ESTUDO DA FOSFATASE ALCALINA SÉRICA E FORMAS
ISODINÃMICAS NA ESQUISTOSSOMOSE MANSONICA *
O estudo das form as isodinâm icas da fosfatase alcalina sérica em pacientes esquistossom á-ticos, revelou m odificações de suas propriedades físico -q u ím ica s na fase hépato in te s tin a l e hepatosplê-nica compensada e descompensada, com parando-se com as da fosfatase alcalina sérica de in d ivíd u o s considerados com o norm ais. P or filtra ç ã o m ole cu la r em Sephadex G—2 0 0 fo i possível separarar três (3) form as m oleculares d istin ta s de fosfatase alcalina sérica na esquistossom ose m ansônica hepatosplê-nica compensada e descompensada, duas das quais se apresentaram com o term orresistentes, d ife rin d o das equivalentes form as isodinâm icas de soro n orm al, que são term olábeis. Na fase hépato in te s tin a l da esquistossom ose m ansônica, em pregando a mesma m etodologia, fo i detectada uma única form a da fosfatase alcalina, te rm o lá b il, que parece corresponder à p rim e ira form a isodinâm ica do soro norm al. F o i tam bém realizado um estudo das dife re n te s form as m oleculares de fosfatase alcalina humana de: fíg a d o , in te s tin o delgado, osso e placenta provenientes de tecidos considerados norm ais, bem com o do
e x tra to de S chistosom a m ansoni.
IN T R O D U Ç Ã O
A fosfatase alcalina sérica fo i id e n tific a d a em 1 9 2 6 1 p o r M a rtla n d e R o bison m u ito em bora já se conhecesse n o u tro s te c id o s anim ais e vegetais. A s m aiores c o n trib u iç õ e s c ie n tífic a s o co rre ra m na década de c in q ü e n ta , q u a n d o fo i p u rific a d a e isolada a enzim a de soro h u m a n o 2 - 6 . Poste rio rm e n te , fo ra m estudadas as propriedades fís ic o -q u ím ic a s e c o m p o rta m e n to c in é tic o da fosfatase alcalina sérica; c o m o ta m b é m o seu estudo em órgãos a nim ais ta is c o m o : F íg a d o , in te s tin o delgado, osso, pla centa e rim . Os resultados o b tid o s fo ra m com parados co m os estudos da fosfatase a lcalina sérica de diversos anim ais situados na escala zooló g ica e, m a n tiv e ram um padrão de constância 6 _ 2 4 > 2 9, 3 0 , o que im p lic a ser a fostatase a lcalina sérica o rig i nária da liberação das fo s fo h id ro la se s integrantes dos re fe rid o s órgãos.
D u ra n te a década de sessenta a m e to d o lo g ia a n a lític a fo i aperfeiçoada p e rm itin d o o em prego da e le tro fo re se em gel de p o lia c rila m id a e filt r a ção m o le c u la r em colu n a de Sephadex para o estudo da enzim a te n d o c o m o re sultado a inden- tific a ç ã o de pequenos co m p o n te n te s da fosfatase alcalina 6 ' 2 5 - 2 8
Moss 25 conseguiu id e n tific a r a fosfatase alca lina hepática q u a n d o separada em eletroforese gel de p o lia c rila m id a apresentava três frações que m igravam co m a tra n s fe rrin )3 g lo b u lin a , a j3 lipo- p ro te in a e o í 2 g lo b u lin a em o rd e m decrescente de massa m o le cu la r respectivam ente. Porém a fosfatase alcalina renal e a in te s tin a l apresenta vam apenas um a fo rm a e nzim ática.
A n o m e cla tu ra em pregada na denom inação das frações Com a tivid a d e e nzim ática após sepa ração em e le tro fo re se em gel de p o lia c rila m id a ou filtra ç ã o m o le c u la r p e lo S ephadex, é m u ito c o n tro v e rtid a . A n o m e n cla tu ra das m ú ltip la s form as
* Resumo da tese que fo i apresentada ao D epartam ento de M edicina T ro p ica l do C entro de Ciências da Saúde
da U niversidade F ederal de Pernam buco para obtenção do grau de M estre.
* * M estre em M edicina T ro p ica l — P ro l? C olaboradora da D iscip lin a de M edicina T ro p ica l da Universidade
F ederal de Pernam buco.
( * ) A tese fo i orientada p e lo P rofessor D r. L u iz Gonzaga de Azevedo A c c io ly , Chefe de L a b o ra tó rio de Enzim
o-logia do D epartam ento de B io q u ím ica do C entro de Ciências B iológicas da UFPe.
