TÍTULO:
Efeito Antimicrobiano da Terapia Fotodinâmica Utilizando-se Curcumina Associada a Ultrasom em Biofilme de Streptococcus mutans
AUTORES:
Natalia Costa Martins¹; Alessandra Nara de Souza Rastelli¹; Priscila Borges Gobbo de Melo¹, Adilson César de Abreu Bernardi², Vanderlei Salvador Bagnato³. ¹Araraquara, Faculdade de Odontologia de Araraquara – UNESP, Curso de Odontologia, e-mail: naatcm@hotmail.com
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Bolsista na categoria - PIBIC/CNPq.²Araraquara, Universidade de Araraquara – UNIARA, Curso de Biomedicina;³São Carlos, Instituto de Física de São Carlos - IFSC, Universidade de São Paulo – USP, Curso de Física.INTRODUÇÃO:
A cavidade oral promove ambiente propício para a colonização de microorganismos e a sua organização na forma de biofilmes. O desequilíbrio desse biofilme e consequente proliferação de bactérias do tipo Streptococcus mutans permitem o surgimento da cárie dental¹. O Streptococcus mutans é um dos principais fatores etiológicos da cárie dental e sua prevenção deve ser baseada, principalmente, na desorganização dos microoganismos. Por isso agentes químicos podem ser utilizados como métodos auxiliares no controle de biofilmes orais³. A clorexidina é o agente antimicrobiano mais utilizado para essa finalidade², porém seus efeitos colaterais associado ao uso prolongado limita sua indicação³. Dessa forma é importante verificar o efeito antimicrobiano da inativação fotodinâmica (IFD) associada ao ultrassom (STFD).
OBJETIVOS:
O objetivo do estudo foi avaliar o efeito antimicrobiano da inativação fotodinâmica (IFD) associada à terapia ultrassônica (STFD) em biofilme de Streptococcus mutans, utilizando-se curcumina irradiada por fonte de luz.
MATERIAL E MÉTODOS:
Inicialmente, as concentrações inibitórias mínimas (CIM) e bactericida mínima (CBM) foram testadas, sendo as concentrações de 40 e 80µM selecionadas para os demais experimentos. Biofilmes de S. mutans foram induzidos em placas de 96 poços durante 7 dias. Para a citotoxicidade no escuro, a curcumina foi incubada durante 5 minutos. Para a IFD, os grupos foram incubados durante 5 minutos (pré-irradiação) e irradiados por LED azul. Já para a IFD + ultrassom, foram incubados em cuba ultrassônica durante 5 minutos (pré-irradiação) e irradiados por LED. Após os tratamentos, as cepas foram semeadas em BHI ágar e incubadas a 37°C durante 48 horas para determinação do número de UFC/mL. Além disso, os biofilmes foram submetidos à análise de microscopia confocal de varredura utilizando-se corante Live/DeadTM BacLight™ (ThermoFisher Scientific).
RESULTADOS:
Os resultados foram submetidos à análise de variância (ANOVA) e teste de Tukey ao nível de 5%. Reduções significativas no número de células viáveis de S. mutans foram observadas nos grupos tratados com IFD + ultrassom (L+D80U+) promovendo 4log10 de redução bacteriana quando comparado ao grupo controle negativo (L-D-), 2log10. Além disso, o grupo clorexidina + ultrassom, eliminou completamente os microorganismos. As imagens em microscopia confocal de varredura confirmam os resultados obtidos.
DISCUSSÃO:
A clorexidina é considerada o padrão ouro no controle do biofilme bacteriano, porém este medicamento possui suas desvantagens³. Por isso, a IFD surge como método alternativo para inativação microbiana, entretanto, ela também possui limitações². Dessa forma, a Sonoterapia Fotodinâmica (STFD), a associação da IFD + ultrassom, pode se tornar uma opção eficaz para o controle de biofilme. O ultrassom gera excitação eletrolítica no fotossensibilizador, aumentando a produção de espécies reativas de oxigênio, melhorando ainda mais a ação da inativação fotodinâmica e a penetração do fotossensibilizador². Logo, a associação das duas técnicas, leva a maior toxicidade aos tecidos quando comparadas de forma isolada. Com isso, de acordo com a literatura e com os resultados obtidos, foi possível observar, que a inativação fotodinâmica (IFD) associada ao ultrassom, pode ser técnica eficaz para o controle dessa bactéria na cavidade bucal.
REFERÊNCIAS:
1. Araújo NC, Fontana CR, Bagnato VS, Gerbi MEM. Photodynamic antimicrobial therapy of curcumin in biofilms and carious dentine. Lasers Med Sci. 2014;29(2):629–35.
2. Harris, F.; Dennison, S.R.; Phoenix, D.A. Using sound for microbial eradication – light at the end of the tunnel? FEMS Microbial Lett. 2014;356(1):20-2.
3. Wang, H.; Wang, X; Wang, P; Zhang, K; Yang, S; Liu, Q. Ultrasound enhances the efficacy of chlorin E6-mediated photodynamic therapy in MDA-MB-231 cells. Ultrasound Med Biol. 2013;39(9):1713-24.
