ATIVIDADE RESPIRATÓRIA DOS LEUCÓCITOS EM TILÁPIAS INOCULADAS COM AEROMONAS HYDROPHILA E TRATADAS
COM PROMETAZINA
SIMONE CRISTINA DA SILVA HRUSCHKA1, PRISCILA COSTA
OCTAVIANO¹, MELQUE FERRARI DE OLIVEIRA¹, VANESSA PAVESI
DE FARIA2, ROBERTO BARBUIO², MARCO ANTONIO ANDRADE DE
BELO³
¹ Graduanda em Medicina Veterinária, Campus Descalvado Universidade Camilo Castelo Branco (UNICASTELO)
² Pós-graduando do Programa em Medicina Veterinária, Campus de Jaboticabal - FCAV-UNESP
³ Professor Doutor do Programa de Pós-Graduação em Medicina Veterinária, Campus de Jaboticabal - FCAV-UNESP
RESUMO
Tendo em vista o papel biológico da histamina sobre a permeabilidade vascular e a escassa literatura deste autacóide em peixes teleósteos, este estudo propõe avaliar a participação da histamina na reação inflamatória aguda em tilápias do Nilo desafiadas com Aeromonas hydrophila, tratadas com anti-histamínico prometazina, através da análise da atividade respiratória dos leucócitos. O método determinou as espécies reativas de oxigênio (ROS) produzidas pelo “Burst” respiratório por meio do ensaio colorimétrico baseado na redução do corante Nitroblue Tetrazolium (NBT). Os resultados demonstram evidências de que a histamina participe da inflamação das tilápias com aumento de ROS na fase mais aguda pós-tratamento com prometazina intra-celomática e com 6 e 12 horas em peixes tratados via intramuscular (efeito tardio), sugerindo aumento na atividade celular de neutrófilos e monócitos no sangue resultantes da diminuição da diapedese por alteração na permeabilidade vascular.
RESPIRATORY ACTIVITY LEUKOCYTE TILAPIA INOCULATED WITH AEROMONAS HYDROPHILA AND TREATED WITH
PROMETHAZINE
ABSTRACT
In view of the biological role of histamine on vascular permeability and scant literature of this autacoid in teleost fish, this study aims to determine the role of histamine in the acute inflammatory response in Nile tilapia challenged with Aeromonas hydrophila inoculum, submitted or not to parenteral treatment with the antihistamine promethazine H1 receptors, by analyzing the respiratory activity of leukocytes, the method consisted in determining the reactive oxygen species produced by the "Burst" breathing through the colorimetric assay based on the reduction of the dye nitroblue tetrazolium (NBT) The results show evidence that histamine participates in the tilapias inflammation with an increase of ROS in more acute post-treatment with intra-coelomic promethazine and 6 and 12 hours for fish treated intramuscularly (delayed effect), suggesting an increase in cellular activity of neutrophils and monocytes in the blood due to the decrease in diapedesis by alteration of vascular permeability.
Key-words: Respiratory Burst, Oerochromis niloticus, Histamine
INTRODUÇÃO:
A biomanipulação dos ecossistemas aquáticos com a maximização dos recursos produtivos traz consigo inúmeros desafios, dentre os quais se destaca o controle sanitário das populações de peixes (Belo et al., 2005). A Aeromonas hydrophila é considerada um patógeno oportunista, responsável por enormes perdas econômicas em tilapiculturas intensivas (Reque et al., 2010). De acordo com Castro et
al. (2014), as infecções bacterianas são agressões biológicas ao organismo dos peixes que respondem através da reação inflamatória na tentativa de diluir, circunscrever e isolar ou destruir o agente agressor. Tendo em vista o papel biológico da histamina sobre a permeabilidade vascular e a escassa literatura deste autacóide em peixes teleósteos, este estudo propõe avaliar a participação da histamina na reação inflamatória aguda em tilápias do Nilo desafiadas com inóculos de
Aeromonas hydrophila, submetidas ou não ao tratamento parenteral
com o anti-histamínico de receptores H1 prometazina.
