Estudo do comportamento eletroquímico de alguns agentes antifúngicos utilizando polarografia de pulso diferencial e voltametria de redissolução catódica

UNIVERSIDADE ESTADUAL PAULISTA

U N E S P

INSTITUTO DE QUÍMICA

CÂMPUS DE ARARAQUARA

DISSERTAÇÃO DE MESTRADO

“ESTUDO DO COMPORTAMENTO ELETROQUÍMICO DE

ALGUNS AGENTES ANTIFÚNGICOS UTILIZANDO

POLAROGRAFIA DE PULSO DIFERENCIAL E VOLTAMETRIA

DE REDISSOLUÇÃO CATÓDICA”

MESTRANDO

FRANCISCO CLAUDECE PEREIRA

ORIENTADORA

Profa. Dra. MARIA VALNICE BOLDRIN ZANONI.

Dissertação apresentada ao Instituto de Química da UNESP -

Araraquara para obtenção do Título de Mestre em Química.

COMISSÃO EXAMINADORA.

Profa. Dra. Maria Valnice Boldrin Zanoni - UNESP - Araraquara

ORIENTADORA

1.0 - DADOS CURRICULARES.

1.1 - DADOS PESSOAIS.

1.1.1 - NOME: Francisco Claudece Pereira.

1.1.2 - DATA DE NASCIMENTO: 12 de abril de 1961.

1.1.3 - NATURALIDADE: Palmácia - Ceará.

1.1.4 - NACIONALIDADE: Brasileiro.

1.1.5 - FILIAÇÃO: Antonio Claudio Pereira e

Francisca Juraci Martins Pereira.

1.1.6 - PROFISSÃO: Professor.

1.1.7 - ENDEREÇO RESIDENCIAL: Rua Ipiranga, 2124 - Conj. São

Francisco I - Pio Saraiva - Fortaleza - Ceará - C.E.P. 60.352-780.

2.0 - FORMAÇÃO ACADÊMICA.

2.1 - GRADUAÇÃO:

2.1.1 - Curso de Licenciatura Curta em Ciências: concluido na

Universidade Estadual do Ceará - UECE.

2.2 - PÓS-GRADUAÇÃO.

2.2.1 - MESTRADO EM QUÍMICA.

3.0 - RESUMOS APRESENTADOS E PUBLICADOS EM ANAIS

DE CONGRESSOS.

3.1 - PEREIRA, F.C., GUARATINI, C.C.I., E ZANONI, M.V.B.,

“Polarografia de Pulso Diferencial de Clotrimazol Derivatizado com

Corante Reativo.” 21

Reunião Anual da Sociedade Brasileira de

Química - S.B.Q. Poços de Caldas - Minas Gerais. 1998, vol.3.

3.2 - PEREIRA, F.C., ZANONI, M.V.B., “Determinação de

Clotrimazol Através de Voltametria de Redissolução Catódica.”

XXXVIII Congresso Brasileiro de Química -A.B.Q. - São Luis-

Maranhão - 1998 - pg. 140-1.

3.3 - PEREIRA, F.C., ZANONI, M.V.B., “Eletroanálise de Miconazol

em Formulações Farmacêuticas” 10

_{Encontro Nacional de Química}

analítica - ENQA - Santa Maria - Rio Grande do Sul – 1999, EL-12.

4.0 - TRABALHOS COMPLETOS APRESENTADOS E

PUBLICADOS EM ANAIS DE CONGRESSOS.

4.1 - ZANONI, M.V.B., e PEREIRA, F.C., “Estudo da redução

Eletroquímica de Clotrimazol em Eletrodo de Mercúrio”. XI Simpósio

Brasileiro de Eletroquímica e Eletroanalítica - SIBEE - Maragogi -

Alagoas - 1999 - pg.273-5.

5.0 - TRABALHOS SUBMETIDOS À PUBLICAÇÃO.

5.1- PEREIRA, F.C., STRADIOTTO, N.R., ZANONI, M.V.B., -

“Electrochemical Reduction and Cathodic Stripping Voltammetric

Determination of Clotrimazole”, J. Braz. Chem. Soc.

A AMIGA E ORIENTADORA VALNICE.

Em minha andanças cruzei os caminhos de pessoas tão valiosas e

dispostas a estender a mão que assumi uma eterna dívida e, se

tivesse que algum dia pagar, não saberia como iniciar.

Meu eterno agradecimento ao incentivo, amizade, paciência e as

maduras lições de vida.

Minha admiração e respeito a seu profissionalismo, competência,

amor e dedicação ao trabalho.

Deus abençoe sua família e seu trabalho.

AO AMIGO E ETERNO MESTRE ROUQUAYROL.

“Quem chegou, ainda que apenas em certa medida, à liberdade da

razão, não pode sentir-se sobre a terra senão como um andarilho”.

(Nietzsche)

Meu profundo respeito e admiração ao profissional exemplar e a

maravilhosa figura humana que sóis.

A ZÉLIA.

“Por mais que na batalha se vença um ou mais inimigos, a vitória

sobre si mesmo é a maior de todas as vitórias”

(Buda)

Obrigado pelo apoio e incentivo que muito me ajudaram.

AO AMIGO E IRMÃO ERIDAN.

A DEUS.

A este mundo vimos com uma missão: aprender, evoluir e nos

aperfeiçoar. Em nossa trajetória conhecemos o bem e o mal e

devemos pedir lucidez para discernir entre ambos. Os percalços, as

dificuldades e os sofrimentos que passamos são as provas na vida

que devemos ser submetidos para formarmos nosso juízo e valores

pessoais.

Sempre seremos eternos aprendizes!

Obrigado pela direção, luz e encaminhamento em minha vida.

A MEU PAI.

A você meu pai, meu agradecimento pela maior herança que

podemos receber: dignidade, respeito próprio e bondade no

coração.

AO MEU AMIGO E IRMÃO LEÔNCIO (LEO).

Meu muito obrigado a todo o apoio, incentivo, palavras de confiança

e ajuda material. Aceite minha admiração, respeito e amizade.

AOS PROFESSORES DA MINHA QUERIDA U E C E.

AIRTON MARQUES, CLAUDIO COUTO, JADIR JUCÁ

e a todo o

Departamento de Química pela força, apoio financeiro e moral.

AS AMIGAS DO SPG.

IZOLINA, SANDRA E VILMA

, pelos sorrisos e as mãos sempre

AOS AMIGOS E AMIGAS DO DEPARTAMENTO DE QUÍMICA

ANALÍTICA.

Roni, Nedja, Buda (Eduardo), Erwing, Marie, Patrícia, Claudia e

Sulene pelas informações, ajuda e apoio nos momentos difíceis.

AOS FUNCIONÁRIOS (AS) DA BIBLIOTECA DO NOSSO

INSTITUTO.

Pela grandiosa ajuda e amizade.

AOS PROFESSORES DO DEPARTAMENTO DE QUÍMICA

ANALÍTICA.

Pela saudável convivência e lições profissionais.

AO PROFESSOR NELSON R. STRADIOTTO.

Pela amizade, assistências e informações de grande valia que

tantas vezes foram requisitadas.

A FAPESP, CAPES, CNPq E CONSULADO BRITÂNICO.

Pelo suporte financeiro.

RESUMO.

O c o m p o r t a m e n t o v o l t a m é t r i c o d e d o i s a g e n t e s a n t i f ú n g i c o s d e n o m i n a d o s d e C l o t r i m a z o l e M i c o n a z o l f o i i n v e s t i g a d o e m m e i o h i d r o m e t a n ó l i c o s o b r e e l e t r o d o d e m e r c ú r i o . C l o t r i m a z o l e m i c o n a z o l s ã o r e d u z i d o s e m p o t e n c i a l b a s t a n t e n e g a t i v o e m s o l u ç ã o t a m p ã o B - R p H > 6 a t r a v é s d a t r a n s f e r ê n c i a r e v e r s í v e l d e 1 e l é t r o n à l i g a ç ã o C - C l , c u j o m e c a n i s m o d e r e d u ç ã o f o i i n v e s t i g a d o a t r a v é s d e P P D e V C . P a r a a d e t e r m i n a ç ã o d e s t e s c o m p o s t o s e m m e i o a q u o s o , r e c o m e n d a - s e a a d i ç ã o d e 0 , 0 0 1 % d e T r i t o n X - 1 0 0 a t r a v é s d a q u a l o b t e v e - s e u m a c u r v a d e c a l i b r a ç ã o l i n e a r e n t r e 5 x 1 0- 6 a 2 , 8 x 1 0- 4 m o l . L- 1 p a r a c l o t r i m a z o l e m s o l u ç ã o t a m p ã o f o s f a t o p H 6 , 9 e p a r a m i c o n a z o l 1 9 2 , 0 a 7 1 8 , 5 n g . m L- 1 e m s o l u ç ã o t a m p ã o B - R p H 8 , 0

c o n c o r d â n c i a d e 9 9 , 5 % e m r e l a ç ã o a o m é t o d o e s p e c t r o f o t o m é t r i c o u t i l i z a d o p a r a c o m p a r a ç ã o .

C l o t r i m a z o l e M i c o n a z o l s ã o p r é - c o n c e n t r a d o s e m e l e t r o d o d e m e r c ú r i o e r e d u z i d o s e m p o t e n c i a l d e - 1 , 3 5 V e - 1 , 7 5 V , r e s p e c t i v a m e n t e e m t a m p ã o f o s f a t o p H 6 , 9 e t a m p ã o B - R p H 8 , 0 . U m a c u r v a d e c a l i b r a ç ã o c o m e x c e l e n t e l i n e a r i d a d e n o i n t e r v a l o d e 1 0 3 a 3 4 5 n g . m L- 1 e l i m i t e d e d e t e c ç ã o d e 5 n g . m L- 1 f o i o b t i d o p a r a c l o t r i m a z o l u t i l i z a n d o T a c = 6 0 s e E a c = - 0 , 2 V . P a r a m i c o n a z o l a c u r v a d e c a l i b r a ç ã o é l i n e a r n o i n t e r v a l o d e 1 9 2 , 0 a 7 1 8 , 5 n g . m L- 1 a p r e s e n t a n d o l i m i t e d e d e t e c ç ã o d e 8 n g . m L- 1 p a r a T a c = 3 0 s e E a c = 0 V .

