R evista d a So cied a d e B rasileira de M edicina Tropical
2 6(2):83-87, abr-jun, 1993
AVALIAÇÃO DE PREPARAÇÕES ANTIGÊNICAS DE
STRONGYLOIDES STERCORALIS
PARA O
IMUNODIAGNÓSTICO DA ESTRONGILOIDÍASE
Cláudio Lúcio Rossi, Emília Emiko Hieda Takahashi, Angela Lauand
Sampaio Teixeira, Sílvia de Barros-Mazon e Rose Clélia Grion Trevisan
P reparações antigênicas de
S tr o n g y lo i d e s s t e r c o r a l isp a ra o im unodiagnóstico da
estrongiloidíase têm sido tradicionalmente obtidas p ela extração de antígenos do parasita com
solução salina. No presente trabalho, após obtenção da preparação antigênicade
S . s t e r c o r a l iscom extração salina, a fr a ç ã o residual fo i solubilizada com uréia, e as duas preparações fo ra m
avaliadas para o bnunodiagnóstico da estrongiloidíase, através de uma técnica imunoenzimática.
N ão fo r a m encontradas diferenças significativas entre as duas preparações, em term os de
atividade antigência específica e reatividade cruzada. A dificuldade de obtenção de larvas de
S . s t e r c o r a l istem sido um fa to r limitante para o desenvolvim ento de reações m ais sensíveis e
específicas que possam ser empregadas no imunodiagnóstico da estrongiloidíase. A possibilidade
de um m aior rendimento, em termos de m aterial antigênico ativo, abre perspectivas de
fra cio n a m en to do extrato bruto do parasita, na tentativa de se encontrar fr a ç õ e s com m aior
atividade antigênica específica e m enor reatividade cruzada.
Palavras-chaves:
S tr o n g y lo id e s s te r c o r a lis .Estrongiloidíase. Imunodiagnóstico. Antígenos.
Strongyloides stercoralis
é u m p a r a s ita c o m d i s t r i b u i ç ã o g e o g r á f i c a m u n d ia l, te n d o m a io r p r e v a lê n c ia e m p a ís e s tr o p i c a i s 5. A m a io r ia d o s i n d i v í d u o s c o m e s tr o n g ilo id ía s e é a s s in to m á tic a o u a p r e s e n ta m a n if e s ta ç õ e s c lín ic a s b r a n d a s , n ã o p a to g n o m ô n i c a s 2 9.O d i a g n ó s tic o d e e s tr o n g ilo id ía s e te m s id o tr a d ic io n a lm e n te fe ito p o r m é to d o s p a r a s ito ló g ic o s b a s e a d o s n a id e n tif ic a ç ã o d e la r v a s d e S.
stercoralis
n a s f e z e s d o s i n d iv íd u o s in f e c ta d o s . E n tr e ta n to , m u ito s a u to r e s tê m r e s s a lta d o a fa lta d e s e n s ib ilid a d e d e s s e s m é t o d o s 8 1 0 .
O d e s e n v o l v i m e n t o d e t e s te s s o r o ló g ic o s c o n f iá v e is p a r a o d i a g n ó s tic o d a e s tr o n g ilo id ía s e p o d e t e r g r a n d e u t i l i d a d e e m s i t u a ç õ e s e p i d e m i o l ó g i c a s e c l í n i c a s . A té o p r e s e n t e m o m e n to , p o u c a s te n ta tiv a s tê m s id o fe ita s p a r a o
T r a b a l h o r e a l i z a d o n o D e p a r t a m e n t o d e P a to lo g ia C lín ic a d a F a c u l d a d e d e C i ê n c ia s M é d i c a s d a U n i v e r s i d a d e E s ta d u a l d e C a m p i n a s , C a m p i n a s , S P .
E n d ereço p a ra c o rresp o n d ên cia: D r . C l á u d i o L ú c io R o s s i. D e p t o . d e P a t o l o g i a C l í n i c a / F C M / U N I C A M P . C P : 6 1 1 1 , 1 3 0 8 1 - 9 7 0 C a m p i n a s , S P .
