Sociedade Brasileira de Química ( SBQ)
29a Reunião Anual da Sociedade Brasileira de Química 1 (CDCl3,
1H-400MHz,
13C-125MHz, m/z 341 [M+Na]=
3.50 Å
3.22Å 3.89Å 3.50 Å
3.22Å 3.89Å
Dicetopiperazinas produzidas pelo fungo endofítico VA17 associado à Viguiera arenaria (Asteraceae)
Denise O. Guimarães
1(PG)*, Carlos H. T. P. Silva
1(PQ), Cristina Kawano
1(PQ), Gustavo H.
Goldman
2(PQ), Norberto P. Lopes
3(PQ), Mônica T. Pupo
1(PQ).
e-mail: deol@fcfrp.usp.br
1. Departamento de Ciências Farmacêuticas – FCFRP/USP
2. Departamento de Análises Clínicas, Toxicológicas e Bromatológicas – FCFRP/USP 3. Departamento d e Física e Química – FCFRP/USP
Palavras Chave: dicetopiperazinas, fungos endofíticos
Introdução
Os alcalóides dicetopiperazínicos constituem uma classe de metabólitos secundários amplamente distribuída em fungos, com diversas atividades biológicas, incluindo atividade antibiótica, imunossupressora e antitumoral1. O isolamento de duas dicetopiperazinas (DKP) inéditas (1 e 2) e uma (3) já relatada na literatura2 demonstram a contribuição dos fungos endofíticos na busca de novas substâncias.
Resultados e Discussão
As DKPs foram isoladas após processos cromatográficos a partir do cultivo envolvendo processo fermentativo em duas etapas:
Figura 1. Obtenção das dicetopiperazinas 1, 2 e 3.
As estruturas das dicetopiperazinas foram estabelecidas com base nos dados de RMN 1H, 13C, HMQC, HMBC e NOE-diff.
Experimentos NOE-diff com 3 permitiram correlação entre os H do grupo SCH3 (δ 1,14) com os H aromáticos (δ 7,16; 6,80) indicando uma conformação dobrada para a molécula. Estudos de modelagem molecular utilizando o programa SPARTAN pelo método MONTE CARLO3 confirmaram a conformação dobrada para a DKP 3 como a predominante.
Houve divergência na classificação do fungo VA17, através de taxonomia convencional – Humicola sp. – e identificação molecular – Fusarium sp. A quimiotaxonomia não é tão difundida na classificação de microrganismos, porém pode fornecer informações adicionais na correlação de metabólitos/microrganismos contribuindo para a identificação. A substância 3 foi previamente isolada de Fusarium chlamydosporum2. A produção de 3 por VA17 poderia sugerir sua classificação como pertencente ao gênero Fusarium, conforme resultado obtido através do sequenciamento de seu DNA.
Conclusões
Fungos endofíticos são fontes naturais de crescente interesse, por serem organismos ainda pouco explorados e que podem oferecer oportunidades de inovação na descoberta de novos compostos bioativos4.
Agradecimentos
Meio pré-fermentativo Jacks on - 24 hs . Meio Fermentativo Czapek - 144 hs.
Fluído da cultur a Micélio
Mac eraç ão em MeOH - 7 dias Par tiçã o co m AcOEt
Ex tr ato AcOE t (232,0mg)
CC e m sílica flash FM: Hex/AcO Et ( 1:1 e 1 :4) 1 0 f raç ões
F raç ão 8 ( 10,0mg)
CLAE - DAD C-1 8 2 50 x 10 mm Me CN/H2O ( 7:13 ) 4mL/min loop 20 0 ml ( 0.5 mg )
Extr ato MeOH (9,48g)
1. Suspe nsão em MeO H/H2O (1 :3) 2. Extra ção com C H2Cl2
CH2Cl2 MeOH-H2O
1. Eva po ra ção CH2Cl2
2. Ext raç ão Me OH/He x AcOEt
Hexano (0,96g)
MeOH (0,51g)
Ac OEt (0,47g)
MeOH-H2O (7,35g)
CC - sílica gel FM: He x/AcOEt (4 :1 e 1: 1)
Fração 6 (9,4mg)
Fraç ão 7 (11,4mg)
Pre cipitaç ão CL AE - DAD
C- 18 250 x 1 0mm MeCN/ H2O ( 7:1 3) 5 mL /min loo p 2 00 ml ( 0. 5mg)
DICETOPIPE RAZINA 1 (0,6mg)
DICE TOPIP ERAZINA 2 (1,0mg)
DICETOPIPERAZINA 3 (6,7 mg) VA1 7
3 (CDCl3, 1H-400MHz, 13C-125MHz, m/z 403 [M+Na]=
NH
N O
O
O
H H
9 .05 s
2.99 d (J 1 2.4)
3.52d (J 12.4)
6.86 d (J 8 .5, 2 H)
7.14 d (J 8.5, 2H )
4.4 7 d (J 7.4, 2H)
5.47 tl (J 7.4) 1.79 s
1.74 s 3.52 dl
(J 16.5)
162 .4
67.8 124 .9
132.2
115.1 15 7.9
65 .1119.4 1 38.6
25.9
S 18.4
Me
1 64.3
2.22 s 13 .2
H H
OCH3
158.8 61 .7
4.0 5 d (J 16 .5)
3.73 s
2 (CDCl3, 1H- 400MHz, 13C- 125MHz, m/z 387 [M+Na]= N
H
N O
O
OH
O H
H
H H Me
6.30 s 2.75 d (J 17 .6)
3.50 d (J 1 7.6)
3.00 d (J 13.6)
3.20 d (J 13.6)
6.86 d (J 8.6, 2H)
7.08 d (J 8.6, 2H)
4.50 d (J 6.8, 2H)
5.40 b r t (J 6.8) 1.80 b r s
1.74 br s 2.84 s
52.1 167.3
82.6 48.4 125 .1 131.7
115 .2 159.0
6 5.41 19.7 138.9
26.2
18.5 33.8
1 4
N H
HN O
O
O
H H 9.05 s 5.05 s
1.14 s
2.82 d (J 13.1)
3.41 d (J 13.1)
6.80 d (J 8.6, 2H)
7.16 d (J 8.6, 2H)
4.4 5 d (J 6.6, 2H)
5.37 b r t (J 6.6) 1.68 b r s
1.72 br s 8.57 s
57.7 164.7
68.0 41.6 127.0 132.2
114.5 157.9
64 .51 20.4 137.2
25.7
18.3 S
H
S Me Me
164.2 9.4
2.14 s
13.0 à NOEs observados
Sociedade Brasileira de Química ( SBQ)
25a Reunião Anual da Sociedade Brasileira de Química - SBQ 2
FAPESP BIOTA BIOprospecTA
1 Ameur, R. M. B; Mellouli, L; Chabchoub, F.; Fotso, S. e Bejar, S.
Chem. Nat. Compd 2004, 40, 510.
2 Usami, Y.; Aoki, S.; Hara, T.; Numata, A. J. Antibiot. 2002, 55, 655.
3 SPARTAN´04, v.1.0.3, Warefunction, Inc., Irvine, CA, 2005.
4 Clardy, J.; Walsh, C. Nature 2004, 432, 829.
