MORFOLOGIA DOS ESPERMATOZÓIDES DE SUÍNO, DILUÍDOS NO DILUIDOR DE BELTSVILLE (BTS) ADICIONADOS DO ÁCIDO 3-INDOL ACÉTICO

MORFOLOGIA DOS ESPERMATOZÓIDES DE SUÍNO, DILUÍDOS NO

DILUIDOR DE BELTSVILLE (BTS) ADICIONADOS DO ÁCIDO 3-INDOL

ACÉTICO

(Morphological aspects of swine spermatozoa, diluted into Beltsville extender added of acetic 3-indol acid)

Ricardo TONIOLLI

FAVET - Universidade Estadual do Ceará

RESUMO

O sêmen de 45 varrões das raças Landrace, LargeWhite, Pietran e mestiços, foi coletado e diluído em diluidor BTS. O IAA foi adicionado ao BTS em duas concentrações finais: 10 ng/mL (IAA10) e 100 ng/mL (IAA100). O tratamento controle constou de BTS sem a adição de IAA. Após a diluição, o sêmen foi conservado a 15°C durante 1, 5 e 13 dias. Após cada período, foram feitas avaliações da morfologia do acrossoma, indicando a viabilidade do sêmen. Para cada diluidor testado, não houve efeito de períodos de conservação, exceto aos 13 dias no IAA100, quando observou-se uma redução na porcentagem de espermatozóides vivos com acrossoma intacto. A porcentagem de espermatozóides vivos com acrossoma intacto nos tratamentos com IAA foi maior do que no controle. As diferenças entre as duas concentrações de IAA (10 e 100 ng/mL) não foram significativas (P > 0,05). Neste trabalho, foi observado um efeito benéfico do IAA sobre as características morfológicas do espermatozóides do varrão.

PALAVRAS-CHAVE: congelação, morfologia, suíno.

ABSTRACT

The semen of 45 boars (Landrace, LargeWhite, Pietran and crossbred), was collected and diluted in BTS. IAA was added to BTS in two final concentrations: 10 ng/mL (IAA10) and 100 ng/mL (IAA100). The control treatment consisted of BTS without IAA. After dilution, the semen was conserved at 15°C for 1, 5 and 13 days. After each period evaluations of the acrossome morphology, indicating semen viability, were performed. For each extender tested, there was no difference between conservation periods, except at 13 days in IAA100, where a reduction was observed in the percentage of live spermatozoa with intact acrossomes. The percentage of live spermatozoa with intact acrossomes was larger in the treatments with IAA than in the control group. The differences between the two concentrations of IAA (10 and 100 ng/mL) were not significant (P > 0.05). A beneficial effect of IAA on morphological characteristics of boar spermatozoa was observed in this study.

KEYWORDS: congelation, morphological, swine.

Endereço para correspondência Av. Paranjana, 1700

60740-000 Fortaleza, Ceará

INTRODUÇÃO

Para assegurar o sucesso da inseminação artificial, é necessário que o método de obtenção e de conservação, a qualidade, o momento e a forma de aplicação do sêmen, sejam bem conduzidos (PÉREZ GARCIA, 1958; JOHNSON et al., 1988; WABERSKI et al., 1990). A qualidade espermática dos ejaculados (concentração, motilidade e anomalias morfológicas) é um dos principais fatores considerados para a seleção de reprodutores dentro de uma criação, podendo ser influenciada por vários fatores: idade, luminosidade, temperatura, manejo, nutrição, frequência de coleta e diluidor utilizado. Foi observada correlação entre estes fatores e uma ou várias anomalias espermáticas encontradas no ejaculado (BONET et al., 1993).

O teste de laboratório mais utilizado para a avaliação de machos é a porcentagem de células móveis do ejaculado (SLAWETA et al., 1981), que possibilita a obtenção de uma maior porcentagem de fecundação. Entretanto, até o presente momento, não existe uma definição clara de um sêmen fértil, apesar da grande variedade de testes laboratoriais (YAVETZ et al., 1995).

A literatura mostra resultados positivos relativos às características morfológicas, com a utilização do BTS em relação aos diluidores Kiev e Zorlesco (SLAWETA et al., 1981; CHENG, 1988; PEREZ MARCOS et al., 1991). A função acrossômica desempenha um papel chave dentro dos eventos da fertilização, e suas anomalias causam problemas de fecundação (PARINAUD et al., 1995). TONIOLLI et al. (1996), demonstraram que o ácido 3-indol acético adicionado ao diluidor BTS, melhorou as condições de conservação do sêmen de varrão, com um efeito significativamente favorável sobre a porcentagem de espermatozóides vivos com acrossoma intacto após 13 dias de conservação em uma temperatura entre 15 e 17°C.

A observação pura e simples da motilidade não é suficiente para apreciar a qualidade potencial do sêmen (EINARSON & VIRING, 1973). A morfologia dos espermatozóides é

igualmente um indicador importante desta qualidade, uma vez que ela influencia e taxa de partos e a prolificidade (WABERSKI et al., 1990), mesmo se a correlação entre a motilidade, a morfologia e a fertilidade for fraca (GALLI & BOSISIO, 1988). Já nas décadas de 20 e 30 autores como WILLIAMS & SAVAGE (1925) e LAGERLÖF (1934), puderam colocar em evidência a importância da morfologia espermática, verificando que uma porcentagem de células anormais, superior a 18% apresentou um efeito negativo sobre a taxa de fertilização.