R e c e b i d o p a r a p u b l i c a ç ã o e m 3 0 / 1 2 / 9 2 .
d e s e n v o l v i m e n t o d e s s e s t e s t e s 1 6 11 13 14 15. T r a d ic io n a lm e n te , p r e p a r a ç õ e s a n tig ê n ic a s d e
S.
stercoralis,
r e s u lta n te s d e e x tr a ç ã o d e a n tíg e n o s c o m s o lu ç ã o s a lin a , tê m s id o u tiliz a d a s n a s té c n ic a s s o r o ló g ic a s p a d r o n iz a d a s . T o d a v ia , ta is p r e p a r a ç õ e s c a r e c e m d e a d e q u a d a s e n s ib ilid a d e e e s p e c if ic id a d e , p o r r e p r e s e n ta r e m e x tr a to s b r u to s d o p a r a s ita . U m a d a s p r i n c i p a i s l i m i t a ç õ e s e n c o n t r a d a s n o d e s e n v o lv im e n to d e te s te s s o r o ló g ic o s m a is s e n s ív e is e e s p e c íf ic o s , é a d if ic u ld a d e e m s e o b te r q u a n tid a d e s s u f ic ie n te s d e a n tíg e n o s q u e p e r m ita m s e u p o s te r io r f r a c io n a m e n to e a n á lis e .E s tu d o s p r é v io s tê m m o s tr a d o q u e , a p ó s a e x tr a ç ã o d e a n tíg e n o s d e
Schistosoma mansoni
c o m s o l u ç ã o s a l i n a , a f r a ç ã o r e s i d u a l d o p a r a s i t a s o lu b iliz a d a c o m u r é ia , p o d e a p r e s e n ta r q u a n tid a d e s s ig n if ic a tiv a s d e m a te r ia is a n tig ê n ic o s a tiv o s 16 17.R ossi CL, T akahashi EEH, Teixeira A L S, B arros-M azon S , Trevisan RCG. A valiação de p re p a r a ç õ e s antigênicas
de
S t r o n g y l o i d c s s t e r c o r a l i sp a ra o im unodiagnóstico da estrongiloidíase. R evista da S o cied a d e B rasileira de
M edicina Tropical 26:83-87, abr-jun, 1993.
M A T E R I A L E M É T O D O S
Reagentes
Q u a n d o n ã o e s p e c if ic a d o n o te x to , o s re a g e n te s f o r a m o b tid o s d a S ig m a C h e m ic a l C o . , S a in t L o u is , M O . T r is ( h id r o x im e til) - a m in o m e ta n o ( T r is ) e p e r ó x id o d e h id r o g ê n io a 3 0 % ( H 20 2) f o r a m o b tid o s d a A ld r ic h C o ., M ilw a u k e e , W I .
Preparação dos antígenos de
S. stercoralis
L a r v a s d e
S. stercoralis
r e c u p e r a d a s d e c u ltu r a d e fe z e s c o m c a r v ã o , a tr a v é s d e u m a m o d if ic a ç ã o d o m é to d o d e B a e r m a n n 12, f o r a m la v a d a s v á r ia s v e z e s p o r c e n tr if u g a ç ã o e e s to c a d a s a -7 0 ° C a té o m o m e n to d e u s o . A p r e p a r a ç ã o a n tig ê n ic a r e s u lta n te d a e x tr a ç ã o s a lin a fo i o b tid a s e g u n d o G a m , N e v a e K r o t o s k i 3 . R e s u m i d a m e n t e , a s l a r v a s f o r a m d e s c o n g e la d a s e r e s s u s p e n d id a s e m s o lu ç ã o s a lin a ta m p o n a d a c o m f o s f a to 0 ,1 5 M , p H 7 ,2 ( S S T ), c o n te n d o 5 m M d e f lu o r e to d e f e n ilm e tils u lf o n ila ( F F M S ) . A p ó s f r a g m e n t a ç ã o d a s l a r v a s p o r s o n ic a ç ã o ( 2 ,5 m in ) , o m a te r ia l fo i d e ix a d o s o b a g ita ç ã o le n ta , a 4 ° C , d u r a n te 1 8 h , p a r a a e x tr a ç ã o d e a n tíg e n o s . A p ó s c e n tr if u g a ç ã o a 3 2 .0 0 0 x g , d u r a n te 3 0 m in , a 4 ° C , o s o b r e n a d a n te ( p r e p a r a ç ã o E S ) fo i c u id a d o s a m e n te r e m o v id o , a liq u o ta d o e e s to c a d o a - 7 0 ° C . O p r e c ip ita d o , r e s u lta n te d a c e n tr if u g a ç ã o , f o i r e s s u s p e n d id o e m ta m p ã o T r is - H C 1 0 ,0 5 M , c o n te n d o u r é i a 8 M e F F M S 5 m M , p H 8 . 