Perfil genômico de um carcinoma espinocelular ex-adenoma pleomórfico comparado a um carcinoma espinocelular de cabeça e pescoço

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Brazilian

Journal

of

OTORHINOLARYNGOLOGY

RELATO

DE

CASO

Genomic

profile

of

a

squamous

cell

carcinoma

ex

pleomorphic

adenoma

compared

to

a

head

and

neck

squamous

cell

carcinoma

夽

Perfil

genômico

de

um

carcinoma

espinocelular

ex-adenoma

pleomórfico

comparado

com

um

carcinoma

espinocelular

de

cabec

¸a

e

pescoc

¸o

Fernanda

Viviane

Mariano

_,

_Luis

_Fernando

_Vidal

_Saccomani

_,

_Karina

_Giovanetti

_,

André

Del

Negro

_,

_Luiz

_Paulo

_Kowalski

_,

_Ana

_Cristina

_Victorino

_Krepischi

e

Albina

Altemani

a_{UniversidadeEstadualdeCampinas(UNICAMP),FaculdadedeCiênciasMédicas,DepartamentodePatologia,Campinas,SP,Brasil} b_{UniversidadeEstadualdeCampinas(UNICAMP),FaculdadedeCiênciasMédicas,CirurgiadeCabec¸aePescoc¸o,Campinas,}

SP,Brasil

c_{ACCamargoCancerCenter,DepartamentodeCirurgiadeCabec¸aePescoc¸o,SãoPaulo,SP,Brasil}

d_{UniversidadedeSãoPaulo(UNIFESP),InstitutodeBiociências,DepartamentodeGenéticaeBiologiaEvolucionária,SãoPaulo,}

SP,Brasil

Recebidoem6deoutubrode2015;aceitoem13denovembrode2015 DisponívelnaInternetem4dejulhode2017

Introduc

¸ão

O carcinoma espinocelular (CEC) é a neoplasia mais fre-quenteemcabec¸aepescoc¸oecavidadeoral.Eleéosexto câncersólidomaiscomumeafetamaisde900.000pessoas em todo o mundoa cada ano. Ocarcinoma espinocelular

DOIserefereaoartigo:http://dx.doi.org/10.1016/j.bjorl.2015.

11.015

夽 _{Comocitaresteartigo:MarianoFV,SaccomaniLF,GiovanettiK,}

DelNegroA,KowalskiLP,KrepischiAC,etal.Genomicprofileofa squamouscellcarcinomaexpleomorphicadenomacomparedtoa headandnecksquamouscellcarcinoma.BrazJOtorhinolaryngol. 2018;84:393---7.

∗_{Autorparacorrespondência.}

E-mail:fevimariano@gmail.com(F.V.Mariano).

ArevisãoporparesédaresponsabilidadedaAssociac¸ão Brasi-leiradeOtorrinolaringologiaeCirurgiaCérvico-Facial.

oral(CECO)éomaiorsubgrupodeCECCP,causaanualmente 7.400mortesnosEUA.1_{Devidoàaltaprevalênciae}

agres-sividade, o CECCP tem sido estudado por várias técnicas molecularesecitogenéticas.Osdesequilíbrios cromossômi-cosrelatadoscommaisfrequêncianoCECCPsão:3p,4,5q, 8p,9p,11,13qe18q(perdas)e3q25-26,5p,8q24,9q22-34, 11q13,14q24,16p,19p,20q24e22q(ganhos).1

Ocomponente carcinomatoso doex-adenoma pleomór-fico(EXAP)englobaumavariedadedetiposhistológicosde tumor,taiscomoadenocarcinoma,carcinomamioepitelial, carcinomaepitelial-mioepitelial,carcinomasarcomatoidee carcinomadoductosalivar.2_{Muitosestudosepidemiológicos}

sobreaincidência doEXAP mostrarampoucos ounenhum casocomumcomponentecarcinomatoso.

