Fungitoxicidade in vitro de iprodione sobre o crescimento micelial de fungos que se associam a sementes de arroz.

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CRESCIMENTO MICELIAR DE FUNGOS EM SEMENTES DE ARROZ

Revista Brasileira de Sementes_{, vol. 24, nº 1, p.67-70, 2002} 67

FUNGITOXICIDADE

IN VITRO

_{DE IPRODIONE SOBRE O CRESCIMENTO MICELIAL}

DE FUNGOS QUE SE ASSOCIAM A SEMENTES DE ARROZ

1

1_{Aceito para publicação em 28.12.2001.}

1_Engos_Agros_{, M.Sc., Depto. de Fitopatologia/UFLA, Lavras-MG: e-mail:} dfp@ufla.br

3_Engo_Agro_{, Ph.D., Prof. do Depto. de Fitopatologia/UFLA, Lavras-MG;} e-mail: machado@ufla.br

LILIANA AUXILIADORA AVELAR PEREIRA2_{, WIRTON MACEDO COUTINHO}2_{, JOSÉ CRUZ MACHADO}3_, FLÁVIO HENRIQUE LINHARES MAGALHÃES2_{E ROSÂNGELA CONCEIÇÃO MARQUES PENA}2

RESUMO - Este estudo teve o objetivo de avaliar a fungitoxicidade de iprodione, em diferentes concentrações, sobre o crescimento micelial in vitro dos fungos mais comuns disseminados pelas sementes de arroz no Estado de Minas Gerais, Brasil. Isolados de Alternaria alternata, Aspergillus flavus, Aspergillus niger, Aspergillus ochraceus, Curvularia oryzae, Drechslera oryzae, Gerlachia oryzae, Phoma sorghina e Pyricularia grisea foram obtidos de sementes de arroz e o seu cresci-mento micelial foi avaliado em meio BDA contendo o fungicida nas concentrações de 10mg.l-1_, 50mg.l-1_{, 100mg.l}-1_{e 500mg.l}-1_{, após sete dias de incubação. O efeito de iprodione foi avaliado} por meio da ED₅₀ (dose necessária para inibir em 50% o crescimento micelial). O fungicida iprodione inibe com alto efeito (ED₅₀<10mg.l-1_{) o crescimento micelial dos fungos A. alternata,} A. niger, A. ochraceus, C. oryzae, D. oryzae e G. oryzae, médio efeito (ED₅₀ entre 10 e 50mg.l-1₎ Phoma sorghina e baixo efeito (ED₅₀>50mg.l-1₎_{Pyricularia grisea. Os fungos A. niger e A.} ochraceus foram os mais sensíveis a iprodione, tendo apresentado ED₅₀ de 2,5 e 3,1mg.l-1_, respectivamente.

Termos para indexação: inibição micelial, iprodione, Oryza sativa.

FUNGITOXICITY IN VITRO OF IPRODIONE ON MYCELIAL GROWTH OF FUNGI ASSOCIATED WITH RICE SEEDS

ABSTRACT - This experiment aimed to evaluate the iprodione effects on mycelial growth of fungi commonly associated with rice seeds in the state of Minas Gerais, Brazil. Isolates of Alternaria alternata, Aspergillus flavus, Aspergillus niger, Aspergillus ochraceus, Curvularia oryzae, Drechslera oryzae, Gerlachia oryzae, Phoma sorghina and Pyricularia grisea were obtained from rice seeds and mycelial growth measured in PDA medium containing the fungicide at concentrations of 10mg.l-1_{, 50mg.l}-1_{, 100mg.l}-1_{and 500mg.l}-1_{, after seven days of incubation. The} effect of iprodione was evaluated by calculating ED₅₀ (dose required for inhibiting 50% of the mycelial growth). Iprodione inhibits with high effect (ED₅₀ < 10mg.l-1_{) the mycelial growth of the} fungi A. alternata, A. flavus, A. niger, A. ochraceus, C. oryzae, D. oryzae and G. oryzae, medium effect (ED₅₀ = 10-50mg.l-1_{) P. sorghina and low effect (ED}

50 > 50mg.l

-1_{) the mycelial growth of P.}

grisea. The fungi A. niger and A. ochraceus were the most sensitive ones to the fungicide tested with ED₅₀ of 2,5 e 3,1mg.l-1_{, respectively.}

Index terms: mycelial inhibition, iprodione, Oryza sativa.

