UNIVERSIDADE FEDERAL DE PELOTAS Faculdade de Agronomia Eliseu Maciel
Programa de Pós-Graduação em Ciência e Tecnologia de Sementes
Dissertação
Teste de tetrazólio para avaliação de sementes em feijão caupi: concentração do sal e período de coloração.
Bruno Souza Lemos
Bruno Souza Lemos
Teste de tetrazólio para avaliação de sementes em feijão caupi: Concentração do sal e período de coloração.
Dissertação apresentada ao Programa de Pós-Graduação em Ciência e Tecnologia de Sementes da Faculdade de Agronomia Eliseu Maciel da Universidade Federal de Pelotas como requisito parcial à obtenção de título de Mestre em ciências.
Orientador: Paulo Dejalma Zimmer
Coorientadores: Suemar Alexandre Gonçalves Avelar Andreia da Silva Almeida
Universidade Federal de Pelotas / Sistema de Bibliotecas Catalogação na Publicação
L555t Lemos, Bruno Souza
LemTeste de tetrazólio para avaliação de sementes em feijão caupi: concentração do sal e período de coloração. / Bruno Souza Lemos ; Paulo Dejalma Zimmer, orientador ; Suemar Alexandre Gonçalves Avelar, Andreia da Silva Almeida, coorientadores. — Pelotas, 2015.
Lem37 f. : il.
LemDissertação (Mestrado) — Programa de Pós-Graduação em Ciência e Tecnologia de Sementes, Faculdade de Agronomia Eliseu Maciel, Universidade Federal de Pelotas, 2015.
Lem1. Vigna unguiculata L. Walp. 2. Feijão-caupi. 3. Vigor. 4. Sal de tetrazólio. 5. Genótipos. I. Zimmer, Paulo Dejalma, orient. II. Avelar, Suemar Alexandre Gonçalves, coorient. III. Almeida, Andreia da Silva, coorient. IV. Título.
CDD : 633.34 Elaborada por Gabriela Machado Lopes CRB: 10/1842
Bruno Souza Lemos
Teste de tetrazólio para avaliação de sementes em feijão caupi: concentração do sal e período de coloração.
Dissertação aprovada, como requisito parcial, para a obtenção do grau em Mestre em ciências, Programa de Pós-Graduação em Ciência e Tecnologia de Sementes, Faculdade de Agronomia Eliseu Maciel, Universidade Federal de Pelotas.
Data da Defesa: Junho de 2015
Banca Examinadora:
Prof. Dr. Paulo Dejalma Zimmer (UFPel)
Dr. Suemar Alexandre Gonçalves Avelar
Prof. Dr. Tiago Zanatta Aumonde (UFPel)
Dedico a todos que me ajudaram nestes últimos anos e especialmente, aos meus pais e minha querida Laura.
Agradecimentos
À minha mãe Maria, que me incentivou e esteve presente em todas as decisões. Agradeço por ser o meu exemplo de perseverança, comemorar as minhas conquistas e por ter compartilhado os momentos difíceis com o conforto de suas palavras.
Ao meu pai Zé de Paula, pelo exemplo de educação e competência profissional deixados em vida.
A minha companheira Laura, pela ajuda e paciência.
Ao profissional Dr. Suemar, pela disponibilidade de tempo e orientação.
Aos funcionários do laboratório de sementes da APROSMAT, pelo auxílio no trabalho, em especial, a Janice e Márcia.
A Valter Peters da Embrapa Produtos e Mercado, pela receptividade e auxílio nas atividades.
Ao IBG, pela iniciativa de executar cursos e convênios com instituições de ensino.
Resumo
LEMOS, Bruno Souza. Teste de tetrazólio para avaliação de sementes em feijão
caupi: concentração do sal e período de coloração. 2015. 29f. Dissertação
(Mestrado em Ciência e Tecnologia de Sementes) – Programa de Pós Graduação em Ciência e Tecnologia de Sementes, Faculdade de Agronomia Eliseu Maciel, Universidade Federal de Pelotas, Pelotas, 2015.
O incremento da área semeada em safrinha com feijão-caupi (Vigna unguiculata (L.) Walp.), no centro-oeste brasileiro, causou um aumento na demanda de sementes de boa qualidade e alto vigor. O teste de tetrazólio é uma das opções disponíveis para avaliar a qualidade e vigor das sementes e, embora exista metodologia padronizada pelas Regras para Análise de Sementes (Brasil, 2009), a metodologia mostra-se ineficiente sendo necessário adequá-la para obtenção de resultados confiáveis. Dessa maneira, foi conduzido trabalho com o objetivo de estudar diferentes concentrações de sal de tetrazólio e tempo de coloração na avaliação do potencial fisiológico de sementes de feijão-caupi. Utilizaram-se sementes das cultivares BRS Guariba (Classe Branco Liso), BRS Novaera (Classe Branco Rugoso) e BRS Pajeú (Classe Mulato Liso), cada uma representada por um lote, produzido na safrinha de 2014. As sementes foram submetidas ao teste de germinação e classificação do vigor de plântulas. O teste de tetrazólio foi conduzido utilizando três concentrações diferentes de sal de tetrazólio (0,500%, 0,075% e 0,050%) com tempo de exposição de 90 minutos, 150 minutos e 960 minutos. Os dados foram submetidos à análise de variância e, quando apresentaram diferença significativa, as médias foram comparadas pelo teste de Tukey à 5% e submetidas à análise de correlação de Pearson, correlacionando o teste em areia e diferentes tempos e concentrações testados no teste de tetrazólio. Os resultados revelaram que a leitura do teste de tetrazólio é possível nos três tempos de embebição para as três concentrações de solução, exceto na concentração de 0,500% de sal de tetrazólio no tempo de 960 minutos.
Palavras-chave: Vigna unguiculata (L.) Walp.; feijão-caupi; vigor; sal de tetrazólio;
Abstract
LEMOS, Bruno Souza. Tetrazolium test for evaluation of cowpea seeds: salt
concentration and staining period. 2015. 29f. Dissertation (Master of Science and
Seed Technology) - Graduate Program in Science and Seed Technology, Faculty of Agronomy Eliseu Maciel, Federal University of Pelotas, Pelotas, 2015.
The increase in area sown in off-season with cowpea (Vigna unguiculata (L.) Walp.), In the Brazilian Midwest, caused an increase in good quality seed demand and high force. The tetrazolium test is one of the options available to assess the quality and vigor and, although there is standardized methodology by the Rules for Seed Analysis (Brazil, 2009), the methodology proves to be inefficient and it is necessary to adapt it to obtain results reliable. Thus, work was conducted in order to study different tetrazolium salt concentrations and staining time in evaluating the physiological potential of cowpea seeds. They used seeds of BRS Guariba (Class White Smooth), BRS Novaera (White Class Rough) and BRS Pajeú (Class Mulato Straight), each represented by a lot, produced in 2014. The second-crop seeds were submitted to the test germination and seedling vigor classification. The tetrazolium test has been conducted using three different concentrations of tetrazolium salt (0.500%, 0.075% and 0.050%) with exposure time of 90 minutes, 150 minutes and 960 minutes. The data were submitted to variance analysis and when presented significant difference, the means were compared by Tukey test at 5% and subjected to Pearson correlation analysis, correlating the test in sand and different times and concentrations tested in the test tetrazolium . The results showed that the reading of the tetrazolium test is possible in the three soaking times for the three solution concentrations, except in the concentration of 0.500% tetrazolium salt in time of 960 minutes.
