Caracterização de cepas de Strongyloides stercoralis (Bavay, 1876) Stiles & Hassal, 1902 (Rhabditida, Strongyloididae) isoladas de pacientes com e sem sintomatologia da região de Araraquara-SP

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Ficha Catalográfica

Elaborada Pelo Serviço Técnico de Biblioteca e Documentação Faculdade de Ciências Farmacêuticas

UNESP – Campus de Araraquara

Miné, Júlio César

M664c Caracterização de cepas de Strongyloides stercoralis (Bavay, 1876) Stiles & Hassall, 1902 (Rhabditida, Strongyloididae) isoladas de pacientes com e sem sintomatologia da região de Araraquara-SP / Júlio César Miné. – Araraquara, 2009.

126 f.

Tese (Doutorado) – Universidade Estadual Paulista. “Júlio de

Mesquita Filho”. Faculdade de Ciências Farmacêuticas. Programa de Pós Graduação em Biociências e Biotecnologia Aplicadas à Farmácia

Orientador: João Aristeu da Rosa

. 1.Strongyloides stercoralis. 2. Caracterização molecular.

3.Morfologia. 4.Epidemiologia. I.Rosa, João Aristeu da, orient. II.Título.

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Helmintíases Intestinais

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Países não endêmicos para helmintíases intestinais _{Fonte: WHO, 1997} Países em que as helmintíases intestinais são problemas de Saúde Pública

Países em que as helmintíases intestinais são transmitidas Países não endêmicos para helmintíases intestinais

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Figura 02 – Distribuição geográfica da estrongiloidíase humana nos diferentes continentes. Adaptado de: http://www.med1.de/Laien/Krankheiten/Tropen/Strongyloidiasis.

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Figura 03 – Esquema da organização do DNA ribossomal típico de eucarioto (COLEMAN, 2003).

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(59)

Figura 05 – Fotomicrografias das larvas filarióides (A – Comprimento do Esôfago e Largura (seta); B – Comprimento da Cauda – Aumento de 400X; C – Comprimento Total – Aumento de 200X).

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(62)

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(63)

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(64)

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Figura 06 – Limites dos municípios da Região Administrativa Central do Estado de São Paulo. Em destaque, os municípios de onde os voluntários da pesquisa são

oriundos (adaptado de www.cidadespaulistas.com.br)

Araraquara Taquaritinga

Motuca Rincão Santa Lúcia

Américo Brasiliense Gavião

Peixoto Nova Europa

Araraquara Taquaritinga

Motuca Rincão Santa Lúcia

Américo Brasiliense Gavião

(65)

Figura 07 – Procedência das amostras enviadas para exame. Araraquara, 2005 – 2009.

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119 258 139

0 1000 2000 3000 4000 5000 6000 7000 8000 9000 10000 Araraquara Americo Brasiliense Gavião Peixoto

Rincão Motuca Taquaritinga Nova Europa Sta. Lúcia 9156

6171

1393

1992

677

119 258 139

0 1000 2000 3000 4000 5000 6000 7000 8000 9000 10000 Araraquara Americo Brasiliense Gavião Peixoto

Rincão Motuca Taquaritinga Nova Europa Sta. Lúcia

Outros Protozoários: Endolimax nana, Sarcocystissp., Chilomastix mesniliie

Blastocystis hominis

Outros Protozoários: Endolimax nana, Sarcocystissp., Chilomastix mesniliie

Blastocystis hominis

(66)

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7A*64G43945B1

Tabela 01 – Resultado dos exames coproparasitológicos realizados em Araraquara entre 2005 e 2009.

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B

Figura 09 – Distribuição dos resultados positivos dos exames coproparasitológicos (n = 3749). Araraquara, 2005 – 2009.

Outros Protozoários: Endolimax nana, Cystoisospora belli, Sarcocystissp., Entamoeba histolytica/dispar, Entamoeba hartmanii, Chilomastix mesniliie Blastocystis hominis Outros Protozoários: Endolimax nana, Cystoisospora belli, Sarcocystissp., Entamoeba

(67)

Tabela 02 – Espécies de enteroparasitas encontrados em 19905 amostras fecais de pessoas residentes em oito municípios da região de Araraquara entre 2005 e 2009.

