R E P R O D U T IB IL ID A D E E E S T A B IL ID A D E DE A N TÍG E N O S
PREPARADO S DE C U LTU R A S DE TR Y P A N O S O M A C R U ZI
PARA REAÇÕ ES DE F IX A Ç A O DO C O M P LE M E N TO .*
José O liveira de A lm e id a '* Irw ing K a g a n *** Therezinha A. C u n h a * * * *
A n tíg e n o s p re p a ra d o s d e c u ltu ra s d e T r y p a n o s o m a c r u z i fo ra m e x p e rim e n ta d o s c o m u m sôro cha-gásico d e re fe rê n c ia , e m reações q u a n tita tiv a s d e fix a ç ã o d o c o m p le m e n to . Q u a tro d e les fo ra m lio fili-zados e m p e q u e n o s vo lu m es e m a n tid o s e m ge lad eira. U m o u tr o f o i m a n tid o e m estado líq u id o , co m a z id a só dica e a 3-6? C.
Os t ít u lo s d o c o m p le x o -im u n e , e m te rm o s d e sôro o u d e a n tíg e n o fo ra m d e te rm in a d o s co m o a in clinaç ão d a lin h a d e regressão tra ç a d a q u a n d o se p r o je ta m as q u a n tid a d e s d e c o m p le x o (e m te rm o s d e sôro o u d e a n tíg e n o ) necessárias p a ra 5 0 % d e h e m ó lis e c o n tra o n ú m e ro d e un id ades de c o m p le m e n to usadas na reação.
D iv id in d o -s e o t í t u lo d o a n tíg e n o p e lo t í t u lo d o sôro, o b te m -s e u m ín d ic e d e re a tiv id a d e específica í l . R . E . ) , q u e in fo r m a so bre a r e p r o d u tib i/id a d e e e s ta b ilid a d e d o a n tíg e n o . E x a m in a n d o os antíg eno s, d e frascos c o lh id o s ao acaso, ve rificou -se q u e os a n tíg e n o s B.W . 8 9 e C D C 1 0 -7 5 ap resen taram um I.R .E . c o m p e q u e n a d ife re n ç a e n tre as am ostras, e n q u a n to m a io r varia ção f o i observada co m os a n tíg e nos B .W . 1 0 5 e 7 6 0 1 3 0 . A n tíg e n o s r e c o n s titu íd o s e m a n tid o s em ge lad eira, a té o ito meses, p e rd ia m le n ta m e n te sua ca p ac id ad e re a tiv a , c o m exceção d o a n tíg e n o B .W . 8 9 e C D C 10 -75.
Os d a d o s sugerem q u e o uso d e a n tíg e n o s d e T. c r u z i p a ra reações d e fix a ç ã o d o c o m p le m e n to d e vem ser e m preg ado s q u a n d o re c o n s titu íd o s , evitan d o -se sua m a n u te n ç ã o em estado líq u id o , p e la queda d o seu p o d e r fix a d o r.
IN T R O D U Ç Ã O
A n tíg e n o s p re p a ra d o s de c u ltu ra s d e
Try
panosoma cruzi
para uso e m reações de f ix a ção de c o m p le m e n to , se gu nd o o m é to d o de K E L S E R 1 2 , e m b o ra e s p e c ífic o s , e ra m in s tá veis já n o f im d e 4 sem anas. C o m a in tro d u ç ã o d o " m e r t h io la t e " p o r D A V IS 8 f o i p os s ív e l se te r a n tíg e n o s estáveis a té u m a n o , m e s m o p ro v e n ie n te s d e v á rio s lo te s d e trip a n o s o m a s . M U - N IZ e F R E IT A S 14 c o n fir m a m a e s ta b ilid a d e d o a n tíg e n o d e D A V IS d u ra n te trê s meses. O a n tíg e n o d e D A V IS , p re p a ra d o s eg u n d o M U - N IZ e F R E IT A S , a prese nta v a q u e d a d o p o d e r fix a d o r , já n o f im de u m m ês, m esm o q u a n d o co n s e rv a do c o m " m e r t h io la t e " e m g e la d eira , se gu nd o F R E IT A S 1 0 . Na o b s e rv a çã o d e P E L - L E G R I N 0 1S o a n tíg e n o de D A V IS p o d e riaser u sado a té c in c o meses d e p o is de p re pa ra d o , se m a n tid o e m g elad eira.