Keywords: Vigna unguiculata (L.) Walp .; cowpea; force; tetrazolium salt; genotypes;
Lista de Figuras
Figura 1 Esquema Corte longitudinal de uma semente de soja, mostrando suas estruturas embrionárias... 15
Lista de Tabelas
Tabela 1 Instruções para o Teste de Tetrazólio em Sementes (Brasil, 2009)... 20
Tabela 2 Vigor no teste de tetrazólio (%) em sementes de feijão caupi avaliados utilizando diferentes concentrações de sal de tetrazólio e tempos diferentes de exposição (min) a solução... 22
Tabela 3 Viabilidade no teste de tetrazólio (%) em sementes de feijão caupi avaliados utilizando diferentes concentrações de sal de tetrazólio e tempos diferentes de exposição (min) a solução... 23
Tabela 4 Coeficiente de correlação de Pearson entre o teste de Germinação em Areia e o teste de tetrazólio, em três tempos e três concentrações distintas de sal de tetrazólio... 25
Sumário
1. Introdução... 11
2. Revisão bibliográfica... 13
2.1. Feijão caupi... 13
2.2. Avaliação da qualidade de sementes... 14
2.3. Tetrazólio... 16
2.3.1. Definição e importância do teste de tetrazólio... 17
3. Material e métodos... 19
3.1. Obtenção das amostras... 19
3.2. Teste de tetrazólio... 19
3.3. Teste de germinação... 20
3.4. Classificação de vigor em plântulas... 21
3.5. Análise estatística... 21 4. Resultados e discussão... 22 5. Considerações finais... 26 Referências bibliográficas... Anexos... 27 32
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1. INTRODUÇÃO
O feijão caupi ou feijão-de-corda (Vigna unguiculata (L.) Walp.) é uma leguminosa de grande importância em regiões tropicais e subtropicais, principalmente Brasil, Índia e Nigéria. Sendo uma importante componente alimentar, possuindo alto conteúdo de proteína em seus grãos (AKANDE, 2007). Os maiores produtores e consumidores mundiais são a Nigéria, Níger e Brasil (SINGH, 2002).
Nos últimos anos, a cultura vem despertando o interesse de agricultores da agricultura empresarial, cuja lavoura é totalmente mecanizada. Isto tem levado a uma maior procura por cultivares melhoradas com arquitetura de planta mais moderna, porte mais compacto e mais ereto (FREIRE FILHO, 2006), o que aumenta a demanda por sementes de boa qualidade e de origem comprovada (certificadas e fiscalizadas).
A análise de sementes envolve uma série de métodos para avaliar a qualidade e a identidade de uma amostra retirada de um lote de sementes, e os resultados obtidos tem a finalidade de avaliar o potencial do lote, determinando o seu valor para a semeadura e fornecendo informações para fiscalização do comércio e normatização da produção além de ajudar na identificação de problemas de qualidade e suas causas (TILLMANN; MIRANDA, 2006). O resultado do teste de germinação é o principal indicativo do potencial fisiológico de um lote de sementes, pois tem seu padrão definido pelo Ministério da Agricultura, e a metodologia empregada pelos laboratórios é padronizada nas Regras para Análises de Sementes (BRASIL, 2009), permitindo a obtenção de uma germinação regular e completa dentro do menor período de tempo e resultados reproduzíveis entre laboratórios.
A alta qualidade de sementes é de grande importância, principalmente quanto à germinação uniforme, necessária para garantir um estande ideal de plantas. Por essa razão, sementes de alto vigor constituem-se em elemento básico e fundamental da cultura (MENDONÇA, 2003). Por outro lado, existem diversas outras metodologias, padronizadas e não padronizadas para avaliação do potencial fisiológico das sementes.
Dentre os diversos métodos de avaliação da qualidade de sementes adotados pela indústria de sementes no Brasil, destaca-se o teste de tetrazólio (FRANÇA NETO, 1985; FRANÇA NETO, 1988), por sua rapidez, precisão e também pelo
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grande número de informações fornecidas. Este teste avalia a viabilidade e o vigor dos lotes de sementes, fornecendo o diagnóstico das possíveis causas da redução da qualidade, quais sejam: danos mecânicos, deterioração por umidade e danos de percevejo, problemas estes que mais comumente afetam a qualidade fisiológica da semente de feijão caupi. Porém, além desses danos, os danos de secagem e de estresse hídrico, também podem ser facilmente identificados por esse teste (BARROS; MARCOS FILHO, 1997).
O aumento da demanda de análises de sementes pelo teste de tetrazólio, por produtores tecnificados do centro-oeste, observou ao utilizar a concentração de sal de tetrazólio recomendada pelas Regras de Análises de Sementes (BRASIL, 2009), impossibilitava a leitura dos resultados, pela intensa coloração de trifenilformazan (composto vermelho, estável e não difusível).
Com o desenvolvimento da análise de sementes, tornou-se fundamental estabelecer e padronizar métodos (NOVEMBRE, 1991), e embora o teste de tetrazólio em sementes de feijão caupi tenha metodologia padronizada pelas Regras para Análise de Sementes, verifica-se em laboratório dificuldade de avaliação ao utilizar a concentração de sal de tetrazólio e o tempo recomendados, dificultando a obtenção de resultados confiáveis e reproduzíveis entre laboratórios. Sendo importante ter uma metodologia confiável e adequada para a realização do teste de tetrazólio e reproduzível em diferentes localidades nacionais.
A hipótese desse trabalho é que é possível adequar a metodologia do teste de tetrazólio reduzindo a concentração do sal e o tempo de coloração das sementes. O objetivo do presente trabalho é avaliar a influência de diferentes concentrações de sal de tetrazólio e tempo de coloração no resultado do teste de tetrazólio em sementes de Feijão Caupi.
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2. REVISÃO BIBLIOGRÁFICA
2.1. Feijão Caupi
O feijão-caupi é uma dicotiledônea da família Fabaceae, do gênero Vigna e a espécie Vigna unguiculata (L.) Walp. As primeiras classificações foram em outros gêneros, como Phaseolus e Dolichos. (SELLSCHOP, 1962).