C l o t r i m a z o l e i s r e d u c e d a t m e r c u r y e l e c t r o d e a b o v e p H 6 i n v o l v i n g a r e v e r s i b l e o n e - e l e c t r o n p r o c e s s . T h e e l e c t r o d i c p r o c e s s p r e s e n t s a l a r g e c o n t r i b u t i o n o f t h e a d s o r p t i o n e f f e c t s . F o r t h e d i f f e r e n t i a l p u l s e p o l a r o g r a p h i c d e t e r m i n a t i o n i s r e c o m m e n d e d t h e a d d i t i o n o f T r i t o n X - 1 0 0 , w h i c h p r o m o t e s a l i n e a r c a l i b r a t i o n c u r v e f r o m 5 x 1 0- 6 m o l . L- 1 t o 2 , 8 x 1 0- 4m o l . L- 1. I n a d d i t i o n , c l o t r i m a z o l e c a n b e d e t e r m i n e d b y c a t h o d i c s t r i p p i n g v o l t a m m e t r y a t 5 n g . m L- 1 _{l e v e l w h e n p r e - a c c u m u l a t e d} f o r 1 m i n a t a n a c c u m u l a t i o n p o t e n t i a l o f - 0 , 2 V . T h e p r o p o s e d m e t h o d h a v e s h o w n a l i n e a r c a l i b r a t i o n c u r v e f r o m 1 0 3 t o 3 4 5 n g . m L- 1 _{a n d c a n b e a p p l i e d s u c c e s s f u l l y f o r t h e} d e t e r m i n a t i o n o f t h e c l o t r i m a z o l e i n c o m m e r c i a l f o r m u l a t i o n s .

I n t e r a c t i o n o f t h e c l o t r i m a z o l e w i t h r e a c t i v e d y e P r o c i o n R e d H E - 3 B ( R R 1 2 0 ) w a s i n v e s t i g a t e d i n a q u e o u s s o l u t i o n b y d i f f e r e n t i a l p u l s e p o l a r o g r a p h y . T h e c l o t r i m a z o l e d e r i v a t i z e d w i t h t h e r e a c t i v e d y e i n B - R b u f f e r ( p H 2 ) y i e l d e d a s e n s i t i v e p o l a r o g r a p h i c r e s p o n s e a t - 0 , 3 8 V (v s A g / A g C l ) . A n a l y t i c a l p a r a m e t e r s s u c h a s p H , b u f f e r c o m p o s i t i o n s , t e m p e r a t u r e , r e a c t i o n t i m e a n d c o n c e n t r a t i o n o f d y e h a v e b e e n o p t i m i s e d . L i n e a r c a l i b r a t i o n c u r v e s f o r c l o t r i m a z o l e h a v e b e e n c o n s t r u t e d f r o m 1 0 - 3 4 µ g . m L- 1 u s i n g 1 x 1 0- 4 m o l . L- 1 o f t h e d y e a t r o o m t e m p e r a t u r e . T h e m e t h o d h a s b e e n a p p l i e d t o t h e d e t e r m i n a t i o n o f c l o t r i m a z o l e i n p h a r m a c e u t i c a l p r e p a r a t i o n s .

SIMBOLOS E ABREVIATURAS.

Ag/AgCl = prata cloreto de prata

B-R = Britton e Robinson

C= concentração

CH= celulose hidratada

cm= centímetro

DC= corrente contínua

DME= eletrodo gotejador de mercúrio

E

= potencial de acúmulo

EDTA= ácido etilenodiaminatetraacético

Ep= potencial de pico

E

= potencial de meia-onda

HCl= ácido clorídrico

HMDE= eletrodo de gota pendente de mercúrio

HPLC= cromatografia líquida de alta eficiência

HPLC-EC= cromatografia líquida de alta eficiência - eletroquímica

ipa= corrente de pico anódica

ipc= corrente de pico catódica

KCl= cloreto de potássio

Kg= kilograma

L= litro

log= logarítmo

m= meta

mg= miligrama

min= minuto

mL= mililitro

mM= milimolar

MTX= metotrexate

mV= milivolt

nA= nanoampere

ng= nanograma

nm= nanometro

pKa= constante de dissociação

PVC= policloreto de vinila

R= radical

RR= reactive red

RSD= desvio padrão relativo

s= segundo

SCE= eletrodo de Calomelano saturado

UV= ultra violeta

V= volt

vs= versus

v/v= volume/volume

W

= largura de pico a meia altura

W

= metade da largura de pico a meia altura

α

n= coeficiente de transferência eletrônica

β

n= constante de estabilidade

∆

E= amplitude de pulso

λ

= comprimento de onda

µ= micra

ÍNDICE GERAL.

1.0 – INTRODUÇÃO 2

1.1- Considerações Gerais 2

1.2 - Exemplos de Aplicação das Técnicas Voltamétricas para Análise de Alguns Fármacos em Formulações Farmacêuticas e

Fluidos Biológicos 6

1.3 – FUNGICIDAS 15

1.3.1 - Histórico e Desenvolvimento 15

1.3.2 –CLOTRIMAZOL 19

1.3.2.1 - Características Gerais 19

1.3.3 – MICONAZOL 23

1.3.3.1 - Características Gerais 23

1.4 - MÉTODOS ANALÍTICOS PARA ANÁLISE DE

CLOTRIMAZOL E MICONAZOL 27

1.4.1 – CLOTRIMAZOL 27

1.4.1.1 - Determinação Analítica de Clotrimazol 27

1.4.2 – MICONAZOL 33

1.4.2.1 - Determinação Analítica de Miconazol 33

1.5 – OBJETIVO

CAPÍTULO II

2.0 - PARTE EXPERIMENTAL

39

41

2.1 – Equipamentos 41

2.2 - Reagentes e Procedência 42

2.3 – Soluções 43

2.4 - PROCEDIMENTOS EXPERIMENTAIS 47

2.4.1 - Derivatização de Clotrimazol com o Corante Reactive Red

120 47

2.4.2 - Quantificação de Clotrimazol em Formulações

Farmacêuticas Através de Método Espectrofotométrico 47

2.4.3 - Quantificação de Miconazol em Formulações

2.4.4.1 - Amostras Comerciais em Solução 49 2.4.4.2 -Amostra Comercial sólida

CAPÍTULO III

3.0 - RESULTADOS E DISCUSSÃO

3.1 - COMPORTAMENTO ELETROQUÍMICO DE CLOTRIMAZOL

50

52

52

3.1.1 - Estudo Polarográfico de Clotrimazol 52

3.1.2 - Influência do pH e Composição do Eletrólito Suporte 56

3.1.3 - Análise da Reversibilidade do Processo de Redução 59

3.1.4 - Características do Processo que Controla a Intensidade de Corrente

3.2 - COMPORTAMENTO VOLTAMÉTRICO

3.2.1 - Estudo Voltamétrico de Clotrimazol

61

72

72

3.2.2 - Influência da Velocidade de Varredura 75

3.2.3 - Comportamento Voltamétrico em Meio Neutro 76

3.2.4 - Comportamento em Meio Alcalino

3.3 - REDUÇÃO DE CLOTRIMAZOL

3.4 - COMPORTAMENTO ELETROQUÍMICO E DETERMINAÇÃO POLAROGRÁFICA DE CLOTRIMAZOL DERIVATIZADO COM CORANTE REATIVO

3.4.1 - Investigação Polarográfica da Interação RR 120 vs Clotrimazol

85

90

93

95

3.4.2 - Influência do pH e Composição do Eletrólito Suporte 97

3.4.3 - Características da Interação entre Clotrimazol e o Corante

RR 120 99

3.4.4 - Estequiometria do Composto Derivatizado 106

3.4.5 - Estabilidade do Composto 110

3.4.6 - Curva Analítica 111

3.4.7 - APLICAÇÃO DO MÉTODO A OUTROS ANTIFÚNGICOS

DA MESMA CLASSE DE FÁRMACOS 113

3.4.7.1 – Miconazol 113

3.4.7.2 – Tinizadol 115

3.4.8 - Aplicação Analítica

3.5 - ESTUDO VOLTAMÉTRICO DE REDISSOLUÇÃO CATÓDICA DE CLOTRIMAZOL

117

126

3.5.1 - Considerações Gerais 126

3.5.2 - Comportamento Adsortivo de Clotrimazol 126

3.5.6 - Influência do Tempo de Acúmulo 134

3.5.7 - Curvas de Calibração 135

3.5.8 - Aplicação em Formulações Farmacêuticas

3.6 - ESTUDO DO COMPORTAMENTO ELETROQUÍMICO DE MICONAZOL

3.6.1 - Comportamento Polarográfico

138

141

141

3.6.2 - Efeito do pH e Composição do Eletrólito Suporte 143

3.6.3 - Análise da Reversibilidade 147

3.6.4 - Características do Processo que Controla a Intensidade de Corrente

3.7 - ESTUDO VOLTAMÉTRICO DE MICONAZOL

148

152 3.7.1 - Influência da Velocidade de Varredura

3.8 - ESTUDOS VOLTAMÉTRICOS DE REDISSOLUÇÃO CATÓDICA DE MICONAZOL

153

156

3.8.1 - Influência do pH 157

3.8.2 - Influência da Velocidade de Varredura 159

3.8.3 - Influência do Potencial de Acúmulo e Tempo de Acúmulo 161

3.8.4 - Estabilidade 164

3.8.5 - Curvas de Calibração 164

3.8.6 - Aplicação Analítica

3.9 - CONSIDERAÇÕES FINAIS

3.10 - ESTUDOS FUTUROS

APÊNDICE I

3.11 - REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS

166

171

173

174

ÍNDICE DAS FIGURAS.

