Efeito do óleo de copaíba sobre o microbioma bucal

1 UNIVERSIDADE FEDERAL DO RIO GRANDE DO SUL

FACULDADE DE ODONTOLOGIA

PROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM ODONTOLOGIA

NÍVEL DOUTORADO

ÁREA DE CONCENTRAÇÃO CLÍNICA ODONTOLÓGICA/PERIODONTIA Linha de pesquisa:

Biomateriais e Técnicas Terapêuticas em Odontologia.

Tese:

EFEITO DO ÓLEO DE COPAÍBA SOBRE O MICROBIOMA BUCAL

Doutoranda:

ANA LÚCIA DIEFENBACH

ORIENTADOR: CASSIANO KUCHENBECKER RÖSING

2 ANA LÚCIA DIEFENBACH

EFEITO DO ÓLEO DE COPAÍBA SOBRE O MICROBIOMA BUCAL

Tese apresentada ao Programa de Pós-Graduação em Odontologia da Universidade Federal do Rio Grande do Sul como requisito parcial para obtenção do título de Doutor em Odontologia, área de concentração em Clínica Odontológica/Periodontia.

Orientador: Prof. Dr. Cassiano Kuchenbecker Rösing

4 Dedico esta tese ao meu marido Paulo Augusto Alves (in memorian) e meu afilhado Hugo Benno pelo amor e carinho nessa jornada.

5 AGRADECIMENTOS

Ao final desta jornada, em especial, gostaria de expressar meus agradecimentos:

A minha família, principalmente aos meus pais Donard e Mayara Diefenbach que me educaram e apoiaram meus passos.

A minha amiga-irmã Naelka Sarmento que sempre me incentiva a seguir em frente, nunca desiste, sempre com muito otimismo e felicidade.

Ao meu orientador Cassiano Kuchenbecker Rösing pela sua disposição em ensinar, generosidade, exemplo de professor e competência. Minha gratidão.

Dedico aos meus sobrinhos Hugo e Igor Diefenbach que me ensinam a beleza da inocência de uma criança.

Ao Francisco Montagner pela amizade e disponibilidade em sempre ajudar. Muito obrigada. Aos meus colaboradores Thais Negrini, Rodrigo Arthur muito obrigada pela dedicação, generosidade e ensinamentos. Minha gratidão.

Ao Francisco Wilker Mustafa Gomes muito obrigada por ser tão generoso em ensinar e por sua amizade. Minha gratidão.

Aos queridos Harry Oballe, Marina Mendez e Gerson Langa que sempre estiveram disponíveis em colaborar. Muito obrigada.

Aos amigos Vanessa, Edson e ao pequeno Levi Braga que são minha nova família em Porto Alegre. Meu muito obrigada.

Aos amigos Patológicos Celso Tinôco, José Onofre, Juliana Figueiredo, Luciana Alencar, Márcia Rachel e Sávio Albuquerque pelos anos de convivência e apoio.

6 Aos queridos Paula Barcellos da Silva e Otávio Sposito e Debora Delai meus novos amigos endodontistas gaúchos.

À profa. Dra. Maria Beatriz Cardoso Ferreira, obrigada pelas conversas e por compartilhar seu conhecimento.

Ao prof. Dr. Luciano Casagrande, obrigada pela acolhida e palavras de estímulo e ajuda.

Aos colegas do Laboratório de Bioquímica e Microbiologia da UFRGS (LABIM), Luisa Mercado e Ariel Rup, obrigada pelo convívio de amizade.

À Letícia Marconatto e Adriana Giongo Borges que me sempre estiveram disponíveis a ajudar e compartilhar conhecimento.

A Universidade do Estado do Amazonas -UEA ESA- minha casa acadêmica. especialmente a Coordenação do Curso de Odontologia da Universidade do Estado do Amazonas.

Aos Professores de Periodontia da UEA, em especial a Profa.Gisele Tino e Profa.Izabelle Câmara pela amizade e apoio para a realização deste Doutorado.