Originário da África, domesticado nos sistemas agrícolas compostos pelo Sorgo e Milheto, predominante nas regiões semiáridas do oeste da África. No Brasil o Feijão Caupi foi introduzido no século XVII, pelos colonizadores portugueses, espanhóis e escravos africanos, provavelmente onde se localiza o estado da Bahia, e a partir do século XVIII, foi levado por colonizadores nordestinos para a região norte do Brasil (ARAUJO, 1982). Após 1865, novas sementes foram trazidas para o estado de São Paulo, por colonos americanos. Devido a introduções em diferentes épocas e locais do país, e possível observar a grande diversidade de cultivares.
Sua cultura é pouco exigente em fertilidade do solo e apresenta boa capacidade de fixar nitrogênio atmosférico, através da simbiose com bactérias do gênero Rhizobium (ANDRADE JUNIOR, 2003). É cultivado principalmente, para a produção de grãos, sendo uma ótima fonte de proteínas de qualidade, bem como fonte de carboidratos, vitaminas, sais minerais, fibras dietéticas e baixo teor de gordura, podendo ser consumido por todas as populações em todas as faixas etárias, também e utilizado como adubo verde e na alimentação animal como forragem e ensilagem ou feno (FREIRE FILHO, 2005).
Por muito tempo foi uma cultura de subsistência em que agricultores de pequeno porte cultivavam em ambientes não adequados com a utilização restrita de insumos tecnológicos. Nos Cerrados Brasileiros, principalmente quando cultivado em forma de safrinha, o Feijão Caupi tem um custo muito competitivo, fator que contribui para o aumento de interesse dos produtores pela cultura, além da produção com alta qualidade e boa aceitabilidade por comerciantes, distribuidores e consumidores, com exportação do produto a mais de seis países (FREIRE FILHO;
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2011). A cultura do Feijão Caupi contribui com 35,6 % da área plantada e 15 % da produção de feijão total (Feijão Caupi + Feijão Comum) no país (JACKSON; 2010).
Dados disponíveis na FAO (2009) sobre a produção mundial de Feijão Caupi, indicam que no ano de 2007, a cultura atingiu 3,6 milhões de toneladas produzidas em 12,5 milhões de hectares. Produzido em 36 países, destacando-se entre os maiores produtores a Nigéria, o Níger e o Brasil, representando 84,1 % da área e 70,9 % da produção mundial. (JACKSON, 2010).
Anualmente, em média, foram produzidas 482 mil toneladas em 1,3 milhão de hectares no Brasil. A produtividade média do Feijão Caupi, é baixa (366 kg há-1), em função do baixo nível tecnológico empregado no cultivo. No entanto, estados como Amazonas, Goiás, Mato Grosso do Sul e Mato Grosso apresentam produtividades superiores a 1.000 kg há-1, consideradas altas produtividades em função, principalmente, do uso de tecnologias que propiciam a cultura à expressão do seu potencial produtivo. (JACKSON, 2010)
A partir de 2008 com o aumento de interesse de produtores mato-grossenses, a Embrapa passou a pesquisar nova cultivares adaptadas as condições locais de produção em safrinha, com a instalação de unidades demonstrativas (UDs) e unidades de valor de Cultivo e Uso (VCU), na região do município de Primavera do Leste. Assim, a seleção de genótipos com arquitetura de planta adequada ao cultivo de forma mecanizada, tem recebido muita atenção por parte dos melhoristas no sentido de disponibilizar cultivares eretas, com ramos mais curtos e resistentes ao acamamento. Com grandes áreas plantadas em safrinha, houve um incremento ao consumo de sementes de boa qualidade com origem comprovada (certificadas e fiscalizadas).
2.2. Avaliação da qualidade de sementes
A alta qualidade de sementes é de grande importância, principalmente quanto à germinação e emergência uniformes, necessárias para garantir um estande ideal de plantas. Por essa razão, sementes de alto vigor constituem-se em elemento básico e fundamental da cultura (MENDONÇA, 2003).
Para avaliar a qualidade das sementes, alguns testes vêm sendo recomendados. O teste de germinação tem sido utilizado para determinar a
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capacidade das sementes de produzirem plântulas normais, sob condições favoráveis de ambiente (CARVALHO; NAKAGAWA, 2000).
Segundo Carvalho (2006), existem limitações para demonstrar o desempenho do lote em condições de campo. Marcos Filho (1999) relatou que, quando as condições de ambiente desviam-se das mais adequadas, a avaliação do vigor é necessária para estimar o potencial de desempenho das sementes. Os testes de vigor devem ser escolhidos de maneira a atender os objetivos específicos, completando as informações obtidas no teste de germinação.
De acordo com as Regras de Análise de Sementes (Brasil, 2009), considera-se germinada toda a considera-semente que, pelo deconsidera-senvolvimento das estruturas esconsidera-senciais de seu embrião (FIGURA 1), mostre sua capacidade para gerar uma planta normal, sob condições ambientais favoráveis. Porém, ao avaliar a qualidade de um lote de sementes, devem-se levar em consideração os fatores edafoclimáticos, pois, no processo de germinação ocorre uma série de atividades metabólicas, baseadas em reações químicas e apresentando exigências quanto à temperatura e à disponibilidade de oxigênio (MARCOS FILHO, 1986). Além da necessidade de padronização de métodos e interpretação dos resultados, os testes de vigor devem apresentar relação com a emergência de plântulas em campo, rapidez, objetividade, simplicidade, baixo custo e reprodutibilidade (AOSA, 1983).
Figura 01 – Esquema Corte longitudinal de uma semente de soja, mostrando suas estruturas embrionárias.
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Para que tais requisitos sejam alcançados, o sistema de controle de qualidade na indústria de sementes deve ser ágil, versátil e confiável, fornecendo resultados precisos e de maneira rápida. Algumas determinações, como pureza física e varietal, grau de umidade e índice de danos mecânicos podem ser realizadas em apenas alguns minutos, suprindo, parcialmente, tais exigências (FRANÇA NETO, 1997).
A demora na obtenção dos resultados de germinação resulta numa séria limitação ao processo de tomada de decisões na indústria de sementes. Além da demora em sua execução, o teste de germinação, na sua forma de avaliação tradicional, não fornece informações quanto ao vigor não permitindo de maneira precisa a identificação dos fatores que afetam a qualidade das sementes com seus resultados frequentemente mascarados pela ocorrência de danos de embebição (FRANÇA NETO, 1997) e pela presença de fungos como Phomopsis spp. e
Fusarium semitectum (HENNING; FRANÇA NETO, 1980; FRANÇA NETO; WEST,
1989). Tais limitações podem resultar em sérios prejuízos aos produtores de sementes por afetar negativamente a tomada de decisões ao destino de lotes.
2.3 Tetrazólio
Dentre os diversos testes para determinação do potencial fisiológico de um lote de sementes adotado pelo controle de qualidade da indústria sementeira no Brasil, o teste de tetrazólio tem se destacado, devido à sua rapidez, precisão e também pelo grande número de informações fornecidas pelo mesmo (FRANÇA NETO 1985; FRANÇA NETO, 1988). O teste, além de avaliar a viabilidade o vigor dos lotes de sementes, fornece o diagnóstico das possíveis causas responsáveis pela redução de sua qualidade: danos mecânicos, deterioração por umidade e danos de percevejo, que são os principais problemas que mais afetam a qualidade fisiológica das sementes.