F i g u r a 1 . 1 : E s t r u t u r a m o l e c u l a r d o c l o t r i m a z o l . 20 F i g u r a 1 . 2: E s t r u t u r a m o l e c u l a r d o m i c o n a z o l . 24 CAPÍTULO III

F i g u r a 3 . 1: P o l a r o g r a m a d e p u l s o d i f e r e n c i a l o b t i d o p a r a 5 x 1 0- 4 m o l . L- 1 d e c l o t r i m a z o l e m

s o l u ç ã o t a m p ã o B - R p H 2 , 0 . 53

F i g u r a 3 . 2: P o l a r o g r a m a s d e p u l s o d i f e r e n c i a l o b t i d o p a r a 5 x 1 0- 4 _{m o l . L}- 1 _{d e c l o t r i m a z o l e m} s o l u ç ã o t a m p ã o f o s f a t o p H 6 , 9 ( c u r v a I I ) . C u r v a I =

e l e t r ó l i t o s u p o r t e . 54

F i g u r a 3 . 3: P o l a r o g r a m a s d e p u l s o d i f e r e n c i a l o b t i d o p a r a 5 x 1 0- 4 _{m o l . L}- 1 _{d e c l o t r i m a z o l e m}

s o l u ç ã o B - R p H 1 2 , 0 ( c u r v a I I ) . C u r v a I = e l e t r ó l i t o s u p o r t e . 55

F i g u r a 3 . 4: I n f l u ê n c i a d o p H s o b r e o p o t e n c i a l d e p i c o d e r e d u ç ã o d e 5 x 1 0- 4 _{m o l . L}- 1 _{d e c l o t r i m a z o l e m} s o l u ç ã o t a m p ã o B - R ( p H ≥8 , 0 ) e s o l u ç ã o t a m p ã o

f o s f a t o ( p H 6 e 7 ) . 58

F i g u r a 3 . 5 : A n á l i s e l o g a r í t m i c a d a i n f l u ê n c i a d o t e m p o d e g o t e j a m e n t o s o b r e a c o r r e n t e d e p i c o c a t ó d i c o d e 5 x 1 0- 4 _{m o l . L}- 1 _{d e c l o t r i m a z o l e m}

s o l u ç ã o t a m p ã o B - R p H 1 2 , 0 . 62

F i g u r a 3 . 6 : A n á l i s e l o g a r í t m i c a d a i n f l u ê n c i a d o t e m p o d e g o t e j a m e n t o s o b r e a c o r r e n t e d e p i c o c a t ó d i c o d e 5 x 1 0- 4 _{m o l . L}- 1 _{d e c l o t r i m a z o l e m}

s o l u ç ã o t a m p ã o f o s f a t o p H 6 , 9 . 63

F i g u r a 3 . 7 : P o l a r o g r a m a s d e p u l s o d i f e r e n c i a l o b t i d o s p a r a c l o t r i m a z o l e m s o l u ç ã o t a m p ã o f o s f a t o p H 6 , 9 / m e t a n o l ( 3 : 2 ) C u r v a I = e l e t r ó l i t o s u p o r t e ; c u r v a I I = 2 , 5 ; c u r v a I I I = 3 , 5 ; c u r v a I V = 4 , 0 ; c u r v a V = 4 , 5 ; c u r v a V I = 5 , 0 ; c u r v a V I I = 5 , 5 ; c u r v a V I I I = 6 , 0 ; c u r v a I X = 7 , 0 e c u r v a X = 7 , 5 ( x 1 0- 4 m o l . L- 1 d e

c l o t r i m a z o l ) . 65

F i g u r a 3 . 9: E f e i t o d a a d i ç ã o d e T R I T O N X - 1 0 0 s o b r e a s o n d a s p o l a r o g r á f i c a s d e p u l s o d i f e r e n c i a l d e 2 x 1 0- 4 _{m o l . L}- 1 _{d e c l o t r i m a z o l e m s o l u ç ã o} t a m p ã o f o s f a t o p H 6 , 9 . C o n c e n t r a ç ã o d e T r i t o n X - 1 0 0 : C u r v a I = 0 , 0 ; c u r v a I I = 7 , 5 x 1 0- 4 % ; c u r v a I I I =

1 x 1 0- 3 _{% e c u r v a I V = 2 x 1 0}- 3_{% . 69}

F i g u r a 3 . 1 0 : E f e i t o d a c o n c e n t r a ç ã o s o b r e a c o r r e n t e d e p i c o c a t ó d i c o p a r a c l o t r i m a z o l e m s o l u ç ã o t a m p ã o f o s f a t o p H 6 , 9 c o n t e n d o 1 x 1 0- 3_%

d e t r i t o n X - 1 0 0 . 71

F i g u r a 3 . 1 1 : V o l t a m o g r a m a c í c l i c o d e 1 x 1 0- 4 _{m o l .} L- 1 d e c l o t r i m a z o l e m s o l u ç ã o t a m p ã o f o s f a t o p H

6 , 9 , υ = 6 0 m V . s- 1_{. 73}

F i g u r a 3 . 1 2 : V o l t a m o g r a m a c í c l i c o d e 1 x 1 0- 4 m o l . L -1 _{d e c l o t r i m a z o l e m s o l u ç ã o t a m p ã o B - R p H 1 2 , 0 , υ}

= 6 0 m V . s- 1_{. 74}

F i g u r a 3 . 1 3: E f e i t o d a v e l o c i d a d e d e v a r r e d u r a s o b r e a i n t e n s i d a d e d e c o r r e n t e d e p i c o c a t ó d i c o ( B ) e p i c o a n ó d i c o ( A ) n o s i s t e m a 1 x 1 0- 4 m o l . L- 1 d e

c l o t r i m a z o l e m s o l u ç ã o t a m p ã o f o s f a t o p H 6 , 9 . 79

F i g u r a 3 . 1 4: E f e i t o d a v e l o c i d a d e d e v a r r e d u r a s o b r e a f u n ç ã o c o r r e n t e n o s i s t e m a 1 x 1 0- 4 m o l . L- 1

d e c l o t r i m a z o l e m s o l u ç ã o t a m p ã o f o s f a t o p H 6 , 9 . 80

F i g u r a 3 . 1 5 : E f e i t o d a v e l o c i d a d e d e v a r r e d u r a s o b r e a r a z ã o c o r r e n t e d e p i c o a n ó d i c o e c o r r e n t e d e p i c o c a t ó d i c o d o s i s t e m a 1 x 1 0- 4 _{m o l . L}- 1 _{d e}

c l o t r i m a z o l e m s o l u ç ã o t a m p ã o f o s f a t o p H 6 , 9 . 82

F i g u r a 3 . 1 6 : E f e i t o d a v a r r e d u r a s u c e s s i v a d e p o t e n c i a l s o b r e a f o r m a d o v o l t a m o g r a m a c í c l i c o o b t i d o p a r a 1 x 1 0- 3 m o l . L- 1 d e c l o t r i m a z o l e m

s o l u ç ã o t a m p ã o p H 6 , 9 . 84

F i g u r a 3 . 1 7 : E f e i t o d a v e l o c i d a d e d e v a r r e d u r a s o b r e a i n t e n s i d a d e d e c o r r e n t e d e p i c o c a t ó d i c o ( A ) e p i c o a n ó d i c o ( B ) c o r r e s p o n d e n t e à r e d u ç ã o e

s o l u ç ã o t a m p ã o B - R p H 1 2 , 0 . 87

F i g u r a 3 . 1 8 : E f e i t o d a v e l o c i d a d e d e v a r r e d u r a s o b r e a f u n ç ã o c o r r e n t e ( p i c o c a t ó d i c o ) c o r r e s p o n d e n t e à r e d u ç ã o d e 1 x 1 0- 4 m o l . L- 1 d e c l o t r i m a z o l e m s o l u ç ã o t a m p ã o B - R p H 1 2 , 0 .

F i g u r a 3 . 1 9: E f e i t o d a v a r r e d u r a s u c e s s i v a s o b r e a c o r r e n t e d e p i c o n o s i s t e m a 1 x 1 0- 3 _{m o l . L}- 1 _{d e} c l o t r i m a z o l e m s o l u ç ã o t a m p ã o B - R p H 1 2 , 0 .

88

89

F i g u r a 3 . 2 0 : E s t r u t u r a M o l e c u l a r d o C o r a n t e

R E A C T I V E R E D 1 2 0 . 94

F i g u r a 3 . 2 1: P o l a r o g r a m a d e p u l s o d i f e r e n c i a l p a r a 5 x 1 0- 4 _{m o l . L}- 1 _{d o c o r a n t e R R 1 2 0 e m s o l u ç ã o}

t a m p ã o B - R p H 3 , 0 . 95

F i g u r a 3 . 2 2 : P o l a r o g r a m a s d e p u l s o d i f e r e n c i a l p a r a 5 x 1 0- 4 _{m o l . L}- 1 _{d e R R 1 2 0 ( c u r v a I ) n a a u s e n c i a} e p r e s e n ç a d e 1 x 1 0- 4 m o l . L- 1 d e c l o t r i m a z o l

( c u r v a I I ) e m s o l u ç ã o t a m p ã o B - R p H 3 , 0 . 96

F i g u r a 3 . 2 3 : P o l a r o g r a m a s d e p u l s o d i f e r e n c i a l o b t i d o s e m s o l u ç ã o t a m p ã o B - R p H 2 , 0 . C u r v a I = 5 x 1 0- 4 _{m o l . L}- 1 _{d e R R 1 2 0 ; c u r v a I I = a d i ç ã o d e}

2 , 5 x 1 0- 4 m o l . L- 1 d e c l o t r i m a z o l . 99

F i g u r a 3 . 2 4: E s p e c t r o s d e a b s o r ç ã o U V - V i s p a r a 1 x 1 0- 5 _{m o l . L}- 1_{; d o c o r a n t e R R 1 2 0 ( c u r v a I ) n a} p r e s e n ç a d e 5 x 1 0- 6 m o l . L- 1 d e c l o t r i m a z o l ( c u r v a I I ) e a p ó s a d i ç ã o d e 8 x 1 0- 6 m o l . L- 1 d e c l o t r i m a z o l

( c u r v a I I I ) e m s o l u ç ã o t a m p ã o B - R p H 2 , 0 . 101

F i g u r a 3 . 2 5 : P o l a r o g r a m a s d e p u l s o d i f e r e n c i a l o b t i d o s e m s o l u ç ã o t a m p ã o B - R p H 2 , 0 . C u r v a I = 5 x 1 0- 4 m o l . L- 1 d e R R 1 2 0 ; c u r v a I I = a d i ç ã o s u c e s s i v a d e 7 , 5 x 1 0- 5 m o l . L- 1 d e c l o t r i m a z o l ; c u r v a

I I I = 9 , 5 x 1 0- 5 _{m o l . L}- 1 _{e c u r v a I V 2 , 5 x 1 0}- 4 _{m o l . L}- 1_{. 103}

