Sociedade Brasileira de Química ( SBQ)
30a Reunião Anual da Sociedade Brasileira de Química
Síntese de dissacarídeos glicosídicos e glicopeptídeos como potenciais substratos de trans-sialidase de Trypanosoma cruzi
(TcTS)
Vanessa Leiria Campo1 (PG)*, Rob A. Field2 (PQ), Ivone Carvalho1 (PQ) (vlcampo@fcfrp.usp.br) 1. Faculdade de Ciências Farmacêuticas de Ribeirão Preto - USP. Av. do Café S/N, CEP 14040-903, Ribeirão Preto - SP, Brazil.
2. Centre for Carbohydrate Chemistry, School of Chemical Sciences and Pharmacy, University of East Anglia, Norwich,
NR47TJ, UK.
Palavras Chave: Trypanosoma cruzi, trans-sialidase, dissacarídeo glicosídico, glicopeptídeo
Introdução
T. cruzi é incapaz de sintetizar ácido siálico e usa a enzima trans-sialidase (TcTS) para retirar este monossacarídeo de glicoconjugados do hospedeiro para sialilar moléculas aceptoras, como mucina-GPI, presentes na sua membrana plasmática1. Considerando a heterogenicidade das moléculas de mucina de T. cruzi, não existem compostos disponíveis que atuem como substratos glicopeptídicos sintéticos. Desta forma, este trabalho apresenta a síntese do dissacarídeo glicosídico aLacNAcThr 1 e do glicopeptídeo NH2(Thr)2- (aLacNAc)-(Thr)3-GlyOH 2 como potenciais substratos da enzima TcTS.
Resultados e Discussão
A reação de glicosilação do dissacarídeo aLacN3Cl 3 com o aminoácido treonina 4, contendo os grupos protetores N-Fmoc (9-Fluorenilmetoxicarbonil) e O-Bn (COOBn) na presença de HgBr2 (promotor) e 1,2- dicloroetano (solvente) durante 9h a 90ºC2 forneceu o produto aLacN3-FmocThrOBn 5 (60%), o qual foi submetido à acetilação redutiva para conversão ao derivado aLacNAc-FmocThrOBn 6 (65%). A etapa final de preparação de 6 para posterior acoplamento em cadeia peptídica envolveu a remoção do grupo éster O-Bn por meio de hidrogenação catalítica clássica (10% Pd-C/H2), fornecendo o produto 7 (85%) após 1h de reação. Com a finalidade de ser empregado em ensaios enzimáticos com TcTS, o composto 6 foi totalmente desprotegido; o aumento do tempo de reação de hidrogenólise de 7 para 8h conduziu à remoção do grupo N-Fmoc e a desproteção dos grupos O-Ac foi realizada na presença de solução de NaOMe 1M, sendo assim obtido o produto aLacNAcThr 1 (90%). (Esquema 1).
Esquema 1. Síntese dos compostos 6, 7 e 1.
A síntese do glicopeptídeo 2 em fase sólida foi realizada na presença dos reagentes de acoplamento PyBOP (hexafluorofosfato de benzotriazol-1-iloxi- tripirrolidinofosfônio) e HOBt (1-hidroxi-benzotriazol), e da base DIPEA em DMF, estando representada no Esquema 2.
Esquema 2. Procedimento de síntese em fase sólida do glicopeptídeo 2.
Após O-desproteção das unidades de açúcar, o glicopeptídeo 2 foi purificado por CLAE utilizando coluna de fase reversa C18 semi-preparativa, sendo obtido com 35% de rendimento.
Conclusões
O dissacarídeo glicosídico aLacNAcThr 1 e o glicopeptídeo NH2(Thr)2-(aLacNAc)-(Thr)3-GlyOH 2 obtidos por síntese em solução e por síntese em fase sólida foram caracterizados pelas análises de RMN
1H e ESI-MS, e estão sendo empregados em ensaios enzimáticos com a enzima TcTS.
Agradecimentos
Os agradecimentos vão para a FAPESP e CAPES pelo suporte financeiro.
Fmo cHN O
OBn O H O
AcO N3
O Ac
Cl O
Ac O
Ac O O Ac
Ac O O
4 6 3
+ i. HgBr2/ DC E
O
AcO AcH N
OAc O Ac O
AcO O Ac
Ac O O
O N HFmo c
OH O
THF/ Ac2O/ AcOH (3 :2 :1) ii. Zn , C uSO4 /
7
v. Na OMe iv. Pd- C 10% / H2, 8h
O HO
Ac NH OH O OH
HO O H
HO O
O OH O
NH2 1
O AcO
AcH N OAc O Ac O
AcO O Ac
AcO O
O N HFmo c
O Bn O
iii. Pd -C 10 %/ H2 1 h
O FmocHN O
O
i. 2 0% piperidina ii. F mocThr OH, HOBt, PyB OP, DIP EA (2 x) Fmo cGly-W ang r esin
O N O
H O
HN O O OH F mocHN
HO
i. 20% piperidina iii. LacNAc(alfa) ThrOH 7, HOBt,
PyB OP, DIP EA 72 h
HN HN O
O OH HN
O O
HN HO O A cNH OA c O
A cO O
OAc OA c
O O
O 3h
i. 20% piperidina ii. Fm ocThrOH, HOBt, P yBOP , DIP E A (2 x)
3h
O
HO HN O OH FmocHN HN HN
O
O OH FmocHN
O O
HN HO O A cNH OA c O OA c
AcO O
OA c OAc
O O
O OA c
i. 20% piper idina iv. TF A 95%
O AcO A cHN OAc O AcO A cO OA c
OA c O
HN HN O
O OH HN
O O
HN HO
O OH O
HO HN O
OH H2N
11 A cO
AcO
v. NaOMe vi. Resina Dowe x
O
HO AcHN
OH O OH HO
OH
OH O
HN HN O
O OH HN
O O
HN HO
O OH O
HO HN O OH H2N
2 8
9 10
Sociedade Brasileira de Química ( SBQ)
25a Reunião Anual da Sociedade Brasileira de Química - SBQ 2
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1 Previato, L M.; Previato, J.; Jones, C.; Xavier, M. T. and Travassos, L R. J. Biol. Chem., 1995, 270, 7241.
2 Carvalho, I.; Scheuerl S. L.; Kartha K. P R.; Field R. A.
Carbohydr. Res., 2003, 338, 1039-1043.
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