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das enzim as fo i d e fin id a em 1 9 7 1 31 pela C o m is são de N o m e n cla tu ra de B io q u ím ic a (C B N ) da U nião In te rn a c io n a l de Q u ím ic a Pura e A p lic a d a (IU P A C —IU B ).
Neste tra b a lh o as frações co m d ife re n te s p ro priedades fís ic o -q u ím ic a s encontradas nos soros hum anos estudados serão d e n om inadas de fo rm a s isodinâm icas de fostadase alcalina.
A hiperfosfatasem ia na esquistossom ose man- sônica te m sido relatada na lite ra tu ra desde 1 9 7 5 32, porém a investigação d o c o m p o rta m e n to das fo rm a s isodinâm icas nesta p a to lo g ia ainda não fo i descrita na lite ra tu ra m édica. Justifica-se p o rta n to este estudo pela possível co n trib u iç ã o ao c o n h e cim e n to das m o d ifica çõ e s b io q u ím ica s decorrentes desta doença, fo rn e cendo, deste m o d o m elhores su b síd io s a novas orientações diagnósticos e terapêuticas.
O presente tra b a lh o se p ro p õ e a estudar as alterações que o c o rre m co m a fosfatase alcalina sérica e fo rm a s isodinâm icas em pacientes com esquistossom ose m ansônica nas fases hépato in te s tin a l e hépato esplênica com pensada em des- com pensada; com parando-se com um g ru p o tes te m u n h o considerado n o rm a l.
M A T E R IA L
A fosfatase alcalina sérica fo i dosada em soro hum ano o b tid o d o sangue to ta l após c e n trifu - gação refrigerada d u ra n te dez m in u to s a I.OOOxg. O sangue co le ta d o era de in d iv íd u o s q ue se enquadrava nos grupos d e n tro da p a to lo g ia da esquistossomose m ansônica. Os grupos apresen tavam in d iv íd u o s num a fa ix a e tá ria de 2 0 a 5 0 anos. Os pacientes deveriam apresentar o pré- re q u isito de não te r o u tra p a to lo g ia associada à esquistossomose m ansônica.
G R U P O A — In d iv íd u o s sem esquistossom ose m ansônica o u o u tra p a to lo g ia que venha m o d ifi car o m e ta b o lism o h e pático.
G R U PO B — In d iv íd u o s p o rta d o re s de esquis tossom ose m ansônica h é p a to in te s tin a l, isto é, sem viscerom egalia e sem sintom as c lín ic o s .
G R U P O C — In d iv íd u o s p o rta d o re s de esquis tossom ose m ansônica hépato esplênica co m p e n sada podendo ser um p a ciente que se re cuperou de uma descompensação o u então nunca te r des- com pensado.
G R U P O D — In d iv íd u o s p o rta d o re s de esquis tossom ose m ansônica h é p a to esplênica descom - pensada p o dendo ser o q u a d ro c lín ic o co m ascite e /o u hem orragia g a strentestinai.
A fosfatase alcalina p ro ve n ie n te d o fíg a d o , in te s tin o delgado, osso, pla centa e
Schistosoma
mansoni
— verm e a d u lto — ta m b é m fo ra m inves tigadas e os resultados com p a ra do s co m aqueles o b tid o s da enzim a soro ló g ica dos g ru p o s analisa dos. A m o stra s destes órgãos fo ra m p ro ve n ie n te s de c iru rg ia de pacientes não e sq u istossom ático e, o m a te ria l p la c e n tá rio c o lh id o logo após o d e liv ra m e n to , os verm es a d u lto s d oSchistosoma
mansoni
p ro v ie ra m de um a filtra ç ã o hepática e x tra corpórea.Os reagentes q u ím ic o s u tiliz a d o s para separar, dosar a a tiv id a d e e n zim á tica da fosfatase alcalina sérica e suas fo rm a s isodinâm icas e, d e te rm in a çã o da massa m o le c u la r fo ra m : Sephadex G —2 0 0 p a rtíc u la 4 0 —12 0 d o P harm acia; A m id o d o Reagen; Á c id o 3 ,5 , d in itro s a lis ílic o d o N u tritio - nal B io ch e m ica ls e os dem ais o b tid o s de E. M e rk D a rm sta d t.
M E T O D O L O G IA
A — Separação de frações isodinâmicas de fos
fatase alcalina sérica m ediante filtração m olecular
em Sephadex G—200.