F i g u r a 3 . 2 6 : E f e i t o d a r a z ã o m o l a r s o b r e a c o r r e n t e d e p i c o d a s o n d a s p o l a r o g r á f i c a s o b t i d a s p a r a o s i s t e m a c l o t r i m a z o l / R R 1 2 0 e m s o l u ç ã o

t a m p ã o B - R p H 2 , 0 . 107

F i g u r a 3 . 2 7: R e l a ç ã o e n t r e p o t e n c i a l d e p i c o e l o g a r í t m o d a c o n c e n t r a ç ã o d e c l o t r i m a z o l n o i n t e r v a l o d e 2 , 2 x 1 0- 5 m o l . L- 1 a 4 x 1 0- 5 m o l . L- 1 e c o n c e n t r a ç ã o d o c o r a n t e R R 1 2 0 f i x o e m 1 x 1 0- 4

F i g u r a 3 . 2 8 : C u r v a d e c a l i b r a ç ã o p a r a c l o t r i m a z o l n a p r e s e n ç a d e 1 x 1 0- 4 _{m o l . L}- 1 _{d o c o r a n t e R R 1 2 0}

e m s o l u ç ã o B - R p H 2 , 0 . 112

F i g u r a 3 . 2 9 : P o l a r o g r a m a s d e p u l s o d i f e r e n c i a l d e 1 x 1 0- 4 m o l . L- 1 m i c o n a z o l n a p r e s e n ç a d e 5 x 1 0- 4 m o l . L- 1 d o c o r a n t e R R 1 2 0 e m s o l u ç ã o t a m p ã o B - R

p H 2 , 0 ( C u r v a I I ) ; e c u r v a I = r e d u ç ã o d o R R 1 2 0 . 114

F i g u r a 3 . 3 0 : F ó r m u l a e s t r u t u r a l d o t i n i d a z o l . 115 F i g u r a 3 . 3 1 : P o l a r o g r a m a s d e p u l s o d i f e r e n c i a l

p a r a t i n i z a d o l n a p r e s e n ç a d e 5 x 1 0- 4 m o l . L- 1 d o c o r a n t e R R 1 2 0 e m s o l u ç ã o t a m p ã o B - R p H 2 , 0 . C u r v a I = R R 1 2 0 , c u r v a I I = 1 , 5 x 1 0- 4 _{m o l . L}- 1 _{d e} t i n i d a z o l , c u r v a I I I = 3 , 0 x 1 0- 4 m o l . L- 1 d e t i n i d a z o l e

c u r v a I V = 5 , 0 x 1 0- 4 m o l . L- 1 d e t i n i d a z o l . 116

F i g u r a 3 . 3 2 : P o l a r o g r a m a s d e p u l s o d i f e r e n c i a l p a r a C a n e s t e n n a p r e s e n ç a d e R R 1 2 0 e m s o l u ç ã o t a m p ã o B - R p H 2 , 0 . C u r v a 1 = s e m C a n e s t e n ; c u r v a 2 = 2 9 , 2 8 µ g . m L- 1_{; c u r v a 3 = 3 6 , 2 1 µ g . m L}- 1_{; c u r v a 4 =}

4 6 , 5 5 µ g . m L- 1 e c u r v a 5 = 6 0 , 3 4 µ g . m L- 1. 118

F i g u r a 3 . 3 3 : C u r v a a n a l í t i c a p a r a d e t e r m i n a ç ã o d e c l o t r i m a z o l p e l o m é t o d o e s p e c t r o f o t o m é t r i c o

( O s a m a & P a k i n a z - 1 9 9 3 ) . 121

F i g u r a 3 . 3 4 : P o l a r o g r a m a s d e p u l s o d i f e r e n c i a l o b t i d o s p a r a a m o s t r a d e 4 1 , 3 8 µ g . m L- 1 d e D e r m o b e n e e m s o l u ç ã o t a m p ã o B - R p H 2 , 0 ( c u r v a

F i g u r a 3 . 3 5 :

c a t ó d i c a o b t i d o s c o m v a r r e d u r a l i n e a r p a r a 1 x 1 0- 6 m o l . L- 1 d e c l o t r i m a z o l e m s o l u ç ã o t a m p ã o f o s f a t o p H 6 , 9 ; E a c = - 0 , 2 V e υ= 1 0 0 m V . s- 1. C u r v a I I = T a c d e 3 0 s ; c u r v a I I I = T a c d e 9 0 s e c u r v a I = e l e t r ó l i t o

s u p o r t e e m T a c = 3 0 s . 127

F i g u r a 3 . 3 6 : I n f l u ê n c i a d a v a r i a ç ã o d o p H s o b r e a c o r r e n t e d e p i c o o b t i d o p a r a 1 x 1 0- 6 m o l . L- 1 d e c l o t r i m a z o l e m s o l u ç ã o t a m p ã o B - R a p ó s

p r é - a c ú m u l o d e 1 2 0 s ; E a c = 0 , 0 V ,

υ= 1 0 0 m V . s- 1. 129

F i g u r a 3 . 3 7 : V o l t a m o g r a m a s d e r e d i s s o l u ç ã o a d s o r t i v a p a r a 1 x 1 0- 6 m o l . L- 1 d e c l o t r i m a z o l e m s o l u ç õ e s t a m p ã o B - R p H 7 , 0 ( c u r v a A ) e t a m p ã o f o s f a t o p H 7 , 0 ( c u r v a B ) ; T a c = 1 2 0 s ; E a c = 0 V ;

υ= 1 0 0 m V . s- 1_{. 130}

F i g u r a 3 . 3 8 : I n f l u ê n c i a d a V e l o c i d a d e d e v a r r e d u r a s o b r e a c o r r e n t e d e p i c o c a t ó d i c a d e v o l t a m o g r a m a s o b t i d o s d e 1 x 1 0- 6 _mol.L- 1 _{d e} c l o t r i m a z o l e m s o l u ç ã o t a m p ã o f o s f a t o p H 6 , 9 ,

T a c = 1 2 0 s ; E a c = 0 , 0 V . 132

F i g u r a 3 . 3 9 : I n f l u ê n c i a d o E a c s o b r e a c o r r e n t e d e p i c o c a t ó d i c o d e v o l t a m o g r a m a s o b t i d o s d e 1 x 1 0- 6 m o l . L- 1 _{d e c l o t r i m a z o l e m s o l u ç ã o t a m p ã o f o s f a t o}

p H 6 , 9 ; υ= 1 0 0 m V . s- 1_{, T a c = 1 2 0 s . 133}

F i g u r a 3 . 4 0 : I n f l u ê n c i a d o t e m p o d e a c ú m u l o s o b r e a c o r r e n t e d e p i c o c a t ó d i c o o b t i d o d e v o l t a m o g r a m a s d e 5 x 1 0- 7 _{m o l . L}- 1 _{( c u r v a a ) e 1 x 1 0}- 6 m o l . L- 1 d e c l o t r i m a z o l , ( c u r v a b ) , e m s o l u ç ã o t a m p ã o f o s f a t o p H 6 , 9 ; υ= 1 0 0 m V . s- 1 e E a c = -0 , 2 V .

135

F i g u r a 3 . 4 1 : C u r v a d e c a l i b r a ç ã o o b t i d a d o s i s t e m a e m s o l u ç ã o t a m p ã o f o s f a t o p H 6 , 9 ; E a c = - 0 , 2 V ;

υ= 1 0 0 m V . s- 1, T a c d e 3 m i n u t o s . 137

F i g u r a 3 . 4 2 : C u r v a d e c a l i b r a ç ã o o b t i d a d o s i s t e m a e m s o l u ç ã o t a m p ã o f o s f a t o p H 6 , 9 ; E a c = - 0 , 2 V ;

F i g u r a 3 . 4 3

o b t i d o p a r a 5 x 1 0- 4 _{m o l . L}- 1 _{d e m i c o n a z o l e m s o l u ç ã o} t a m p ã o B - R p H 8 , 0 ( c u r v a B ) e e l e t r ó l i t o s u p o r t e

( c u r v a A ) . 142

F i g u r a 3 . 4 4: P o l a r o g r a m a d e p u l s o d i f e r e n c i a l d e 5 x 1 0- 4 m o l . L- 1 d e m i c o n a z o l e m s o l u ç ã o t a m p ã o B

-R p H 1 2 , 0 . 143

F i g u r a 3 . 4 5 : I n f l u ê n c i a d o p H n o p o t e n c i a l d e p i c o c a t ó d i c o o b t i d o d e p o l a r o g r a m a s d e p u l s o d i f e r e n c i a l d e 5 x 1 0- 4 _{m o l . L}- 1 _{d e m i c o n a z o l e m}

s o l u ç ã o t a m p ã o B - R . 145

F i g u r a 3 . 4 6 : P o l a r o g r a m a s d e p u l s o d i f e r e n c i a l o b t i d o s p a r a 5 x 1 0- 4 m o l . L- 1 d e m i c o n a z o l e m s o l u ç ã o t a m p ã o f o s f a t o p H 8 , 0 / m e t a n o l ( 1 : 1 ) ( c u r v a B ) e s o l u ç ã o t a m p ã o f o s f a t o p H 8 , 0 / m e t a n o l ( 1 : 1 )

( c u r v a A ) 146

F i g u r a 3 . 4 7 : G r á f i c o l o g a r í t m i c o d a i n f l u ê n c i a d o t e m p o d e g o t e j a m e n t o s o b r e a i n t e n s i d a d e d e c o r r e n t e d o s i s t e m a 5 x 1 0- 4 m o l . L- 1 d e m i c o n a z o l e m

s o l u ç ã o t a m p ã o B - R p H 8 , 0 . 149

F i g u r a 3 . 4 8 : C o m p o r t a m e n t o d a c o r r e n t e d e p i c o c a t ó d i c o v s c o n c e n t r a ç ã o d e m i c o n a z o l e m s o l u ç ã o t a m p ã o B - R p H 8 , 0 e t e m p o d e

g o t e j a m e n t o d e 0 , 8 s e g u n d o s . 150

F i g u r a 3 . 4 9 : V o l t a m o g r a m a c í c l i c o d e 1 x 1 0- 3 _{m o l .} L- 1 d e m i c o n a z o l e m s o l u ç ã o t a m p ã o B - R p H 8 , 0 ,

υ= 3 0 m V . s- 1 ₁₅₃

F i g u r a 3 . 5 0 : V o l t a m o g r a m a s d e r e d i s s o l u ç ã o c a t ó d i c a o b t i d o s d e 1 x 1 0- 6 _{m o l . L}- 1 _{d e m i c o n a z o l e m} s o l u ç ã o t a m p ã o B - R p H 8 , 0 e m T a c = 1 5 s ( c u r v a B ) ; T a c = 3 0 s ( c u r v a C ) ; T a c = 6 0 s ( c u r v a D ) e c u r v a A = e l e t r ó l i t o s u p o r t e e m T a c = 6 0 s . E a c = 0 , 0 V e