A r e p ro d u tib ilid a d e de a n tíg e n o s p o d e ser c o n s ta ta d a , q u a n d o e ram eles p re p a ra d o s de tr ip a n o s o m a s secos, m a n tid o s e m v á c u o e em b a ix a te m p e ra tu ra , se gu nd o L I E M 1 3 . F R E I T A S 9 /10 c o n fir m o u ta is re s u lta d o s , o b te n d o a n tíg e n o s d e igu al p o tê n c ia ta n to de tr ip a n o som as c o lh id o s re c e n te m e n te c o m o d aq u e le s c o ns e rv a d o s secos.
A n tíg e n o s p re p a ra d o s p ela té c n ic a d e F R E I T A S & A L M E I D A 11 m a n tiv e ra m in a lte ra d a c a p a c id a d e fix a d o ra a té d ez e n o ve meses, q u a n d o c o n se rv a d o s a 5 °C o u a - 3 0 ° C , segun d o F R E IT A S 1 0 .
A m e d id a d o p o d e r de c o m b in a ç ã o e n tre s ô ro chag ásico e a n tíg e n o s d e
T. cruzi
p ô d e ser fe ita d e te rm in a n d o -s e o ín d ic e decapaci-* T ra b a lh o re a liza d o c o m a u x ílio (S IP 0 8 - 0 5 3 ) d o C on selh o N a c io n a l d e D e s e n v o lv im e n to C ie n tíifiç o e Tecno lóg ico .
* 'P ro fe s s o r c a te d rá tic o d o D ep . P arasitolo gia, M ic ro b io lo g ia e Im u n o lo g ia d a F a c u ld a d e d e M e d ic in a d e R ib e irã o P re to . U n . São Paulo.
* * * D ir e to r da D ivis ão d e P arasito lo g ia C e n tro d e C o n tro le d e D oenças, A tla n ta , G eórgia. Est. U nid os.
* ' * T é cnica e m Im u n o lo g ia . Fac. M e d ic in a d e R ib e irã o P re to.
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Rev. Soc. Bras. Med. Trop.
Vol. X II - N?s 1 a 6
dade re a tiv a e s p e c ífic a , c o m o u m q u o c ie n te e n tre t í t u l o d o a n tíg e n o e o t í t u l o d o s ôro ( A L M E ID A E T A L . 6 ).
N o e s tu d o da a tiv id a d e fix a d o ra d e a n tíg e - n os d e
T. cruzi
as d is c re p â n c ia s e n tre reações fe ita s c o m os m esm os e le m e n to s não fo ra m m aiores n em m ais fre q ü e n te s d o q u e as o b s e r vadas no sistem a s ífilis , s eg u nd o A L M E I D A & S IQ U E IR A 7 . Dessa fo rm a se p ô d e c o m p a ra r are a tiv id a d e e s p e c ífic a d e a n tíg e n o s de
T. cruzi
em reações c o m s ô ros chagásicos. E m p re g a n d o o a n tíg e n o a qu os o de F R E IT A S & A L M E I D A 1 1 , S I Q U E IR A 16 o b s e rv o u q ue d a d o t í t u lo d o a n tíg e n o , já e m 4 sem anas, m a n te n d o -s e p o ré m o ín d ic e d e c a p a c id a d e re a tiv a e s p e c ífi ca. Os t í t u lo s de a n tíg e n o s rec e nte s fo ra m m aiores q u e os d o s a n tíg e n o s p re p a ra d o s c o m trip a n o s o m a s c on s e rv a do s secos.
Nesse tr a b a lh o , S I Q U E IR A 15 e m p re g o u a té c n ic a de fix a ç ã o de c o m p le m e n to q u a n t it a t i va, baseada nas cu rv a s is o h e m o lític a s 1 d e te r m inad a s c o m o a n tíg e n o b e n z e n o -c lo ro fo rm a - d o . A n tíg e n o s p re p a ra d o s de u m m es m o lo te de trip a n o s o m a s secos, e m d ia s d ife re n te s de 16 e de 9 3 dias, fo ra m a p ro v a d o s n os te s te s de análise s e q ü e n c ia l, para re a tiv id a d e n ão e s p e c í fic a , c o m sô ro s não chagásicos e para r e a tiv i dade e s p e c ífic a , c o m s o ros d e p a c ie n te s c o m d oe nça de C hagas.1 6 .