Procedeu-se à separação das fo rm a s iso d in â micas da fosfatase alca lin a m e d ia n te filtra ç ã o m o le c u la r em co lu n a de S ephadex G —2 0 0 m e d in d o 15 X 7 5 m m de dim ensões: A plica n d o -se 2 ,0 m l d o soro em estudo e em pregando-se água d e stilada co m eluente. Frações de 3 ,5 m l fo ra m coletadas d u ra n te o processo co m o a u x ílio de um c o le to r de frações L K B e preservados em te m p e ra tu ra de 0 —4 ? C.
B — Determ inação da atividade enzimática.
F o i u tiliz a d o o m é to d o de Bessey, L o w ry , B ro c k 33 para d e te rm in a r a a tiv id a d e e n zim á tica da fosfatase alcalina sérica e das frações coletadas d u ra n te a filtra ç ã o m o le c u la r em S ephadex, co m a seguinte m o d ific a ç ã o :
S olução ta m p ã o : g lic in a , NaOH 5 0 m M , pG 10 ,5 c o n te n d o M gC I2 0 ,5 m M .
S olução s u b stra to ta m p ã o : 1 c o m p rim id o d o su b stra to (p a ra n itro fe n ifo s fa to 5 ,5 m M ) d is so lvid o em 10 m l da solução ta m pão. Incuba-se em um a cu b e ta de q u a rtz o (tra je to ó p tic o de 1 cm ) a 3 6 ? C 2 ,0 m l d o su b stra to ta m p ã o e 0 ,5 m l da solução ta m p ã o . E stabele c id o o e q u ilíb r io té rm ic o 0,1 m l d o soro o u da fra çã o co letada é a d ic io n a d o ao sistem a e a absorbancia n o c o m p rim e n to de o nda de 4 0 5 nn fo i registrada a a tiv id a d e e n zim á tica co m o a u x í
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m ente m e d ia n te tra ta m e n to té rm ic o de 100?C p o r 5 m in u to s.
A la b ilid a d e té rm ic a das frações isodinâm icas fo i investigada segundo tra ta m e n to té rm ic o de 56?C d u ra n te 10 m in u to s .
A s am ostras dos te cid o s ta is c o m o placenta, fíg a d o , in te s tin o delgado e pe rió ste o hum ano fo ra m hom ogeneizados em solução ta m p ã o e, do sobrenadante fo ra m c o lh id o s 2 ,0 m l aplicados no to p o de um a co lu n a de S ephadex G - 2 0 0 para filtra ç ã o m o le c u la r sem elhante à m e to d o lo g ia empregada para a separação da fosfatase alcalina sérica, já d escrita a n te rio rm e n te . Para o estudo do
Schistosoma mansoni
fo ra m u tiliz a d o s 1 .356 vermes a d u lto s os quais fo ra m hom ogeneizados em solução ta m p ã o e, d o sobrenadante 2 ,0 m l fo ra m aplicados no to p o de um a co lu n a Sepha dex G —2 0 0 ; procedendo-se de ora em d ia n te de m o d o sem elhante aos semais te c id o s estudados.Para d e te rm in a r a massa m o le c u la r das fo rm a s isodinâm icas 1, 2 e 3 da fosfatase a lcalina sérica fo i u tiliz a d o o m é to d o de A n d re w s 3 4 , usando co m o padrões a catalase e a a m ila s e .
A a tiv id a d e catalásica fo i d e te rm in a d a em pre- gando-se o m é to d o m o d ific a d o de A c c io ly e M elo 35 e n q u a n to qu e a (X am ilásica fo i pro ce d i da c o n fo rm e m e to d o lo g ia d e scrita p o r Beni- fe ld 36 .
R E S U L T A D O S
O H istogram a 1 e x e m p lific a um dos resultados o b tid o s co m a filtra ç ã o m o le cu la r em Sephadex G —2 0 0 de fosfatase alcalina de soro n o rm a l, a Tabela resum e os resultados da a tivid a d e da fo s fatase a lcalina to ta l e fo rm a s isodinâm icas estuda dos no g ru p o n o rm a l.
A s fo rm a s isodinâm icas qua n d o subm etidas ao tra ta m e n to té rm ic o apresentaram uma redução de 44% para o p rim e iro p ic o e de 100% para o segundo e te rc e iro picos.
