XXV Congresso de Iniciação Científica
Estabilização de células do fungo Rhizomucor pusillus imobilizadas em farelo de trigo com glutaraldeído.
Jéssica Fernanda Alves dos Santos* (IC), Janaina P. Borges (PG), Roberto da Silva (O). Curso de Bacharel em Química Ambiental. Bolsista CNPq. *jessicaf.alves@yahoo.com.br
Laboratório de Bioquímica e Microbiologia Aplicada (IBILCE/UNESP). São José do Rio Preto – SP.
Palavras Chave:Hidrólise, Catalisadores, Glutaraldeído.
Introdução
As enzimas são catalisadores biológicos que possuem estrutura química definida, sendo capazes de catalisar inúmeras e diferentes reações químicas1. Enzimas imobilizadas são enzimas ou células fisicamente confinadas ou localizadas em uma região definida do espaço com retenção de suas atividades catalíticas. A transesterificação de triglicerídeos com um álcool, na presença de lipases imobilizadas tem sido útil para a produção de biodiesel, pois reduzem os custos do processo, além de permitir sua reutilização. A imobilização também oferece uma melhor estabilidade à enzima ou às células em presença de determinados solventes, inibidores e outros agentes desnaturantes2.
Objetivo
O objetivo do trabalho foi imobilizar as hifas do fungo RP em farelo de trigo e posteriormente modificá-las com glutaraldeído, procedendo ao teste de hidrólise das células brutas (micélio) e modificadas.
Materiais e Métodos
O micélio imobilizado em trigo e o micélio com glutaraldeído foram submetidos à reação de hidrólise e suas atividades lipolíticas foram quantificadas através de titulação com KOH 0,0469 M.
As atividades hidrolíticas foram realizadas adicionando-se 0,5 g das células imobilizadas a uma solução contendo 0,09 g de goma arábica, 4 mL de tampão fosfato de sódio pH 7, 3 mL de água destilada e 1 mL de óleo de soja, que foram encubados a 45ºC sob agitação de 150 rpm (realizados em triplicata). A atividade hidrolítica foi expressa em U/g, que é definida como a quantidade de enzima necessária para liberar 1 µmol de ácido graxo por minuto por grama de material, nas condições do ensaio.
Resultados e Discussão
Através da Tabela 1 é possível observar que o valor da atividade de hidrólise é maior nas hifas com adição de glutaraldeído, obtendo um aumento de
63,15% em relação às hifas imobilizadas em trigo sem a adição de glutaraldeído.
Tabela 1. Atividade Hidrolítica das hifas de Rhizomucor pusillus utilizando óleo de soja.
Micélio Hidrólise (U/g) RP sem glutaraldeído 0,72
RP com glutaraldeído 1,14
Esse aumento da atividade hidrolítica pode ter ocorrido devido às ligações químicas multipontuais covalentes que o glutaraldeído faz com a enzima, imobilizando-a e permitindo que não ocorram perdas de massa e outros eventos que possam prejudicar a eficiência da conversão do óleo de soja para ácido graxo, ou seja, confere maior estabilidade à enzima3.
O glutaraldeído é um agente bifuncional reticulante, que ao se ligar com a enzima preserva suas características e permite sua reutilização. Este fato é comprovado pelo aumento da atividade hidrolítica em relação à célula sem ativação.
Conclusão
O glutaraldeído aumentou a eficiência da hidrólise, confirmando que ocorreu a ativação das hifas do RP. Essa metodologia será utilizada para os próximos testes de transesterificação e de reutilização enzimática.
Agradecimentos
CAPES, CNPq.
1Brena , M., Batista-Viera, F. Immobilization of Enzymes and Cells.
Methods in Biotechnology, Second Edition, v. 22, p. 20-30, 2006.
2 Carvalho, W. ET al. Uso de biocatalisadores imobilizados: uma alternativa para a condução de bioprocessos. Analytica, 2006, 23, 60.
3Rosane, I.; Oliveira, Z. W.; Vieira, C. I. Construção e aplicação de biossensores usando diferentes procedimentos de imobilização da peroxidase de vegetal em matriz de quitosana. Quim. Nova, Vol. 29, n.
5, 932-939, 2006.
