo ao Qui-quadrado (χ2), nos moldes do teste exato de Fischer. teste. (KALBFLEISCH, 1979) e adequado para avaliação de eventos citogenéticos quando uma grande amostra de células é necessária para detectar a ocorrência de uma determinada alteração citológica. A metodologia aplicada para obtenção de células da mucosa oral não é um procedimento invasivo (raspagem superficial da mucosa) e foi realizada utilizando equipamento descartável que não oferece risco de lesão ou contaminação aos indivíduos da amostra.
Todas as pessoas da amostra foram informadas sobre a pesquisa e poderiam participar ou desistir no horário que lhes fosse conveniente. Os dados dos participantes da pesquisa foram confidenciais e todos os dados constantes dos formulários foram utilizados apenas pelos pesquisadores responsáveis.
RESULTADOS
Características da amostra
- Idade
- Gênero
O uso de enxaguatório bucal entre os indivíduos do GE1 variou entre frequência diária (nove indivíduos, sendo quatro deles utilizados duas vezes ao dia) e frequência semanal: cinco indivíduos que utilizavam duas vezes por semana, cinco que relataram utilizar duas vezes por semana, horários e um indivíduo que utilizavam quatro vezes por semana (Figura 10). Nove indivíduos relataram que o antisséptico utilizado não continha álcool em sua fórmula e onze utilizavam antissépticos que continham álcool. Sete indivíduos do GE3 relataram consumir bebidas alcoólicas de duas a três vezes por semana e treze uma vez por semana.
Todos relataram consumir cerveja (variação de três a 20 copos, em média 11 copos por vez), e doze deles consumiam outros tipos de bebidas alcoólicas além da cerveja. Quanto ao tempo de hábito, onze indivíduos bebiam há pelo menos um ano e no máximo cinco anos e nove referiram beber há mais de cinco anos e menos de dez anos (Figuras 12, 13 e 14). Quanto ao uso de enxaguatório bucal entre os indivíduos do GE3, a frequência variou entre uma vez ao dia (seis indivíduos) e semanalmente: seis indivíduos que utilizavam duas vezes por semana, sete que relataram utilizar três vezes por semana e um indivíduo que utilizava quatro vezes por semana. vezes. por semana (Figura 15).
Análise Citológica
A avaliação das diferenças entre os grupos quanto à ocorrência de apoptose (deduzida pela soma de cariorrexe, cromatina condensada e picnose), realizada com o mesmo teste, revelou diferença significativa entre os grupos: χG.L.= 3; p<0,001. As distribuições do qui-quadrado mostram que a ocorrência de apoptose é significativamente maior nos indivíduos dos grupos expostos (GE1, GE2 e GE3) em comparação aos indivíduos do grupo controle (GC), sem diferença significativa quando se comparam os grupos expostos a cada outro. Outros. .
DISCUSSÃO
Os efeitos genotóxicos do hábito de consumir bebidas alcoólicas, traduzidos no aumento da ocorrência de micronúcleos, têm produzido resultados controversos na literatura. 2000), em estudo que avaliou os efeitos dos hábitos de beber e fumar na indução de micronúcleos em células da mucosa oral, descreveu frequências mais elevadas dessas estruturas apenas em decorrência do consumo de tabaco. Maior ocorrência de micronúcleos em células esfoliadas da língua de indivíduos dependentes de bebidas alcoólicas foi relatada por Reis et al.. Nessas células, Stich e Rosin (1983a), que também descreveram a ocorrência de micronúcleos em consumidores de bebidas alcoólicas e/ou tabaco, maior ocorrência dessas estruturas ocorreu apenas em indivíduos nos quais esses hábitos estavam associados.
Em estudo semelhante, Meireles (2003) observou maior prevalência de micronúcleos entre consumidores de tabaco e bebidas alcoólicas em comparação com não fumantes e abstêmios dessas bebidas. Há poucas evidências na literatura avaliando a relação entre o uso de enxaguatório bucal e a ocorrência de micronúcleos em humanos. Os resultados descritos por Freita et al. 2005) apontam maior prevalência de micronúcleos entre usuários de enxaguantes bucais, mas os próprios autores chamam a atenção para o fato de que esses resultados devem ser vistos com cautela, pois o número de usuários era muito pequeno (apenas cinco indivíduos) e entre estes três estavam tabaco - e consumidores de álcool.
Dórea (2008) também descreveu maior prevalência de micronúcleos entre indivíduos que utilizam enxaguatório bucal. Por outro lado, Wiltgen (2007), avaliando a genotoxicidade de três enxaguatórios bucais, não observou diferença estatística ao comparar expostos e controles quanto à ocorrência de micronúcleos. Estes resultados concordam com os descritos por Santos (2003) e Freita (2005) que, tal como neste estudo, observaram efeitos genotóxicos do hábito de consumir bebidas alcoólicas que apenas se traduzem pela maior incidência de apoptose.
Também foi observada maior incidência de apoptose quando comparado qualquer um dos outros grupos expostos com o grupo controle, reforçando a genotoxicidade dos antissépticos já demonstrada na indução de micronúcleos isoladamente ou em conjunto com o consumo de bebidas alcoólicas. A prevalência de micronúcleos dependendo do sexo e da idade deve sempre ser considerada em estudos que avaliam a prevalência de micronúcleos em humanos.
CONCLUSÕES
Mutations in the long control region of human papillomavirus DNA in oral cancer cells and their functional consequences. Monograph on the evaluation of the carcinogenic risk of chemicals to humans, Betel-quid and Areca-nut chews and some areca-nut-related nitrosamines. The role of alcohol in non-smokers and tobacco in non-smokers in the etiology of oral epithelial dysplasia.
Impact of time lag and clinical progression on head and neck cancer prognosis. Bronchial micronuclei as a marker of early stage carcinogenesis in human tracheobronchial epithelium. Use of a fluorescent micronucleus assay to detect genotoxic effects of radiation and arsenic exposure in exfoliated human epithelial cells.
First in vivo evaluation of the mutagenic effect of Brazilian green propolis by comet assay and micronucleus assay. World Oral Health Report 2003: Continuous improvement of oral health in the 21st century - an approach of the WHO World Oral Health Programme. Cytological changes in the oral mucosa after chronic exposure to ethanol (Alerações citlógicas na mucosa bucal após exposición crónica ao ethanol.
Risk assessment of oral cancer in patients with pre-cancerous states of the oral cavity using micronucleus test and challenge assay. Application of the micronucleus test on exfoliated cells from groups at high cancer risk: tobacco chewers. Localized formation of micronuclei in the oral mucosa and tobacco-specific nitrosamines in the saliva of “reverse” smokers, khaini tobacco chewers and gudakhu users.
Application of the micronucleus test to desquamated epithelial cells from the oral cavity of bedi-smokers, a high-risk group for oral cancer.