Aos professores da disciplina de Periodontia da UFRGS Alex Haas, Tiago Fiorini, Eduardo Gaio, Juliano Cavagni, Sabrina Gomes, Patrícia Weidlich, Marilene Fernandes e Fernando Daudt, obrigados disposição em ensinar e educar.

Agradeço à Universidade Federal do Rio Grande do Sul (UFRGS), em especial ao programa de Pós-Graduação em Odontologia pela acolhida, oportunidade, pela infraestrutura, logística e principalmente a colaboração de seus funcionários e alunos que foram essenciais para o desenvolvimento e finalização de esta etapa de formação acadêmica.

Agradeço a Nossa Senhora de Fátima que nunca me abandona e me consola nos momentos mais difíceis.

7 “O saber a gente aprende com os mestres e os livros. A sabedoria se aprende é com a vida e os humildes.” Cora Coralina

8 RESUMO

A utilização de produtos naturais e fitoterápicos para cura de doenças é milenar. O interesse no desenvolvimento desses produtos é muito significativo e isso não seria diferente na odontologia. Quando se avalia a etiologia das principais doenças da cavidade bucal, cárie e doença periodontal, pode-se fazer uma analogia de uma “batalha” frente a um microbioma complexo e, por vezes, muito agressivo. Como são doenças de origem infecciosa a utilização de mecanismos que impeçam ou estabilizem o processo patológico é de suma importância. A presente tese teve como objetivo principal, avaliar a utilização do óleo de copaíba frente ao microbioma bucal. Nese sentido a tese se divide em 3 capítulos científicos, sendo uma revisão de literatura, uma revisão sistemática e um ensaio clínico randomizado. O primeiro capítulo de revisão de literatura procurou demostrar o potencial do óleo de copaíba e suas aplicações na odontologia. O segundo capítulo, de revisão sistemática da literatura, elucidou a lacuna existente da ação do óleo de copaíba frente a patógenos orais. Esta revisão sistemática constatou que nenhum estudo clínico havia sido realizado utilizando óleo de copaíba frente às bactérias orais propostas no estudo. Assim, resultados promissores mostraram que o mesmo poderia ser utilizado na cavidade bucal, como forma de prevenção e tratamento da cárie e doença periodontal. No terceiro capítulo realizou-se um estudo clínico randomizado, avaliando o efeito imediato de enxaguatório contendo óleo de copaíba a 5% e 10%. Foram realizadas análises microbiológicas para caracterização das comunidades microbianas presentes em saliva e Análise Intergênica de Espaçadores Ribossomais (RISA) além da análise da percepção gustativa (Escala Hedônica e gustativa). Os resultados mostraram que não houve uma diminuição significativa na contagem total de bactérias após a utilização dos enxaguatórios. Os resultados da análise de percepção gustativa mostraram que sensação do sabor doce foi o resultado predominante. A partir dos resultados obtidos nos artigos constituintes da presente tese e frente considerações realizadas, pode-se concluir que a utilização do óleo de copaíba frente a bactérias orais é comprovada nos estudos in vitro, mas recomenda-se estudos clínicos capazes de confirmar sua efetividade in vivo.

Palavras-chave: Óleo de Copaíba, Fitoterápicos, Saliva, Revisão Sistemática, Unidade Formadora de Colônia, Bactéria, Reação em Cadeia de Polimerase, Ecologia Microbiana, Diversidade, Escala Hedônica.