υ = 1 0 0 m V . s- 1_{. 157}

F i g u r a 3 . 5 1 : I n f l u ê n c i a d o p H s o b r e a c o r r e n t e d e p i c o c a t ó d i c o n o s i s t e m a 1 x 1 0- 6 _{m o l . L}- 1 _{d e} m i c o n a z o l e m s o l u ç ã o t a m p ã o B - R . T a c = 6 0 s ,

F i g u r a 3 . 5 2 :

s o b r e a c o r r e n t e d e p i c o c a t ó d i c o d e 1 x 1 0- 6 _{m o l . L}- 1 d e m i c o n a z o l e m s o l u ç ã o t a m p ã o B - R p H 8 , 0 o b t i d o

a T a c = 4 5 s e E a c = 0 , 0 V . 160

F i g u r a 3 . 5 3 : I n f l u ê n c i a d o p o t e n c i a l d e a c ú m u l o s o b r e a c o r r e n t e d e p i c o c a t ó d i c o d e 1 x 1 0- 6 m o l . L- 1 d e m i c o n a z o l e m s o l u ç ã o t a m p ã o B - R p H 8 , 0 o b t i d o

a T a c = 4 5 s e υ= 1 0 0 m V . s- 1_{. 162}

F i g u r a 3 . 5 4 : I n f l u ê n c i a d o t e m p o d e a c ú m u l o s o b r e a c o r r e n t e d e p i c o c a t ó d i c o d e 1 x 1 0- 6 _{m o l . L}- 1 _{d e} m i c o n a z o l e m s o l u ç ã o t a m p ã o B - R p H 8 , 0 o b t i d o a

E a c = 0 , 0 V e υ= 1 0 0 m V . s- 1_{. 163}

F i g u r a 3 . 5 5: C u r v a s d e c a l i b r a ç ã o o b t i d a p a r a m i c o n a z o l e m s o l u ç ã o t a m p ã o B - R p H 8 , 0 e m E a c = 0 , 0 V e υ= 1 0 0 m V . s- 1_{. C u r v a I T a c = 1 0 0 s e g u n d o s e}

c u r v a I I T a c = 3 0 s e g u n d o s . 165

F i g u r a 3 . 5 6 : C u r v a a n a l í t i c a p a r a m i c o n a z o l s e g u n d o o m é t o d o e s p e c t r o f o t o m é t r i c o ( C a v r i n i e t

ÍNDICE DAS TABELAS.

T a b e l a 2 . 1: E f e i t o d a p r e s e n ç a d e m e t a n o l s o b r e o v a l o r f i n a l d o p H d a s s o l u ç õ e s t a m p ã o B - R

u t i l i z a d a s c o m o e l e t r ó l i t o s u p o r t e . 4 5

T a b e l a 2 . 2: E f e i t o d a a d i ç ã o d e m e t a n o l s o b r e o v a l o r f i n a l d o p H d a s s o l u ç õ e s d e t a m p ã o f o s f a t o

u t i l i z a d a s c o m o e l e t r ó l i t o s u p o r t e . 4 6

CAPÍTULO III

T a b e l a 3 . 1: P a r â m e t r o s p o l a r o g r á f i c o s d e p u l s o d i f e r e n c i a l p a r a 5 x 1 0- 4 _{m o l . L}- 1 _{d e c l o t r i m a z o l e m}

s o l u ç ã o t a m p ã o B - R . 56

T a b e l a 3 . 2 : I n f l u ê n c i a d o p H n o s v a l o r e s d a l a r g u r a d o p i c o a m e i a a l t u r a ( W1 / 2) o b t i d o s n o s p o l a r o g r a m a s d e p u l s o d i f e r e n c i a l p a r a 5 x 1 0- 4

m o l . L- 1 d e c l o t r i m a z o l e m s o l u ç ã o t a m p ã o B - R . 60

T a b e l a 3 . 3 : P a r â m e t r o s v o l t a m é t r i c o s d o s i s t e m a 1 x 1 0- 4 m o l . L- 1 d e c l o t r i m a z o l e m s o l u ç ã o t a m p ã o

f o s f a t o p H 6 , 9 . 77

T a b e l a 3 . 4: P a r â m e t r o s v o l t a m é t r i c o s o b t i d o s d o s i s t e m a 1 x 1 0- 4 m o l . L- 1 d e c l o t r i m a z o l e m s o l u ç ã o

t a m p ã o B - R p H 1 2 , 0 . 86

T a b e l a 3 . 5 : P a r â m e t r o s p o l a r o g r á f i c o s d e p u l s o d i f e r e n c i a l o b t i d o s d o s i s t e m a 5 x 1 0- 4 _{m o l . L}- 1 _{d e} R E D 1 2 0 e 1 x 1 0- 4 m o l . L- 1 d e c l o t r i m a z o l e m

s o l u ç ã o t a m p ã o B - R . 98

T a b e l a 3 . 6: P a r â m e t r o s e s p e c t r o f o t o m é t r i c o s o b t i d o s d o s e s p e c t r o s c o r r e s p o n d e n t e s a o s i s t e m a c o r a n t e R R 1 2 0 e c l o t r i m a z o l e m s o l u ç ã o t a m p ã o

B - R p H 2 , 0 . 102

T a b e l a 3 . 7: D e t e r m i n a ç ã o d e c l o t r i m a z o l n o s p r a y C a n e s t e n a t r a v é s d o m é t o d o p o l a r o g r á f i c o .

119 T a b e l a 3 . 8 : D e t e r m i n a ç ã o d e c l o t r i m a z o l n o s p r a y

C a n e s t e n , s e g u n d o o m é t o d o e s p e c t r o f o t o m é t r i c o

T a b e l a 3 . 9 : D e t e r m i n a ç ã o d o t e o r d e c l o t r i m a z o l n a s o l u ç ã o t ó p i c a c o m e r c i a l i z a d a c o m o

D e r m o b e n e . M é t o d o p r o p o s t o . 124

T a b e l a 3 . 1 0: D e t e r m i n a ç ã o d e c l o t r i m a z o l n a s o l u ç ã o t ó p i c a d e D e r m o b e n e . M é t o d o e s p e c t r o f o t o m é t r i c o ( O s a m a & P a k i n a z - 1 9 9 3 ) . 125

T a b e l a 3 . 1 1: R e s u l t a d o s o b t i d o s n a d e t e r m i n a ç ã o d e c l o t r i m a z o l e m a m o s t r a s c o m e r c i a i s d e C a n e s t e n ( s p r a y ) a t r a v é s d o m é t o d o v o l t a m é t r i c o

d e r e d i s s o l u ç ã o . 139

T a b e l a 3 . 1 2 : P a r â m e t r o s p o l a r o g r á f i c o s d e p u l s o d i f e r e n c i a l o b t i d o s d e 5 x 1 0- 4 m o l . L- 1 d e m i c o n a z o l

e m s o l u ç ã o t a m p ã o B - R / m e t a n o l ( 1 : 1 ) . 144

T a b e l a 3 . 1 3: V a l o r e s d a l a r g u r a d e p i c o a m e i a a l t u r a ( W1 / 2) d o s i s t e m a 5 x 1 0- 4 m o l . L- 1 d e

m i c o n a z o l e m s o l u ç ã o t a m p ã o B - R / m e t a n o l ( 1 : 1 ) . 147

T a b e l a 3 . 1 4 : P a r â m e t r o s v o l t a m é t r i c o s d o s i t e m a 1 x 1 0- 3 _{m o l . L}- 1 _{d e m i c o n a z o l e m s o l u ç ã o t a m p ã o B}

-R / m e t a n o l ( 1 : 1 ) p H 8 , 0 . 154

T a b e l a 3 . 1 5 : Q u a n t i f i c a ç ã o d e m i c o n a z o l n a f o r m u l a ç ã o f a r m a c ê u t i c a d e n o m i n a d a c o m o D a k t a r i n a t r a v é s d a t é c n i c a v o l t a m é t r i c a d e

r e d i s s o l u ç ã o c a t ó d i c a . 166

T a b e l a 3 . 1 6 : Q u a n t i f i c a ç ã o d e m i c o n a z o l n a f o r m u l a ç ã o f a r m a c ê u t i c a d e n o m i n a d a d e V o d o l a t r a v é s d a t é c n i c a v o l t a m é t r i c a d e r e d i s s o l u ç ã o

c a t ó d i c a . 167

T a b e l a 3 . 1 7 : D e t e r m i n a ç ã o d e m i c o n a z o l n a f o r m u l a ç ã o f a r m a c ê u t i c a c o m e r c i a l i z a d a c o m o D a k t a r i n u t l i z a n d o - s e o m é t o d o e s p e c t r o f o t o m é t r i c o ( C a v r i n i e t a l - 1 9 8 1 ) . 169

T a b e l a 3 . 1 8 : D e t e r m i n a ç ã o d e m i c o n a z o l n a f o r m u l a ç ã o f a r m a c ê u t i c a c o m e r c i a l i z a d a c o m o V o d o l u t i l i z a n d o - s e o m é t o d o e s p e c t r o f o t o m é t r i c o

C A P Í T U L O I

E s q u e m a 1 . 1 : M e t a b ó l i t o s g e r a d o s n a b i o t r a n s f o r m a ç ã o d e c l o t r i m a z o l ( H o o g e r h e i d e & W i k a - 1 9 8 2 )

E s q u e m a 1 . 2: P r o d u t o s d e h i d r ó l i s e d o m i c o n a z o l ( O y l e r e t a l - 1 9 9 1 ) .

C A P Í T U L O I I I

E s q u e m a 3 . 1 : E s q u e m a d e r e d u ç ã o p a r a c o m p o s t o s h a l o g e n a d o s , ( o n d e X = F-, C l-, B r -e I-) r e s u m i n d o a s p r i n c i p a i s r o t a s e p r o d u t o s p r e v i s t o s ( B a i z e r & L u n d - 1 9 8 3 ) :

21

25

90

E s q u e m a 3 . 2 : E s q u e m a d e r e d u ç ã o d e

c l o t r i m a z o l 91

E s q u e m a 3 . 3 : E s q u e m a d e h i d r ó l i s e á c i d a d o

CAPÍTULO

I

I N T R O D U Ç Ã O .