N o p re se n te tr a b a lh o e s tu d o u -s e a re p ro d u - tib ilid a d e e a e s ta b ilid a d e d e a n tíg e n o s de
T.
cruzi
p re p a ra d o s e m R ib e irã o P re to , e m A tla n - ta e em M a rb u rg , u tiliz a n d o a té c n ic a q u a n ti ta tiv a 3 / s ) d e fix a ç ã o d o c o m p le m e n to .O bservou-se q u e os t í t u lo s d o s ô ro d e re fe rê n c ia 4 v a ria ra m ju n ta m e n te c o m os t í t u lo s d o s a n tíg e n o s , d e n tro de lim ite s to le rá v e is pa ra esse tip o de b io -e n s a io .
M A T E R IA L E M ÉTO D O S
Antígenos de T. Cruzi
Os a n tíg e n o s e x p e rim e n ta d o s fo ra m p re p a rados de c u ltu ra s de
Trypanosoma cruzi
p o r e x tra ç ã o aquosa d o s T rip a n o s o m a s p re v ia m e n te tra ta d o s p e lo b e n z e n o 5711. O s a n tíg e nos fo ra m d is trib u íd o s e m fra s c o s d e v id r o n e u tro , lio filiz a d o s e m a n tid o s a 3? — 6? C. F o ra m re c o n s titu íd o s c o m água d e s tila d a e m a n tid o s e m g e la d e ira , nas p ro v as de e s ta b ili d ade. Os a n tíg e n o s e s tu d a d o s fo ra m os s e g u in te s : B. W . 8 9 , B. W . 1 0 5 ,C D C 1 0 -7 5 , 7 6 0 1 3 0 e 7 6 0 8 2 5 . E ste ú lt im o f o i m a n tid o e m fo r m a l í q u id a , p re se rva d o c o m a zida só d ic a a 1 /5 0 0 0 e co ns erva do em g e la d e ira.Sôro de Referência
O s ô ro d e re fe rê n c ia u sad o neste e n s a io é a m is tu ra de s o ros p ro v e n ie n te s d e p a c ie n te s chagásicos, d o B ra s il, E l S a lv a d o r, V e n e z u e la e A rg e n tin a , lio filiz a d a e m v o lu m e s de 2 ,5 a 5 ,0 m l e m a n tid o s a —30? C.
Complemento
F o i e m p re g a d o c o m p le m e n to d e c o b a ia , lio filiz a d o , e re c o n s titu íd o c o m água d e s tila d a , s end o p re s e rv a d o p o r s o lu ç ã o c o n s e rv a d o ra s .
Diluente
O d ilu e n te e m p re g a d o f o i a s o lu ç ã o s alin a b o ra ta d a a q u e se ju n ta ra m c á lc io e m a g né s io 5 .
Sistema Hem olítico
F o i e m p re g a d o o siste m a h e m o lític o , c o m h e m acia s d e c a rn e iro e h e m o lis in a p re p a ra d a e m c o e lh o s . A c o n c e n tra ç ã o c e lu la r f o i d e 5% a fe rid a fo to m e tr ic a m e n te , e n q u a n to a h e m o li sina era e m p re ga da e m d ose d e m a x im a sensi b iliz a ç ã o 5 .
L E IT U R A E IN T E R P R E T A Ç Ã O DOS R ES U LTA D O S
A le itu ra d o s g ra u s d e h e m ó lis e f o i fe ita co- lo rim e tr ic a m e n te n os s o b re n a d a n te s , s endo o v o lu m e a ju s ta d o p o r ju n ç ã o d e s o lu ç ã o s alina.
O s ô ro ch ag ásico e o a n tíg e n o fo r a m d ilu i- d o s e m série g e o m é tric a , de raz ão 0 ,7 5 . Q u a n d o os lo g a ritm o s das q u a n tid a d e s d e s ó ro o u de a n tíg e n o e ra m p ro je ta d o s e m o rd e n a d a s , c o n tra os lo g ito s de h e m ó lis e , lin h a s de re gressão p u d e ra m ser traç a d a s , e assim d e te r m in a d a s as q u a n tid a d e s d e s ô ro o u d e a n tíg e n o n ecessários p ara 5 0% d e h e m ó lis e . Q u a n d o essas q u a n tid a d e s e ra m p ro je ta d a s e m abcissas c o n tra as doses d e c o m p le m e n to in ic ia lm e n te p re se n tes , d e te rm in a v a m -s e p o n to s s o b re um a re ta , c u ja in c lin a ç ã o era o
títu lo
d o s ô ro o u do a n tíg e n o .375C o m o as c u rv a s de is o fix a ç ã o d o sistem a m o lé s tia d e Chagas, c o m a n tíg e n o s a qu oso s de
T. cruzi
p e rte n c e m a o t ip o l 6 /1 6 , asdosagens d e s ô ro fo ra m fe ita s e m excesso d e a n tíg e n o , e as d e a n tíg e n o , e m excesso d e s ô ro .Janeiro Dezem bro, 1978
Rev. Soc. Bras. Med. Trop.