Apesar de haver relatos de numerosas alterac¸ões cro-mossômicas em CEC de outros locais, não há relato de desequilíbrios cromossômicos especificamente para o carcinoma espinocelular, ex-adenoma pleomórfico (CEC--EXAP).O objetivo deste estudo foi identificar alterac¸ões

2530-0539/©2016Associac¸˜aoBrasileiradeOtorrinolaringologiaeCirurgiaC´ervico-Facial.PublicadoporElsevierEditoraLtda.Este ´eum artigoOpenAccesssobumalicenc¸aCCBY(http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/).

Figura1 Carcinomaespinocelularex-adenomapleomórfico.(A,B)Adenomapleomórficoresidual.A,Áreadeadenomapleomórfico mostraextensahialinizac¸ãodoestroma.B,Poucasestruturasductaisrevestidasporcélulassemcaracterísticasatípicaspodemser vistas.(C,D)Componentecarcinomatoso.C,Umcarcinomaespinocelularfrancamenteinvasivoéocomponentemalignodotumor. D,Detalhedocomponentemalignomostrailhasformadasporcélulascomdiferenciac¸ãoescamosa.

cromossômicasassociadasaoCEC-EXAPecompará-lascom dadosdeliteraturasobreoCECCP.

Relato

de

caso

Dadosclinicopatológicos

O caso foi encaminhado ao nosso departamento para avaliac¸ãohistopatológica.Osexoeaidadedopacientesão desconhecidos.Opacienteapresentou-secomumtumorem glândula parótida que havia sido notado havia dez anos. O tumor foi ressecado cirurgicamente e o exame histoló-gico mostrou áreas de adenoma pleomórfico (AP) e CEC que surgiam no AP (fig. 1). As células tumorais apresen-tavam formac¸ão de pérolas de queratina e invadiam os tecidos adjacentes à glândula parótida. A neoplasia foi classificada como um CEC-EXAP francamente invasivo. O paciente desenvolveu metástase a distância nospulmões, mas a informac¸ão sobre o acompanhamento não estava disponível.

Análisedearray-CGH

As alterac¸ões somáticas do número de cópias detectadas naamostradoCEC-EXAPsãodetalhadasna tabela1,bem comoosgenesconhecidosafetadospelocâncer,deacordo com o Cancer Gene Census Sanger (https://www.sanger. ac.uk/research/projects/cancergenome/census.html).

Opresentecaso exibiuumpadrãogenômicocomplexo, comváriasalterac¸õesdonúmerodecópias.Asperdasforam detectadasem1p,8p,17pe18qeosganhosforam identi-ficadosem1p,6,8q,11q,17q,19qe22q(fig.2A).

Trêsregiõesqueexibiamalterac¸õescomaltonúmerode cópias(amplificac¸ões)foramdetectadasem11q14.3q22.1, 11q22.1q22.3 (fig. 2B) e 19p13.2 (fig. 2C). Entre outros genes, essas amplificac¸ões envolvemos genes conhecidos docâncer,MAML2,BIRC3eLYL1.

Discussão

Marianoetal.(2013)2_{relataramumcasodeCEC-EXAP(2,6%)}

em38casosdeEXAPdapopulac¸ãobrasileira.Deacordocom nossapesquisa,foramdescritossomentecasosesporádicos quemostravamCECcomoocomponentemalignodeEXAPe enfatizavamascaracterísticasclínicasemorfológicas.

OCECorigina-seapartirdocomponenteepitelialdoAP edelesõesquesurgemdasglândulassalivaresmenoreseé importantedemonstrarquenãohácontinuidadedosnichos doCECcomamucosabucal.Nopresentecaso,áreasdeAP residual foramassociadas aum CEC amplamente invasivo detecidosmolesemtornodaglândulaparótida.Metástases distantesforamobservadasemnossocaso.Issosugereque oCECpertenceaogrupodeEXAPagressivo.Propôs-seque oEXAPseja,naverdade,umacategoriadetumores,enão umúnicotumor,poisoscarcinomastantoagressivosquanto indolentespodemsurgirdeumAP.

