Studies of the efficacy of GZL were performed in mice infected with the Y strain and treated by oral (PO) and intravenous (IV) routes for 20 consecutive days at doses of 1, 5 and 25 mg/kg/day, parallel to control groups BZ 100mg / kg / day and infected untreated (INT). The effectiveness of the treatment was also evaluated by parasitological tests (blood culture and CRP) and serological tests (ELISA).
INTRODUÇÃO
Animais infectados tratados com maior dose de LIC nanoencapsulado em formulações poliméricas foram capazes de promover 100% de cura parasitológica em camundongos infectados por ambas as cepas quando tratados na fase aguda da infecção.
REVISÃO BIBLIOGRÁFICA
A DOENÇA DE CHAGAS E O Trypanosoma cruzi
Após a infecção e posterior período de incubação, inicia-se a fase aguda da DC (PRATA, 2001). O BZ é mais ativo na fase aguda da doença e menos ativo na fase crônica (CASTRO et al, 2006) com taxa de cura em torno de 15%, principalmente devido a sua baixa permeabilidade celular, o que dificulta a liberação do fármaco entrar no citoplasma das células hospedeiras. , onde se localizam amastigotas (LOZANO et al, 2015).
TRATAMENTO atual DA DOENÇA ATUAL E BUSCA POR NOVAS
Além de todos esses efeitos adversos descritos, ambos requerem longos períodos de tratamento (BZ 60 dias e NF até 90 dias), e todos esses aspectos contribuem para a baixa adesão dos pacientes ao tratamento dessa doença (ESPUELAS et al, 2012 ). ). Esta informação ilustra as limitações dos tratamentos atualmente disponíveis e destaca a necessidade de avaliar novas drogas ou novos regimes de tratamento que representem anticorpos anti-T.
LACTONAS SESQUITERPÊNICAS DO GÊNERO Lychnophora: ÊNFASE
20 estimam que das mais de 50.000 espécies de plantas, 775 são chamadas de "plantas do futuro" por possuírem propriedades inerentes capazes de prevenir e erradicar doenças nacionais e até internacionais, cujo estudo deve ser incentivado. 21 Realização de testes in vivo para avaliar a eficácia terapêutica em modelo de camundongo infectado experimentalmente com T. Observa-se maior segurança com o uso de BZ em relação ao GZL em ambos os tempos de incubação quando se compara o IS de tripomastigotas sanguíneos.
Porém, ao comparar os valores obtidos pela análise em amastigotas, observa-se um valor de IS bem maior para GZL. Tais atividades, assim como seus efeitos tóxicos gerais, foram atribuídas à presença de dois grupos funcionais alquilantes: α-metileno-γ-lactona; ciclopentenona α,β-insaturada. Animais infectados tratados com LIC em solução apresentaram redução significativa da parasitemia e aumento da sobrevida em relação aos grupos controle, porém sem recuperação dos animais; LIC nanoencapsulados em formulações poliméricas de longa circulação com superfície polimérica ligada covalentemente ao polietilenoglicol (PEG) foram capazes de promover 100% de cura parasitológica em camundongos infectados com ambas as cepas quando tratados na fase aguda da infecção.
Portanto, atualmente, investimentos estão sendo feitos na avaliação da lactona sesquiterpênica goiazensolida (GZL), que possui os mesmos grupos alquil funcionais da licnofolida, LS, que já foi extensivamente estudada por nosso grupo e tem atividade tripanocida comprovada in vitro e em vivo.
JUSTIFICATIVA
OBJETIVO
OBJETIVO GERAL
OBJETIVOS ESPECÍFICOS
METODOLOGIA
- COLETA, ISOLAMENTO E CARACTERIZAÇÃO DA GOIAZENSOLIDA
- ESTUDOS DA EFICÁCIA IN VIVO
- PREPARO DAS SOLUÇÕES DE Goiazensolida LIVRE
- TRATAMENTO PARA DETERMINAÇÃO DA CURVA DOSE-RESPOSTA EM
- PROTOCOLO DE TRATAMENTO
- AVALIAÇÃO DO TRATAMENTO
- AVALIAÇÃO PÓS-TRATAMENTO
- Hemocultura (Hc)
- Reação em Cadeia da Polimerase (PCR)
- Avaliação sorológica: Sorologia convencional pela ELISA (ELISA)
- qPCR no tecido cardíaco
- CRITÉRIO DE CURA
As amostras foram mantidas em temperatura ambiente por sete dias e depois fervidas por 5 minutos a 100°C para a clivagem do DNA (BRITTO et al, 1993). Uma alíquota de 0,2 ml do lisado foi submetida à extração de DNA usando o kit WizardTM Genomic DNA Purification (Promega) seguindo todas as recomendações do fabricante. A amplificação do DNA foi processada em um termociclador PTC-150 (MJ Research, Ramsey, MA, EUA) sob as seguintes condições: 35 ciclos conforme descrito: uma fase inicial de desnaturação a 95 °C, 5 minutos, seguida por.