Porém, além desses, os danos de secagem e de estresse hídrico podem também ser facilmente visualizados pelo teste (BARROS; MARCOS FILHO, 1997). O fornecimento desse diagnóstico em pouco tempo tem sido o grande responsável pela adoção do teste em nosso país, pois, além de apontar os problemas de redução de qualidade das sementes, o teste, quando aplicado nas diversas etapas
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do sistema de produção, pode identificar os pontos de origem desses problemas, permitindo que ações corretivas sejam adotadas, resultando na obtenção de sementes de alta qualidade.
A utilização do teste de tetrazólio repercute não apenas com relação aos aspectos quantitativos, mas principalmente, quanto aos qualitativos, pois quando realizado em conjunto com outros testes, tem propiciado a comercialização dos lotes que efetivamente apresentem bons padrões de qualidade. Isto tem resultado num sistema de controle de qualidade de alta confiabilidade, assegurando maiores lucros aos produtores de sementes, através da produção de sementes de alta qualidade a menor custo. Segundo França Neto (1997), informações constantemente recebidas de diversos produtores de sementes, com o auxilio da análise de tetrazólio, tem resultado em índices próximos de zero de reposição de sementes e de ressemeadura.
2.3.1 Definição e Importância do Teste de Tetrazólio.
O teste de tetrazólio baseia-se na atividade das enzimas desidrogenases (AOSA, 1983; BULAT, 1961; COPELAND, 1959; MOORE, 1973; SMITH, 1952; SMITH; THONEBERRY, 1951) as quais catalisam as reações respiratórias nas mitocôndrias, durante a glicólise e o ciclo de Krebs. Estas enzimas, particularmente a desidrogenase do ácido málico, reduzem o sal de tetrazólio (2,3,5-trifenil cloreto de tetrazólio ou TCT) nos tecidos vivos. Quando a semente é imersa na solução incolor de TCT, esta é difundida através dos tecidos, ocorrendo nas células vivas a reação de redução que resulta na formação de um composto vermelho, estável e não difusível, conhecido por trifenilformazan.
Quando o TCT é reduzido, formando o trifenilformazan, isto indica que há atividade respiratória nas mitocôndrias, significando que há viabilidade celular e do tecido. Portanto, a coloração resultante da reação é uma indicação positiva da viabilidade através da detecção da respiração a nível celular, tecidos não viáveis não reagem e consequentemente não são coloridos (FRANÇA NETO, 1997).
Conforme Moore (1985), o teste possui três objetivos básicos: a) determinar o potencial de germinação de um lote de sementes sob as condições mais ideais possíveis; b) categorizar as sementes em diferentes classes de viabilidade; e c)
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diagnosticar as possíveis causas que resultam na perda de viabilidade das sementes. Os dois primeiros objetivos podem ser alcançados pela interpretação de quatro características básicas: condição e cor dos tecidos após a coloração, pela localização e pelo tamanho das lesões. A habilidade do analista de sementes em reconhecer os sintomas típicos dos diferentes tipos de danos que podem ocorrer nas sementes é imperativo para a obtenção do diagnóstico correto das causas de perda de viabilidade.
Para Moore (1985), tecidos vigorosos tendem a colorir gradualmente e uniformemente e, quando embebidos, apresentam-se túrgidos. A ocorrência de vermelho intenso é característica de tecidos em deterioração, que permitem uma maior difusão da solução de tetrazólio através de suas membranas celulares já comprometidas. Quando expostos ao ar, tais tecidos perderão a turgidez mais rapidamente que os tecidos vigorosos. O branco identifica tecidos mortos, que não apresentam a atividade enzimática necessária para a produção do trifenilformazan. Tecidos mortos normalmente são flácidos e apresentam a coloração branco-opaca, mas podem ser amarelados, cinzentos ou esverdeados, principalmente quando sofreram danos causados por percevejos. Em algumas raras situações, tecidos mortos podem apresentar manchas avermelhadas, causadas por atividades de certos fungos ou bactérias. Entretanto, tais tecidos são facilmente diferenciados de tecidos viáveis, por serem extremamente flácidos e friáveis.
Segundo Bhering (1999), os resultados do teste de tetrazólio podem diferir dos resultados obtidos em condições de campo, mas normalmente, os altos valores obtidos no teste de tetrazólio têm correspondido à elevada germinação das sementes e emergência de plântulas em campo.
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3. Material e Métodos
3.1. Obtenção das Amostras.
O trabalho foi conduzido no laboratório de sementes da Associação dos Produtores de Sementes de Mato Grosso (APROSMAT), utilizando-se de três lotes de sementes de categoria Básica das respectivas cultivares e classes: BRS Guariba (Classe Branco Liso), BRS Novaera (Classe Branco Rugoso) e BRS Pajeú (Classe Mulato Liso). As sementes foram produzidas por agricultor tecnificado na safrinha 2014, no município de Primavera do Leste/MT na sequência da lavoura de soja, colhidas e beneficiadas em Maio de 2014, armazenadas em câmera fria em sacaria de papel multifoliado até outubro, onde se iniciou os testes.
3.2. Teste de Tetrazólio
A realização dos testes de tetrazólio foi baseada na metodologia do Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento (MAPA), que publicou em 2009 o manual de Regras para Análise de Sementes (Brasil, 2009), (Tabela 1). Para verificar a melhor configuração de concentração de sal de tetrazólio e tempo de embebição foram testados os tratamentos de concentração 0,500%, 0,075% e 0,050% de TZ e período de coloração de 90, 150 e 960 minutos.
Para cada repetição, quatro subamostras de 50 sementes foram pré-condicionadas entre papel de germinação, umedecido com 2,5 vezes a massa (g) do papel em água destilada, dobrado em quatro e colocado dentro de sacos plásticos para manter a umidade, por 22 horas a 25ºC (Brasil, 2009). Após esse período as amostras foram colocadas em copos plásticos e imersas em solução de tetrazólio nas concentrações de 0,050%, 0,075% e 0,500%, mantidas em câmera de germinação a 30ºC pelo tempo determinado de acordo com o tratamento. Realizada
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a coloração, a solução de tetrazólio foi drenada e as sementes lavadas em água corrente para estacionar o processo.
Após a coloração as sementes foram cortadas no sentido longitudinal, através do eixo embrionário (Brasil; 2009). As duas metades foram individualmente examinadas e, de acordo com a extensão, intensidade dos tons avermelhados, presença de áreas brancas leitosas, aspecto dos tecidos e localização destas colorações em relação às áreas essenciais ao crescimento, foram dadas notas de 1 a 8 onde sementes com notas de 1 a 5 foram incluídas na categoria viabilidade e sementes com notas de 1 a 3 foram incluídas na categoria vigor, com os resultados expressos em porcentagem.