Agressividadelocal,taxaelevadaderecidivasprecoces etaxareduzida decincoanosdesobrevidanãosuperiora

Tabela1 Alterac¸õesdonúmerodecópiassomáticasdetectadasporarray-CGHemumcasodeCEC-EXAP Coordenadascromossômicas

(Hg19)

Tipodeevento Tamanho (Mb)

Citobanda Genes(n) Genes

cancerígenos conhecidos(CGCS)

chr1:783,108-10,814,886 Ganho 10,0 1p36.33-p36.22 162 TNFRSF14,

PRDM16,RPL22, CAMTA1

chr1:55,751,323-74,536,392 Perda 18,7 1p32.3-p31.1 94 JUN,JAK1

chr1:106,671,417-121,354,529 Perda 14,6 1p21.1-p11.2 171 RBM15,TRIM33,

NRAS,FAM46C, NOTCH2

chr6:122,468-21,138,924 Ganho 21,0 6p25.3-p22.3 126 IRF4,DEK

chr6:147,333,160-170,923,962 Ganho 23,5 6q24.3-q27 154 EZR,FGFR1OP,

MLLT4 chr8:239,745-43,440,193 Perda 43,0 8p23.3-p11.1 364 PCM1,WRN, WHSC1L1,FGFR1, HOOK3 chr8:93,473,949-109,349,316 Ganho 15,8 8q22.1-q23.1 94 COX6C chr11:84,971,351-92,399,403 Ganho 7,4 11q14.1-q14.3 43 PICALM

chr11:92,410,361-99,634,930 Amplificac¸ãoa _{7,0 11q14.3-q22.1 48 MAML2}

chr11:99,645,163-104,334,763 Amplificac¸ãoa _{4,6 11q22.1-q22.3 29 BIRC3}

chr17:9,134,319-22,224,426 Perda 13,0 17p13.1-p11.1 165 GAS7,MAP2K4 chr17:46,160,506-59,942,017 Ganho 13,7 17q21.32-q23.2 177 COL1A1,HLF,

MSI2,CLTC,BRIP1 chr18:18,440,032-78,062,375 Perda 59,6 18q11.1-q23 278 ZNF521,SS18,

MALT1,BCL2

chr19:12,951,065-13,396,186 Amplificac¸ãoa _{0,4 19p13.2 19 LYL1}

chr19:28,039,051-59,128,983 Ganho 31,0 19q11-q13.43 1123 CCNE1,CEBPA, AKT2,CD79A,CIC, BCL3,CBLC, ERCC2,KLK2, PPP2R1A,ZNF331, TFPT chr22:31,865,770-43,582,078 Ganho 11,7 22q12.2-q13.2 205 MYH9,PDGFB, MKL1,EP300

a _{Altonúmerodeganhosdecópias.}

50% são aspectos clínicoscaracterísticos doCEC. O CECO causa7.400mortesnosEUAacadaano.1_{Portanto,durante}

asduasúltimasdécadas,abordagensdetriagemdogenoma, como ahibridizac¸ão genômica comparativa(CGH)do cro-mossoma,foramaplicadasparadescobrirabasemolecular dacarcinogênesedessetumor.

Umperfilgenômicocomplexodasalterac¸õesdonúmero decópiasdoCECCPfoidescritonaliteratura,inclusive per-dasem3p,4,5q,8p,9p,11,13qe18qeganhosem3q25q26, 5p,8q24,9q22q34,11q13,14q24,16p,19q,20q24e22q.1

Opresentecasotambémmostrouumperfilgenômico com-plexocomváriasalterac¸õesdonúmerodecópias,mascom umpadrãodiferenteemcomparac¸ãocomoCECCP, prova-velmentedevidoàlinhagemcelulardistinta.Curiosamente, existemváriasregiõesdiscretasdeperdaem3pnoCECCP.1,3