0 m a te ria l fo i s o n ic a d o c o m o p r e v ia m e n te d e s c rito e d e ix a d o s o b a g ita ç ã o le n ta , a 4 ° C , d u r a n te 2 h . A p ó s c e n tr if u g a ç ã o a 3 2 .0 0 0 x g , p o r 3 0 m in , a 4 ° C , o s o b r e n a d a n te fo i c u id a d o s a m e n te r e m o v id o 3 s u b m e tid o a c r o m a to g r a f ia s d e e x c lu s ã o e m c o lu n a s P D - 1 0 ( P h a r m a c ia F i n e C h e m ic a ls , P is c a ta w a y , N J ) , e q u ilib r a d a s c o m ta m p ã o T r i s - H C 1 0 ,0 5 M , p H 8 , c o n te n d o 0 ,2 M d e N a C l. O e lu e n te c o n te n d o p r o te ín a s ( p r e p a r a ç ã o E U ) fo i a liq u o ta d o e e s to c a d o a -7 0 ° C .ELISA
A té c n ic a í m u n o e n z im á tic a u tiliz a d a n e s te tr a b a lh o f o i a d a p ta d a a p a r t i r d e u m a té c n ic a p r e v ia m e n te d e s c r ita p a r a a d e te c ç ã o d e a n tic o r p o s e s p e c íf ic o s d a c la s s e Jg G a n ti-S .
stercoralis11.
A s c o n c e n tra ç õ e s p r o té ic a s d a s p r e p a r a ç õ e s a n tig ê n ic a s ,b e m c o m o a c o n c e n tr a ç ã o ó tim a d o c o n ju g a d o , s e l e c i o n a d a s p a r a u s o , f o r a m d e t e r m i n a d a s p r e v ia m e n te a tr a v é s d e e n s a io s d e titu la ç ã o e m p la c a s d e E L I S A . P la c a s d e p o lie s tir e n o c o m o r i fíci os d e f u n d o c h a t o ( C o r n i n g , N e w Y o r k ) f o r a r e c o b e r ta s c o m 2 0 0 ;u l/o r if íc io d a s p r e p a r a ç õ e s E ., o u E U , d ilu íd a s a
4fxg
d e p r o t e í n a / m l c o m ta m p ã o c a r b o n a t o - b i c a r b o n a t o 0 , 1 M , p H 9 , 6 . A p ó s in c u b a ç ã o p o r 3 h , a 3 7 ° C , a s p la c a s f o r a m la v a d a s tr ê s v e z e s c o m S S T c o n te n d o 0 ,1 % d e T w e e n 2 0 ( S S T /T w ) . A s e g u ir , 2 00 /xl d a s a m o s tr a s d o s s o ro s d ilu íd a s e m S S T - T w c o n te n d o 0 ,1 % d e a lb u m in a b o v in a s é r ic a , f o r a m a d i c io n a d o s a o s o r if íc io s . A p ó s in c u b a ç ã o p o r l h , à te m p e r a tu r a a m b ie n te , as p la c a s fo ra m la v a d a s c o m S S T - T w c o m o p r e v ia m e n te d e s c r i t o . D u z e n t o s m i c r o l i t r o s d o c o n j u g a d o , im u n o g lo b u lin a d e c a b r a a n ti- I g G h u m a n a m a r c a d a c o m p e r o x id a s e , d ilu íd o a 1 :7 5 0 c o m S S T - T w , fo r a m a d ic io n a d o s a o s o r if íc io s e a s p la c a s f o ra m d e ix a d a s e m re p o u s o p o r 1 h , à te m p e r a tu r a a m b ie n te . A s p la c a s f o r a m la v a d a s c o m S S T - T w , c o m o j á d e s c r i t o , e 2 0 0 / í l d o s i s t e m a s u b s t r a t o fo r a m a d ic io n a d o s a o s o r if íc io s . O s is te m a s u b s tr a to e ra c o m p o s to d e 3 , 3 ', 5 ,5 '- t e t r a m e t i l b e n z i d i n a e H 20 