N o estudo da a tivid a d e e n zim á tica da fo sfa tase a lcalina e fo rm a s isodinâm icas em soro de pacientes co m esquistossom ose m ansônica na fase hé p a to in te s tin a l, c o m o e xe m p lific a d o no H istogram a 2, fo i d e te cta d o apenas uma fo rm a iso d inâm ica da enzim a, e o corre sp o nd e n te tra ta m e n to té rm ic o re su lto u em um a redução de 56% . Estes resultados estão apresentados na T abela II. E stu d a n d o o soro de paciente com esquistossom ose m ansônica hepatosplênica co m pensada a a tivid a d e da fosfatase alcalina e suas fo rm a s isodinâm icas e o seu respectivo tra ta m e n to té rm ic o , c o m o apresenta o H istogram a 3; observam os o a p a re cim e n to das trê s fo rm a s iso d inâm icas da fosfatase alcalina.
A Tabela III resum e os dados d o g ru p o em estudo. O c o m p o rta m e n to té rm ic o destas resul
Tabela I
E studo da F A S e suas fo rm a s, isodinâm icas em soro no rm a l
1? p ico m ll/m l 2? p ico m U /m l 3 ? p ico m U /m l N W I V I C
E A R% E A R% E A I
1 OPB F 29,25 10,5 6,6 40 6,45 0 100 4,95 0 100
2 LC M 21,0 4,5 1,95 50 2,25 0 100 1,5 0 100
3 L F 39,0 9,0 4,5 50 3,0 0 100 2,7 0 100
4 CB M 43,5 11,25 4,5 60 4,50 0 100 4,5 0 100
5 MLS F 48,0 0 ,0 4,5 30 6,0 0 100 3,0 0 100
6 A M F 48,0 12,0 ü,G 30 4,5 0 100 6 0 100
7 EM O F 25,5 19,5 3,0 80 13,5 0 100 3,0 0 100
8 C M 31,5 25,5 16,5 30 19,5 0 100 19,5 0 100
9 J M 25,5 16,5 10,5 40 22,5 0 100 9,0 0 100
10L F 48,0 6,0 4,5 30 6,0 0 100 3,0 0 100
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to u num a redução de 37 ± % para o p rim e iro pico, o segundo de 2 3 ± % e, o te rc e iro p ico não sofreu redução da a tivid a d e e nzim ática.
0 H istogram a 4 refere-se ao estudo da fo s fa tase alcalina e sjjas fo rm a s isodinâm icas no soro de um paciente com esquistossom ose m ansônica na fase hepatosplênica descom pensada co m o correspondente tra ta m e n to té rm ic o . A Tabela IV reune os dados d o re fe rid o g ru p o . Nesta fase da esquistossomose m ansônica observam -se nova m ente as três fo rm a s isodinâm icas de fosfatase alcalina. 0 c o m p o rta m e n to té rm ic o destas fra ções revelou que o p rim e iro p ico so fre u uma
redução de 55 ± %; o segundo e o te rc e iro pico um a redução de 5 ± %.
O H istogram a 5 apresenta o re su lta d o da a tiv i dade e n zim á tica da fosfatase alcalina d o verm e a d u lto o q ual apresenta apenas um p ic o , que não sofreu redução de sua a tiv id a d e e n zim á tica , após tra ta m e n to té rm ic o de 5 6 ? C d u ra n te 10 m in u to s .
O H istogram a 6 é o re su lta d o d o e studo em e x tra to de fíg a d o h u m a n o o n d e as três fo rm a s isodinâm icas fo ra m isoladas, sendo a redução da a tiv id a d e e n zim á tica em to rn o de 7 0 ± % para o p rim e iro p ic o , e n q u a n to o segundo e o te rc e iro
H istog ra m a 1
E stu d o da a tiv id a d e da F A e suas fo rm a s isodinâm icas em so ro n o rm a l
m U /m l
100
90
80
70
60
5 0
4 0
3 0
-20
10
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17
E stu d o da a tiv id a d e e n zim á tica após tra ta m e n to té rm ic o 5 6 ° C / 10 m in u to s
(Frações 3,5 m l)
picos sofreram redução de 100% em suas a ti vidades.
O H istogram a 7, re fe re n te a fosfatase alcalina e form as isodinâm icas do in te s tin o delgado hum ano, apresenta as três fo rm a s isodinâm icas e que, sum etidas a
tratam ento
té rm ic o , apresenta ram uma redução de 3 0 ± % pará o p rim e iro pico e de 100 ± % para o segundo e te rc e iro picos.Os resultados d o estudo da fosfatase a lcalina e form as isodinâm icas em osso hum a n o estão no H istogram a 8, reveland apenas um a
form a
isodi- nâmica com um c o m p o rta m e n to té rm ic o cujaredução da a tivid a d e e n zim á tica fo i de 8 5 ± % . O H istogram a 9, alusivo aos estudos da fosfatase alcalina e fo rm a s isodinâm icas em placenta hum ana, revela apenas um a fo rm a isod in â m ica da fosfatase alcalina e que q u a n d o su b m e tid a a tra ta m e n to té rm ic o sofreu redução de a tiv id a d e em to rn o de 2 0 ± %.