Tabela 1 – Instruções para o Teste de Tetrazólio em Sementes (BRASIL, 2009).
Condição Entre papel com água
Pré-umedecimento Tempo (h) 22
Temperatura (ºC) 25
Preparação/Coloração Semente Intacta
Coloração
Solução (%) 0,5; 1,0
Tempo (h) 16-24
Temp. (ºC) 30
Avaliação ½ da ponta da radícula. ½ dos coltilédones oposto a zona de inserção do eixo hipocótilo-radicula ou ao longo da borda dos cotilédones. ¼ da plúmula a partir da extremidade distal.
Observação Se houver necessidade de determinar a viabilidade das sementes duras, esta pode ser feita por uma punção no tegumento, durante o pré-humedecimento. Fonte: Regras para Análise de Sementes, 2009.
3.3. Teste de Germinação
No teste de germinação foram analisadas 400 sementes em quatro repetições de 100 sementes (BRASIL; 2009). As sementes foram semeadas entre substrato areia em duas bandejas. A areia foi umedecida com um volume de água destilada levando a cerca de 60% de retenção de água a massa da areia seca. Após a semeadura as sementes foram levadas para um germinador de sala com temperatura de 25 a 30ºC conforme recomendação para a espécie (BRASIL; 2009). A contagem realizada cinco dias após a incubação, sendo os resultados expressos em porcentagem de plântulas normais.
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3.4. Classificação de vigor em plântulas
O objetivo deste teste é determinar o vigor relativo do lote avaliando, o percentual de plântulas normais fortes (Anexo A), obtido pela classificação das plântulas normais do teste de germinação (NAKAGAWA, 1999).
O teste de classificação de vigor de plântulas é baseado no teste padrão de germinação, portanto os equipamentos e os materiais necessários são os mesmos empregados e descritos nas Regras para Análise de Sementes (BRASIL, 2009), para a avaliação da germinação.
Na avaliação do teste de germinação, as plântulas são separadas em duas categorias, as plântulas normais e as plântulas anormais, sendo estas descritas com detalhe nas Regras para Análise de Sementes (BRASIL, 2009). Para classificação do vigor de plântulas, as plântulas normais foram divididas em Plântulas normais fortes e plântulas normais fracas com os resultados expressos em porcentagem de plântulas fortes.
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3.5. Análise Estatística
O delineamento experimental foi em blocos casualizados (considerando cada bloco como uma cultivar diferente), no esquema fatorial 3 x 3 (concentração da solução x tempo de coloração). Para cada bloco foram utilizadas 3 repetições, 9 repetições por tratamento e 81 unidades experimentais (parcelas). As médias foram submetidas ao teste de variância e quando significativa foram testadas pelo Teste de Tukey a 5% de probabilidade.
Após a análise os resultados de vigor e viabilidade no teste de tetrazólio foram correlacionados com o teste de germinação em areia e classificação do vigor de plântulas, utilizando o coeficiente de correlação de Pearson (r).
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4. Resultado e Discussão
Os resultados do teste de tetrazólio demonstraram interação significativa entre concentração e o tempo de exposição a solução tanto para vigor quanto para viabilidade (Tabelas 2 e 3).
É possível observar que a solução utilizando a concentração de sal de tetrazólio de 0,500% apresentou resultado inferior para o vigor em relação as demais concentrações independente do tempo de exposição, enquanto que a concentração de 0,075% apresentou vigor inferior a concentração de 0,050% no tempo de exposição de 960 minutos (Tabela 2). Não houve diferença para o vigor em relação ao tempo de exposição na concentração de 0,050%.
Tabela 2 - Vigor no teste de tetrazólio (%) em sementes de feijão caupi avaliados utilizando diferentes concentrações de sal de tetrazólio e tempos diferentes de exposição (min) a solução.
Concentração de sal de Tetrazólio (%)
Tempo de exposição a solução de sal de tetrazólio (minutos)
90´ 150´ 960´
0,050 79Aa* 78Aa* 76Aa*
0,075 79Aa* 75Aab* 70Bb*
0,500 61Ba* 66Ba* 0Cb*
Cv% 8,69
*: Médias seguidas pela mesma letra maiúsculas na coluna (tempo) e minúsculas na linha (concentração) não diferem entre si pelo Teste de Tukey a 0,05 de significância.
Da mesma forma que o vigor, para viabilidade no teste de tetrazólio, a concentração 0,050% apresentou resultado superior em relação as concentração de 0,500% (90 e 960 minutos) (Tabela 3). A concentração de 0,075% não apresentou diferença significativa em nenhum dos tempos de exposição testados. No tempo de 150 minutos não houve nenhuma diferença significativa nas três concentrações testadas. Em relação ao tempo, a concentração de 0,500% apresentou valor inferior quando o tempo de exposição foi de 960 minutos, não havendo diferença para as demais concentrações.
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Tabela 3 -Viabilidade no teste de tetrazólio (%) em sementes de feijão caupi avaliados utilizando diferentes concentrações de sal de tetrazólio e tempos diferentes de exposição (min) a solução.
Concentração de sal de Tetrazólio (%)
Tempo de exposição à solução de sal de tetrazólio (minutos)
90´ 150´ 960´
0,050 87Aa* 86Aa* 85Aa*
0,075 84Aba* 83Aa* 82Aa*
0,500 80Ba* 81Aa* 0Bb*
Cv% 6,50
*: Médias seguidas pela mesma letra maiúsculas na coluna (tempo) e minúsculas na linha (concentração) não diferem entre si pelo Teste de Tukey a 0,05 de significância.
Pelos resultados apresentados é possível observar que a concentração de 0,050% do sal de Tetrazólio nos tempos de 90, 150 e 960 minutos, não apresentaram diferença significativa tanto para vigor e viabilidade, em todos os tratamentos testados. A concentração de 0,075% apresentou diferença significativa para o vigor após 960 minutos de exposição, enquanto que a concentração de 0,500% apresentou diferença significativa para o vigor em todos os tempos testados, mas para viabilidade não houve diferença significativa no tempo de exposição de 150 minutos em relação aos demais tratamentos.
É possível verificar nos Anexos a diferença de intensidade de coloração nos diferentes tempos de exposição e diferentes concentrações, onde nota-se que a tonalidade final obtida pode afetar a capacidade de leitura do analista. A alta intensidade de coloração na concentração de 0,500% a 960 minutos (Anexo F) impossibilitou a análise das sementes pelo analista, o que discorda das recomendações da Regras de Análises de Sementes 2009 (BRASIL, 2009), no qual a menor concentração da solução recomendada é de 0,500 % por 960 minutos de embebição, e dos resultados obtidos por Bezerra (2013), que conseguiram analisar pelo teste de tetrazólio cultivares crioulas de Feijão Caupi utilizando solução com concentração de 0,500% do sal após 1440 minutos de exposição a solução.