INTRODUÇÃO

As sementes de arroz podem ser colonizadas em toda as fases de produção, inclusive após a colheita, por fungos fitopatogênicos, cujos principais danos são a redução da ger-minação e do vigor.

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L.A.A. PEREIRA et al.

e de armazenamento. Os fungos classificados no primeiro grupo colonizam as sementes no campo de cultivo, necessi-tando para o seu desenvolvimento de umidade relativa em torno de 95%, enquanto que os de armazenamento são res-ponsáveis pela invasão e deterioração de sementes em condi-ções de baixa umidade, podendo crescer em qualquer maté-ria orgânica com grau de umidade em equilíbrio com a umi-dade do ambiente entre 65 e 90% (Christensen, 1973). Os fungos saprófitas colonizam as sementes em condições de umidade relativa de 85 a 95% e podem reduzir a qualidade fisiológica delas (Neergaard, 1977).

A eliminação ou redução do inóculo em sementes pode ser eficientemente alcançada pelo manejo e tratamento das mesmas por métodos biológicos, físicos ou químicos, sendo o último a forma mais freqüente de controlar doenças no cam-po (Machado, 2000).

Vários são os fungicidas existentes para controlar patógenos associados a sementes de arroz. Amaral (1981) e Ribeiro (1996) relataram a eficácia de thiram, captan, carboxin, mancozeb e de quintozene na melhoria da qualida-de sanitária qualida-de lotes qualida-de sementes, e conseqüente aumento qualida-de estande no campo. Valarini & Lasca (1984), Figueiredo et al. (1985) e Sartorato et al. (1990) reportaram a eficácia de iprodione no controle dos patógenos Drecheslera oryzae (Breda de Haan) Subram. & Jain e Phoma sorghina (Sacc.) Boerema, Derenbosh & Van Kesteremn associados a semen-tes de arroz, iprodione tem período de proteção longo e atua tanto de forma preventiva quanto curativa (Machado, 2000). Especificamente para o arroz, o espectro desse fungicida em relação à micobiota associada a sementes é pouco conhecido.

Este trabalho teve por objetivo avaliar o efeito de dife-rentes concentrações do fungicida iprodione sobre o cresci-mento micelial, in vitro, dos fungos Alternaria alternata (Fr.) Keissler, Aspergillus flavus Link ex Fr., Aspergillus niger van Tiegh., Aspergillus ochraceus Wilhelm, Curvularia oryzae Bugnicourt, Drecheslera oryzae (Breda de Haan) Subram. & Jain, Pyricularia grisea (Cooke) Sacc., Phoma sorghina (Sacc.) Boerema, Dorenbosch & Van Kesteren e Gerlachia oryzae (Hash. & Yok.) W. Gams, os quais constituem a micobiota mais comum associada a sementes de arroz no Es-tado de Minas Gerais e representam os três grupos de fungos que podem se associar às sementes: patogênicos de campo, de armazenamento e saprófitas.

MATERIAL E MÉTODOS

Os ensaios foram conduzidos no Laboratório de Patolo-gia de Sementes do Departamento de FitopatoloPatolo-gia da

Uni-versidade Federal de Lavras, Minas Gerais. O fungicida iprodione (isopropilcarbamoil 1 (dicloro 3,5 fenil) -hidantoína) foi fornecido pelo seu fabricante.

Isolamento e obtenção de culturas puras dos fungos -as cultur-as pur-as de A. alternata, A. flavus, A. niger, A. ochraceus, C. oryzae, D. oryzae, G. oryzae, P. sorghina e P. grisea foram obtidas pelo isolamento desses fungos de se-mentes de arroz (Oryza sativa L.) submetidas ao teste de sa-nidade pelo método do papel de filtro com congelamento e transferidos para placas de Petri contendo meio BDA (extra-to de batata - dextrose - ágar). As placas com o inóculo dos fungos foram mantidas em câmara de crescimento com tem-peratura de 20±2o_{C e fotoperíodo de doze horas de luz negra}

(comprimento de onda próximo a ultravioleta), durante sete dias.