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Tabela II
E studo da F A S e suas fo rm a s isodinâm icas na E M H I
NOM E S E X O
1? p ico m U /m l 2? pico m U /m l 3? pico m U /m l
E A . R% E A R% E A R%
1 NB F 3 1 ,5 1 0,5 0 100 — — — — — —
2 JO M 3 1 ,5 6 ,3 1,5 80 - - -
-3 VS F 3 1 ,5 7,5 3 ,7 5 50 - - -
-4 JL F 141,0 4 7 ,0 6,0 90 - - -
-5 MJS F 141 ,0 4 8 ,0 6 ,0 90 _ - -
-6 E F 27,0 7,5 6,0 20 - - -
-7 JG M 3 1 ,5 8 ,2 5 4 ,5 50 - - -
-8 ES F 27,0 7,5 6 ,0 20 _ - -
-9 M L F 6 9 ,0 3 4 6 22,5 10 - - -
-10 A R M 3 1 ,5 8 ,2 5 4 ,5 50 - - - - -
-FA S — Fosfatase A lc a lin a Sérica F A — Fosfatase A lc a lin a E — Fração e n co ntra d a no soro A — Fração aquecida a 5 6 °C — lo m in . R% — Redução s o frid a após o aq u ecim e n to
H istog ra m a 2
E stu d o da a tiv id a d e da F A e suas fo rm a s isodinâm icas em so ro de p acie nte c o m E M H I
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H istog ra m a 3
E stu d o da a tiv id a d e da F A e suas fo rm a s is odinâm icas e m so ro de p acie nte c o m E M H E com pensada
E stu d o da a tiv id a d e e n z im á tic a após tra ta m e n to té rm ic o 5 6 ° C / 10 m in u to s
Tabela Ml
E studo da F A S e suas fo rm a s isodinâm icas na E M H E com pensada
Paciente Sexo F A to ta l m U /m l
1o p ico m U /m l 2 o pico m U /m l 3 o pico m U /m l
E A R% E A R% E A R%
1 SA M 3 1 ,5 7,5 4 ,5 30 2,1 1,5 20 3,2 0
2 M M P M 2 9 2 ,5 4 2 ,0 2 2 ,5 50 6 ,5 4 ,2 30 2,1 2,1 0
3 G CA M 75,0 19,5 15,0 30 6 ,0 4 ,0 30 2,1 2,1 0
4E S S M 3 6 ,0 7,5 6,0 10 2,4 1,8 3 0 2,4 2,4 0
5 JRS M 9 7 ,5 18,0 13,5 30 3,9 3,0 20 1,8 1,8 0
6 JLS M 159 ,0 25,5 15,0 40 3,9 3,9 0 1,5 1,5 0
7 JR M 1 4 2 ,5 2 8 ,5 15,0 5 0 . 18,0 6 ,0 70 7,2 7,2 0
8 A F G M 6 7 ,5 12,0 7,5 40 2,7 2,7 0 3,3 3 ,3 0
9 FJS M 2 9 0 ,0 4 1 ,0 4 0 ,0 50 6 ,0 4,0 30 2,1 2,1 0
10 RS M 1 50,0. 25,0 14,5 40 4 ,0 4,0 0 1,5 1,5 0
F A S — Fosfatase A lc a lin a Sérica F A — Fosfatas A lc a lin a
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Tabela IV
E studo da F A S e suas fo rm a s isodinâm icas na E M H E descompensada
Paciente Sexo F A to ta l m U /m l
1o p ico m l> /m l 2? p ico m U /m l 3? pico m U /m l
E A R% E A R% E A R%
1 JJB M 1 4 8 ,5 3 9 ,7 5 19 ,85 50 4 9 ,5 2 4 ,8 50 4 9 ,5 4 9 ,5 0
2 L 3 M 8 2 ,5 24 ,7 5 12,75 50 9,3 3,57 60 3,6 3,6 0
3 JB M 52,5 27,0 14,5 50 1,8 1,05 50 2,4 1,65 30
4 A T F 3 7 ,5 4 ,5 3,0 30 3,0 2,25 20 3 ,0 3,0 0
5 JA F 42 ,0 7,5 3 ,7 5 50 3,0 3,0 0 3 2,2 5 20
6 R PA M 168,0 73,5 15,0 80 6 3 ,0 6 3 ,0 0 12,0 12,0 0
7 G F N M 147,0 4 6 ,5 7,5 80 4 8 ,0 13,5 70 55,5 55,5 0
8 DSV M 199 ,5 6 3 ,0 4 8 ,0 20 3 4 ,5 16,5 50 27,0 24,0 10
9 MJP M 175 ,5 4 8 ,0 6 ,0 80 10,5 6 ,0 40 52,5 52,5 0
1 0 A A S M 8 5 ,5 16,5 6 ,0 6 0 4 ,5 4 ,5 0 6 ,0 6 ,0 0
FA S — Fosfatase A lc a lin a Sérica F A — Fosfatase A lc a lin a E — Fração e n contrada no soro A — Fração aquecida a 5 6 °C — lo m in .