Por outro lado, estes resultados estão de acordo com Marcos Filho (1987), onde as cores mais escuras nas sementes refletiram o aumento gradativo da concentração da solução de tetrazólio e do período de coloração, e quanto mais escura a cor da semente, maior foi a dificuldade de visualização dos tecidos e a identificação das injúrias, podendo confundir tecidos vivos com aqueles em deterioração. Wetzel (1992) também verificaram problemas de avaliação do teste de tetrazólio na concentração da solução de 1,0% para sementes de seringueira.
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Na análise de correlação de Pearson (Tabela 4), correlacionando os resultados do teste de germinação em areia, classificação do vigor de plântulas com os resultados do teste de tetrazólio (vigor e viabilidade) com tempos de 90, 150 e 960 minutos e concentrações de sal de tetrazólio de 0,050%, 0,075% e 0,500%, pode-se observar que houve correlação positiva significativa entre os testes, com exceção da 0,500% a 960 minutos, no qual não há interação linear, devido a dificuldade de avaliação das sementes nesse tratamento. Podemos observar, que a correlação entre o teste na areia e o tetrazólio na concentração de 0,500% nos tempos de 90 e 150 minutos, e no tempo de 960 minutos nas concentrações de 0,050% e 0,075%, estão no nível de significância de 1% para viabilidade e vigor.
Considerando-se o vigor e a viabilidade na seleção dos tratamentos (Tabela 2 e Tabela 3), aliada à correlação com os testes de germinação em areia e o teste de classificação do vigor de plântulas (Tabela 4), é possível afirmar que os melhores resultados foram obtidos com a imersão das sementes em solução de tetrazólio a 0,050%, 0,075 e 0,500% por 90 e 150 minutos. Neste tratamento a maioria das sementes apresentou-se com uma coloração de fácil visualização para o analista, de tom rosa claro variando a vermelho escuro de acordo o nível de dano da semente, portanto essas poderiam ser sugeridas como padrões para o teste de tetrazólio em sementes de Feijão Caupi. Por outro lado, devido à grande dificuldade proporcionada ao analista pelo tratamento utilizando a concentração a 0,500% no tempo de 960 minutos de embebição para identificação dos tipos de danos sofridos pelas sementes, não destituindo tecidos saudáveis de tecidos injuriados devida a intensa coloração, não se recomenda a utilização dessa metodologia na condução do teste de tetrazólio para análise de sementes de Feijão Caupi. Pesquisas realizadas com sementes de outras espécies também têm mostrado que soluções menos concentradas que as prescritas pelas Regras para Análise de Sementes (Brasil, 2009) têm possibilitado melhores resultados (BITTENCOURT; VIEIRA, 1997; FRANÇA NETO, 1998; DIAS; BARROS, 1999; BHERING, 2005).
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Tabela 4 – Coeficiente de correlação de Pearson entre o teste de Germinação em Areia e o teste de tetrazólio, em três tempos e três concentrações distintas de sal de tetrazólio.
Tempo Concentração (%) Parâmetro Vigor Viabilidade Fortes Germinação
90 0,05 Vigor 1 0,95** 0,71* 0,86** Viabilidade 1 0,57NS 0,78* Fortes 1 0,93** Germinação 1 0,075 Vig. 1 0,97** 0,74* 0,89** Viab. 1 0,66NS 0,86** Fort. 1 0,92** Germ. 1 0,5 Vig. 1 0,80** 0,85** 0,93** Viab. 1 0,73* 0,89** Fort. 1 0,92** Germ. 1 150 0,05 Vig. 1 0,95** 0,66NS 0,85** Viab. 1 0,58NS 0,81** Fort. 1 0,93** Germ. 1 0,075 Vig. 1 0,95** 0,74* 0,90** Viab. 1 0,52NS 0,77* Fort. 1 0,93** Germ. 1 0,5 Vig. 1 0,91** 0,81** 0,92** Viab. 1 0,65NS 0,85** Fort. 1 0,92** Germ. 1 960 0,05 Vig. 1 0,98** 0,86** 0,94** Viab. 1 0,76* 0,88** Fort. 1 0,93** Germ. 1 0,075 Vig. 1 0,94** 0,79* 0,88** Viab. 1 0,68* 0,83** Fort. 1 0,93** Germ. 1 0,5 Vig. 1 0NC 0NC 0NC Viab. 1 0NC 0NC Fort. 1 0,92** Germ. 1
** Correlação e significativa ao nível de 1% *Correlação e significativa ao nível de 5% NC = Correlação não Significativa.
Portanto, sugere-se para o teste rápido de Tetrazólio realizado nas fazendas ou unidades básicas de beneficiamento de sementes (UBS) a concentração de 0,075% de Sal de Tetrazólio a um tempo de embebição de 90 minutos está adequada para utilização, devido a necessidade de rapidez na tomada de decisão
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nestes locais, e esta ser a mesma concentração utilizada na cultura da soja, pois neste locais geralmente produzem e beneficiam soja, facilitando o processo de tomada de decisão dos gestores. Nos Laboratórios de Análise de Sementes, recomenda-se a concentração de 0,050% de Sal de Tetrazólio a um tempo de embebição de 90 minutos, representando uma redução nos custos da análise devido ao elevado valor do Sal de Tetrazólio. Para trabalhos científicos utilizar a concentração de 0,500% de sal de Tetrazólio no tempo de 90 minutos de embebição, pois este apresenta no nível de significância de 1% para germinação e vigor.
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5. Considerações Finais.
A análise e leitura do teste tetrazólio para verificar vigor e viabilidade das sementes, e possível nos tempos 90 e 150 minutos de embebição nas soluções de concentrações 0,050%, 0,075% e 0,500%.
Para o tempo de 960 minutos a leitura é possível apenas nas concentrações de 0,050% e 0,075%, não sendo possível a leitura no tempo de 960 minutos na concentração de 0,500%.
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Referências Bibliográficas
AKANDE, S.R. Interação genótipo- ambiente para caupi rendimento e doenças reações de sementes na floresta derivado da savana agro-ecológicas do sudoeste da Nigéria. American- Eurasian Journal de Agricultura e Meio Ambiente Ciência, v.2, p.163-168, 2007.
AÑEZ, L. M. M.; COELHO, M. F. B.; ALBUQUERQUE, M. C. F. MENDONÇA, E. A. F.; DOMBROSKI, J. L. D. Padronização da metodologia do teste de tetrazólio para sementes de Jatropha elliptica M. Arg. (Euphorbiaceae). Revista Brasileira Plantas
Medicinais, Botucatu, v. 9, n. 3, p. 82 – 88, 2007.
ANDRADE JUNIOR, A. S. Cultivo de Feijão-caupi. Embrapa Meio-Norte, Piauí, Teresina, jan. 2003.
Associação Brasileira de Tecnologia de Sementes, Comitê de Vigor de Sementes.
Vigor de sementes: conceitos e testes. Londrina: ABRATES 1, 1999. 218p.