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0 te m p o d e fix a ç ã o d o c o m p le m e n to f o i de 15 a 1 8 h o ra s e m g e la d e ira a 3? —6? C , e n q u a n to a h e m ó lis e se processava a 3 7 ° C p o r 3 0 m in u to s .
U m e x e m p lo da m e to d o lo g ia usada é a p re sentado nas fig u ra s 1 e 2.
LO G ITO S DE HE M Ó LIS E
FIGURA 1.
O s lo g a ritm o s das q u a n tid a d e s de s ô ro c ha g ás ico p ro je ta d o s c o n tra os lo g ito s de h e m ó lis e , d e te rm in a m p o n to s s ob re u m a re ta , c a lc u la n d o -s e e n tã o a q u a n tid a d e de s ô ro necessária p ara 5 0 % d e h e m ó lis e , para vá ria s d ilu iç õ e s de c o m p le m e n to .D O S A G E M D O SÕ RO D E R E F E R Ê N C IA C O M A N T ÍG E N O A Q U O S O DE T . C R U Z I
R E S U LTA D O S E DISCUSSÃO
O s a n tíg e n o s C D C 1 0 -7 5 , B. W . 8 9 , B W 1 0 5 e 7 6 0 1 3 0 , lio filiz a d o s , fo ra m re c o n s titu íd o s e e m p re g a d o s e m d ose de m á x im a re a tiv id a d e 1/20 nas dosagens d o sô ro d e re fe rê n c ia cha gásico.
Q u a n d o se processava a titu la g e m d o a n tí g e n o , o s ô ro chag ásico era u sado na d ilu iç ã o d e ‘ 1 :2 ,5 , para p e r m itir q u e a reação fosse fe ita e m excesso de a n tic o rp o s . D e te rm in a n d o -s e os t í t u lo s d o c o m p le x o im u n e , e m te rm o s de sô
ro o u d e a n tíg e n o , c alcu la-se o
índice de rea
tividade específica,
c o m o o q u o c ie n te e n tre t í t u l o d o a n tíg e n o e t í t u l o d o sô ro .Os ín d ic e s d e re a tiv id a d e d e te rm in a d o s em fra s c o s d e u m m esm o a n tíg e n o in fo rm a m d a e s ta b ilid a d e d o a n tíg e n o lio filiz a d o e m a n tid o e m g e la d eira T A B E L A I
T A B E L A I
C A P A C ID A D E R E A T I V A E S P E C IF IC A D E T E R M IN A D A E M F R A S C O S D E U M M E S M O L O T E D E A N T ÍG E N O
L I O F I L I Z A D O
A N T ÍG E N O F R A S C O M É D IA
1 2 3
BW . 1 0 5 1 0 ,8 7 ,0 8 ,7 8 ,8 B W . 9 8 " 1 2 ,2 11,1 1 6 ,4 1 3,2 C D C 1 0 -7 5 6 ,6 8 ,6 7 ,9 7 ,7 7 6 0 1 3 0 1 0 ,9 7 ,9 7 ,8 8 ,9
" P re p a ra d o há m a is de d o is anos.
1 X 1 0 -3 M L D E SÔ RO C H A G Á S IC O
FIGURA 2.
A s q u a n tid a d e s d e s ô ro neces sárias para 5 0 % d e h e m ó lis e , p ro je ta d a s c o n tra c o m p le m e n to (em u n id a d e s 5 0% ) d e te rm in a m p o n to s s o b re u m a re ta , c u ja in c lin a ç ã o é o t í t u lo d o s ô ro .V e rific a m o s h av er v a ria çõ e s de re a tiv id a d e e m fra s c o s d ife re n te s , sendo q u e m e n o r v a ria ção o c o rre u c o m o a n tíg e n o W . B. 8 9 e c o m o a n tíg e n o C D C 1 0-7 5 .
O a n tíg e n o r e c o n s titu íd o e m a n tid o em ge la d e ira m o s tra u m a le n ta q ue d a d o s seus ín d i ces, c o m o m o s tra a T A B E L A
2.