As amostras foram transferidas para tubos de 1,5 ml e, a seguir, foram realizados os procedimentos de extração de DNA total com o kit WizardTM Genomic DNA Purification (Promega®), de acordo com as recomendações do fabricante. Para detectar o DNA do parasita em fragmentos de coração de camundongo por qPCR, foi necessário construir uma curva padrão para determinar o número de cópias do DNA do parasita relativamente. Posteriormente, a concentração e a qualidade do DNA obtido foram determinadas com um espectrofotômetro (Nanodrop, GE Healthcare Products).
Cada placa de reação de 96 poços continha a curva padrão (em triplicata) feita a partir de uma solução obtida pela extração de DNA na concentração de 1,0 x 108 epimastigotas da cepa TY em água ultrapura autoclavada (1:10) para obter os pontos da curva. obter , que foram medidos a partir de DNA equivalente a 1,0 x 105 a 1,0 x 100 parasita. Os animais com testes parasitológicos negativos foram avaliados pela técnica de qPCR do tecido cardíaco para determinar a presença de T.
RESULTADOS
AVALIAÇÃO DA EFICÁCIA TERAPÊUTICA DOS TRATAMENTOS COM
- Curva de parasitemia de animais infectados pela cepa Y, tratados com
- Parâmetros derivados da curva de parasitemia
- Hemocultura (HC)
- PCR
- ELISA
- qPCR Coração
- Sobrevida dos camundongos
- Eficácia do tratamento dos animais infectados com a cepa Y de T. cruzi
Apenas os grupos tratados com GZL 25 mg/kg/dia PO e IV e o grupo 5 mg/kg/dia IV apresentaram diferença estatística entre os grupos tratados com GZL ou BZ, os demais grupos não apresentaram diferença estatística (Figura 6). . INT: grupo controle infectado não tratado; BZ (100,0 mg/kg/dia): grupo infectado tratado com benznidazol na dose de 100,0 mg/kg/dia; GZL mg/kg/dia VO: grupos de animais infectados e tratados com goiazensolida nas doses de 1, 5 ou 25 mg/kg/dia via oral; GZL mg/kg/dia IV: grupos de animais infectados e tratados com goiazensolida nas doses de 1, 5 ou 25 mg/kg/dia por via intravenosa; d.p.i.: dia pós-infecção. Todos os animais tratados, com exceção daqueles tratados com GZL 25 mg/kg/dia PO, apresentaram PMPs semelhantes entre si (Tabela 1).
Quanto à avaliação dos animais por hemocultura, apenas os grupos tratados com GZL 5 mg/kg/dia por via oral e 5 mg/kg/dia por via IV, foram 100% negativos. O grupo de animais tratados com BZ 100 mg/kg/dia apresentou 42,9% de negatividade, enquanto o grupo INT apresentou 100% de positividade neste teste (Tabela 3). NC: grupo de animais controle não infectados e não tratados; INT: grupo de animais controle infectados não tratados; BZ (100,0 mg/kg/dia): grupo de animais infectados e tratados com benznidazol na dose de 100,0 mg/kg/dia; GZL mg/kg/dia VO: grupos de animais infectados e tratados com goiazensolid nas doses de 1, 5 ou 25 mg/kg/dia via oral; GZL mg/kg/dia IV: grupos de animais infectados e tratados com goiazensolid nas doses de 1, 5 ou 25 mg/kg/dia por via intravenosa; dpt: dias após o tratamento; DO: densidade óptica.
