Os produtos naturais tiveram papel importante na descoberta de muitos medicamentos e formaram a base da medicina moderna, que está estritamente ligada às plantas medicinais (CECHINEL FILHO; YUNES, 2001; . YUNES et al., 2001; BUTLER, 2005; VEIGA JUNIOR et al., 2001; BUTLER, 2005; VEIGA JUNIOR et al., 2001; BUTLER, 2005; VEIGA JUNIOR et al. al., 2005). Na determinação dos efeitos terapêuticos de produtos vegetais é muito importante a colaboração entre grupos multidisciplinares, incluindo: fitoquímica, farmacologia, microbiologia, toxicologia, farmacotécnica e outras áreas afins (CECHINEL FILHO; YUNES, 1998; SIMÕES et al., 2002).
Objetivo geral
Essa atividade antineoplásica também foi observada em outro estudo onde também foi isolado o quassinóide 6-α-senecioiloxichaparrina (ARISAWA et al., 1983a). Foram isolados os quassinóides 6-α-tigloiloxichaparrinona e 6-α-tigloiloxichaparrina, posteriormente isolados de Ailanthus grandis Prain (Simaroubaceae), que também apresentou atividade antineoplásica no modelo analisado (POLONSKY et al., 1980). Os quassinóides cedronolactonas A-E apresentaram atividade citotóxica significativa contra linhagens celulares P388 nestes estudos (OZEKI et al., 1998).
Este modelo de nocicepção desenvolvido por Collier et al. 1968), é relativamente simples, mas avalia a atividade antinociceptiva das substâncias testadas de forma inespecífica. Sílica gel CC Sílica gel CC. atividade central ou periférica), amplamente utilizada pelos farmacologistas (SOUZA et al., 2003). A atividade fungicida da cantina-6-ona também foi relatada em um estudo de biodirecionamento das raízes e casca de Zanthoxylumusabarense (HE et al., 2002).
Além disso, alguns autores atribuem atividade analgésica, antiulcerogênica, anti-hiperglicêmica e antimicrobiana ao composto β-sitosterol (ABOUTABL et al., 2002; RAMESH et al., 2001). Entretanto, atividades analgésica, anticolinesterásica, colinérgica, antimalárica, antineoplásica e outras são frequentemente relatadas na literatura (RASKIN et al., 2002).
Objetivo específico
Importância das plantas medicinais
Desde então, as plantas medicinais tornaram-se uma fonte inesgotável de propriedades medicinais, embora seus constituintes químicos sejam desconhecidos (PHILLIPSON, 2001; SARDESAI, 2002; MACIEL et al., 2002). A intoxicação também pode ocorrer por adulteração, uso incorreto de uma planta devido à identificação errada da espécie (RATES, 2001a,b; SARDESAI, 2002; VEIGA JUNIOR et al., 2005).
Biomas brasileiros: Cerrado
A importância do estudo desses ecossistemas visa não apenas compreender seu perfil químico e descobrir novas substâncias úteis ao homem, mas também preservá-los (PINTO et al., 2002; GUARIM NETO; MORAIS, 2003). A flora do estado de Mato Grosso é caracterizada por uma grande variedade de espécies, formada pelas áreas biogeográficas do Cerrado, Pantanal, Amazônia e áreas de transição, tendo a presença de árvores de médio e grande porte como uma das principais características da região (LEITZKE; GUARIM NETO, 2002).
Família Simaroubaceae
- Simaba multiflora
- Simaba orinocensis
- Simaba guianensis
- Simaba cuspidata
- Simaba cedron
- Simaba polyphylla
- Simaba subcymosa
- Simaba ferruginea St. Hil
- Outros gêneros relevantes da família Simaroubaceae
Desta espécie foram isolados o quassinóide orinocinolídeo (1) e o composto simalicalactona D (2), ambos apresentando boa atividade contra Plasmodium falciparum, e o quassinóide (1) também apresentou melhor atividade contra Leishamania donovani em comparação com agentes como pentamidina e anfotericina B (MUHAMMAD et al., 2004). Alguns quassinóides foram isolados das folhas de Eurycoma longifolia, tais como: 14,15β-dihidroxicalineanona, 15-β-O-acetil-14-hidroxicalineanona, longilactona, que demonstraram atividades antiesquistossômica, antitumoral e antimalárica (JIWAJ et al. 2000 et al2), IND. .
Análise fitoquímicados rizomas
- Material vegetal
- Preparação do extrato bruto
- Obtenção das frações
- Análise cromatográfica
- Separação e purificação dos compostos
- Identificação e elucidação estrutural dos compostos isolados
Para purificar as subfrações, elas foram recromatografadas de acordo com o sistema mencionado acima e também por cromatografia flash, utilizando sílica gel Merck (250-400 mesh) como fase. O polímero Sephadex LH-20, cujo mecanismo de separação é a exclusão de tamanho, foi utilizado como fase estacionária para a purificação de subfrações altamente polares.