2 n a s c o n c e n tr a ç õ e s f in a is d e 0 ,4 2 m M e 0 ,0 0 4 % , r e s p e c tiv a m e n te . T r i n t a m in u to s a p ó s a a d iç ã o d o s is te m a s u b s tr a to , a s r e a ç õ e s f o r a m b lo q u e a d a s a d ic io n a n d o - s e a o s o r if íc io s 50/^1 d e H 2S 0 4 4 N . A s a b s o r b â n c ia s d a s r e a ç õ e s f o r a m lid a s a 4 5 0 n m em u m a le ito r a d e p la c a s . T o d a s a s d ilu iç õ e s d o s so ro s fo r a m te s ta d a s e m tr ip l i c a t a e a d e n s id a d e ó tic a ( D .O .) m é d ia fo i c o n s id e r a d a . T o d a s a s p la c a s c o n tin h a m 8 r e p lic a ta s d o c o n t r o l e d e a n tíg e n o . A ^ *j. f i n a l p a r a c a d a d i l u i ç ã o d o s o r o fo i d e te r m in a d a , s u b tr a in d o - s e a m é d ia d a s D .O . d o s 8 c o n tr o le s d e a n tíg e n o s . U m r e s u lta d o fo i c o n sid e ra d o p o s itiv o , q u a n d o a D .O . f in a l f o i s u p e r i o r a 2 d e s v io s - p a d r õ e s ( D P ) a c im a d a m é d ia d e u m g ru p o d e s o r o s n e g a tiv o s , o b tid o s d e 1 2 in d iv íd u o s sem n e n h u m a e v id ê n c ia d e e s t r o n g i l o i d í a s e , te s ta d o s na m e s m a p la c a .Soros
O s s e g u in te s g r u p o s d e s o r o s , p r o v e n ie n te s de i n d i v í d u o s i n f e c t a d o s , f o r a m u t i l i z a d o s :
S tr o n g y lo id e s s te r c o r a lis
( n = 1 7 ) ;A scaris
lumbricoides
(n = 3 );Schistosoma m ansoni
(n = 3);Giardia lamblia
(n = 3 );Hymenolepis nana
(n = 2);R ossi CL, T aka h a sh i EEH , Teixeira A L S, B arros-M azon S , Trevisan RCG. A valiação de p rep a ra çõ es antigênicas
de
S t r o n g y l o i d e s s t e r c o r a l i sp a ra o im unodiagnóstico da estrongiloidíase. Revista da Sociedade Brasileira de
M edicina T ropical 26:83-87, abr-jun, 1993.
Enterobius vermicularis
(n = 2 ) ;Taenia sp
(n = 2 ). O d ia g n ó s t i c o , e m to d o s o s g r u p o s , fo i d e te r m in a d o p o r m e io s p a r a s ito ló g ic o s . E m to d o s o s c a s o s , n e n h u m a in f e c ç ã o s im u ltâ n e a c o m o u tr o s p a r a s ita s in te s tin a is f o i o b s e r v a d a , e m p e lo m e n o s tr ê s e x a m e s d e f e z e s c o n s e c u tiv o s .U m
p o o l
d e s o r o s r e a g e n te s p a r aS. stercoralis
fo i o b t i d o , m i s tu r a n d o - s e p a r te s ig u a is d e s o r o s d e i n d iv íd u o s c o m e s tr o n g ilo id ía s e , c o m p r o v a d a p o r m e io s p a r a s i t o l ó g i c o s e s o r o lo g ia p o s itiv a p a r a o p a r a s ita .
O s s o r o s c o n tr o le s n e g a tiv o s f o r a m o b tid o s d e e s tu d a n te s d a F a c u ld a d e d e C iê n c ia s M é d ic a s d a U N I C A M P e d e f u n c i o n á r i o s d o n o s s o D e p a r ta m e n to . E s te s in d iv íd u o s tin h a m , p e lo m e n o s , tr ê s e x a m e s p r o to p a r a s ito ló g ic o s n e g a tiv o s e n ã o tin h a m h is tó r ia p a s s a d a d e in fe c ç ã o p o r
S. stercoralis.
R E S U L T A D O S
E m te r m o s d e c o n c e n tr a ç ã o d e p r o te ín a s , a p r o p o r ç ã o e n t r e a s e x tr a ç õ e s c o m S S T e u r é ia fo i d e
1 ,7 :1 .