ASSOCIATION OF OFFICIAL SEED ANALYSTS. Seed vigor testing handbook.
Handbook on seedtesting. Contribuition, 32. AOSA, 1983. 88p.
BARROS, D. I.; DIAS, D. C. F. S. dos; BHERING, M. C.; DIAS, L. A. S. dos;
ARAÚJO, E. F. Uso do teste de tetrazólio para avaliação da qualidade fisiológica de sementes de abobrinha. Revista Brasileira de Sementes, Brasília, v. 27, n. 2, p. 165 – 171, 2005.
BARROS, A. S. R.; MARCOS FILHO, J. Testes para avaliação rápida do vigor de sementes de soja. Revista Brasileira de Sementes, Brasília, v. 19, n. 2, p. 288 - 294. 1997.
BATISTA, N. A. S.; LUZ, P. B. da; SOBRINHO, S. P. de; NEVES, L. G. N.; KRAUSE, W. Avaliação da qualidade fisiológica de sementes de feijão – caupi pelo teste de condutividade elétrica. Revista Ceres, Viçosa, v. 59, n. 4, p. 550 – 554, 2012.
BENVINDO, R.N. Avaliação de genótipos de feijão – caupi de porte semi –
prostrado em cultivo de sequeiro e irrigado. 2007. 69 f. Dissertação (Mestrado
em Produção Vegetal) – Centro de Ciências Agrárias, Universidade Federal do Piauí, Teresina, 2007.
BHERING, M.M.; DIAS, D.C.F.S.; BARROS, D.I. Adequação da metodologia do teste de tetrazólio para avaliação da qualidade fisiológica de sementes de melancia.
Revista Brasileira de Sementes, Brasília, v.27, n.1, p.176-182, 2005.
BHERING, M. C.; SILVA, R. F.; ALVARENGA, E. M.; DIAS, D. C. F. S. Metodologia
do teste de tetrazólio em sementes de feijão. In: KRYZANOWSKI, F. C.; VIEIRA,
R. D.; FRANÇA NETO, J. B. (Ed.). Vigor de sementes: conceitos e testes. Londrina: ABRATES, 1999. P.8.3-1 - 8.3-10.
30
BITTENCOURT, S.R.M.de; VIEIRA, R.D. Metodologia do teste de tetrazólio em
sementes de amendoim. In: KRZYZANOWSKI, F.C.; VIEIRA, R.D.; FRANÇA
NETO, J.B. Vigor de sementes: conceitos e testes. Londrina: ABRATES, 1999. cap.8, p.2.1-2.8
BRASIL. Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento. Regras para análise
de sementes. Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento. Secretaria de
Defesa Agropecuária. Brasília, DF: MAPA/ACS, 2009. p. 395.
CARVALHO, J.F. Avaliação de cultivares de feijão – caupi e feijão – vagem
arbustivo em sistema orgânico de produção. 2012. 86 f. Dissertação (Mestrado
em Produção Vegetal) – Centro de Ciências e Tecnologias Agropecuárias, Universidade Estadual do Norte Fluminense, Campos dos Goytacazes, 2012.
CARVALHO, N.M.; NAKAGAWA, J. Sementes: ciência, tecnologia e produção. 4ed. Jaboticabal: FUNEP, 2000, 588p.
COSTA, N. P.; FRANÇA-NETO, J. B.; KRZYZANOWSKI, F. C.; HENNING, A. A.; OLIVEIRA, M. C. N. Procedimento alternativo no teste de tetrazólio em sementes de soja. Pesquisa Agropecuária Brasileira, v. 33, n. 6, p. 869 - 877, 1998.
CRUZ, N. A. de A.; SANTOS, A. P. dos; FREIRE FILHO, F. R.; RIBEIRO, V.Q.; ROCHA, M. de M. Persistência e uniformidade da cor verde em grãosde
feijão-caupi. In: CONGRESSO NACIONAL DE FEIJAO-CAUPI, 2006, Teresina.
Tecnologias para o Agronegocio. Teresina: Embrapa Meio-Norte, 2006.
DUTRA, A. S.; TEÓFILO, E. M. Envelhecimento acelerado para avaliar o vigor de sementes de feijão caupi. Revista Brasileira de Sementes, Brasília, v. 29, n. 1, p. 193 – 197, 2007.
DONÇA, M.C.B. Seleção precoce para caracteres dos grãos no melhoramento
do feijão – caupi. 2012. 102 f. Dissertação (Mestrado em Genética e Melhoramento
de Plantas) – Programa de Pós-Graduação em Genética e Melhoramento de Plantas, Universidade Federal de Lavras, Lavras, 2012.
DIAS, M.C.L.L.; BARROS, A.S.R. Metodologia do teste de tetrazólio em sementes de milho. In: KRZYZANOWSKI, F.C.; VIEIRA, R.D.; FRANÇA NETO, J.B. (Ed.).
Vigor de sementes: conceitos e testes. Londrina, ABRATES, 1999. cap. 8.4,
p.1-10.
FRANÇA NETO, J.B.; KRZYZANOWSKI, F.C.; COSTA, N.P. da. O teste de
tetrazólio em sementes de soja. Londrina: EMBRAPA-CNPSo, 1998. 72p.
(Embrapa- CNPSo. Documentos, 116).
FRANÇA NETO, J.B.; PEREIRA, L.A.G.; COSTA, N.P. Metodologia do teste de tetrazólio em sementes de soja. In: FRANÇA NETO, J.B.; HENNING, A.A.
Diagnóstico completo da qualidade da semente de soja – Versão Preliminar.
31
FRANÇA NETO, J.B.; PEREIRA, L.A.G.; COSTA, N.P.; KRZYZANOWSKI, F.C.; HENNING, A.A. Metodologia do teste de tetrazólio em semente de soja. Londrina: EMBRAPA-CNPSo, 1988. 58p. (EMBRAPA-CNPSo. Documentos, 32). FRANÇA NETO, J.B.; KRZYZANOWSKI, F.C.; HENNING, A.A.; COSTA, N.P.
Avaliação da suscetibilidade de cultivares de soja ao dano de embebição no teste padrão de germinação. Informativo ABRATES, Campinas, v.7, n.1/2, p.127,
1997. (Resumo apresentado no X Congresso Brasileiro de Sementes, Foz do Iguaçu).
FRANÇA NETO, J. B.; KRZYZANOWSKI, F. C.; COSTA, N. P. Metodologia do teste de tetrazólio em sementes de soja. In: KRZYANDWSKI, F. C.; VIEIRA, R. D.;
FRANÇA-NETO, J. B. (Ed). Vigor de sementes: conceitos e testes. Londrina: ABRATES, 1999. p. 8.51-8.528.
FILHO, C.H.A.M. Análise genética de caracteres relacionados à arquitetura de
planta em feijão – caupi (Vigna unguiculata (L.) Walp.). 2006. 70 f. Dissertação
(Mestrado em Produção Vegetal) – Centro de Ciências Agrárias, Universidade Federal do Piauí, Teresina, 2006.