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(68)

Figura 10 – Distribuição dos resultados positivos dos exames coproparasitológicos (n = 3749). Araraquara, 2005 – 2009.

Figura 11 – Consistência das fezes examinadas (n=19905). Araraquara, 2005 – 2009.

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Diarréicas Formadas Pastosas 1911 7422 10572 0 2000 4000 6000 8000 10000 12000

(69)

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*64I1

Tabela 03 – Distribuição das faixas etárias segundo o sexo dos indivíduos portadores de S.

stercoralis. Araraquara, 2005 – 2009.

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S W

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(70)

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Tabela 04 – Procedência dos indivíduos portadores de S. stercoralis. Araraquara, 2005 –

2009.

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(71)

Tabela 05 – Distribuição dos indivíduos portadores de enteroparasitas em relação à presença ou ausência de sintomas. Araraquara, 2005 – 2009.

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(72)

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Sazonalidade de S. stercoralis X Pluviosidade

0 50 100 150 200 250

01/00502/00 5 03/00

5 04/00505/00

5

06/00501/00602/00 6

03/00604/00 6 05/00

6 06/00601/00

7

02/00703/00704/00705/00706/00701/00802/00803/00 8

04/00 8

05/00 8

06/00801/00 9 Bimestres Nº d e Am o st ra s 0 10 20 30 40 50 60 Di as c o m Ch u va

(73)

Sazonalidade S. stercoralis (2005)

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 Jane iro (2

005) Feve reiro (200 5) Març o (2 005)

Abril (20 05) Maio (200 5) Junho (2005 ) Julho (

2005) Agos

to (20 05) Sete mbro (200 5) Outu bro (

200 5) Nove mbro (2005 ) Deze mbro (2005 ) N º d e A m o st ra s P o si ti va s 0 5 10 15 20 25 30 Nº d e Di as c o m Ch u va

Nº de amostras positivas % de S. stercoralis Nº de dias com chuva

Sazonalidade de S. stercoralis (2006)

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 Jane iro (2

006) Feve reiro (200 6) Març

o (200 6)

Abril ( 2006 ) Maio (2006 ) Junho (2006)

Julho ( 2006)

Agos to (2

006)

Setem bro (

2006) Outubr

o (200 6)

Novem bro (2

006)

Dezem bro (

200 6) N º de A m os tr as P os it iv as 0 5 10 15 20 25 Nº d e Di as c o m Ch u va

0 20 40 60 80 100 120 140 Jane iro (2

007 ) Fever eiro (200 7) Març o (200

7) Abril

(2007) Maio (

2007 )

Junh o (2

007 ) Julho (20 07) Ago sto (2

007 )

Sete mbr

o (200 7) Outu bro (200 7) Novem bro (

2007)

Deze mbr

o (2 007) Nº d e Am o st ra s P o si ti va s 0 5 10 15 20 25 30 N º d e Di as c o m Ch u va

0 20 40 60 80 100 120 Janeir o (20

08)

Fever eiro (

2008 )

Març o (20

08) Abril (2

008 ) Maio (200 8) Junh

o (2 008)

Julho ( 2008)

Agost o (200

8)

Setemb ro (2

008) Outub

ro (2 008) Nove mbro (200 8) Deze mbro (2008) Janeir

o (20 09) N º de A m os tr as P o si ti va s 0 5 10 15 20 25 30 35 N º d e D ias co m C h u va

Figura 12 B – Distribuição da sazonalidade do

aparecimento de S.

stercoralis entre os meses

(74)

i D; : :

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92 > ; 7<= :=;

:dN>4_>=;: *64P1

Tabela 06 – Frequência de exames positivos para S. stercoralis em cada mês durante os

anos de 2005 a 2008.