A s a t i v i d a d e s a n t i g ê n i c a s e s p e c í f i c a s d a s
p r e p a r a ç õ e s E S e E U fo r a m a v a lia d a s , a tr a v é s d e E L I S A , u tiliz a n d o o s s o r o s d e in d i v í d u o s c o m e s tr o n g ilo id ía s e d ilu íd o s a 1 :1 0 . D o s 1 7 s o r o s t e s t a d o s , 13 f o r a m r e a g e n t e s c o m a s d u a s p r e p a r a ç õ e s , 1 fo i r e a g e n te c o m a p r e p a r a ç ã o E S e d u v id o s o c o m a p r e p a r a ç ã o E U e 3 n ã o r e a g ir a m c o m a s d u a s p r e p a r a ç õ e s . U m
p o o l
d e 8 s o r o s d e i n d iv íd u o s c o m e s tr o n g ilo id ía s e e c o m s o r o lo g ia p o s itiv a p a r aS. stercoralis
ta m b é m fo i te s ta d o p o r E L I S A c o m a s d u a s p r e p a r a ç õ e s . A s d e n s id a d e s ó tic a s f in a is d a s r e a ç õ e s e n tr e a s p r e p a r a ç õ e s E S e E U e opool
d e s o r o s d ilu íd o s a 1 /1 0 0 fo ra m , r e s p e c tiv a m e n te , 0 ,7 5 e 0 ,7 4 .A r e a tiv id a d e d o s s o ro s d e in d iv íd u o s p o r ta d o r e s d e o u tr a s in fe c ç õ e s p a r a s itá r ia s c o m a s p r e p a r a ç õ e s E S e E U é m o s tr a d a n a T a b e la 1. E s te s s o r o s f o r a m te s ta d o s c o m d ilu iç õ e s s e r ia d a s , c o m e ç a n d o e m 1 /1 0 . D o s 15 s o r o s te s ta d o s , s o m e n te 2 r e a g i r a m c o m a s d u a s p r e p a r a ç õ e s a n tig ê n ic a s . E s t e s e r a m p r o v e n ie n te s d e u m in d iv íd u o c o m e s q u is to s s o m o s e e d e u m c o m a s c a r id ía s e . N e s te s s o r o s f a ls o - p o s i t i v o s , n ã o f o r a m o b s e r v a d a s d i f e r e n ç a s s ig n if ic a tiv a s e n tr e o s títu lo s d e E L IS A o b t i d o s c o m a s p r e p a r a ç õ e s E S e E U .
Tabela 1
-A valiação da reatividade entre preparações antigênicas de
S. s te r c o r a lise soros de indivíduos portadores de infecções heterólogas,
através de ELISA.
n ° c a s o T ip o d e in f e c ç ã o T ítu lo s d e
E L ISA
aES
b E U C1
A. lumbricoides
8 0 4 02 < 10 < 1 0
3 < 10 < 1 0
4
S. m ansoni
2 0 1 05 < 1 0 < 1 0
6 < 10 < 1 0
7
G. lamblia
< 1 0 < 1 08 < 1 0 < 1 0
9 < 10 < 1 0
1 0
H. nana
< 10 < 1 011 < 10 < 1 0
1 2
E. vermicularis
< 1 0 < 1013 < 10 < 10
1 4
Taenia sp
< 10 < 1 015 < 1 0 < 1 0
A
T ítu lo s f o r a m e x p r e s s o s c o m o a s r e c í p r o c a s d a s d il u iç õ e s d o s s o r o s . B P r e p a r a ç ã o a n ti g ê n ic a d eS. stercoralis
o b tid a c o m e x tr a ç ã o s a lin a . c P r e p a r a ç ã o a n ti g ê n ic a o b tid a c o m s o lu b iliz a ç ã o p e la u r é ia d a fr a ç ã o r e s id u a lR ossi CL, T akahashi EEH, Teixeira A L S, Barros-M azon S, Trevisan RCG. A valiação de p re p a ra ç õ e s antigênicas
de
S t r o n g y l o i d e s s t e r c o r a l i sp a ra o im unodiagnóstico da estrongiloidíase. R evista da S o cied a d e B rasileira de
M edicina Tropical 26:83-87, ahr-jun, 1993.
