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TÍTULO:
Influência do extrato vegetal Syzygium cumini (Lam.) associado à nanopartículas metálicas de prata (AgNPs) sobre biofilme de Streptococcus mutans
AUTORES:
Stefania Morselli, Denise M. P. Spolidorio, Wagner L. de Carvalho Bernardo, Thaís M. Zampronio
INTRODUÇÃO:
Terapias alternativas estão sendo desenvolvidas para controle de microrganismos resistentes, e os extratos vegetais e nanopartículas metálicas (formadas pelo método de sintese verde) abrem novas perspectivas para prevenção e controle eficiente de Streptococcus mutans.
OBJETIVOS:
Avaliar as propriedades antimicrobianas e a citotoxicidade das nanopartículas de prata obtidas pela síntese verde, a partir do extrato vegetal da folha de Syzygium cumini.
MATERIAL E MÉTODOS:
Foi utilizada cepa padrão de Streptococcus mutans (ATCC 25175), cultivada em meio BHI (Brain Heart Infusion – Infusão Cérebro Coração), suplementado com extrato de levedura e mantidas em jarras de microaerofilia por 18 horas 37º C. A turbidez da suspensão bacteriana foi ajustada a 625 nm (OD625) correspondendo a 1.0x107 UFC ml-1. Os discos de papel filtro foram impregnados com o extrato e com as nanopartículas e foram depositados sobre o meio de cultura e mantidos a 37º C por 24 horas em microaerofilia. O teste de difusão em discos foi realizado para a determinação da sensibilidade antimicrobiana em meio MHA (Mueller Hinton Agar). Como controle negativo e positivo foi utilizado S. mutans e clorexidina (CHX 2%), respectivamente.A Concentração inibitória mínima (CIM) foi definida como a menor concentração das soluções testadas sem crescimento visível, e a Concentração Bactericida Mínima (CFM) como a menor concentração capaz de reduzir o inoculo inicial a ≥ 99.9%. Para determinação da CBM, 10 µL do inóculo foi removido dos poços sem turvação visível, plaqueado em Mitis Salivarius Ágar (MSB), e incubado a 37° C por 48 h. Para avaliação da atividade metabólica dos microrganismos foi utilizado o teste de XTT. Para avaliação da citotoxicidade foi utilizada linhagem celular de queratinócitos humanos (NOK), cultivadas em frascos de cultura esterilizados, utilizando o meio de cultura Meio Dulbecco Mem/Ham F-12 suplementado com 10% de soro fetal bovino e 1% de penicilina, estreptomicina e glutamina e mantidas em incubadora a 37º C em 5% de CO2. Após o período de incubação, o meio de cultura foi aspirado e os grupos de tratamentos (Nano 16x,Nano 32x, Nano 64x, Nano 128x, Nano 256x;
e Extrato 16x, Extrato 32x,Extrato 64x, Extrato128x, Extrato 256x, Controle, H2O2) foram adicionados a cada poço contendo as células.
As células foram expostas aos tratamentos e após exposição pelos períodos determinados de 5minutos, as soluções foram aspiradas e as células lavadas com PBS. Para análise estatística foi utilizado o teste de Kruskal-Wallis e Mann Whitney (p<0.05).
RESULTADOS E DISCUSSÃO:
O extrato vegetal e as nanopartículas de prata obtidos por síntese verde, apresentaram halo médio de 8 mm, o que demonstrou sua atividade antimicrobiana. A clorexidina foi utilizada como controle apresentando halo de inibição de 14 mm. As nanopartículas de prata obtidas, apresentaram concentração inicial de 14 mg/mL. Após realizadas as microdiluições, o CIM para o AgNPextrato, apresentou resultados com valor de 0.11 mg/mL (1/128 da concentração inicial) e a CBM foi de 0.06 mg/mL. A concentração do extrato vegetal foi de 166 mg/mL de compostos fenólicos totais e o CIM e o CBM para o extrato vegetal foi de 0.65 mg/mL. Para as demais diluições realizadas, não houve crescimento bacteriano. Para o biofilme de 48h, as concentrações de nanopartículas de prata utilizadas foram capazes de eliminar o biofilme de S. mutans. Em relação à atividade metabólica das células após aplicação dos grupos de tratamento do extrato vegetal Syzygium cumini (Lam.) associado à nanopartículas metálicas de prata (AgNPExtrato) pelo tempo de 5 minutos e os resultados mostraram que para o extrato, a condição de maior concentração (16x) gerou menor atividade metabólica, sendo que para as nanopartículas foram na concentração 32x.
CONCLUSÕES:
O extrato vegetal e as nanopartículas de prata obtidos por síntese verde a partir da folha de Syzygium cumini, apresentaram atividade antimicrobiana, podendo ser uma alternativa para o controle para o controle do biofilme cariogênico. A viabilidade celular utilizando diferentes concentrações de nanopartícula AgNPextrato S. cumini causaram um significante decréscimo no número de células após 5 min quando comparados ao grupo controle.
AGRADECIMENTOS: Ao CNPq pela bolsa PIBIC concedida.