9 ABSTRACT

The use of natural and herbal products for diseases cure is millenarian. The interest in the development of this products is very significant and this would not be different in dentistry. When evaluating the etiology of the main diseases of the oral cavity, caries and periodontal disease, we can make an analogy of a "battle" against a complex and sometimes very virulent microbiome. As diseases of infectious origin are the use of mechanisms that prevent or stabilize the disease process is of paramount importance. The main objective of this thesis was to evaluate the use of copaiba oil against the oral microbiome.In this sense were produced 3 scientific articles, being a literature review, a systematic review and a randomized clinical trial. The first chapter of literature review sought to demonstrate the potential of copaiba oil and its applications in dentistry. The second chapter, a systematic review of the literature, elucidated the existing gap in the action of copaiba oil against oral pathogens. The systematic review found that no clinical study had been conducted using copaiba oil against the bacteria proposed in the study. Even so, promising results showed that could be used in the oral cavity as a form of prevention and treatment of caries and periodontal disease. In the third chapter, a randomized clinical study was executed, evaluating the immediate effect of 5% and 10% copaiba oil. Microbiological analyzes were performed to characterize the microbial communities present in saliva and Intergenic Ribosomal Spacer Analysis (RISA) in addition to the analysis of gustatory perception (Hedonic and gustatory scale). The results showed that there was no significant decrease in total bacterial counts after the use of mouthwashes. The results of the gustatory perception analysis showed that sweet taste sensation was the predominant result. From the results obtained in the articles of this thesis and the considerations made, it can be concluded that the use of copaiba oil against oral bacteria is proven in vitro studies, but clinical studies are recommended to confirm its effectiveness in vivo.

Key-words: Copaiba Oil, Herbal Medicine, Saliva, Systematic Review, Colony Forming Unit, Bacteria, Polymerase Chain Reaction, Microbial Ecology, Diversity, Hedonic Scale.

10 APRESENTAÇÃO

Esta tese é parte dos requisitos para obtenção do grau de Doutora em Odontologia, com área de concentração em Clínica Odontológica/Periodontia pelo Programa de Pós-Graduação em Odontologia da Universidade Federal do Rio Grande do Sul.

Os objetivos acadêmicos desta tese vinculados à produção intelectual incluem produção científica e técnica em revistas de circulação nacional e internacional. Trata-se de uma tese composta por 3 artigos principais que têm por objetivo a apresentação de possibilidades de utilização do óleo de copaíba pela Odontologia. Abaixo são citados os três artigos que compõem esta tese:

Capítulo 1: Rösing, C.K & Diefenbach, A.L. (2018). Fitoterápicos Brasileiros: Há Espaço Para Uso Na Odontologia? - O Exemplo do Óleo de Copaíba. International Journal of Brasilian Dentistry, Florianópolis, v.14, n.2, p.108-110, abr-/jun. Esse artigo teve por objetivo a divulgação do conhecimento obtido a partir das revisões da literatura realizadas. Foi publicado em periódico de divulgação nacional, com penetração na comunidade Odontológica. Trata-se de um produto técnico procurando divulgar o conhecimento sobre o uso da copaíba na Odontologia.

Capítulo 2: Diefenbach, A.L., Muniz, F.W.M.G., Oballe, H.J.R., Rösing, C.K.(2017). Antimicrobial Activity of Copaiba Oil (Copaifera Ssp.) On Oral Pathogens: Systematic Review. Phytotherapy Research: ;1–11. Esse artigo foi publicado em um periódico de circulação internacional e teve por objetivo preencher uma lacuna na literatura a respeito dos efeitos do óleo de copaíba sobre a microbiota bucal, através de uma revisão sistemática da literatura.

Capítulo 3: Diefenbach, A.L., Negrini, T.C., Montagner,F., Borges, A.G., Sarmento,N., Veiga Jr.,V.F., Rösing, C.K. Efeito Imediato do Óleo De Copaíba (Copaifera Multijuga Hayne) Usado Como Enxaguatório Frente o Microbioma Bucal – Ensaio Clínico Randomizado. Esse artigo encontra-se em sua versão manuscrita final e após a defesa da tese será submetido ao periódico Phytotherapy Research. Trata-se de um ensaio clínico randomizado realizado em seres humanos, duplo-cego e controlado por placebo e

11 tratamento padrão, com o objetivo de avaliar o efeito imediato do bochecho com duas soluções de óleo de copaíba sobre o microbioma bucal.

Ao final da tese, são realizadas considerações finais, com o objetivo de fazer uma reflexão contextualizada das informações nela contidas.