D I S C U S S Ã O
O d i a g n ó s tic o d e f in itiv o d e e s tr o n g ilo id ía s e é d a d o , p e lo a c h a d o d e la r v a s d e
S. stercoralis
n a s fe z e s d e p e s s o a s in f e c ta d a s . E n tr e ta n to , a s la r v a s d o p a r a s i t a p o d e m e s t a r p r e s e n t e s e m p e q u e n a s q u a n tid a d e s , o u m e s m o a u s e n te s d o s m a te r ia is e x a m in a d o s , d e m o d o q u e v á r io s a u to r e s tê m s a lie n ta d o a f a lta d e s e n s ib ilid a d e d o s m é to d o s p a r a s i t o l ó g i c o s 7 10. A s t é c n i c a s s o r o l ó g i c a s , p r in c ip a lm e n te a s im u n o e n z im á tic a s , p c l e m s e r u m a b o a a l t e r n a t i v a p a r a o d i a g n ó s t i c o d a e s tr o n g ilo id ía s e . A m a io r ia d o s tr a b a lh o s r e a liz a d o s , a té o p r e s e n te m o m e n to , in d ic a q u e a s e n s ib ilid a d e d a s té c n ic a s im u n o e n z im á tic a s p a r a d e te c ç ã o d e a n t i c o r p o s e s p e c í f i c o s d a c l a s s e I g G a n t i - S .stercoralis
é p r ó x i m a a 8 5 % 13 11 . A d if ic u ld a d e d e o b t e n ç ã o d e l a r v a s d eS. s te r c o r a lis
e , c o n s e q u e n t e m e n t e , a o b t e n ç ã o d e q u a n tid a d e s s u f ic ie n te s d e m a te r ia l a n tig ê n ic o a tiv o , te m s id o u m f a to r lim ita n te p a r a o im u n o d ia g n ó s tic o d a e s tr o n g ilo id ía s e 5.T r a b a lh o s p r é v io s tê m m o s tr a d o q u e a n tíg e n o s l i g a d o s à m e m b r a n a d e p a r a s i t a s p o d e m s e r s o lu b iliz a d o s n a p r e s e n ç a d e u r é i a 1617. O s r e s u lta d o s d o p r e s e n te tr a b a lh o m o s tr a r a m q u e a f ra ç ã o re s id u a l d e
S. stercoralis,
r e s u lta n te d a e x tr a ç ã o s a lin a , a p ó s s o lu b iliz a ç ã o c o m u r é ia , a p r e s e n to u q u a n tid a d e s s ig n if ic a tiv a s d e m a te r ia l a n tig ê n ic o a tiv o . A s p r e p a r a ç õ e s a n tig ê n ic a s E S e E U p a r e c e m te r g r a u s i m i l a r d e r e a t i v i d a d e c r u z a d a c o m s o r o s d e in d iv íd u o s p o r ta d o r e s d e in f e c ç õ e s h e te r ó lo g a s . P a r tic u la r m e n te im p o r ta n te fo i a f o r te r e a tiv id a d e o b s e r v a d a c o m o s o r o d e u m i n d i v í d u o c o m a s c a r id ía s e . E s s a r e a tiv id a d e c r u z a d a ta m b é m te m s id o o b s e r v a d a p o r o u t r o s a u t o r e s , u tiliz a n d o p r e p a r a ç õ e s a n tig ê n ic a s d eS. stercoralis
o uS.