A o bs erva ção f o i fe ita d e p o is d e 4 e 8 meses. Os a n tíg e nos C D C 1 0 -7 5 e B. W . 8 9 se m o s tra m m ais es tá v e is q u e os a n tíg e n o s B. W . 1 0 5 e 7 6 0 1 3 0 .A s d is c re p â n c ia s re la tiv a s e n tre os t í t u lo s d o s ô ro ch ag ásico d e re fe rê n c ia (lo te n ? 13) d e te rm in a d o s c o m os v á rio s a n tíg e n o s , m os tr a m q u e os a n tíg e n o s B. W . 8 9 e B. W . 1 05 são d e igu al re a tiv id a d e , assim c o m o os a n tí g en os B. W . 1 0 5 e C D C 1 0 -7 5 , c o m o m o s tra a
70
Rev. Soc. Bras. Med. Trop.
Vol. X II - N?s 1 a 6
C A P A C ID A D E R E A T IV A E S P E C IF IC A D E A N T ÍG E N O S R E C O N S T IT U ÍD O S E M A N T ID O S É M G E L A D E IR A A T É O IT O _____________________________ M E S E S .
A N T ÍG E N O 0
T E M P O D E O B S E R V A Ç Ã O E M M E S E S
4 8
B. W. 105 13,8 4 ,9 9,1
B. W. 89 1 6 ,8 1 0 ,2 12,7
C D C 1 0-75 6 ,6 5,1 4 ,9
7 6 0 1 3 0 1 0 ,9 9 ,7 7 ,5
T A B E L A 3
D IS C R E P Â N C IA S R E L A T I V A S E N T R E T Í T U L O S D O S O R O D E R E F E R Ê N C I A P A R A M O L É S T I A D E C H A G A S , D E T E R M IN A D O S C O M V Á R I O S A N T Í G E N O S
A n tíg e n o s c o m p a ra d o s
T itu la ç õ e s re a liz a d a s e m M a rç o 7 6 O u t u b r o 7 6 F e v e re iro 7 7
C D C /B W 8 9 1 9 ,3 2 5 , 3 9 ,8
C D C /B W 3 ,0 8 ,6 3 ,2
C D C /7 6 0 1 3 0 6 9 ,9 7 0 ,7 3 3 ,7
B W 8 9 / B W 1 0 5 1 6 ,3 1 6 ,7 6 ,6
B W 8 9 / 7 6 0 1 3 0 8 6 , 0 4 7 , 5 2 4,1
B W 1 0 5 / 7 6 0 1 3 0 1 5 ,8 6 3 ,0 3 0 , 6
Na c o m p a ra ç ã o de a n tíg e n o s a d m ite -s e u m a d is c re p â n c ia re la tiv a a té d e 16% , c o m o d e v id a à v a ria b ilid a d e d o s m é to d o s de m e d id a da re a tiv id a d e e s p e c ífic a .
Q u a n d o são c o m p u ta d o s o s t í t u lo s c o m o a in c lin a ç ã o da lin h a de regressão n o sistem a de co orde na da s, te n d o p o r o rd e n a d a s as q u a n tid a d e s de c o m p le m e n to in ic ia lm e n te p rese n tes e em abcissas as q u a n tid a d e s d e c o m p le x o im u n e , em te rm o s de s ô ro o u de a n tíg e n o , é p ossível o c á lc u lo d o ín d ic e de re a tiv id a d e es p e c ífic a c o m o o q u o c ie n te e n tr e o t í t u l o d o a n tíg e n o p e lo t í t u l o d o s ô ro . Nesse caso, te m se q u e se a te r à d e fin iç ã o d o ín d ic e , c u jo c á l c u lo já não e n v o lv e d ir e ta m e n te o c o m p le m e n to , a saber:
C. R. E s p e c ífic a =
= A C e T g = A C
A A A S
E n tã o , s u b s titu in d o :
C. R. E s p e c ífic a = - ^ - A A
Os d a d o s a p re s e n ta d o s na T A B E L A 4 su g ere m as s e gu in te s c o n c lu s õ e s :
1? O a n tíg e n o B. W . 8 9 m a n te v e sua re a ti v id a d e e s p e c ífic a p o r 1 6 meses, c o m p a ra n d o - se ao a n tíg e n o C D C 1 0 -7 5 .