12 SUMÁRIO

INTRODUÇÃO...14

CAPÍTULO 1 - FITOTERÁPICOS BRASILEIROS: HÁ ESPAÇO PARA USO NA ODONTOLOGIA? – O EXEMPLO DE ÓLEO DE COPAÍBA ...16

CAPÍTULO 2 - ANTIMICROBIAL ACTIVITY OF COPAIBA OIL (COPAIFERA ssp.) ON ORAL PATHOGENS: SYSTEMATIC REVIEW ...19

CAPÍTULO 3 - EFEITO IMEDIATO DO ÓLEO DE COPAÍBA (COPAIFERA MULTIJUGA HAYNE) USADO COMO ENXAGUATÓRIO FRENTE O MICROBIOMA BUCAL – ENSAIO CLÍNICO RANDOMIZADO...30

CONSIDERAÇÕES FINAIS...55

REFERÊNCIAS DA TESE...58

ANEXO 1-QUESTIONÁRIO DA PERCEPÇAO GUSTATIVA...62

ANEXO 2- QUESTIONÁRIO DA ESCALA HEDÔNICA...63

ANEXO 3 – PARECER DO COMITÊ DE ÉTICA EM PESQUISA DA UNIVERSIDADE FEDERAL DO RIO GRANDE DO SUL (UFRGS)...64

13 LISTA DE ABREVIATURAS, SIGLAS E SÍMBOLOS

DNA ácido desoxirribonucleico

ATCC American Type Culture Collection UFC Unidade Formadora de Colônia et al., e colaboradores g gramas h horas mm milimetro mg miligramas min. minutos ml ou mL mililitros α Alfa β beta γ gama X número de vezes % por cento o_{C Graus Celsius} μl ou μL microlitros μg microgramas - menos +/- mais ou menos ‹ menor › maior

14 INTRODUÇÃO

A utilização de fitoterápicos, que são medicamentos obtidos a partir de plantas medicinais (Ministério da Saúde, 2016), e suas propriedades farmacológicas está cada vez mais em voga, por conta de cepas resistentes a antibióticos (Roberts, 2002; Breyers & Ratner 2004; Zaura et al.,2015). Sendo assim, o desenvolvimento científico a partir de plantas, óleos, extratos, tinturas está cada vez mais consolidado, tendo em vista que o seu uso associado ao tratamento preventivo poderia ajudar a reduzir e ou prevenir uma série de doenças.

Os óleos essenciais, como o óleo de copaíba, são elementos voláteis contidos em muitos órgãos vegetais e estão relacionados com muitas funções necessárias à sobrevivência vegetal e possuem papel fundamental na defesa contra a ação microbiana nas plantas (Gayoso et al., 2004; Rigamonte Azevedo et al., 2004).

Dos microrganismos colonizadores do biofilme dental o Streptococcus mutans, um dos agentes etiológicos da cárie dental, facilita a colonização de outros microrganismos, inclusive de anaeróbios (Takahash & Nyvad 2011, Ito et al.,2012). Assim, o controle do crescimento do S. mutans também leva a prevenção das doenças periodontais. Desta forma, substancias capazes de inibir sua colonização estariam colaborando na manutenção da saúde bucal (Juiz et al., 2010). Estudos como o de Drumond et al., (2004), Vasconcelos, et al., (2008), Valdevite (2007), Pieri et al.,(2012), Simôes et al., (2016) mostraram, em estudos in vitro, atividade antibacteriana do óleo copaíba frente a esse microrganismo. A atividade do óleo de copaíba, frente s bactérias orais, é atribuída devido a sua composição de terpenos e sesquiterpenos que danificam a integridade da parede celular bacteriana (Santos et al., 2008; dos Santos et al.,2013)

A manutenção da saúde bucal se dá, principalmente, através da remoção mecânica do biofilme (Oppermann et al.,2010). Porém, têm sido cada vez mais usual a orientação para o uso de enxaguatórios bucais após a aplicação de métodos mecânicos de controle do biofilme dentário. A utilização do controle químico dos diferentes biofilmes presentes no ambiente bucal é plenamente justificável face à facilidade de uso e sua comprovada eficiência (Bernimoulin 2003; Teles & Teles, 2009; Zanatta et al., 2007).