ratti
4 10 l5 .A s e n s ib ilid a d e e a e s p e c if ic id a d e d e u m a té c n ic a i m u n o ló g ic a d e p e n d e m , e m g r a n d e p a r te , d a p r e p a r a ç ã o a n tig ê n ic a u tiliz a d a . A p o s s ib ilid a d e d e u m m a io r r e n d im e n to d e m a te r ia l a n tig ê n ic o d e
S. stercoralis,
a tr a v é s d e u m s e g u n d o p r o c e s s o d e e x tr a ç ã o , c o m u r é ia , a b r e p e r s p e c tiv a s p a r a o f r a c io n a m e n to d o e x tr a to b r u to d o p a r a s ita , n a te n ta tiv a d e s e e n c o n tr a r f r a ç õ e s c o m m a io r a tiv id a d e a n tig ê n ic a e s p e c íf ic a e m e n o r r e a tiv id a d e c r u z a d a .S U M M A R Y
A queous-soluble (AS) antigens fr o m larvae o f
S tr o n g y lo id e s s t e r c o r a l is ,extracted with
phosphate-buffered saline, are traditionally u s e d fo r serodiagnosis
ofstrongyloidiasis. To identify sources o f a ntigensfor use
in serodiagnosis, residual particulates fr o m parasite
larvae after aqueous extraction were solubilized with
Tris-buffered 8M urea, yielding a urea-soluble (US)
antigen fraction. Both A S and US antigens fr o m
S . s t e r c o r a l i sw ere e v a lu a te d by an e n zy m e -lin k e d
immunosorbent assay. No significalive differences were
observed between A S and US antigens fr o m the parasite
regarding specific antigenic activity a nd cross-reactivity.
lm m unoassays are highly dependent on the antigen fo r
sensitivity a nd specificity. C rude extracts fr o m
S . s t e r c o r a l isshould be fu r th e r studied, m ainly in relation
to antigenic fra ctio n s which could provide even more
sensitive and specific results. Studies o ffra ctio n a tio n o f
S . s t e r c o r a l ism ust take into account the antigen y ield o f
both lhe crude extract and fra ctio n s, since larvae o f
parasite are normally difficult to obtain. C onsidering this
aspect, the results fr o m this study are very useful, since
the extraction with urea subslantialty increased the
amounts o f antigenic m ateriais norm ally obtained with
the classical aqueous extraction.
K e y - w o r d s :
S t r o n g y l o i d e s s t e r c o r a l i s .Strongyloidiasis. Immunodiagnosis. Antigens.
R E F E R Ê N C I A S B I B L I O G R Á F I C A S
1. C a r r o l l S M , K a r th i g a s u K T , G r o v e D l . S e r o d ia g n o s is o f h u m a n s tr o n g y lo i d ia s is b y a n e n z y m e - lin k e d im m u n o s o r b e n t a s s a y . T r a n s a c t i o n s o f t h e R o y a l S o c ie ty o f T r o p i c a l M e d i c in e a n d H y g i e n e 7 5 :7 0 6 - 7 0 9 , 1 9 8 1 .
2 . C a r v a l h o - F i l h o E . S t r o n g y l o i d i a s i s . C li n ic s in G a s tr o e n te r o l o g y 7 : 1 7 9 - 2 0 0 , 1 9 7 8 .
3 . G a m A A , N e v a F A , K r o to s k i W A . C o m p a r a t iv e s e n s itiv ity a n d s p e c i f ic ity o f E L I S A a n d 1 H A fo r s e r o d ia g n o s is o f s tr o n g y lo id ia s is w ith la r v a l a n tig e n s . A m e r i c a n J o u r n a l o f T r o p i c a l M e d i c i n e 3 7 :1 5 7 - 1 6 1 , 1 9 8 7 .
4 . G e n ta R M . P r e d i c ti v e v a l u e o f a n e n z y m e - lin k e d im m u n o s o r b e n t a s s a y ( E L I S A ) f o r t h e s e r o d ia g n o s is o f s t r o n g y lo i d ia s is . A m e r i c a n J o u r n a l o f C lin ic a i P a th o lo g y 8 9 : 3 9 1 - 3 9 4 , 1 9 8 8 .
5 . G e n ta R M . G lo b a l p r e v a l e n c e o f s t r o n g y lo id ia s is : c r i ti c a i r e v i e w w ith e p id e m io l o g ic in s ig h ts in to th e p r e v e n t io n o f d is s e m i n a te d d i s e a s e . R e v ie w s o f
Rossi CL, T akahashi EEH , Teixeira A L S, Barros-M azon S, Trevisart RCG. A va lia çã o de p re p a ra ç õ e s antigênicas
de
S t r o n g y l o i d e s s t e r c o r a l i sp a ra o im unodiagnóstico da estrongiloidíase. R evista da S ociedade B rasileira de
M edicina T ropical 26:83-87, abr-jun, 1993.