R% — Redução so frid a após o aq u ecim e n to
H istog ra m a 4
E stu d o da a tiv id a d e da F A e suas fo rm a s isodinâm icas em so ro de p acie nte c o m E M H E descom pesada
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H istog ra m a 5
E stu d o da a tiv id a d e da F A e suas fo rm a s isodinâm icas em e x tr a to Schistosoma m osoni
E stu d o da a tiv id a d e e n z im á tic a após tra ta m e n to té r m ic o 5 6 ° C / 1 0 m in u to s
H istog ra m a 6
E stu d o da a tiv id a d e da F A e suas fo rm a s isodinâm icas em e x tr a to de fíg a d o h um an o
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H istog ra m a 7
E stu d o da a tiv id a d e da F A e suas fo rm a s is odinâm icas em e x tr a to de in te s tin o delg ad o h u m an o
E stu d o da a tiv id a d e e n z im á tic a após tra ta m e n to té rm ic o 5 6 ° C / 10 m in u to s
H istog ra m a 8
E stu d o da a tiv id a d e da, F A e suas fo rm a s isodinâm icas em e x tra to ósseo h u m a n o
1 0 0•
90
8 0 -
7 0 -
60 .
5 0 -
4 0 •
3 0 -
2 0-
1 0
-0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 1 3 .1 4 15 16 17 (Frações 3,5 m l)
UO
G
m
m
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Vol. XV - NPs 1 - 14
Histograma 9
Estudo da atividade da FA e suas formas isodinâmicas em extrato de placenta humana
E stu d o da a tiv id a d e e n z im á tic a após tra ta m e n to té r m ic o 5 6 ° C / 10 m in u to s
Figura 1
D e te rm in a çã o da massa m o le c u la r das fo rm a s isodinâm icas da FA S de pacientes na fase E M H E descom pensada
L E G E N D A
C A T — Catalase
F A j — Fosfatase A lc a lin e 1? fo rm a isodinâm ica
a A M — O! A m iase
F A2 — Fosfatase A lc a lin e 2? fo rm a isodinâm ica F A3 — Fosfatase A lc a lin e 3 ? fo rm a isodinâm ica
2 ,4 X 1 0 3 F A ,
V O L . D E E L U IÇ Â O (m l)
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D IS C U S S Ã O
0 e stu d o da fosfatase alcalina sérica e suas fo rm a s isodinâm icas no g ru p o c o n tro le , dem o n s tro u a existê n cia de três fo rm a s isodinâm icas. A a tivid a d e e n zim á tica d o p rim e iro p ic o s u b m e tid o a tra ta m e n to té rm ic o sofre redução de 43,5% , assemelhando-se ao c o m p o rta m e n to da fo rm a isodinçam ica de m a io r a tiv id a d e d escrita na lite ra tu ra 3 7 , e n q u a n to q ue o segundo e o te rc e iro picos so fre ra m redução de 100 ± %.
Nos pacientes co m esquistossom ose mansô- nica hépato in te s tin a l, a fosfatase a lcalina sérica, q u a n d o filtra d a em S ephadex, revelou apenas um p ico co m a tivid a d e e n zim á tica , co rre sp o nd e tn e ao p rim e iro p ic o e n c o n tra d o no g ru p o c o n tro le , um a vez qu e a sua e luição e c o m p o rta m e n to té r m ico são a p ro x im a d a m e n te correspondentes.