1 . 0 - I N T R O D U Ç Ã O .

1 . 1 - C O N S I D E R A Ç Õ E S G E R A I S .

A u t i l i z a ç ã o d e t é c n i c a s v o l t a m é t r i c a s n a i n v e s t i g a ç ã o d o c o m p o r t a m e n t o e l e t r o q u í m i c o d e c o m p o s t o s f a r m a c ê u t i c o s e d e s u b s t â n c i a s b i o l o g i c a m e n t e a t i v a s é r e p o r t a d o n a l i t e r a t u r a d e s d e l o n g a d a t a ( B r e z i n a & Z u m a n , 1 9 5 8 ) . D e n t r e o s m é t o d o s e l e t r o q u í m i c o s e x i s t e n t e s , a s t é c n i c a s p o l a r o g r á f i c a s e v o l t a m é t r i c a s c o n s t i t u e m i m p o r t a n t e f e r r a m e n t a n o e s t u d o d e s s a s s u b s t â n c i a s , u m a v e z q u e , a l é m d e i n f o r m a ç õ e s q u a l i t a t i v a s e q u a n t i t a t i v a s , é p o s s í v e l a i n d a e s t a b e l e c e r m e c a n i s m o e c i n é t i c a d e r e d u ç ã o o u o x i d a ç ã o d e u m d a d o s i s t e m a . O s m é t o d o s d e s e n v o l v i d o s t ê m p o s s i b i l i t a d o t a n t o o m o n i t o r a m e n t o d o f á r m a c o n a f o r m a p u r a q u a n t o n a f o r m a d i s p o n í v e l c o m e r c i a l m e n t e o u a i n d a e m f l u i d o s b i o l ó g i c o s .

A p o s s i b i l i d a d e d e a p l i c a ç ã o d o s m é t o d o s v o l t a m é t r i c o s n a a n á l i s e d e c o m p o s t o s f a r m a c ê u t i c o s é a m p l a s e c o n s i d e r a r m o s q u e a g r a n d e m a i o r i a d o s f á r m a c o s p o s s u e m g r u p o s f u n c i o n a i s o u s a t u r a ç õ e s n a m o l é c u l a . A d i c i o n a l m e n t e , a u t i l i z a ç ã o d o m é t o d o p o d e a i n d a s e r a n a l i s a d o a t r a v é s d a u t i l i z a ç ã o d e r e a ç õ e s d e c o n d e n s a ç ã o , a d i ç ã o , o x i d a ç ã o , h i d r ó l i s e e c o m p l e x a ç ã o , q u e p o s s i b i l i t a m a t r a n s f o r m a ç ã o d e u m a e s p é c i e n ã o e l e t r o a t i v a e m o u t r a e l e t r o q u i m i c a m e n t e a t i v a p e r m i t i n d o a s s i m , o m o n i t o r a m e n t o i n d i r e t o d e s t e s c o m p o s t o s ( S m i t h , 1 9 8 0 ; S m i t h & V o s , 1 9 9 2 ) .

I N T R O D U Ç Ã O

d i s p o n í v e i s ( p o l a r o g r a f i a d e c o r r e n t e c o n t í n u a ) , e m r e l a ç ã o à s t é c n i c a s e s p e c t r o f o t o m é t r i c a s v i g e n t e s n a é p o c a . I s t o é , a u t i l i z a ç ã o d a p o l a r o g r a f i a d e p u l s o n o r m a l , d i f e r e n c i a l e o n d a q u a d r a d a m o s t r a r a m a p o s s i b i l i d a d e d e s e d e t e c t a r o a n a l i t o e m n í v e i s d e c o n c e n t r a ç ã o n a o r d e m d e 1 x 1 0- 7 a 1 x 1 0- 8 m o l . L -1 _{a u m e n t a n d o s i g n i f i c a t i v a m e n t e a s e n s i b i l i d a d e d o s m é t o d o s}

p o l a r o g r á f i c o s .

N a s ú l t i m a s d é c a d a s , a u t i l i z a ç ã o d a s t é c n i c a s v o l t a m é t r i c a s d e r e d i s s o l u ç ã o t e m a u m e n t a d o a i n d a m a i s a s e n s i b i l i d a d e d o m é t o d o a m p l i a n d o o s n í v e i s d e d e t e c ç ã o p a r a a o r d e m d e 1 x 1 0- 1 0 _{a 1 x 1 0}- 1 1 _{m o l . L}- 1 _{a t r a v é s d e u m a s i m p l e s} e t a p a d e p r é - c o n c e n t r a ç ã o ( H a r t , 1 9 9 0 ; W a n g , 1 9 8 5 ; W a n g & B a r d , 1 9 8 9 ) .

O c r e s c e n t e i n t e r e s s e p o r m é t o d o s a n a l í t i c o s c a d a v e z m a i s s e l e t i v o s e s e n s í v e i s p a r a d e t e r m i n a ç ã o e m o n i t o r a m e n t o d e f á r m a c o s e s e u s p r o d u t o s d e d e g r a d a ç ã o t e m a u m e n t a d o n o s r e c e n t e s a n o s , b a s i c a m e n t e d e v i d o a o s g r a n d e s a v a n ç o s n a c l í n i c a m é d i c a q u e r e q u e r e m m é t o d o s a n a l í t i c o s e m n í v e i s d e u l t r a - t r a ç o s p a r a a c o m p a n h a m e n t o d e c o m p o s t o s f a r m a c ê u t i c o s n o s m a i s d i v e r s o s f l u i d o s b i o l ó g i c o s . E m r e s u m o , m é t o d o s c o n f i á v e i s , e c o n ô m i c o s e r á p i d o s t ê m s i d o o g r a n d e a l v o d e i n ú m e r o s p e s q u i s a d o r e s n a b u s c a p o r m e t o d o l o g i a s a n a l í t i c a s c a d a v e z m a i s e f i c a z e s a s e r e m u s a d o s n a s m a i s d i v e r s a s m a t r i z e s e n í v e i s d e c o n c e n t r a ç ã o ( H a r t , 1 9 9 0 ) .

I N T R O D U Ç Ã O

a p r o v e i t a m e n t o d a t é c n i c a , a l é m d a c o m p a r a ç ã o d e m a i s d e u m a t é c n i c a e l e t r o q u í m i c a e i n v e s t i g a ç ã o d e d i v e r s o s p a r â m e t r o s q u e a f e t a m a r e s p o s t a a n a l í t i c a ( B e r s i e r , 1 9 8 7 ) .

D e n t r o d a s ú l t i m a s t e n d ê n c i a s n a á r e a d e e l e t r o a n a l í t i c a d e v e m o s a i n d a c i t a r o u s o d e H P L C c o m d e t e c t o r e s e l e t r o q u í m i c o s e o u s o d e s e n s o r e s e l e t r o q u í m i c o s . A a p l i c a ç ã o d a e l e t r o q u í m i c a a c o p l a d a a o m é t o d o d e H P L C t e m c o n t r i b u i d o s i g n i f i c a t i v a m e n t e p a r a a s e n s i b i l i d a d e e s e l e t i v i d a d e d o s m é t o d o s c r o m a t o g r á f i c o s . T é c n i c a s h í b r i d a s c o m o H P L C - E C , q u e c o m b i n a m o p o d e r d e s e p a r a ç ã o d o H P L C c o m a s e n s i b i l i d a d e d a d e t e c ç ã o e l e t r o q u í m i c a t ê m s e m o s t r a d o u m a f e r r a m e n t a p o d e r o s a n a a n á l i s e d e f á r m a c o s e e s t u d o d e s e u s m e t a b ó l i t o s e m f l u i d o s b i o l ó g i c o s ( S m y t h & E g a n , 1 9 9 2 ) .

O u s o d e e l e t r o d o s r e c o b e r t o s p o r f i l m e s d e r e a g e n t e s i m o b i l i z a d o s p a s s í v e i s d e r e a ç õ e s e s p e c í f i c a s c o m o a n a l í t o t e m a i n d a m e r e c i d o e s p e c i a l a t e n ç ã o n a a m p l i a ç ã o d a s p o t e n c i a l i d a d e s a n a l í t i c a s d a s t é c n i c a s v o l t a m é t r i c a s . T r o c a -i ô n -i c a t í p -i c a , -i n c o r p o r a ç ã o d e p a r e s r e d o x n o r e c o b r -i m e n t o p o l i m é r i c o c o n f e r i n d o p r o p r i e d a d e s e l e t r o c a t a l í t i c a s a o e l e t r o d o o u a i n d a c o m c a r a c t e r í s t i c a s l i g a n t e s c a p a z e s d e i n t e r a g i r e s p e c i f i c a m e n t e c o m o a n a l í t o a t r a v é s d e r e a ç ã o d e c o m p l e x a ç ã o , t ê m a u m e n t a d o s i g n i f i c a t i v a m e n t e a s e n s i b i l i d a d e e s e l e t i v i d a d e d o s m é t o d o s e l e t r o q u í m i c o s ( F a c i & M u r r a y , 1 9 8 1 ; A n s o n , e t a l. , 1 9 8 3 ; O y a m a & A n s o n 1 9 8 0 ) .

D i a n t e d o e x p o s t o , é d e n o s s o i n t e r e s s e i n v e s t i g a r o d e s e n v o l v i m e n t o d e n o v o s m é t o d o s a n a l í t i c o s p a r a m o n i t o r a m e n t o d e a l g u n s a g e n t e s a n t i f ú n g i c o s u t i l i z a n d o - s e a

I N T R O D U Ç Ã O

1 . 2 - E X E M P L O S D E A P L I C A Ç Ã O D A S T É C N I C A S V O L T A M É T R I C A S P A R A A N Á L I S E D E A L G U N S F Á R M A C O S E M F O R M U L A Ç Õ E S F A R M A C Ê U T I C A S E F L U I D O S B I O L Ó G I C O S .