Emboraasinvestigac¸õescitogenéticastenhamsugeridoque a perda em 3p seja uma alterac¸ão genômica importante noCECCP,nossocasonãoapresentouessaalterac¸ão. Con-tudo,algumassemelhanc¸asentreCECCPenossocasoforam encontradas, como perdas em 8p23e 18q11e ganhos em 8q22.1,19qe 22q.Essasalterac¸õespodemser específicas

dadiferenciac¸ãodascélulasescamosasecontribuirparao comportamentoagressivo.3

Sugeriu-seque,emCECCP,osganhosem3q26e11q13e delec¸õesem8p23e22qpoderiamsermarcadoresvaliosos dedoenc¸a agressiva.1 _{A perdaem 8p23 nopresente caso}

envolve genes importantes relacionados ao câncer, como PCM1, WRN, WHSCILI, FGFR1 e HOOK3. Por outro lado, sugeriu-se que ganhos cromossômicos em 1q e 16q, bem comoperdascromossômicasem18q,representam marcado-resprognósticosemCECCP.1,3 _{Tambémencontramos perda}

em18qque envolveugenesrelacionados aocâncer, como ZNF521,SS18, MALT1e BCL2. Além disso, observamos em nossaamostraumganhoem 8q22.1q23.1. Nesseintervalo genômico,ogeneYWHAZfoimapeado,umproto-oncogene candidatodoCECCP.

Tambémidentificamosnovosachadosnãorelatados ante-riormente para o CECCP, tais como perdas em 1p32, 1p21 e 17p13.1 e ganhos em 1p36.33, 6p25.3, 6q24, 11q14 e 17q21.32. A perda em 1p32 está associada ao desenvolvimento do carcinoma adenoide cístico1 _{e 1p36}

Perfil genômico SCNA no caso 1

Cromossomos 1p a Xq

A

B

C

Valores de referência/ teste log2

Figura2 Alterac¸õesdonumerodecópiasdetectadasporarray-CGHnocasodeCEC-EXAP.A,Perfilgenômicodearray-CGHexibe todasasalterac¸õesdonúmerodecópiasidentificadasnestecaso.Oeixoxrepresentasondasordenadasdeacordocomasposic¸ões genômicasdoscromossomos1paXq(cadacromossomoémarcadocomumacordiferente).Oeixoyindicaosvaloresde referên-cia/testelog2(ganhoseperdasgenômicasestãoagrupadosacimaouabaixodalinhadebase0,respectivamente;imagensadaptadas dosoftwareNexusCopyNumber7.0,Biodiscovery).Oquadrovermelhoindicacromossomosqueabrigamrearranjosgenômicosde perdasouganhos:1,6,8,11,17,18,19e22.Assetasmostramasregiõesdeampliac¸õesgenômicasnoscromossomos11e19.B, Perfildearray-CGHdocromossomo11mostraemdetalheasduasregiõescomaltoganhodenúmerodecópias(amplificac¸ões):em 11q14q22.1(7Mb)eem11q22.1-q22.3(4,6Mb)(setaazulemA).C,Perfildearray-CGHdocromossomo19exibeumaregiãode amplificac¸ãogenômicaem19p13.2(0,4Mb)(setavermelhaemA).

essasregiões dedesequilíbrio, aperda em 1p21.1parece particularmenteinteressante,porqueenvolveváriosgenes relacionados ao câncer.1 _{A sobre-expressão do gene DEK}

(6p25.3) está associada ao adenocarcinoma gástrico e de mama,4_{bemcomooEZRINdesempenhaumpapelem}

ade-nocarcinomacolorretal,pancreático,gástricoeoutros.5

Valedestacarquedetectamostrêsampliac¸õesgenômicas queenvolviamasregiõesem11q14.3q22.1,11q22.1q22.3e 19p13.2.Essasamplificac¸õespodemabrigargenes relevan-tesqueestimulamacarcinogêneseeMAML2,BIRC3eLYL1 sãogenesconhecidosdocâncermapeadosnessasregiões.