Análise fitoquímica das folhas
- Material vegetal
- Obtenção dos extratos
- Preparação das frações
- Análise cromatográfica
- Separação e purificação dos compostos
- Identificação dos compostos isolados
Todas as frações foram analisadas por cromatografia em camada delgada (TLC) para identificar as principais classes de compostos presentes em cada uma de acordo com o método descrito em 4.1.4. As frações foram submetidas a procedimentos de cromatografia em coluna (CC) utilizando sílica gel Merck mesh como fase estacionária e diferentes sistemas eluentes como fase móvel, previamente selecionados por análise de TLC.
Atividade farmacológica
Atividade antinociceptiva
Os animais foram divididos em onze grupos distintos de 8 animais cada, sendo um controle cujo pré-tratamento consistiu apenas de veículo, e os demais grupos tratados de acordo com as amostras testadas: extrato metanólico 5 mg/kg e 20 mg/kg, fração alcaloide 5 mg/kg. kg e 20 mg/kg, compostos C, D e FB 5 mg/kg e 20 mg/kg cada, por via intraperitoneal 30 minutos antes da injeção de ácido acético. Os animais foram então colocados individualmente na bancada sob funis de vidro onde o número de contorções foi registrado a cada 5 minutos durante 30 minutos.
Atividade antiúlcera
Após esse período, os animais receberam tratamento de acordo com seus grupos (extrato metanólico de rizomas, frações, compostos isolados – C, D, FB) nas doses de 5 mg/kg e 20 mg/kg por via oral e intraperitoneal, enquanto o grupo controle foi apenas veículo recebido. Lesões gástricas foram induzidas pela administração de 30 mg/kg de indometacina dissolvida em bicarbonato de sódio a 2% após 1 hora de tratamento da planta. Além do número médio de úlceras para cada grupo experimental e controle, o índice de ulceração foi utilizado para determinar a extensão das úlceras.
O índice de ulceração foi considerado como a soma total dos pontos obtidos após exame da mucosa gástrica, levando-se em consideração o número total de úlceras e a média do índice de lesão de acordo com a nota e pontuação atribuída conforme os dados citados a seguir.
Análise estatística
Análise fitoquímica
Frações do Rizoma – Extração Convencional
- Caracterização química e revisão da literatura do composto C
- Caracterização química e revisão da literatura do composto D
Esta classe de alcalóides possui grande importância econômica e farmacológica, os principais compostos desta classe são: vincristina e vinblastina, alcalóides com atividade antineoplásica isolados de Catharanthus roseus; ergotamina, utilizada no tratamento da enxaqueca devido à sua atividade adrenérgica nos receptores α-2, isolados de Claviceps purpurea; ajmalicina (Rauwolfia serpentina) e ioimbina (Pausinystalia yohimbe) simpaticolíticos usados para hipertensão e impotência masculina, respectivamente; entre muitos outros alcalóides indólicos com significativa atividade terapêutica (DEWICK, 2002; SIMÕES et al., 2002; HOSTETTMANN et al., 2003). Dentre as diversas atividades do alcaloide cantin-6-ona relatadas na literatura, destacam-se os estudos que demonstraram atividade contra Leishmania amazonensis, mais importante no tratamento da infecção local (FERREIRA et al., 2002) ; atividade inibitória na ativação de Epstein-Barr (MURAKAMI et al., 2004); citotoxicidade observada em queratinócitos de porquinhos-da-índia (ANDERSON et al., 1983) e mais importante, atividade citotóxica eficaz contra diversas linhagens celulares de câncer humano como: melanoma, fibrossarcoma, pulmão, mama, antileucêmico e outros (FUKAMIYA et al., 1986; KARDONO et al., 1991; KUO et al., 2003). Ao avaliar compostos alcalóides como beta-carbolinas, indóis e isoquinolinas quanto à sua afinidade por receptores de benzodiazepínicos, constatou-se que apenas moléculas metoxiladas e/ou moléculas com grupos carbonila foram capazes de se ligar a receptores de benzodiazepínicos (GUZMAN et al., 1984). ).
Em outro estudo com derivados metoxilados da cantina-6-ona, foram observadas atividade citotóxica in vitro contra células KB cultivadas e atividade contra Plasmodium falciparum (CHAN et al., 2004).