FREIRE, F. Feijão-caupi no Brasil: produção, melhoramento genético, avanços
e desafios -Teresina: Embrapa Meio-Norte, 2011.84 p.
FREIRE FILHO, F. R.; ARAÚJO, A.G. de; CARDOSO, M.J.; FROTA, A.B. Sistema
policultivar em caupi (Vigna unguiculata (L.) Walp.). In: REUNIÃO NACIONAL
DE CAUPI, 1, 1982, Goiânia. Resumos. Goiânia: EMBRAPA-CNPAF, 1982. p. 251-253. (EMBRAPA-CNPAF. Documentos, 4)
FREIRE FILHO, F. R. Melhoramento genetico. In: FREIRE FILHO, F. R.; LIMA, J. A. de A.; RIBEIRO, V. Q. (Eds.). Feijão-caupi: avanços tecnológicos. Brasília, DF: Embrapa Informação Tecnológica, 2005. p. 28-92.
GUARNIERI, K.C.L. Comparação de métodos para avaliar o desempenho de
lotes de sementes de soja. 2006. 26 f. Dissertação (Mestrado em Ciências) –
Programa de Pós-Graduação em Ciência e Tecnologia de Sementes, Universidade Federal de Pelotas, Pelotas, 2006.
GRABE, D.F. Manual do teste de tetrazólio em sementes. Brasília, DF: AGIPLAN. 1976. 86p.
JACKSON, Kaesel D da Silva. Estatística da produção de Feijão Caupi. Teresina: Embrapa Meio-Norte. 2009.
LAZAROTTO, M.; PIVETA, G.; MUNIZ, M.F.B.; REINIGER, L.R.S. Adequação do
teste de tetrazólio para avaliação da qualidade de sementes de Ceiba speciosa.
In: SEMINA: CIÊNCIAS AGRÁRIAS, Londrina, v. 32, n. 4, p. 1243 – 1250, out. / dez. 2011.
32
MARCOS FILHO, J.; CICERO, S. M.; SILVA, W. R. O teste de tetrazólio. Piracicaba: ESALQ, Departamento de Agricultura e Horticultura, 1987. 40 p.
MARCOS FILHO, J.; CÍCERO, S. M.; SILVA, W. R. Avaliação da qualidade das
sementes. Piracicaba: FEALQ, 1987. 230p.
MARCOS FILHO, J. Germinação de sementes. In: SEMANA DE ATUALIZAÇÃO EM PRODUÇÃO DE SEMENTES. Campinas: Fundação Cargill, 1986. p.11-39. MENDONÇA E.A.F., RAMOS N.P.; FESSEL S.A. (2003) Adequação da
metodologia do teste de deterioração controlada para sementes de brócolis
(Brassica oleracea L. - var. Itálica). Revista Brasileira de Sementes, 2003. 24p.
MOORE, R.P. Handbook on tetrazolium testing. Zürich: ISTA, 1985. 99p.
NAKAGAWA, J. Testes de vigor baseados no desempenho das plântulas. In: KRZYZANOSKI, F.C.; VIEIRA, R.D.; FRANÇA NETO, J.B. (Ed.). Vigor de
sementes: conceitos e testes. Londrina:ABRATES, 1999. p.2.1-2.24.
NOVEMBRE, A. D. L. C.; MARCOS FILHO, J. Tratamento fungicida e conservação de sementes de feijão. Revista Brasileira de Sementes, Brasília, v. 13, n. 2, p. 105-113, 1991.
SANTOS, S. R. G. dos; PAULA, R. C. de; FOGAÇA, C. A.; MÔRO, F. V.; COSTA, R. S. Viabilidade de sementes de Sebastiania commersoniana (Baill.) Smith &
Downs (branquilho) – Euphorbiaceae – pelo teste de tetrazólio. Científica,
Jaboticabal, v. 34, n. 1, p. 39 – 45, 2006.
SIQUEIRA, K.M.S. de. Importância de Pratylenchus brachyurus na cultura do
caupi e estudos morfológicos e morfométricos sobre populações de P.
brachyurus do Brasil. 2007. 107 f. Dissertação (Doutorado em Fitopatologia) – Agronomia, Universidade de São Paulo Escola Superior de Agricultura “Luiz de Queiroz”, Piracicaba, 2007.
SINGH, B.B.; EHLERS, J.D.; SHARMA B.; FREIRE FILHO, F.R. Os recentes
progressos no melhoramento de feijão caupi. In: FATOKUN, CA; TARAWALI,
S.A; SINGH, B.B.; KORMAWA, P.M; TAMO , M. (Ed.) . Desafios e oportunidades para o reforço produção de feijão-caupi sustentável. Ibadan, IITA, 2002. p.287-300 .
SELLSCHOP. J. P. F. Vigna unguiculata (L.) Walp. Field Crop Abstract, Cowpeas v.15, n.4, p.259-266, 1962.
TILLMANN, M.Â.A.; MIRANDA D.M. de. Análise de sementes. In.: PESKE, S.T. et al. (Eds.). Sementes: fundamentos científicos e tecnológicos. 2.ed. Pelotas: UFPel, 2006. Cap.3, p.159-257.
33
ROCHA, M. M. de; FILHO, F. R. F.; RIBEIRO, V. Q.; CARVALHO, H. W. L. de; FILHO, J. B.; RAPOSO, J. A. A.; ALCÂNTARA, J. P. dos; RAMOS, S. R. R.;
MACHADO, C. F. de. Adaptabilidade e estabilidade produtiva de genótipos de
feijão-caupi de porte semi-ereto na Região Nordeste do Brasil. Pesquisa
agropecuária brasileira, Brasília, v. 42, n. 9, p. 1283 – 1289, 2007.
WETZEL, M.M.V.da S.; CÍCERO, S.M.; FERREIRA, B.C. da S. Aplicação do teste
de tetrazólio em sementes de seringueira. Revista Brasileira de Sementes, v.14,
Anexo A – Documentação fotográfica.
Figura A. Fotografia de Plântulas normais (esquerda), e plântulas anormais (direita).
Figura B. Fotografia da cultivar BRS Novaera, realizado o teste de tetrazólio com concentração de 0,050% com 90 minutos de embebição na solução.
Figura C. Fotografia da cultivar BRS Guariba, realizado o teste de tetrazólio com concentração de 0,050% com 150 minutos de embebição na solução.
Figura D. Fotografia da cultivar BRS Novaera, realizado o teste de tetrazólio com concentração de 0,075% com 90 minutos de embebição na solução.
Figura E. Fotografia da cultivar BRS Pajeú, realizado o teste de tetrazólio com concentração de 0,075% com 150 minutos de embebição na solução.
Figura F. Fotografia da cultivar BRS Novaera, realizado o teste de tetrazólio com concentração de 0,500% com 960 minutos de embebição na solução.
