XXXI Congresso de Iniciação Científica
Mutações em genes do complexo SDH associadas à resistência ao fungicida fluxapiroxade no patógeno da brusone do trigo.
Gabriela Valério Leardine, Paulo Cezar Ceresini, Samara Nunes Campos, Tatiane Carla Silva, Abimael Gomes da Silva, Departamento de fitossanidade e engenharia rural dos solos, Ilha Solteira-SP, UNESP, Curso de Engenharia Agronômica, gabrielaleardinevl@gmail.com, bolsista PIBIC/CNPq.
Palavras Chave: Pyricularia graminis-tritici, seleção natural, evolução.
Introdução
O fungo Pyricularia graminis-tritici é o agente causal da brusone, uma das principais doenças fúngicas da cultura do trigo4.
O manejo da brusone é realizado principalmente pelo uso de fungicidas aplicados na parte aérea2. Os fungicidas inibidores da succinato desidrogenase (SDHI) de segunda geração, são os mais modernos, recém registrados pelo Ministério da Agricultura, para o manejo do trigo no Brasil, considerados, de acordo com o FRAG (Fungicide Resistance Action Group) altamente eficientes. Entretanto, apresentam risco médio/alto evolutivo para o desenvolvimento de resistência nas populações de fitopatógenos associados a doenças1.
Objetivo
Buscar por evidências de mutações em sequências nucleotídicas para três genes do complexo SDH que se correlacionam com o nível de resistência ao fungicida SDHI fluxapiroxade nas populações do patógeno.
Material e Métodos
Foram utilizados 18 isolados de populações de P.graminis-tritici selecionados de acordo com os fenótipos desde sensíveis a moderadamente resistentes. A extração de DNA foi realizada com o kit Gen Elute Plant Genomic DNA (Sigma Aldrich, EUA), a partir de micélios fúngicos cultivados em meio líquido BD sob agitação, a 190 rpm durante 5 dias. Iniciadores específicos foram desenhados para amplificações das sequências alvo dos genes do complexo SDH (SDH-B, SDH-C E SDH-D). As reações de polimerase em cadeia (PCR) foram efetuadas e após observadas as amplificações dos fragmentos de DNA em gel de agarose 1%, os produtos resultantes via PCR foram submetidos a reação de sequenciamento no laboratório CREBIO – Jaboticabal/SP, utilizando-se sequenciador automático ABI 3730xl DNA Analyzer (Applied Biosystems). As sequências foram analisadas e alinhadas no programa Geneious R 9.0.5 (Biomatters, Nova Zelândia).
Resultados e Discussão
Nas análises das sequências nucleotídicas não foram detectadas para nenhum dos 18 isolados estudados variações não-sinonímias nos genes sdh- B, C e D do Pygt, que levariam as alterações de aminoácidos nas proteínas e poderiam estar correlacionadas com diferentes níveis de sensibilidade ao fungicida fluxapiroxade SDHI.
Como a maioria das linhagens utilizadas para investigar o mecanismo de resistência também foi insensível aos fungicidas Qol e DMI em estudos anteriores em nosso grupo de pesquisa, além de moderadamente resistente ao SDHI, neste caso, como a resistência não estaria associada a mutações isso poderia indicar a super expressão da bomba de efluxo como mecanismo de resistência3. Assim como mutações MDR em isolados de campo de Zymoseptoria tritici proporcionam super expressão de genes codificantes para bombas de efluxo, foi identificado como um fator de contribuição a super expressão do gene MgSF1, contudo, ainda não foi esclarecido todos os mecanismos que conferem MDR5.
Conclusões
Não foram encontrados indícios de que a resistência está associada a mutações em quaisquer dos três genes que codificam os componentes alvos do complexo SDH (SDH B, C e D).
Agradecimentos
Apoio FAPESP (processo 2018/21197-0) e CNPq:
PIBIC – Edital PROPe 04/2018.
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1 Fungicide resistance action group. FRAG-UK statement on SDHI fungicides and resistance risk in cereals - April 2014.
2 Goulart, A. C. P.; Sousa, P. G.; Urashima, A. S. Damages in wheat caused by infection of Pyricularia grisea. Summa Phytopathologica, v.
33, p. 358-363, 2007.
3 Hawkins, N. J.; Fraaije, B. A. Fitness penalties in the evolution of fungicide resistance. Annual Review of Phytopathology, v. 56, p. 16.1–
16.22, 2018.
4 Lima, M.I.P.M. Giberela ou Brusone? Orientações para identificação correta dessas enfermidades em trigo e em cevada. Passo Fundo:
Embrapa Trigo, 2004. 56 p. html. (Embrapa Trigo. Documentos Online;
40).
5 Omrane, S. et al. Fungicide efflux and the MgMFS1 transporter contribute to the multidrug resistance phenotype in Zymoseptoria tritici field isolates. Environmental Microbiology, v. 17, p. 2805–2823, 2015.
