Sociedade Brasileira de Química ( SBQ)
33a Reunião Anual da Sociedade Brasileira de Química
Avaliação da interação com o DNA e atividade de clivagem frente ao plasmídio pBSK II de complexos de Cu(II) com o ligante “dppz”.
Everton de Britto Policarpi1* (PG), Adailton J. Bortoluzzi1(PQ), Tiago Bortolotto2 (PG), Hernán Terenzi2 (PQ), Fábio S. Miranda3 (PQ).
1Laboratório de Bioinorgânica e Cristalografia, Depto de Química, UFSC, 88040-900, Fpolis-SC. 2Centro de Biologia Molecular Estrutural, Depto de Bioquímica, UFSC, 88040-900, Fpolis-SC. 3Instituto de Química, UFF – 24020-140, Niterói-RJ. *evertonpolicar@gmail.com
Palavras Chave: Clivagem de DNA, complexos metálicos, cobre (II).
Introdução
O desenvolvimento de potenciais compostos que possam atuar como metalointercaladores, que são complexos metálicos com ligantes que tenham uma função heterocíclica aromática planar, capaz de se inserir entre os pares de bases da dupla hélice do DNA, é de grande importância podendo levar ao desenvolvimento de novos fármacos e sondas de diagnóstico.1,2
Apresentamos a caracterização por difratometria de raios X do complexo 1 “ [Cu(acac)dppz]ClO4” e do complexo 2 “[Cu(bpma)dppz](ClO4)2.0,67H2O”. A interação do complexo frente ao CT-DNA e a atividade de clivagem frente ao plasmídio pBSK II foram avaliadas.
Resultados e Discussão
Os complexos 1 e 2 foram sintetizados por meio da reação com a associação dos ligantes dppz e acac e dppz e bmpa na presença de Cu(ClO4)2, respectivamente. Estes foram caracterizados espectroscopia IV e UV-vis e por difração de raios X. Abaixo estão representadas suas estruturas cristalinas resolvidas por difratometria de raios X.
Figura 1. Estrutura cristalina do complexo 1.
Figura 2. Estrutura cristalina do complexo 2.
Titulações espectrofotométricas utilizando CT-DNA foram realizadas na faixa do UV, a fim de avaliar a interação do complexo ao DNA. Acompanhou-se a
mudança na absorbância no comprimento de onda selecionado de 275 nm para o complexo 1 e de 270 nm para o complexo 2. Calculou-se a constante de ligação intrínseca (Kb) com o DNA, sendo de 9,55x104 e 1,44x105 para os complexos 1 e 2 respectivamente.
A clivagem de DNA plasmidial através da conversão das formas do plasmídio pBSK II por meio de eletroforese em gel de agarose foi avaliada para ambos os complexos. Cerca de 400 ng de pBSK II em tampão Tris-HCl (10 mmol L-1, pH 7,4) foram tratados com diferentes concentrações (0,5 a 5 µmol L-1) dos complexos 1 e 2 na presença do ácido 3- mercaptopropiônico (1 mmol L-1) por 1 h a 37 ºC.
Após a reação, os produtos de clivagem de DNA foram separados por eletroforese em gel de agarose (0,8 %) a 90 V por aproximadamente 1 h, visualizados e digitalizados, sendo a proporção de cada forma do plasmídio quantificada. Nas condições reacionais, ambos os complexos conseguem claramente introduzir quebras simples e duplas ao DNA, o que faz converter a forma superenovelada do plasmídio em circular aberta e linear. Já em concentrações muito baixas (0,5 µmol L-1) o plasmídio é completamente clivado nestas condições. Com o aumento da concentração dos complexos, observa-se que o plasmídio começa a ser clivado em pequenos fragmentos que são indistinguíveis no gel.
Conclusões
As estruturas cristalinas dos complexos 1 e 2 foram apresentadas. A titulação espectrofotométrica com o DNA confirma a afinidade destes compostos. A atividade de clivagem dos complexos 1 e 2 frente ao plasmídio pBSK II evidenciaram a eficiência destes sistemas.
Agradecimentos
Os autores agradecem a UFSC, a UFF e ao CNPq.
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1 Erkkila, K. E.; Odom, D. T.; Barton, J. K., Chem. Rev. 1999, 99, 2777.
2 Guo, L. H.; Wei, M.Y.; Chen, H. J. Phys Chem. B, 2006, 110, 20568.