A u t i l i z a ç ã o d a s t é c n i c a s v o l t a m é t r i c a s n a a n á l i s e d e c o m p o s t o s f a r m a c ê u t i c o s t e m m o s t r a d o r e s u l t a d o s s a t i s f a t ó r i o s n a s m a i s d i v e r s a s c l a s s e s d e f á r m a c o s e m a t r i z e s . M é t o d o s e l e t r o a n a l í t i c o s , t a i s c o m o p o l a r o g r a f i a , v o l t a m e t r i a , a m p e r o m e t r i a e p o t e n c i o m e t r i a , t ê m r e c e b i d o g r a n d e a c e i t a ç ã o n a l i t e r a t u r a ( G e o r g e s c u & C a l u s a r u , 1 9 7 1 ) , c o m o é d e m o n s t r a d o n o s t r a b a l h o s r e l a t a d o s a b a i x o .

A g e n t e s a n t i t u b e r c u l o s e s , t a i s c o m o , d e r i v a d o s t i o b e n z a m i d a , ( R i h o v a , e t a l. , 1 9 7 6 ) , t ê m s i d o i n v e s t i g a d o s u t i l i z a n d o - s e H P L C c o m d e t e c ç ã o f o t o m é t r i c a e d e t e c ç ã o e l e t r o q u í m i c a . D e t e c ç ã o v o l t a m é t r i c a c o m u m e l e t r o d o d e f i b r a d e c a r b o n o f o i u t i l i z a d a a p l i c a n d o u m p o t e n c i a l d e + 1 , 4 V (v s A g / A g C l ) e m o s t r o u m a i o r s e n s i b i l i d a d e q u e a d e t e c ç ã o f o t o m é t r i c a - U V . O s l i m i t e s d e d e t e c ç ã o p a r a a m b a s a s t é c n i c a s f o r a m e n c o n t r a d a s e m 0 , 1 e 1 , 0 n g . m L- 1_, r e s p e c t i v a m e n t e .

B e n z o i m e t r o n i d a z o l , u m a g e n t e a n t i b a c t e r i a l u s a d o s i s t e m a t i c a m e n t e c o n t r a u m a l a r g a v a r i e d a d e d e b a c t é r i a s a n a e r ó b i c a s e e s p e c i a l m e n t e n o t r a t a m e n t o d e T r i c h o m o n i a s i s, f o i e s t u d a d o p o r p o l a r o g r a f i a d e p u l s o d i f e r e n c i a l e m s o l u ç ã o t a m p ã o a c e t a t o 0 , 1 m o l . L- 1 _{p H 6 , 0 n a} p r e s e n ç a d e m e t a n o l ( 9 : 1 - v / v ) c o m 0 , 2 % d e g e l a t i n a . A q u a n t i f i c a ç ã o m í n i m a f o i d e 2 0 n g . m L- 1 ( D a l k a r a, e t a l. , 1 9 8 4 ) .

O c o m p o r t a m e n t o p o l a r o g r á f i c o d e d i f e r e n t e s r i f a m i c i n a s f o i e x t e n s i v a m e n t e e s t u d a d o p o r ( G e o r g e s c u & C a l u s a r u , 1 9 7 1 ) , u t i l i z a n d o p o l a r o g r a f i a d e p u l s o d i f e r e n c i a l e v o l t a m e t r i a c í c l i c a a l é m d e m é t o d o s q u a n t i t a t i v o s p a r a d e t e r m i n a ç ã o d o f á r m a c o . O s a u t o r e s t ê m u t i l i z a d o a t é c n i c a p o l a r o g r á f i c a p a r a e s t u d o d e e s t a b i l i d a d e e h i d r ó l i s e d e s t e s f á r m a c o s .

O s a n t i h e l m í n t i c o s s ã o d r o g a s q u e t ê m a c a p a c i d a d e d e l i v r a r o c o r p o d e v e r m e s p a r a s i t a s o u h e l m i n t o s . A p r e v a l ê n c i a d e i n f e c ç õ e s h e l m í n t i c a s e m h u m a n o s é d i f u n d i d a p o r t o d o o p l a n e t a e r e p r e s e n t a o m a i o r p r o b l e m a d e s a ú d e m u n d i a l , p a r t i c u l a r m e n t e e m p a í s e s d e t e r c e i r o m u n d o ( W i l s o n & G i s v o l ’ s , 1 9 8 2 ) . A s t é c n i c a s v o l t a m é t r i c a s t ê m s i d o u t i l i z a d a s t a m b é m n a d e t e r m i n a ç ã o d e v á r i o s a g e n t e s a n t i h e l m í n t i c o s , h i d r o c a r b o n e t o s c l o r a d o s , f e n ó i s e d e r i v a d o s , c o r a n t e s , p i p e r a z i n a s e c o m p o s t o s c o r r e l a t o s , c o m p o s t o s a n t i m a l á r i c o s , v á r i a s s u b s t â n c i a s h e t e r o c í c l i c a s , a l c a l ó i d e s e o u t r o s p r o d u t o s n a t u r a i s .

( W a l a s h , e t a l. , 1 9 8 5 ) , d e s e n v o l v e r a m m é t o d o s a n a l í t i c o s b a s e a d o s n a p o l a r o g r a f i a d e c o r r e n t e c o n t í n u a p a r a s a i s d e p i p e r a z i n a e c o m p o s t o s c o r r e l a c i o n a d o s . O s a u t o r e s s ã o c a p a z e s d e d i s c r i m i n a r a m i n a s s e c u n d á r i a s d a s p r i m á r i a s o u t e r c i á r i a s . C u r v a d e c a l i b r a ç ã o o b t i d a n e s t a s c o n d i ç õ e s e x p e r i m e n t a i s m o s t r a l i n e a r i d a d e n a f a i x a d e c o n c e n t r a ç ã o e n t r e 1 , 6 x 1 0- 5 - 1 , 9 x 1 0- 4 m o l . L- 1 . O m é t o d o f o i a i n d a a p l i c a d o n a d o s a g e m d e p i p e r a z i n a e m f o r m u l a ç õ e s f a r m a c ê u t i c a s e o s r e s u l t a d o s o b t i d o s m o s t r a r a m c o n c o r d â n c i a c o m o m é t o d o e s p e c t r o f o t o m é t r i c o .

I N T R O D U Ç Ã O

e s p e c i a l m e n t e ú t i l c o n t r a i n f e c ç õ e s v e r m i c i d a s . ( P i n z a u t i & C a s a n i , 1 9 8 0 ) , d e s e n v o l v e r a m p r o c e d i m e n t o p o l a r o g r á f i c o p a r a a n á l i s e d o c o m p o s t o . E m m e i o á c i d o p H < 2 , u m a o n d a d e r e d u ç ã o b e m d e f i n i d a f o i o b s e r v a d a a q u a l f o i u t i l i z a d a p a r a o b t e n ç ã o d e u m a c u r v a d e c a l i b r a ç ã o l i n e a r e n t r e 1 , 7 x 1 0- 5 a 1 , 7 x 1 0- 4 m o l . L- 1. T a b l e t e s c o m e r c i a i s f o r a m a n a l i s a d o s s e g u n d o o p r o c e d i m e n t o e s e u s e x c i p i e n t e s n ã o a p r e s e n t a r a m i n t e r f e r ê n c i a . A n á l i s e e s p e c t r o f o t o m é t r i c a c o m p a r a t i v a f o i r e a l i z a d a e o s p a r â m e t r o s d e a m b a s a s t é c n i c a s p o s s i b i l i t a r a m r e d e s c o b r i m e n t o n a o r d e m d e 1 0 0 ±1 % .

M i c l o s a m i d a é c o n s i d e r a d a c o m o u m a g e n t e a t i v o n o t r a t a m e n t o d e m u i t a s i n f e c ç õ e s c o m c e s t o d e s . M é t o d o s e s p e c t r o f o t o m é t r i c o s , c o l o r i m e t r i a d i f e r e n c i a l , c r o m a t o g r a f i a g a s o s a e p o l a r o g r a f i a D C s ã o m e n c i o n a d o s n a l i t e r a t u r a p a r a s u a d e t e r m i n a ç ã o ( M i s h r a & G o d e , 1 9 8 5 ) . P a r a o e n s a i o d e s t a d r o g a e m t a b l e t e s , o p r i n c í p i o a t i v o é e x t r a í d o c o m m e t a n o l e a d i c i o n a d o à s o l u ç ã o t a m p ã o a p r o p r i a d a . M i c l o s a m i d a p o d e s e r e s t i m a d a e m n í v e i s d e 5 a 1 0 µ g . m L- 1. T a b l e t e s c o n t e n d o 5 0 0 m g d e m i c l o s a m i d a f o r a m a n a l i s a d o s m o s t r a n d o d e s c o b r i m e n t o d e 9 9 , 8 a 1 0 0 , 2 % . O s n o v e e x c i p i e n t e s c o n t i d o s n a f o r m u l a ç ã o n ã o a p r e s e n t a m i n t e r f e r ê n c i a n o e n s a i o .

I N T R O D U Ç Ã O

d r o g a e s e u s m e t a b ó l i t o s f o r a m d e t e r m i n a d o s e m 2 v o l u n t á r i o s a p ó s 9 s e m a n a s d e r e g i m e q u i m i o p r o f i l á t i c o . O s r e f e r i d o s p e s q u i s a d o r e s s u g e r e m q u e a a p l i c a ç ã o d e s e u p r o c e d i m e n t o p o d e s e r e s t e n d i d o n o e s t u d o d o s m e t a b ó l i t o s d e o u t r a s a m i n o d i a q u i n a s a n á l o g a s e m f l u i d o s b i o l ó g i c o s , i n c l u i n d o a m o p i r o q u i n a , c i c l o q u i n a e p i r o n a r i d i n a .

T é c n i c a s v o l t a m é t r i c a s t ê m s i d o u t i l i z a d a s p a r a u m g r a n d e n ú m e r o d e a n t i b i ó t i c o s . D e n t r e e l e s , o c o m p o r t a m e n t o p o l a r o g r á f i c o d o c l o r a n f e n i c o l f o i i n v e s t i g a d o p o r ( K a z a n d z h i e v a , e t a l. , 1 9 8 6 ) , q u e d e s e n v o l v e r a m u m s e l e t i v o , p r e c i s o e r e p r o d u t í v e l m é t o d o p o l a r o g r á f i c o D C p a r a o e n s a i o s i m u l t â n e o d e c l o r a n f e n i c o l e f u r a z o l i d o m i e m t a b l e t e s , a p ó s d i s s o l u ç ã o e m s o l u ç ã o t a m p ã o B - R o u a c e t a t o p H 4 , 6 c o n t e n d o 1 0 % d e d i m e t i l f o r m a m i d a e 0 , 0 1 % d e g e l a t i n a .