15 Desta forma, que quando se pensa em saúde bucal o grande desafio é de manter a saúde dos tecidos periodontais e dentários, porém a recolonização resulta de uma terapia preventiva de manutenção falha e pode acarretar em uma doença recorrente (Arweiler et

al., 2018). Produtos naturais poderiam auxiliar no controle do crescimento do biofilme

dental supra e subgingival (Pedrazzi 2009; Juiz et al.,2010).

O uso de substâncias antimicrobianas poderia tentar compensar a desmotivação para uma boa limpeza mecânica dos dentes (Cury, 1997). Soluções colutórias a base de clorexidina e óleos essenciais possuem ampla documentação e resultados positivos quanto a controle de biofilme e desfechos inflamatórios das gengivas (Van Leeuwen, Slot e Van der Weijden, 2011; Stoeken, Paraskevas e Van der Weijden, 2007) O efeito da clorexidina e a sua propriedade de substantividade torna-a o padrão ouro em eficácia, quando comparado com outros antissépticos. A clorexidina é antisséptica para microrganismos gram-positivos e gram-negativos e para algumas leveduras (Axelsson, 1981; Saleem, Seers, Sabri, & Reynolds, 2016). Porém, efeitos adversos associados ao uso da clorexidina, como: inativação na presença de sulfatos e cálcio (Van Grunsven & Cardoso, 1995), manchamento extrínseco no esmalte dentário, hiperplasia de papilas linguais e perda do sentido da gustação são condições que restringem seu uso, principalmente, no uso prolongado da substância (Ros-Llor & Lopez-Jornet, 2014).

Houve muitos avanços na terapia antimicrobiana, porém a resistência em relação aos patógenos continua a representar um problema clínico sério e crescente. Esse aumento da resistência leva a necessidade de novas pesquisas sobre agentes antimicrobianos (Silveira et al.,2006; D’Costa et al.,2006; Sommer et al.,2009). Embora estudos prévios da literatura descrevam a eficácia antimicrobiana do óleo de copaíba frente a bactérias orais, estudos, principalmente in vivo, devem ampliar e criar uma nova perspectiva para o desenvolvimento de substâncias fitoterápicas, que possam auxiliar na prevenção e tratamento da doença cárie e periodontal.

30 CONSIDERAÇÕES FINAIS

A presente tese objetivou realizar a descrição da ação antimicrobiana do óleo de copaíba frente a bactérias orais.

No Capítulo 1 apresentou-se através de revisão de literatura Diefenbach e Rösing (2018) onde uma busca realizada nas bases de dados disponíveis, especialmente no Pubmed, no intuito de construir um panorama da literatura disponível. Nessa etapa, o foco de interesse residiu em contextualizar sobre o uso de fitoterápicos e avaliar estudos que utilizaram o óleo de copaíba na odontologia. Os resultados desse levantamento mostraram que o óleo de copaíba poderia ser uma alternativa como um agente adicional a ser usado em colutórios ou até mesmo dentifrícios. Assim, construiu-se um panorama da literatura disponível para contextualizar as propostas seguintes, como uma revisão sistemática e pesquisa clínica envolvendo óleo de copaíba frente a bactérias orais.

No Capítulo 2 apresentou-se uma revisão sistemática da literatura Diefenbach et al., (2017), que foi conduzida com o objetivo obter informações mais detalhadas quanto uma real ação antimicrobiana no uso do óleo de copaíba frente a patógenos orais quando comparado a outros fitoterápicos ou a placebo. Os resultados mostraram limitações metodológicas nos estudos, como a não apresentação de dados claros quanto à aleatorização, sigilo de alocação e cegamento dos avaliadores e a análise estatística não fica clara em alguns deles. Salienta-se que todos os estudos publicados em relação a proposta temática são in vitro. As demais características foram adequadamente consideradas, o que sugeriria que os resultados obtidos geram novas proposições de estudos. Observou-se então a necessidade da realização de estudo que empregasse métodos que permitissem avaliar através de testes clínicos a possível ação do óleo de

31 copaíba frente a bactérias da cavidade oral, como forma de prevenção e tratamento da cárie e doença periodontal.

32 REFERÊNCIAS DA TESE

Axelsson, P. (1981) Concept And Practice Of Plaque-Control. Pediatric Dentistry, V. 3, N. Spec, P. 101-112.