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K*/F) GPAJGQB GJAI5PB GTAJPTB 35AJQNB A

K*3F) G4A3T3B GQANGNB 3NANG3B QAJN3B B

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&+&69,) 3NAI4JB GNAJJ5B GNAJT5B GIAI5PB

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)7&69,) GNAIPPB 3NAJ4IB GPAJPPB GIA3Q3B

&D&69,) 3GAIN4B GGAII3B GPAII5B GJA3GGB

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(75)

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(76)

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)6.,46&/+)()'RG-=) CYB AYA

)6.,46&/+)(--*(- BAY CYBB

-,=*,- Y ABY

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4'+X/24-(),46P,(4)!&/4+-30-*(- BCBYA S

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)6.,46&/+)()&'+<9*3)*2-3 CYB S

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GI1

(77)

Figura 13 – Dispersão dos parâmetros morfométricos (1 – CTr X CEr; 2 – CTr X DPC; 3 – CEr X DPC; 4 – CTf X CEF).

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8:=A9GJ >&(B0

1 2

3 4

400 500 600 700 150

200 250 300

Comprimento Total Filarióides

C om pr im ent o E sôf ago Fi la ri ó ide s

r_S= 0,5364

400 500 600 700 150

200 250 300

Comprimento Total Filarióides

C om pr im ent o E sôf ago Fi la ri ó ide s

r_S= 0,5364

250 300 350 400 450 500

60 80 100 120 140

Comprimento Total Rabditóides

C om p ri m ent o E sôf ago R abdi tói de

rS= 0,6812

250 300 350 400 450 500

60 80 100 120 140

C om p ri m ent o E sôf ago R abdi tói de

rS= 0,6812

250 300 350 400 450 500

100 150 200 250

Di st ân ci a d o Pr im . G en it al à C au d a

rS= 0,9064

250 300 350 400 450 500

100 150 200 250

Di st ân ci a d o Pr im . G en it al à C au d a

rS= 0,9064

80 100 120 140

100 150 200 250

Comprimento Esôfago Rabditóides

Di st ân ci a d o Pr im . G en it al à C au d a

rS= 0,6516

80 100 120 140

100 150 200 250

Comprimento Esôfago Rabditóides

Di st ân ci a d o Pr im . G en it al à C au d a

(78)

Figura 14 – Fotomicrografias de larvas filarióides de S. stercoralis. A – visão total

(aumento de 200X); B – fenda no corpo da larva – seta branca (aumento de

1500 x); C – detalhes da fenda – seta branca – e estrias transversais – seta

preta (aumento de 3000X).

#:;7 9 ; D2

=:=?=:1

A B

(79)

==KC2 ;= 6# =; :C

'*=A'*#GB ! 1! 9O;=7D? J44G444

78 =: =:= 7; :;

= ;F=Q4_#34`(A9GNB1

Figura 15 – Gel de agarose a 1% com produto de extração de DNA genômico corado com brometo de etídeo de 24 isolados de larvas filarióides de S. stercoralis.

; 78 ; = ; J44

G444> : 9 ; ; ==C2 !

1 7=; = ; F= Q4_ #34`( : 9

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A*! (B : 6C2 ; 79; :D; ; PT4:6

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3 4

5 6

7 8

(80)

Figura 16 – Gel de agarose a 1,5% com produto de Amplificação do ITS-1 do rDNA corado com brometo de etídeo. PM – Marcador de peso molecular 1Kb plus; 1 a 28 –

isolados de larvas filarióides de S. stercoralis, com aproximadamente 680 pb.

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700 500 700 500 700 500 700 500

1 7 8 9 10 11 12 13

PM 2 3 4 5 6

(81)

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3I i > 3N i > 3P i > 3Q i > 35 i > IG i >

(82)

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Figura 17 – Alinhamento de 13 sequencias de larvas filarióides de S. stercoralis isoladas

de pacientes sintomáticos provenientes de Américo Brasiliense e Araraquara.

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140

130 150 160 170 180 190 200 210 220 230 240

260

(83)

Figura 18 – Alinhamento de 30 sequências de larvas filarióides de isoladas de pacientes

10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120

140

130 150 160 170 180 190 200 210 220 230 240

260

(84)

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