A d i c i o n a l m e n t e , c l o r a n f e n i c o l e x i b e u m a o n d a d e r e d u ç ã o b e m d e f i n i d a e m s o l u ç ã o t a m p ã o p i r i d i n a - á c i d o f ó r m i c o e c l o r e t o d e t r i m e t i l a m ô n i o p H 4 , 3 , E1 / 2 = - 0 , 4 V (v s S C E ) . E s s e p r o c e s s o d e r e d u ç ã o f o i u s a d o p a r a o e n s a i o e m f o r m u l a ç õ e s f a r m a c ê u t i c a s , c o m o c á p s u l a s c o n t e n d o 2 5 0 m g d e c l o r a n f e n i c o l a p r e s e n t a d o d e s v i o p a d r ã o r e l a t i v o d e 1 , 1 ( n = 1 0 ) e t a b l e t e s c o n t e n d o 1 0 0 m g c o m R S D d e 2 , 0 1 % ( M o r a l e s , e t a l. , 1 9 8 4 ) .

I N T R O D U Ç Ã O

c o n h e c i m e n t o d e t a l h a d o d o s n í v e i s d e p l a s m a , d i s t r i b u i ç ã o n o s t e c i d o s o u e x c r e ç ã o d a d r o g a e a s s i m , c o n f i á v e i s m é t o d o s a n a l í t i c o s s ã o r e q u e r i d o s . A u t i l i z a ç ã o d a t é c n i c a v o l t a m é t r i c a d e r e d i s s o l u ç ã o p a r a a l g u m a s d e s s a c l a s s e d e c o m p o s t o s f o i u t i l i z a d a p o r ( W a n g , e t a l. , 1 9 8 7 ) . O s a u t o r e s r e p o r t a r a m q u e c l o r a m b u c i l p o d e s e r p r é - c o n c e n t r a d o e m e l e t r o d o d e g o t a e s t a c i o n á r i a d e m e r c ú r i o e m á c i d o b ó r i c o 0 , 0 2 5 m o l . L- 1 e s o l u ç ã o t a m p ã o a c e t a t o p H 5 , 4 . O f á r m a c o e x i b e u m a o n d a d e

r e d u ç ã o i r r e v e r s í v e l e m p o t e n c i a l d e - 1 , 3 V (v s A g / A g C l ) . U m a r e s p o s t a l i n e a r e n t r e c o r r e n t e d e p i c o e c o n c e n t r a ç ã o d o s u b s t r a t o f o i o b t i d a n o i n t e r v a l o d e 2 x 1 0- 7 a 1 x 1 0- 6 m o l . L- 1.

E x e m p l o s d e a p l i c a ç õ e s d e t é c n i c a s v o l t a m é t r i c a s p a r a m o n i t o r a m e n t o d e a n t i m e t a b ó l i t o s e m f o r m u l a ç ã o f a r m a c ê u t i c a o u f l u i d o b i o l ó g i c o f o r a m i n v e s t i g a d o s p o r ( G u r i r a & B o w e r s , 1 9 8 3 ; E l l a i t h y , e t a l. , 1 9 8 2 ; B o w e r s & G u r i r a , 1 9 8 1 ; F i j a l e k , e t a l. , 1 9 8 5 ) . A n t i m e t a b ó l i t o s s ã o c o m p o s t o s q u e p r e v i n e m a b i o s s í n t e s e o u u t i l i z a ç ã o n o r m a l d o s m e t a b ó l i t o s c e l u l a r e s . A l t a s d o s e s e s t ã o s e n d o u t i l i z a d a s n o t r a t a m e n t o p r e v e n t i v o d e c â n c e r . D e v i d o a s e u a l t o r i s c o d e t o x i d e z s e u g e r e n c i a m e n t o r e q u e r a n á l i s e d o p l a s m a o u s o r o q u e p e r m i t a o m o n i t o r a m e n t o c o n f i á v e l d a t e r a p i a .

I N T R O D U Ç Ã O

o s c i l o p o l a r o g r á f i c a n o e n s a i o d o M T X e f o r m u l a ç õ e s f a r m a c ê u t i c a s c o n t e n d o o p r i n c i p i o a t i v o e m t a b l e t e s e m n í v e i s d e c o n c e n t r a ç ã o d e m M e µ M . ( W a n g , e t a l. , 1 9 8 6 ) , d e s e n v o l v e r a m u m m é t o d o v o l t a m é t r i c o a l t a m e n t e s e n s í v e l b a s e a d o n a p r é - c o n c e n t r a ç ã o a d s o r t i v a d o M T X s o b r e a g o t a e s t a c i o n á r i a d e m e r c ú r i o n o e l e t r o d o c a p i l a r o u n o e l e t r o d o d e p a s t a d e c a r b o n o . O l i m i t e d e d e t e c ç ã o c o m o H M D E f o i d e 2 x 1 0- 9 m o l . L- 1 u s a n d o u m t e m p o d e p r é - c o n c e n t r a ç ã o d e 5 m i n u t o s . M T X p o d e s e r a n a l i s a d o e m a m o s t r a d e u r i n a s e m p r é t r a t a m e n t o o u d i l u í d o 1 : 4 c o m o e l e t r ó l i t o s u p o r t e . A m o s t r a d e u r i n a c o n t e n d o e n t r e 5 a 1 5 x 1 0- 7 m o l . L- 1 d e M T X p r o d u z p i c o s b e m d e f i n i d o s s e g u i d o d e u m c u r t o p e r í o d o d e p r é - c o n c e n t r a ç ã o . P a r a a a n á l i s e d e M T X e m s o r o h u m a n o e u r i n a , m é t o d o s e n v o l v e n d o H P L C c o m d e t e c ç ã o a m p e r o m é t r i c a t ê m t a m b é m s i d o p r o p o s t o s . ( P a l m i s a n o , e t a l. , 1 9 8 5 ) , m o s t r a m u m p r o c e d i m e n t o u s a n d o u m a c o l u n a C1 8 d e f a s e r e v e r s a e d e t e c ç ã o a m p e r o m é t r i c a c o m e l e t r o d o d e c a r b o n o v í t r e o a p o t e n c i a l d e + 0 , 9 5 V (v s A g / A g C l ) . ( G u e r r i e r i & P a l m i s a n o , 1 9 8 7 ) , m o s t r a m u m p r o c e d i m e n t o d e H P L C c o m d e t e c ç ã o p o l a r o g r á f i c a i n d i r e t a u s a n d o u m e l e t r o d o d e m e r c ú r i o e m p o t e n c i a l d e + 0 , 1 9 V (v s A g / A g C l ) p a r a a d e t e c ç ã o d e M T X e m f l u i d o s b i o l ó g i c o s . C u r v a d e c a l i b r a ç ã o p a r a o M T X f o i o b t i d o e n t r e 5 a 1 . 0 0 0 n g . m L- 1. A m e s m a r e l a ç ã o e m s o r o f o i o b t i d a a t é 1 5 0 µ M d e M T X c o m o l i m i t e d e d e t e c ç ã o d e 1 , 5 µ M .

I N T R O D U Ç Ã O

i n c l u e m : s u l f a t o d e b l e o m i c i n a , d a c t i n o m i c i n a ( a c t i n o m i c i n a ) , d a u n o r u b i c i n a ( d a u n o m i c i n a ) , d o x o r u b i c i n a ( a d r i a m i c i n a ) , m i t o m i c i n a , p l i c a m i c i n a ( m i t r a c i n a ) , ( W i l s o n & G i s v o l ’ s , 1 9 8 2 ) . S o m e n t e i n f o r m a ç õ e s s o b r e o c o m p o r t a m e n t o p o l a r o g r á f i c o / v o l t a m é t r i c o e e n s a i o p a r a b l e o m i c i n a s ( O n g & L e e , 1 9 8 6 ) e d a c t i n o m i c i n a s ( S a k u r a & I m a i , 1 9 8 5 ) , p o d e m s e r e n c o n t r a d o s n a l i t e r a t u r a r e c e n t e .

( H o r n , e t a l. , 1 9 8 4 ) , e n c o n t r a r a m c o r r e l a ç ã o e n t r e o g r a u d e r e d u ç ã o d o s a n t i b i ó t i c o s a n t r a c i c l í n i c o s ( d a u n o r u b i c i n a , d o x o r u b i c i n a , a c l a c i n o m i c i n a , 5 - i m i n o - d a u n o m i c i n a , v i o l a m i c i n a B I , v i o l a m i c i n a B I I ) e m e d i d a s p o l a r o g r á f i c a s d e

p o t e n c i a l d e m e i a - o n d a . O s t i p o s d a s c u r v a s d e r e d u ç ã o s ã o d i f e r e n t e s e p o d e m s e r u s a d a s p a r a a c a r a c t e r i z a ç ã o d a s d r o g a s c o m r e s p e i t o a a d s o r ç ã o n a s m e m b r a n a s e t o x i d e z .

A p r o p r i e d a d e a t i v a d e s u p e r f í c i e d e d a u n o r u b i c i n a ( W a n g , e t a l. , 1 9 8 7 ) e d e d e x o r u b i c i n a ( S m y t h , 1 9 8 6 ) , t e m s i d o e x p l o r a d a p a r a o d e s e n v o l v i m e n t o d e m e t o d o l o g i a d e v o l t a m e t r i a d e r e d i s s o l u ç ã o c o m u m l i m i t e d e d e t e c ç ã o d e 1 x 1 0- 9 _{m o l . L}- 1 _{d e d a u n o r u b i c i n a a p ó s u m t e m p o d e p r é} -c o n -c e n t r a ç ã o d e 5 m i n u t o s . A s -c o n d i ç õ e s ó t i m a s i n -c l u e m o u s o d e p o t e n c i a l d e a c ú m u l o d e - 0 , 3 V (v s A g / A g C l ) c o m o H M D E e m s o l u ç ã o t a m p ã o a c e t a t o p H 4 , 4 . A m i s t u r a d e d a u n o r u b i c i n a e 5 - f l u o r o u r a c i l a p r o d u z b e m d e f i n i d o s p i c o s a d s o r t i v o s p a r a a m b o s o s c o m p o s t o s e m p o t e n c i a l d e - 0 , 5 8 V , - 0 , 6 5 V e - 1 , 3 7 V , r e s p e c t i v a m e n t e , p e r m i t i n d o s i m u l t â n e a d e t e r m i n a ç ã o d e a m b o s o s f á r m a c o s .