Sociedade Brasileira de Química (SBQ)
33a Reunião Anual da Sociedade Brasileira de Química
ESTUDO DA ATIVIDADE INIBITÓRIA DA ACETILCOLINESTERASE NO EXTRATO DE STREPTOMYCES LURIDISCABILI
Simone Cavalcante Silva1*(IC), Flávia Mandolesi P. de Melo2 (PG) , Itamar Soares de Melo2 (PQ), Luis Alberto Beraldo de Moraes1(PQ), Carmen Lucia Cardoso1(PQ)
1Departamento de Química da FFCLRP, Universidade de São Paulo.
2Laboratório de Microbilogia Ambiental - EMBRAPA Meio Ambiente – JaguariúnaSP simone cavalcante <mone_sii@yahoo.com.br>
Palavras Chave: microorganismos, doença de Alzheimer inibição enzimática, acetilcolinesterase
Introdução
A Doença de Alzheimer (DA) é uma doença neurodegenerativa que acarreta perda da memória e diversos distúrbios cognitivos. Os portadores da (DA) possuem níveis reduzidos de acetilcolina, um neurotransmissor cerebral, envolvido na transferência de sinais da sinapse. Tal neurotransmissor é hidrolisado pela enzima acetilcolinesterase (AChE) gerando colina e acetato.
Uma abordagem de estudo para o tratamento da DA consiste na inibição da AChE promovendo o aumento dos níveis de acetilcolina.1 Considerando que extratos naturais são uma fonte promissora de substâncias ativas e a riqueza e especialidade encontrada em ambientes como a rizhosfera, rica em fungos e bactérias2,3 tem despertado interesse no estudo de moléculas produzidas por esses microrganismos.3 Este trabalho tem como objetivo geral o fracionamento monitorado do extrato ativo contra a acetilcolinesterase de Streptomyces luridiscabili isolado da rizosfera do milho buscando identificar os metabólitos responsáveis pela atividade observada.
Resultados e Discussão
Após uma triagem inicial de 54 extratos provenientes de processos de fermentação de actinomicetos isolados da rizosfera 20 mostraram atividade relevante contra acetilcolinesterase. O extrato do microorganismo Actino 14, identificado como Streptomyces luridiscabili foi selecionado para caracterização e isolamento de seus metabólitos secundários, uma vez que apresentou ótimo resultado quanto à atividade antiacetilcolinesterase.
As condições de fermentação foram otimizadas em diferentes meios semi-sólidos de feijão, soja, amendoim branco, trigo, canjica e arroz. Os extratos obtidos foram submetidos a ensaios autográficos em CCDC para a avaliação da atividade inibitória da acetilcolinesterase com os ensaios de Ellman4 e Marston5. O extrato bruto ativo, fermentado por 21 dias em meio de amendoim branco apresentou os melhores resultados no ensaio biológico.
O extrato foi caracterizado por Espectrometria de Massas (Figura 1) e via CLAE (Coluna C18 eluição gradiente em MeOH:H2O (5-100% de MeOH) eluição isocrática (MeOH:H2O 3:97) Figura 2.
.
Fig. 1 . Espectro de massas do extrato ativo S. luridiscabili
Figura 2: Cromatograma do extrato bruto de S. luridiscabili.
(meio: amendoim branco). Análise por gradiente (azul) isocrático (preto).
Este extrato foi submetido a um sistema de partição líquido-líquido utilizando como solventes EtOH, hexano, CHCl3, AcOEt e n-BuOH. A atividade biológica foi observada apenas na fração n- BuOH que está na fase de identificação dos princípios ativos
Conclusões
Os resultados obtidos indicaram o quão promissores são os extratos da actinobactérias na busca de substâncias com atividade antiacetilcolinesterase.
Utilizando ensaios que forneceram informações qualitativas sobre as atividades biológicas um extrato promissor foi selecionado para o fracionamento, purificação e identificação estrutural de substâncias ativas
Agradecimentos
À CNPq, FAPESP e CAPES pelo auxílio à pesquisa e bolsas concedidas.
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1http://www.alz.org/alzheimers_disease_what_is_alzheimers.asp
2 Gunatilaka, A. A. L., J. Nat. Prod. 2006, 69, 509.
3. Houghton, P.J. Ren . Y, Howes, M-J. Nat. Prod. Reports, 2006, 23, 181-199
4 Ellman, G. L. Biochem. Pharmacol.; 1961, 7:88.
6 Marston, A.; Kissling, J. Hostettmann, K.; Phytochem. Anal. 13, 51–
54, 2002.
Minutes
0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 17.5 20.0 22.5 25.0 27.5 30.0 32.5 35.0
mAU 0500100015002000 mAU
0 500 1000 1500 2000 De te ctor B-210 nm
actino14 ame ndoim branco iso.dat Retention Time
De te ctor B-210 nm
210nm Actino14 -amendoim branco.dat
Fernanda actino 14_ amendoim
300 400 500 600 700 800 900 1000 1100 1200 1300 1400m/z
%
0 100
beto_050608_67 25 (0.480) Cm (22:90) TOF MS ES+
2.90e3 288.119
397.262
381.060 289.135
290.134 462.360
490.219
504.243
505.403 755.571
727.548 524.387
533.400 534.240
562.291723.186 756.572
783.468
832.292848.417946.426 1149.545