Os resultados o b tid o s co m o g ru p o de in d iv í duos com esquistossom ose m ansônica hepatos- plênica com pesada apresentaram três picos com a tivid a d e e n zim á tica s bastate elevadas, o qu e é c o m p a tív e l co m a elevação da a tiv id a d e en zim á tic a to ta l d o s n ív e is séricos já d e s c rito na lite ra tu ra 3 2 . A s reduções das ativid a d e s enzim áticas dos d ife re n te s picos, q u a n d o s u b m e tid o s a tra ta m e n to té rm ic o , d e m o n stra ra m sensíveis m o d ifi cações em relação ao g ru p o c o n tro le , desde que o p rim e iro p ic o sofreu redução de 37 ± % d e s u a a tivid a d e , o segundo p ico reduziu-se em apenas 2 3 ± %, e n q u a n to qu e o te rc e iro p ico p ra tic a m ente não so fre u redução de ativid a d e .
Investigando-se os pacientes co m esquistosso mose m ansônica hé p a to in te s tin a l e obedecendo ao rig o r c lín ic o la b o ra to ria l de seleção e m p re gado na o b te n ç ã o d o m a te ria l , um paciente apresentou trê s fo rm a s isodinâm icas da posfatase alcalina sérica co m te rm o la b ilid a d e sem elhante às encontradas na esquistossom ose m ansônica hepa- to sp lê n ica com pensada, ver H isto g ra m a 10. Estes dados sugerem que em b o ra esse p a ciente esteja d e n tro d o g ru p o co m esquistossom ose m ansônica hepato in te s tin a l, de a co rd o co m os c rité rio s estabelecidos neste tra b a lh o , o estudo de sua fo s fatase a lcalina sérica e fo rm a s isodinâm icas (em pregando a presente m e to d o lo g ia ) sugere já e x is tire m alterações c o m p a tív e is co m a esquistos somose m ansônica h e patosplênica com pensada. N o g ru p o de pacientes co m esquistossom ose m ansônica h e patosplênica descom pensada, as trê s fo rm a s isodinâm icas da fostatase alca lin a sérica co m p o rta ra m -se de m o d o sem elhante ao obser vado para o g ru p o co m esquistossom ose m ansô nica com pensada.
C onsid e ra n d o a h ipótese de qu e os níve is séricos da fosfatase alca lin a dos pacientes com esquistossom ose m ansônica, com pensada o u
descom pensada, pudessem ser in flu e n cia d o s pela p a rticip a çã o de enzim a d o
Schistossoma
manso-n i,
o estudo de a tividadade e n zim á tica da fo s fatase alcalina no e tra to de verm e a d u lto , a que se p rocedeu, d e m o n s tro u ser ta l evento a ltam ente im p ro vá ve l, em face d o d ife re n te c o m p o rta m e n to té rm ic o apresentado p o r esta enzim a, c o n fo rm e pode ser observado no H istogram a 5. A lé m do m ais, se o e x te rm ín io dos 1 .3 5 6 verm es o c o r ressem sim u lta n e a m e n te d e n tro d o hospedeiro, a a tiv id a d e e n zim á tica elevar-se-ia de apenas 0,1 m U /m l de sangue.O e stu d o realizado nos diversos e x tra to s de órgãos tin h a c o m o o b je tiv o esclarecer a c o n tri b u içã o destas fosfatases alcalinas nos níveis sé ricos, co rre la c io n a n d o o c o m p o rta m e n to da fosfatase alcalina dos diversos órgãos co m a fosfatase a lcalina d o soro de in d iv íd u o s consi derados norm ais.