Avaliação do fungicida sobre o crescimento micelial dos fungos - o fungicida foi solubilizado em água destilada e adicionado ao meio BDA fundente, após esterilização, com temperatura em torno de 45o_{C, obtendo-se os substratos nas}

concentrações de 10mg.l-1_{, 50mg.l}-1_{, 100mg.l}-1_{e 500mg.l}-1_de

ingrediente ativo. O meio BDA com as diferentes concentra-ções do fungicida foi distribuído em placas de Petri de 9cm de diâmetro, utilizando 15ml por placa. No centro de cada placa foi colocado um disco de meio centímetro com micélio dos fungos testados crescidos em meio BDA. Para fungos do gênero Aspergillus, utilizaram-se discos de papel de filtro de meio centímetro de diâmetro, previamente esterilizados, em-bebidos em ágar-água e mergulhados na suspensão dos esporos. As testemunhas consistiram de discos de micélio ou de papel de filtro embebidos em suspensão de esporos e co-locados em meio BDA sem o fungicida. As placas com o inóculo dos fungos foram colocadas em câmara do tipo BOD com fotoperíodo de doze horas e temperatura de 25o_{C, por}

um período de sete dias.

A avaliação da fungitoxicidade in vitro foi realizada por meio da porcentagem de inibição de crescimento micelial (PIC), comparando-se o diâmetro médio, em cm, entre as colônias nos tratamentos com fungicida e a testemunha, após sete dias de incubação (Edgington et al., 1971):

Análises de regressão correlacionando porcentagem de inibição de crescimento micelial (PIC) e concentração de iprodione (transformada em log x+1) foram realizadas para cada fungo, sendo calculada a ED₅₀ (dose necessária para ini-bir em 50% o crescimento fúngico). Após o cálculo da ED₅₀, o fungicida foi classificado em três categorias, segundo a

es-crescimento da testemunha - es-crescimento do tratamento

crescimento da testemunha

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CRESCIMENTO MICELIAR DE FUNGOS EM SEMENTES DE ARROZ

cala de Edgington et al. (1971) modificada: ED₅₀< 10mg.l-1

alto efeito; ED₅₀10 - 50mg.l-1 _{médio efeito e ED}

50 > 50mg.l -1

baixo efeito.

O delineamento experimental usado foi o inteiramente casualizado com cinco tratamentos e quatro repetições.

RESULTADOS E DISCUSSÃO

Para os fungos A. alternata, C. oryzae, D. oryzae, G. oryzae, P. sorghina e P. grisea, à medida que se aumentou a concentração do fungicida iprodione, houve aumento da

por-centagem de inibição de crescimento micelial (PIC), sendo ajustadas aos dados equações de regressão pelo modelo line-ar. As equações de regressão apresentaram um bom ajuste com altos valores para os coeficientes de determinação - R2

(Tabela 1).

Para os fungos pertencentes ao gênero Aspergillus, a concentração de 50mg.l-1_{de iprodione inibiu ao máximo o}

crescimento micelial. Para esses fungos foram ajustadas aos dados obtidos equações de regressão pelo modelo quadrático (Tabela 1).

No cálculo da dose necessária de iprodione para inibir em 50% o crescimento micelial (ED₅₀) dos fungos ava-liados (Tabela 2), verificou-se um alto efeito do fungicida (ED₅₀ < 10mg.l-1_{) em relação aos fungos A.}

alternata, A. flavus, A. niger, A. ochraceus, C. oryzae e D. oryzae, efeito mediano (ED₅₀ = 10 - 50mg.l-1_{) em}

relação a P. sorghina e baixo efeito (ED₅₀ > 50mg.l-1₎

em relação a P. grisea.