Arweiler, N. B., Auschill, T. M. and Sculean, A. (2018), Patient self‐care of periodontal pocket infections. Periodontol 2000, 76: 164-179. doi:10.1111/prd.12152

Breyers, J. D., & Ratner, J. P. (2004). Bioinspired implant materials befuddle bacteria. ASM News, 70, 232–237.

Cury, J.A. Controle Químico Da Placa Dental. (1997) In: Kriger, L. (Coord.). Aboprev: Promoção De Saúde Bucal. São Paulo: Artes Médicas, Cap.7, P.129-40.

Bernimoulin, J. P. (2003). "Recent concepts in plaque formation." J Clin Periodontol 30 Suppl 5: 7-9.

D’Costa, V. M., McGrann, K. M., Hughes, D. W. & Wright, G. D. (2006) Sampling the antibiotic resistome. Science 311, 374–377 (2006)

Diefenbach, A.L., Muniz, F.W.M.G., Oballe, H.J.R., Rösing, C.K.(2017). _{Antimicrobial} Activity of Copaiba Oil (Copaifera Ssp.) On Oral Pathogens: Systematic Review. Phytotherapy Research: ;1–11

Drumond, M. R. S.; Castro, R. D. D.; Almeida, R. V. D. D.; Pereira, M. D. S. V. Et al., (2004). Estudo Comparativo In vitro Da Atividade Antibacteriana De / Produtos Fitoterápicos Sobre Bactérias Cariogênicas. Pesquisa Brasileira Em Odontopediatria E Clínica Integrada, V. 4, N. 1, P. 33-38, jan.-abr.

Gayoso, C., E. Lima, E. Souza, V. Trajano, F. Pereira And I. Lima (2004). "Ação Inibitória Do Óleo Essencial De Cinnamomum Zeylanicum Blume, Α-Pineno E Β-Pineno Sobre Fungos Isolados De Onicomicoses." Jornal Brasileiro De Fitomedicamentos 1(1-4): 25-29. dos Santos, E. C. G., Donnici, C. L., da Silva Camargos, E. R., de Rezende, A. A., de Aguiar Andrade, E. H., Soares, L. A. L., ... & das Graças Almeida, M. (2013). Effects of Copaifera duckei Dwyer oleoresin on the cell wall and cell division of Bacillus cereus. Journal of medical Microbiology, 62(7), 1032-1037.

Grunsven, M. F. V., & Cardoso, E. B. T. (1995). Atendimento Odontológico Em Crianças Especiais. Rev. Assoc. Paul. Cir. Dent, 49(5), 364-70.

Ito, T., Maeda, T., & Senpuku, H. (2012). Roles of Salivary Components in Streptococcus mutans Colonization in a New Animal Model Using NOD/SCID.e2f1-/- Mice. PLoS ONE, 7(2), 1–9.

33 Juiz, P. J. L., Alves, R. J., & Barros, T. F. (2010). Uso De Produtos Naturais Como Coadjuvante No Tratamento Da Doença Periodontal. Revista Brasileira de Farmacognosia, 20(1),134-139. https://dx.doi.org/10.1590/S0102-95X2010000100026 Ministério Da Saúde. Política E Programa Nacional De Plantas Medicinais E Fitoterápicos. Brasília: Ministério Da Saúde, 2016. 190 P. Ibsen 978-85-334-2399-Roberts Mc 2002. Antibiotic Toxicity, Interactions And Resistence Development. Periodontol 2000 28: 280-297.

Oppermann, Rui Vicente, Haas, Alex Nogueira, Villoria, German Eduardo Miguel, Primo, Laura Guimarães, Serra-Negra, Júnia M., Ferreira, Efigênia Ferreira e, & Pannuti, Claudio Mendes. (2010). Proposal for the teaching of the chemical control of supragingival biofilm. Brazilian Oral Research, 24(Suppl. 1), 33-36. https://dx.doi.org/10.1590/S1806-83242010000500006

Pedrazzi, V., Souza, S., Oliveira, R., Cimões, R., & Gusmão, E. (2009). Métodos Mecânicos Para O Controle Do Biofilme Dentário Supragengival. Periodontia, Rio De Janeiro, 19(3), 26-33.