MAML2(11q14.3q22.1)(Mastermind-like2)desempenha umpapel como coativador transcricional para o receptor de Notch e foi relatado como rearranjado com CRTC1 e CRTC3em carcinomasmucoepidermoides.6 _Emnossocaso,

odiagnósticodecarcinomamucoepidermoidequesurgeem umAPfoidescartadonoexamehistológico,poiso compo-nentemalignonãocontinhacélulasmucosas.MAML2-CRTC1 eMAML2-CRTC3nãoforamencontradosemcarcinoma ade-noescamoso,CECouqualqueroutrocarcinomadaglândula salivar.6_{MAML2amplificadoinduzatranscric¸ãodogene}

HES-1(umgenealvodeNotch),queregulaaexpressãodefatores detranscric¸ãoespecíficosdotecidoqueinfluenciama linha-gem e outros eventos. Essa amplificac¸ão é descrita com baixafrequênciaemcânceresdevárioslocais,masnãoem CECCP.

Outro geneamplificado, BIRC3 (BaculoviralIAP Repeat Containing3),codificaummembrodafamíliadeproteínas inibidorasdeapoptose(IAP).Aamplificac¸ãoqueenvolveo BIRC3foidetectadaemcâncerpancreático,osteossarcoma, leucemiamieloide aguda,carcinoma mamário,câncer do pulmão,câncercervicaleCEC.7_{Verificou-sequeBIRC3pode}

aumentarasobrevidadecélulascancerígenasea progres-são do câncer. Isso sugere que os tratamentosque visam ao produto desse gene podemoferecer opc¸ões terapêuti-casúteis.OgeneLYL1(LymphoblasticLeukemiaassociated hematopoiesisregulator 1)representaumfatorbásicode transcric¸ão hélice-alc¸a-hélice que codifica uma proteína com influência na maturac¸ão dos vasos sanguíneos e na hematopoiese.8_{Acreditamosqueaamplificac¸ãodoLYL1em}

tumoresdeglândulassalivarespodecontribuirparaa onco-gênese.

HárelatosdequetantoAPquantoEXAPtêm anormalida-des cromossômicasaltamenteespecíficasrelacionadasaos genesPLAG1eHMGA2.Rearranjosdessesgenes(rearranjos em 8q12 afetamo gene PLAG1 e rearranjos em 12q14-15 afetamogeneHMGA2)foramimplicadosnagênesedoAPe EXAP. Noentanto,embora essasalterac¸õescromossômicas sejam frequentes nesses tumores, elas não são detecta-das em todos eles.9 _{No presente caso, não encontramos}

amplificac¸ão dosgenes PLAG1 ouHMGA2. Isso sugere que otumorprovavelmentepertenceàquelesquenãotêmessa alterac¸ãocariotípica.

Conclusão

OCEC-EXAPmostrouumpadrãocomplexodealterac¸õesdo númerodecópiasquetemalgumassemelhanc¸ascomodo CECCP.Éprovávelqueessasanormalidadescromossômicas possam estar envolvidas no desenvolvimento do fenótipo escamoso e no comportamento agressivo do CEC-EXAP. No entanto, ampliac¸ões genômicas de genes canceríge-nos conhecidos, como LYL1, BIRC3 e MAML2, detectados

apenasnoCEC-EXAP,podemterimportânciaparaoprocesso detransformac¸ão maligna doAP. Essasúltimas alterac¸ões podemsermarcadoresclinicamenterelevantesparao diag-nósticodeCEC-EXAP.

Financiamento

Processo Fapesp: 2011/23204-5 e Processo Fapesp: 2011/23366-5.

Conflitos

de

interesse

Osautoresdeclaramnãohaverconflitosdeinteresse.

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