Frações do Rizoma – Extração Específica para Alcalóides
O alcalóide cantina-6-ona pode apresentar diversas substituições em seu núcleo fundamental, sendo o grupo metoxi um dos mais constantes, distribuído por vários átomos de carbono, conferindo ao composto maior solubilidade lipídica e também atividades biológicas diferentes ou potentes. Embora não tenha sido possível isolar e identificar estes dois alcalóides presentes nesta fração a verificação da presença de outros alcalóides foi muito importante pois justificam as atividades farmacológicas encontradas e discutidas posteriormente quando os alcalóides cantina- 6-ona e 4- metoxicantina-6-ona são os principais compostos da planta, mas suas propriedades terapêuticas podem ser potencializadas por outros alcalóides, mesmo que estes estejam presentes em quantidades muito pequenas, o que é muito comum para esta classe de metabólitos, que muitas vezes são até relatados como estar ausente em certas plantas devido ao baixo rendimento e à difícil detecção. Estas subfrações foram analisadas em TLC com diferentes reveladores, onde foi detectada a maior parte da presença dos dois alcalóides já identificados e também a presença de outros alcalóides, alguns dos quais são provavelmente iguais aos obtidos na fração alcalóide de acordo com sua referência.
A análise CCD verificou a presença majoritária dos compostos alcalóides C e D, sendo esta proporção reservada para testes biológicos.
Frações das Folhas de S. ferruginea
- Caracterização química e revisão da literatura do composto FA
- Caracterização química e revisão da literatura do composto FB
Existem relatos de atividades estrogênicas do β-sitosterol e seu glicosídeo, bem como atividade citotóxica contra células cancerígenas da linhagem Bowes (JU et al., 2004; NGUYEN et al., 2004). Todos os esteróides testados apresentaram resposta antinociceptiva significativa, sendo o β-sitosterol o composto mais eficaz neste modelo, cujo DI50 9 mg/kg foi inferior ao da aspirina 24 mg/kg (SANTOS et al., 1995). Além disso, a presença de hidroxilas nas posições C-3 e C-5 confere máximo poder antioxidante à molécula e, portanto, os flavonóis quercetina e quercitrina apresentam os requisitos para exercer excelente atividade antioxidante (MARTINEZ-FLOREZ et al., 2002; TRUEBA , 2003).
A quercitrina isolada de Bauhinia microstachya foi avaliada quanto à atividade antinociceptiva no modelo de constrição induzida por ácido acético, demonstrando significativa inibição do processo doloroso, justificando o uso desta planta pela população como analgésico (SILVA-MEYRE et al., 2001). .
Atividade farmacológica
Atividade antiúlcera dos rizomas
AE e DCM-RA de Simaba ferruginea em doses de 5 mg/kg e 20 mg/kg administradas por via oral em relação à ulceração induzida por etanol a 50% (10 ml/kg) em camundongos. Posteriormente, a atividade antiulcerogênica da fração alcalóide foi avaliada utilizando o modelo de úlcera induzida por etanol (Fig. 16), que mostrou inibição da ulceração dose-dependente, com a concentração de 5 mg/kg inibindo 66% e a dose de 20 mg. . /kg inibiu a formação de feridas nos animais testados em 80%. Os resultados obtidos no modelo de úlcera induzida por etanol indicam que a fração alcalóide, na dose de 20 mg/kg, administrada por via oral ou intraperitoneal, é a mais eficaz, e seu perfil farmacológico corresponde ao apresentado pela combinação de alcalóides cantin- 6-ona e 4-metoxicantina-6-ona na dose de 10 mg/kg cada.
O perfil antiulcerogênico do extrato metanólico, fração alcalóide e alcalóides administrados por via intraperitoneal também foi avaliado em modelo de úlcera induzida por indometacina 30 mg/kg por via oral em ratos (Tabela 03), os resultados obtidos não foram significativos, embora tenha havido redução da ulceração em animais.
Atividade antinociceptiva dos rizomas de S. ferruginea
Atividade antiúlcera das folhas de S. ferruginea
Contudo, este composto testado sozinho (Figura 24) mostrou uma inibição significativa da úlcera de 66,7% numa dose de 20 mg/kg quando administrado oralmente. Segundo Sannomiya et al (2005), em estudo com folhas de Byrsonima crassa, os flavonóides presentes no extrato metanólico foram os compostos responsáveis pela inibição de até 93% das úlceras induzidas pelo etanol na dose de 500 mg/kg. Uma breve análise histórica da química das plantas medicinais: a sua importância na concepção moderna de medicina segundo os paradigmas ocidental e oriental.
Triagem antiúlcera de plantas medicinais amplamente utilizadas em Mato Grosso para distúrbios gastrointestinais e validação pré-clínica de Simba ferruginea St. O efeito do extrato hidroetanólico de Simaba ferruginea ST.Hil.