2 9 F o i o bs erva da u m a q u e d a le n ta nos v a lo res d e I. R. E ., m a is p ro n u n c ia d a n o a n tíg e no 7 6 0 8 3 5 .
3 ? A lio filiz a ç ã o d o s a n tíg e n o s não im p e d iu q u e sua re a tiv id a d e e s p e c ífic a , e m re la çã o ao s ô ro c hag ásico d e re fe rê n c ia , d im in u ís s e , send o ela c o m p a rá v e l à o b se rva d a c o m o a n tíg e n o a q u o s o , m a n tid o c o m a z id a s ó d ic a , em te m p e ra tu ra d e 3 - 6 ° C.
T A B E L A 4
t ít u l o s d o s a n t i'g e n o s e d o s ô r o d e
REFERÊNCIA PARA MOLÉSTIA DE CHAGAS E SEUS ÍNDICES DE REATIVID AD E ESPECIFICA.
A N T ÍG E N O D A T A D .M .R .
t a T S I.R .E .
B .W .8 9 3 /7 6 1 :4 0 1 5 1 1 5 1 1 2 3 1 3 ,5 3 /7 6 1 :2 0 1 5 6 2 5 9 2 6 1 6 ,8 1 0 /7 6 1 :2 0 1 0 9 6 4 9 01 1 2 ,2 2 /7 7 1 :2 0 7 1 3 4 6 4 3 11,1 7 /7 7 1 :2 0 1 1 4 8 8 6 9 8 1 6 ,4
B .W , 1 0 5 3 /7 6 1 :2 0 1 1 9 0 4 8 6 2 1 3 ,8 1 0 /7 6 1 :2 0 8 2 5 6 761 1 0 ,8 2 /7 7 1 :2 0 4 2 0 1 6 0 2 6 ,9 7 /7 7 1 :2 0 5 0 9 6 5 8 8 8 ,7
7 6 0 1 3 0 3 /7 6 1 :1 6 0 1 4 4 8 2 4 4 8 3 2 ,3 1 0 /7 6 1 :4 0 1 2 5 0 0 1 0 8 7 1 1 ,5 2 /7 7 1 : 4 0 1 2 7 5 0 8 1 9 1 5 ,6 7 /7 7 1 : 2 0 1 5 6 0 5 1 9 9 0 7 ,8
C D C 1 0 -7 5 3 /7 6 1 :4 0 9 9 4 0 9 2 5 1 0 ,7 1 0 /7 6 1 :2 0 4 6 0 6 6 9 9 6 ,6 2 /7 7 1 :2 0 2 2 2 2 2 8 2 7 ,9 1 2 /7 7 1 :2 0 3 7 9 6 4 2 6 8 ,9
7 6 0 8 2 5 " 8 /7 6 1 :2 0 1 5 6 3 0 6 2 5 2 5 ,0 1 0 /7 6 1 :2 0 1 1 2 8 0 4 2 2 2 6 ,7 2 /7 7 1 :2 0 1 5 6 2 5 8 2 6 1 8 ,9 7 /7 7 1 :2 0 8 2 0 0 5 4 0 1 5 ,2 1 2 /7 7 1 :2 0 7 1 3 0 6 4 0 11,1
D .M .R . D o se d e m á x im a re a tiv id a d e . T^ =t í t u l o d o a n tíg e
-n o .
Tg= t í t u l o d o s ô ro . I.R .E . ín d ic e d e re a tiv id a d e e s p e c ífic a .
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S U M M A R Y
Antigens prepared from cultures o f
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Rev. Soc. Bras. Med. Trop.
71
and the am ount o f complement present. When
the antigen tite r was divided b y the serum
ti-ter, an index o f specific reactivity was
ob-tained. From the values o f this index the
re-pro du tibility o f antigens was evaluated and
al-so the decay o f the capacity o f the reativity
against the reference serum. I t was observed
some variations from different vials and some
decay o f the specific reactivity after 8 months,
when kept at 3-6° C.
From five antigens prepared b y similar
technics, two presented comparable reactivity
(CDC-10-75 and B.W. 89). The rela tive
discre-pancies o f specific reactivity were w ithin
ac-ceptable lim its with the antigens B.W. 8 9 and
B.W. 105, in titrations performed a t different
time. The highest discrepancy was observed
when the antigen 760130 was compared with
CDC-10 75, B.W. 89 and B.W. 105.
The index o f reactivity capacity perm itted
the evaluation o f antigens prepared from
T .c ru z i,
inform ing on their reproductibility and
stability.
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