CH: Hemocultura; PCR: reação em cadeia da polimerase; ELISA: ensaio imunossorvente ligado a enzima; qPCR: reação em cadeia da polimerase quantitativa; BZ: Grupo de animais infectados e tratados com benznidazol 100 mg/kg/dia; GZL mg/kg/dia: Grupos de animais infectados e tratados com goyazensolid nas doses de 1, 5 ou 25 mg/kg/dia por via oral ou intravenosa; INT: Grupo controle de animais infectados não tratados. A sobrevida dos animais infectados experimentalmente com a cepa Y e tratados com GZL 5 mg/kg/dia PO foi de 100%, seguido de GZL 1 mg/kg/dia IV e BZ 100 mg/kg/dia, que apresentaram sobrevida de 87,5 % (Tabela 2). Embora nenhuma cura tenha sido observada em camundongos de acordo com o critério de cura aprovado, é importante observar que GZL é administrado em doses de 5 mg/kg/dia por via oral e 1 mg/kg/dia IV por 20 dias consecutivos na fase aguda para . infecção com a cepa Y de T.
AVALIAÇÃO GERAL DA EFICÁCIA TERAPÊUTICA EM CAMUNDONGOS
DISCUSSÃO
Considerando os resultados promissores já obtidos in vitro pelo nosso grupo de pesquisa, foi iniciada a próxima fase deste estudo, que foi a avaliação do efeito do GZL em solução no tratamento de camundongos Swiss infectados com a cepa Y por T. O GZL utilizado neste estudo foi escolhido de acordo com os resultados obtidos em experimentos anteriores com camundongos, utilizando esta mesma linhagem de parasitos, pelo chamado "teste rápido" de anti-T. Observou-se que as menores doses de GZL geraram os melhores efeitos na redução da parasitemia, levando à escolha das doses de 1 mg/kg/dia; 5 mg/kg/dia e 25 mg/kg/dia por via oral e intravenosa na continuação de sua avaliação no "teste longo" ou clássico (BRENER, 1962) da atividade terapêutica do GZL em modelo murino.
Da mesma forma, ao analisar os resultados obtidos com o tratamento de animais também infectados com a cepa Y T. No entanto, verificou-se que o GZL administrado nas doses de 5,0 mg/kg/dia por via oral e 1,0 mg/kg/dia por via intravenosa, por via, para 20 dias consecutivos durante a fase aguda da infecção, conseguiu reduzir a parasitemia (AUC e PMP) e manter a sobrevida de 100% dos animais, diferente do observado nos animais INT (12,5%). , sendo estes resultados superiores aos obtidos com o medicamento de referência BZ testado em paralelo. Além disso, nos animais tratados com GZL 5 mg/kg/dia via oral, todos os outros parâmetros parasitológicos (HC e PCR) foram repetidamente negativos em todas as avaliações, o que é um excelente indicador de terapia eficaz.
No entanto, se considerarmos apenas os resultados parasitológicos (HC, PCR sanguíneo e qPCR cardíaco), até 86% de alguns grupos foram negativos. Da Silva et al, (2013) realizaram um estudo com dois LS, Psilostachyin A e Cynaropicrin, avaliando suas atividades em camundongos infectados com cepas Y e Colombiana de T. Nenhuma atividade significativa foi observada em comparação com o medicamento de referência BZ, e ainda não conseguiram demonstrar que podem prevenir a morte de animais. No entanto, os resultados de sobrevivência de animais tratados com GZL aqui encontrados são semelhantes aos descritos por BRANQUINHO et al. Gent.
CONCLUSÃO
A simple protocol for physical digestion of Trypanosoma cruzi kinetoplast DNA present in blood samples and its application in polymerase chain reaction (PCR)-based diagnosis of chronic Chagas disease. Autoimmunity in Chagas disease cardiopathy: biological relevance of a cardiac myosin-specific epitope cross-reactive to an immunodominant Trypanosoma cruzi antigen. Dias JC, Silveira AC, Schofield CJ. The impact of Chagas disease control in Latin America: a review.
52 DIAS JC, SILVEIRA AC, Schofield CJ. The impact of Chagas disease control in Latin America: an overview. Improvement of pharmacokinetic profile and efficacy of sesquiterpene lactone in nanocarriers in the experimental Chagas disease in mice. 54 microcrystal preparation by solvent change precipitation and in vivo evaluation in the treatment of Chagas disease.
Chagas disease: current epidemiological trends after the interruption of vectorial and transfusion transmission in the Southern Cone countries. The urgent need to develop new drugs and tools for the treatment of Chagas disease. ARMSTRONG, WIM DEGRAVE, ZILTON DE ARAÚJO ANDRADE; In vitro and in vivo experimental models for drug screening and development for Chagas disease; Mem Inst Oswaldo Cruz, Rio de Janeiro, Vol.
PREMIAÇÃO