Os resultados o b tid o s co m o e x tra to de fíg a d o h u m a n o apresentam a fosfatase a lc a i;na hepática co m um c o m p o rta m e n to sem elhante à fosfatase alcalina sérica. O estudo co m o in te s tin o delgado h u m a n o apresenta resultados sem elhantes à fosfatase a lcalina hepática, no e n ta n to , a a tivi- vidade e n zim á tica é bem m e n o r na fosfatase a lcalina in te s tin a l com parando-se co m a atividade da fosfatase alcaina hepática. Os resultados da fosfatase a lcalina óssea d e m o n stra ra m apenas um a fo rm a isodinâm ica co rre sp o nd e n te à p rim e i ra fo rm a iso dinâm ica d o soro e, com uma a tiv id a d e e n zim á tica e resistência té rm ic a m u ito baixas, c o n fo rm e já re latado na lite ra tu ra p o r Posen
e t a lli
3 8 .C om a fosfatase a lcalina placentária tam bém só fo i id e n tific a d a um a fo rm a isodinâm ica. P orém , com um a a tivid a d e e n zim á tica m u ito elevada e co m m a io r resistência ao tra ta m e n to té rm ic o com parando-se co m o p rim e iro p ico da fosfatase a lcalina sérica de in d iv íd u o s norm ais; R esultados .sem elhantes fo ra m d e scritos p o r Posen
e t a lli
3 8 .F in a lm e n te vale ressaltar a pequena massa m o le cu la r das duas fo rm a s isodinâm icas, F j , e F 3, descritas neste tra b a lh o , que, em bora v e rifi cadas em pacientes co m esquistossom ose m ansô nica hepatosplênica descom pensada, eram c o in cidentes com as fo rm a s F 2 e F 3 , verificadas com o g ru p o c o n tro le , c o m o po d e m ser depreendidos dos resultados o b tid o s d u ra n te o estudo da fosfatase alcalina sérica em Sephadex.
C O N C LU S Õ E S
Histograma 10
Estudo da atividade da F A e suas formas isodinâmicas em soro de paciente com EMHI
m U /m l
1 0 0 •
90
80 •
7 0 -
60 -
50
40
3 0 -
2 0-
10
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 ~ l V
Estudo da atividade enzimática após tratamento térm ico 5 6 ° C / 10 m inutos
(Frações 3,5 ml)
R
ev
.
S
o
c.
B
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s.
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T
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Vo
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N
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hum ano, que fo ra m denom inadas F O R M A S IS O D IN Â M IC A S da fosfatase alcalina.
2. O n ú m e ro de pro p rie d a d e s fís ic o -q u ím ic a s das fo rm a s isodinâm icas apresentaram d is tri buição d is tin ta e ca ra cte rística s p ró p ria s nos sistemas estudados:
A — in d iv íd u o s norm ais S oro hum a n o
duas fo rm a s te rm o lá b e is E x tra to de fíg a d o idem
E x tra to de in te s tin o delgado idem
E x tra to de osso um a fo rm a te rm o lá b il E x tra to de placenta nenhum a fo rm a
B — In d iv íd u o s co m esquistossom ose m ansô nica
S oro de esq u isto sso m ó tico na fase hepato in te s tin a l
nenhum a fo rm a
S oro de e sq u isto sso m ó tico na fase h e patosplênica com pensada
dus fo rm a s te rm o rre siste n te s
S oro de esq u isto sso m ó tico na fase hepatosplênica descom pensada idem
3. O a u m e n to da fosfatase a lcalina sérica não é d e vid o à liberação da fosfatase alcalina d o p ró p rio verm e.
4. 0 n ú m e ro e a p ro p rie d a d e das fo rm a s iso dinâm icas independem da a tivid a d e da fosfatase alcalina sérica.
5. A massa m o le cu la r das fo rm a s isodinâm icas fo i estim ada em : F 2 13 X 1 0 3 d a lto n s e F 3 2 ,4 X 10 3 d a lto n s.
S U M M A R Y
T he s tu d y o f th e m u ltip ls fo rm a s o f serum a lk a lin e phosphatase in p a tie n ts w ith schisto- somiasis (he p a to in te s tin a l com pensated and decom pesated hepato sp le n ic) revealed m o d ific a - tio n s in th e ir p h ysico -ch e m ica l p ro p e rtie s. M o le cu la r filt r a t io n w ith a S ephadex G —2 0 0 c o lu n separated th re e d is trin c t m o le c u la r fo rm s o f serum a lk a lin e phosphatase in p a tie n ts w ith h e p a to sp le n ic schistosom iasis m ansoni. T w o o f these fo rm s presented as th e rm o re s is ta n t, con- tra s tin g w ith th e e q u iva le n te m u ltp ls fo rm s in n o rm a l serum w h ic h are te rm o la b ile , In th e h e p a to in te s tin a l phase o f schistosom iasis m anso ni o n ly one th e rm o la b ile fo rm o f a lk a lin e phosphatase was isolated w h ic h co rra p a rd e d to tw e p rim a ry iso d y n a m ic fo rm in n o rm a l serum .
S tudies w ere also d one o n th e d iffe re n t m o le c u la r fo rm s o f h u m a n a lka lin e phosphatase. F ro m live, sm all in te stin e , bone and placenta, o rig in a tin g fro m tissues considered as norm al, and fro m
Schistosoma mansoni
itself.R E F E R Ê N C IA B IB L IO G R Á F IC A
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