O objetivo deste trabalho foi observar o efeito do IAA sobre a viabilidade morfológica dos espermatozóides de machos da espécie suína, conservados a 15°C durante um, cinco e treze dias.

MATERIAL E MÉTODOS

Um total de 45 coletas foram realizadas em nove reprodutores de raças puras (Landrace, Large White e Pietran) ou cruzadas (Híbrido Francês e LargeWhite/Pietran). Cada ejaculado foi conservado no diluidor de Beltsville (BTS -controle), em BTS adicionado do ácido 3-indol acético (IAA) a 10 ng/mL (IAA10) e em BTS adicionado de IAA a 100 ng/mL (IAA100). Foi utilisada uma concentração final de 35 x106 espermatozóides/mL, para cada tratamento. Alíquotas de 3 mL foram armazenadas a 15°C e analisadas após um, cinco e treze dias de conservação.

O efeito dos tratamentos sobre a morfologia espermática, foi avaliado pela classificação dos espermatozóides segundo a morfologia de seu acrossoma e coloração da cabeça em: a) espermatozóides vivos com acrossoma intacto (EVAI); b) espermatozóides vivos com acrossoma danificado (EVAD) e c) espermatozóides mortos (EM). Os esfregaços foram feitos aos 5 min de incubação das amostras em banho maria a +39°C, corados pelo Vermelho do Congo e Giemsa (KOVACS & FOOTE, 1992) e analisados em microscopia óptica e a um aumento de 100x em objetiva de imersão.

Os resultados expressos em porcentagem, foram analisados estatisticamente pelo programa

SYSTAT (versão 5.0) e suas médias comparadas pelo teste do X2 _corrigido.

RESULTADOS E DISCUSSÃO

Dentro de cada tratamento, as diferenças entre os dias de conservação do sêmen não foram significativas (P>0,05), com exceção de IAA100 que apresentou uma redução no número de espermatozóides vivos com acrossoma intacto. Dentro das classes de espermatozóides vivos com acrossoma danificado e espermatozóides mortos, ocorreram diferenças significativas entre

períodos de conservação, sem no entanto haver correspondências com os resultados de EVAI (Tab. 1).

A adição do IAA ao diluidor BTS, independentemente da concentração utilizada e do período de conservação, contribuiu para preservar uma maior porcentagem de EVAI (Fig. 1). A possibilidade de preservação de um maior número de células com acrossoma intacto, deixa a espectativa de melhores resultados de fertilidade quando se leva em consideração os resultados dos trabalhos de autores como WILLIAMS & SAVAGE (1925),

Figura 1. Influência da adição do ácido 3-indol acético ao diluidor BTS, sobre a morfologia dos espermatozóides do varrão.

Letras diferentes dentro de cada dia de conservação, diferença estatística P < 0,05 entre tratamento.

Espermatozóides vivos intactos (%)

Período de conservação (dias)

1 5 13 0 20 40 60 80 BTS + IAA 10 ng/mL BTS + IAA 100 ng/mL a b b a b b a b b BTS

Tabela 1. Características morfológicas dos espermatozóides de varrão conservados por 13 dias em presença ou não do ácido 3-indol acético (IAA).

1_{Dentro de cada classe de espermatozóide e para cada um dos tratamentos (diluidores) as diferenças significativas}

entre as médias são expressas por letras fiferentes nas linhas (P < 0,05).

Classes1 _{BTS BTS + IAA}

(10mg/mL)

BTS + IAA (100mg/mL)

1 5 13 1 5 13 1 5 13

Vivos intactos (EVAI) 55,9a 55,8a 54,7ª 69,3 69,8ª 66,5ª 67,7ª 68,6ª 64,6b Vivos danificados (EVAD) 8,4a _9,7b _{7,7ª 6,3 6,5ª 3,5}b _{6,1ª 6,7a 6,9}a

LAGERLÖF (1934) e PARINAUD et al. (1995).

Dentro desta mesma óptica, os resultados deste trabalho estão em consonância com os de WABERSKI et al. (1990), que consideram a morfologia do espermatozóide como um bom parâmetro para a seleção de machos, em particular quando se tratar de sêmen refrigerado; bem como com os de MARTIN RILLO et al. (1994), que afirmam que o acrossoma desempenha um papel importante dentro do processo de fecundação.

A porcentagem de células com acrossoma intacto ficou relativamente estável mesmo com uma longa conservação (13 dias), sendo superior à 50%. Estes resultados foram melhores do que os encontrados por SLAWETA et al., 1981, WEKERLE, 1982 e por PEREZ MARCOS et al., 1991. Entretanto, foram inferiores aos resultados alcançados por REVELL & GLOSSOP (1989), utilizando o diluidor Reading, obtiveram 75% de espermatozóides vivos, após sete dias de conservação. Esta vantagem a favor do diluidor Reading pode ter sido devido ao fato da presença dos antibióticos lincomicina e spectinomicina no lugar da penicilina.

Os resultados mostraram uma ação protetora do IAA sobre a célula espermática, proporcionando a manutenção de um maior número de espermatozóides normais. A melhoria da condição morfológica da célula espermática em presença do IAA, e em particular a manutenção de um maior número de células com acrossoma intacto, poderá favorecer seu movimento de deslocamento e a consequente penetração da zona pelúcida dos ovócitos.

CONCLUSÃO

A ação favorável do composto ácido 3-indol acético (IAA) sobre a porcentagem de espermatozóides com acrossoma intacto poderá permitir melhores resultados de fertilidade com a utilização de um sêmen conservado na presença desta substância.

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