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34 Simões C.C.G., Conde NCO, Venâncio GN, Milério, PS.L.L., Bandeira M F.C.L., Veiga Júnio VF (2016) Antibacterial Activity Of Copaiba Oil Gel On Dental Biofilm. The Open Dentistry Journal, 2016, 10, (Suppl-1, M6) 188-195.

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Valdevite, L. M. Estudo do efeito 'In vitro' de Extrato das folhas e do Óleo-Resina de Copaíba sobre fatores de Virulência De 'Streptococcus Mutans', relacionados à Cárie Dental (2007). Dissertação (Mestrado). Ribeirão Preto: Faculdade De Ciências Farmacêuticas De Ribeirão Preto, Universidade De São Paulo.

Van Leeuwen, M., Slot, D. And Van Der Weijden, G. (2011), Essential oils compared to Chlorhexidine with respect to plaque and parameters of gingival inflammation: A Systematic Review. Journal Of Periodontology, 82: 174-194. Doi:10.1902/Jop.2010.100266.

Vasconcelos, K. R. F.; Veiga Junior, V. F.; Rocha, W. C.; Bandeira, M. F. C. L. Avaliação In vitro Da Atividade Antibacteriana De Um Cimento Odontológico À Base De Óleo-Resina De Copaifera Multijuga Hayne (2008). Revista Brasileira De Farmacognosia, V. 18, N. Supl, P. 733-738.

Zanatta, F. B., Antoniazzi, R. P. and Rösing, C. K. (2007), The Effect of 0.12% Chlorhexidine Gluconate Rinsing on Previously Plaque‐Free and Plaque‐Covered Surfaces: A Randomized, Controlled Clinical Trial. Journal of Periodontology, 78: 2127-2134. doi:10.1902/jop.2007.070090

35 Zaura E., Brandt B.W., Teixeira de Mattos M.J., et al., (2015) Same Exposure but Two Radically Different Responses to Antibiotics: Resilience of the Salivary Microbiome versus Long-Term Microbial Shifts in Feces. mBio 6: e01693-01615. doi: 10.1128/mBio.01693-15

36

ANEXO

1

–

I

P

/

P

G

Data da Coleta 1: ___/___/_______

Como você classificaria a sensação do enxaguatório que você utilizou hoje, em relação ao gosto?

( ) amargo ( ) azedo ( ) salgado ( ) doce

Data da coleta 2: ___/___/_______

Como você classificaria a sensação do enxaguatório que você utilizou hoje, em relação ao gosto?

( ) amargo ( ) azedo ( ) salgado ( ) doce

Data da Coleta 3: ___/___/_______

Como você classificaria a sensação do enxaguatório que você utilizou hoje, em relação ao gosto?

( ) amargo ( ) azedo ( ) salgado ( ) doce

Data da Coleta 4: ___/___/_______

Como você classificaria a sensação do enxaguatório que você utilizou hoje, em relação ao gosto?

( ) amargo ( ) azedo ( ) salgado ( ) doce Participante nº _______

37

ANEXO

2–

I

P

/

ESCALA

HEDÔNICA

Data: .../.../...

Participante: nº_______

Por favor, avalie o colutório que acabou de bochechar utilizando a escala abaixo para descrever o quanto você gostou ou desgostou do produto. Marque a posição da escala que melhor reflita sua opinião. Código da amostra:_______ ( ) Gostei extremamente ( ) Gostei muito ( ) Gostei moderadamente ( ) Gostei ligeiramente ( ) Indiferente ( ) Desgostei ligeiramente ( ) Desgostei moderadamente ( ) Desgostei muito ( ) Desgostei extremamente Comentários:__________________________________________________________________________ ___________________________________________

38 ANEXO A – PARECER DO COMITÊ DE ÉTICA EM PESQUISA DA UNIVERSIDADE FEDERAL DO RIO GRANDE DO SUL (UFRGS)