I n f e c tio u s D is e a s e s 1 1 :7 5 5 - 7 6 7 , 1 9 8 9 .
6 . G e n ta R M , W e il G J . A n tib o d ie s to
Strongyloides
stercoralis
l a r v a l s u r f a c e a n ti g e n s in c h r o n i c s t r o n g y lo i d ia s is . L a b o r a t o r y I n v e s tig a tio n 4 7 :8 7 - 9 0 , 1 9 8 2 .7 . G r o v e D l . S tr o n g y lo i d ia s i s in A llie d e x - p r is o n e r s o f w a r in S o u t h - E a s t A s ia . B r itis h M e d ic a i J o u r n a l 2 8 0 : 5 9 8 - 6 0 1 , 1 9 8 0 .
8 . G r o v e D l , B l a i r J . D i a g n o s i s o f h u m a n s t r o n g y l o i d i a s i s b y im m u n o f l u o r e s c e n c e , u s in g
Strongyloides ratti
a n dS. stercoralis
la r v a e . T h e A m e r i c a n J o u r n a l o f T r o p i c a l M e d i c in e a n d H y g ie n e 3 0 : 3 4 4 - 3 4 9 , 1 9 8 1 .9 . M i ld e r J E , W a l z e r P D , K ilg o r e G , R u th e r f o r d I, K le in M . C lin ic a i f e a tu r e s o f
Strongyloides stercoralis
i n f e c tio n in a n e n d e m i c a r e a o f t h e U n ite d S ta te s . G a s tr o e n te r o l o g y 8 0 :1 4 8 1 - 1 4 8 8 , 1 9 8 1 .1 0. N e v a F A . B io lo g y a n d im m u n o lo g y o f h u m a n s t r o n g y l o i d i a s i s . J o u r n a l o f I n f e c tio u s D is e a s e s 1 5 3 :3 9 7 - 4 0 7 , 1 9 8 6 .
11. N e v a F A , G a m A A , B u r k e J . C o m p a r i s o n o f la r v a l a n ti g e n s in a n e n z y m e - li n k e d im m u n o s o r b e n t a s s a y f o r s t r o n g y lo i d ia s is in h u m a n s . J o u r n a l o f In f e c tio u s D is e a s e s 1 4 4 :4 2 7 - 4 3 2 , 1 9 8 1 .
1 2 . R u g a i E , M a t to s T , B r is o la A P . N o v a té c n ic a p a r a is o l a r la r v a s d e n e m a t ó id e s d a s f e z e s ; m o d if ic a ç ã o
d o m é to d o d e B a e r m a n n . R e v is ta d o In s titu to A d o lfo L u tz 1 4 :5 - 8 , 1 9 5 4 .
1 3 . S a to Y , R y u m o n I. G e l a t i n p a r t i c l e i n d i r e c t a g g l u t i n a t i o n t e s t f o r s e r o d i a g n o s i s o f h u m a n s tr o n g y lo i d ia s is . J a p a n e s e J o u r n a l o f P a r a s ito lo g y 3 9 :2 1 3 - 2 1 9 , 1 9 9 0 .
1 4 . S a to Y , T a k a r a M , O t s u r u M . D e t e c t io n o f a n t ib o d i e s in s tr o n g y lo id ia s is b y e n z y m e - lin k e d im m u n o s o r b e n t a s s a y (E L I S A ) . T r a n s a c t io n s o f t h e R o y a l S o c ie ty o f T r o p ic a l M e d i c in e a n d H y g ie n e 7 9 : 5 1 - 5 5 , 1 9 8 5 . 1 5 . T r i b o u l e y - D u r e t J , T r i b o u l e y J , A p p r i o u M ,
M e g r a u d R N . A p p l i c a t i o n d u t e s t E L I S A a u d i a g n o s t i c d e la s t r o n g i l o i d o s e . A n n a l e s d e P a r a s ito l o g ie 5 3 :6 4 1 - 6 4 8 , 1 9 7 8 .
1 6 . T s a n g V C W , T a o Y , M a d d i s o n S E . S y s te m a tic fr a c tio n a tio n o f