Os resultados deste estudo em relação a D. oryzae corroboram com os resultados de trabalhos conduzi-dos por Valarini & Lasca (1984) e Figueiredo et al. (1985), diferindo, entretanto, em relação a P. sorghina nos estudos de Figueiredo et al. (1985) e Sartorato et al. (1990). Essas diferenças podem estar relacionadas a diversos fatores como a variabilidade genética entre os isolados utilizados, conforme verificado por Parisi et al. (1999) em relação à fungitoxicidade diferencia-da de um mesmo fungicidiferencia-da sobre o crescimento micelial in vitro de quatro isolados de Phomopsis sojae Lehman e Phomopsis phaseoli f. sp. meridionalis Morgan-Jones.

Dentre os fungos avaliados, A. niger e A. ochraceus foram os mais sensíveis à iprodione, com ED₅₀ de 2,5 e 3,1mg.l-1_{, respectivamente. Esses}

fun-gos, assim como A. flavus, tiveram inibição máxima de crescimento micelial a partir da concentração de 50mg.l-1_{. Segundo Machado (2000), iprodione é um}

produto que apresenta um razoável espectro de ação fúngica, atuando sobre esporos, impedindo sua germi-nação, e sobre o micélio, bloqueando o seu desenvol-vimento. Neste estudo, a eficácia desse fungicida na inibição do crescimento micelial in vitro ficou eviden-ciada para a maioria dos fungos que compõem a micobiota mais freqüentemente encontrada em semen-tes de arroz no Estado de Minas Gerais. A eficácia desse produto ficou evidenciada não só em relação a D. oryzae, como em relação à Gerlachia oryzae, um im-portante patógeno que tem sido uma preocupação em TABELA 1. Coeficientes de determinação (R2) e parâmetros

estimados pelos modelos linear ou quadrático resul-tantes de equações de regressão da porcentagem de inibição de crescimento micelial - PIC (Y) dos principais fungos que se associam as sementes de arroz, no Estado de Minas Gerais, em diferentes concentrações de iprodione (x) *.

Fungos Modelo Parâmetros estimados R

2

a = 9,467

Alternaria alternata Y = a + bx

b = 40,019 0,95

yo = 0,228 0,64

Aspergillus flavus Y = yo + ax - bx2 a = 67,225

b = 17,624

yo = 2,939

Aspergillus niger Y= yo + ax - bx2 a = 100,323 0,96

b = 25,609

yo = 1,140

Aspergillus ochraceus Y = yo + ax - bx2 a = 93,267 0,99

b = 22,409

a = 15,415

Curvularia oryzae Y = a + bx

b = 35,734 0,92

a = 19,236

Drechslera oryzae Y = a + bx

b = 37,860 0,89

a = 18,166

Gerlachia oryzae Y = a + bx

b = 34,318 0,89

a = 11,351

Phoma sorghina Y = a + bx

b = 29,498 0,94

a = -2,400

Pyricularia grisea Y = a + bx

b = 21,293 0,95

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L.A.A. PEREIRA et al.

TABELA 2. Concentração (mg.l-1) de iprodione para inibir em 50% (ED50) o

cresci-mento micelial in vitro_{, dos principais} fungos que se associam às sementes de arroz, no Estado de Minas Gerais.

Fungos ED50

Alternaria alternata 7,3

Aspergillus flavus 9,1

Aspergillus niger 2,5

Aspergillus ochraceus 3,1

Curvularia oryzae 8,2

Drechslera oryzae 5,5

Gerlachia oryzae 7,5

Phoma sorghina 19,4

Pyricularia grisea 286,1

diversas circunstâncias. O fato de não apresentar ação contra espécies de Fusarium e ser eficaz em relação a Gerlachia oryzae, pode fazer com que iprodione seja utilizado na dis-tinção in vitro entre espécies de Fusarium, como F. dimerum, e Gerlachia oryzae, dois fungos que exibem frutificações muito semelhantes, por ocasião dos testes de sanidade, e que ocorrem em sementes de arroz.

CONCLUSÕES

O fungicida iprodione inibe com alta eficácia o crescimen-to micelial in vitro dos fungos Alternaria alternata, Aspergillus flavus, A. niger, A. ochraceus, Curvularia oryzae, Drechslera oryzae e Gerlachia oryzae;

em relação aos fungos patogênicos Phoma sorghina e Pyricularia grisea, a eficácia de iprodione na inibição de crescimento micelial in vitro é baixa.

REFERÊNCIAS

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