MATERIAL E MÉTODOS:
84 tilápias do Nilo (peso médio: 100g), oriundas da mesma desova, foram distribuídas aleatoriamente em 12 aquários com capacidade de 250L cada, constituindo três tratamentos: T0: Padrão Fisiológico, T1: Controle (PBS), T2: com prometazina via intramuscular (IM), T3: com prometazina na cavidade celomática (IC). Foram amostrados sete animais por tratamento para análise de atividade respiratória leucocitária realizado em 3, 6 e 12 horas pós desafio, para a avaliação da resposta no tempo, constituindo 12 grupos experimentais, sendo três por tratamento. A administração do anti-histamínico prometazina (Fenergan®) foi realizada no momento do desafio bacteriano, via IM na região dorso-lateral esquerda na dose de 0,5mg/kg de p.v. diluído em solução oleosa na proporção de 1:1 (T2) e na cavidade celomática na mesma dose porém em solução aquosa (T3). Após anestesia com benzocaína, realizou-se a punção de sangue com heparina nos peixes. Uma alíquota de 0,1 mL de sangue heparinizado foi colocada em tubos com 0,1mL de NBT. A solução foi homogeneizada e incubada por 30 min em 25oC. Após esse período, 50 μL da
n,n-dimetil-formamida (DMF, Sigma, St. Louis, MO, USA) e centrifugado a 3000 g por 5 min. O DMF produz a lise da parede celular dos grânulos de formazan e assim libera na solução o corante NBT reduzido. A densidade óptica da solução foi determinada em espectro em comprimento de onda de 540 nm.
RESULTADOS
Para três tratamentos (T1, T2 e T3) foram calculadas as médias dos valores de Burst dos 7 peixes (de cada grupo) após 3, 6 e 12 horas. A média em T1 foi 0.294, 0.217 e 0.380 respectivamente. Em T2, as medições após 3, 6 e 12 horas revelaram médias 0.306, 0.377 e 0.423. Finalmente para T3, obteve-se 0.340, 0.255 e 0.322 após 3, 6 e 12 horas (Figura 1).
Figura 1. Valores observados na análise do “burst respiratório” das tilápias após inoculação com A. hydrophila.
DISCUSSÃO
Os resultados mostraram aumento na produção de espécies reativas de oxigênio (ROS) em peixes tratados com prometazina na cavidade celomática. Tais resultados sugerem podem refletir a atividade de neutrófilos e monócitos presentes na circulação e que não conseguem chegar ao foco inflamado, pois a atividade anti-histamínica
da prometazina pode ter diminuído a permeabilidade vascular. De acordo com Reque et al. (2010), a diminuição da permealidade diminui a diapedese e o acúmulo celular no exsudato. Após 6 e 12 horas, houve um aumento do efeito da prometazina IM, resultando em aumento expressivo da produção de ROS, sendo efeito tardio resultado da lentidão do processo de absorção por esta via, enquanto a administração intra-celomática que é absorvida rapidamente os efeitos caíram 6 e 12 horas após a inoculação com A. hydrophila.
CONCLUSÃO:
Este estudo trouxe evidência de que a histamina participe da inflamação da tilápia, sendo notório a diferença do efeito tardio da prometazina por via intramuscular ou agudo pela administração via intra-celomática, avaliado pela produção de espécies reativas de oxigênio durante a evolução da resposta inflamatória.
REFERÊNCIA
BELO, M. A. A. et al. Effect of Dietary Supplementation with Vitamin E and Stocking Density on Macrophage Recruitment and Giant Cell Formation in the Teleost Fish, Piaractus mesopotamicus. Journal of Comparative Pathology, Vol. 133, 146–154
CASTRO, M.P. et al. Acute aerocystitis in Nile tilapia bred in net cages and supplemented with chromium carbochelate and Saccharomyces cerevisiae. Fish & Shellfish Immunology, v. 36, p. 284-290, 2014.
REQUE, V. R. et al. Inflammation induced by inactivated Aeromonas
hydrophila in nile tilapia fed diets supplemented with Saccharomyces
