1 Escopo
Este método tem por objetivo determinar açúcares redutores em lactose, açúcares não redutores em sacarose e amido em amostras de leite e derivados por titulometria de oxidação (método Lane-Eynon).
2 Fundamentos
Neste método, os íons cúpricos da solução de Fehling são reduzidos quantitativamente,
sob ebulição, a óxido cuproso por titulação com solução de açúcar redutor. O ponto final
é alcançado quando um pequeno excesso do açúcar redutor descolora o azul de
metileno.
3 Reagentes, padrões e materiais
Todos os reagentes são de grau analítico (p.a.), exceto quando especificado. Toda a água utilizada nos procedimentos é destilada/deionizada, exceto quando especificada.
3.1 Reagentes
- Acetato de zinco dihidratado (Zn(CH3COO))2 ou sulfato de zinco heptahidratado
(ZnSO4.7H2O);
- Ácido clorídrico (HCl); - Álcool etílico (C2H5OH);
- Azul de metileno (C16H18CIN3.3H2O);
- Ferrocianeto de potássio trihidratado (K4 [Fe(CN)6].3H2O);
- Hidróxido de sódio (NaOH);
- Sulfato de cobre pentahidratado (CuSO4.5H2O);
- Sulfato de zinco heptahidratado (ZnSO4.7H2O);
- Tartarato duplo de potássio e sódio (C4H4KNaO6.4H2O).
3.2 Padrões
3.3 Materiais - Balões volumétricos (100, 200, 250, 500 e 1000 mL); - Bastões de vidro; - Beckers (200 e 300 mL); - Bureta de 10 e 25 mL; - Erlenmeyers (125 e 250 mL); - Funis;
- Papel de filtro qualitativo; - Pérolas de vidro;
- Pipetas volumétricas (5 e 10 mL); - Proveta (50 mL).
4 Equipamentos
− Autoclave;
− Balança analítica, com precisão mínima de quatro casas decimais; − Balança semi-analítica;
− Banho-maria; − Placa aquecedora.
5 Precauções analíticas
Este método emprega substâncias químicas nocivas e possui procedimentos que podem representar risco ao operador. Equipamentos de proteção individual e uniforme apropriado devem ser utilizados durante todo o processo.
Amostras de alimentos em geral devem ser consideradas como de risco biológico, evitando-se o contato direto com pele e mucosas.
O resíduo gerado pelo ensaio contém cianeto que deverá ser descartado em recipientes adequados, com pH alcalino, para evitar vapores altamente tóxicos.
Antes de iniciar a determinação quantitativa dos açúcares redutores, fazer uma prova qualitativa procedendo de acordo com o MET POA/SLAV/46 “Determinação qualitativa de amido em produtos lácteos”.
6 Procedimentos
6.1 Preparo de soluções
6.1.1 Solução azul de metileno 1% (m/v)
Pesar 1,0 g de azul de metileno e transferir para balão volumétrico de 100 mL. Completar volume com água e homogeneizar.
6.1.2 Solução de ferrocianeto de potássio trihidratado a 15% (m/v)
Pesar 75 g de ferrocianeto de potássio e transferir para um balão volumétrico de 500 mL. Completar o volume com água e homogeneizar.
6.1.3 Solução de hidróxido de sódio a 40% (m/v)
Em um becker, pesar 200 g de NaOH e dissolver com água. Esperar esfriar e transferir para balão de 500 mL. Completar o volume com água e homogeneizar.
6.1.4 Solução de acetato de zinco dihidratado a 30% (m/v)
Pesar 150 g de acetato de zinco e transferir para um balão de 500 mL. Completar o volume com água e homogeneizar.
6.1.5 Solução de sulfato de zinco heptahidratado 30% (m/v)
Pesar 150 g de sulfato de zinco e transferir para um balão de 500 mL. Completar o volume com água e homogeneizar.
6.1.6 Solução Fehling A
Dissolver 34,65 g de sulfato de cobre pentahidratado e transferir para um balão volumétrico de 1000 mL. Completar o volume com água e homogeneizar.
6.1.7 Solução Fehling B
Dissolver 173 g de tartarato duplo de potássio e sódio em 300 mL de solução de NaOH 40%. Transferir para um balão volumétrico de 1000 mL, completar o volume e homogeneizar. Deixar em repouso por 24 horas.
6.1.8 Solução padrão de glicose
Pesar exatamente 0,5 g de glicose padrão, previamente seca em estufa a 70°C por uma hora. Transferir para um balão volumétrico de 100 mL, completar o volume e homogeneizar.
6.2 Padronização da solução de Fehling
Em uma bureta de 25 mL, colocar a solução-padrão de glicose. Transferir, com pipeta volumétrica, 10 mL de cada uma das soluções de Fehling A e B para um erlenmeyer de 250 mL. Adicionar 40 mL de água, algumas pérolas e aquecer até ebulição. Adicionar uma gota de solução azul de metileno 1% e completar titulação até descoramento do indicador. O tempo de titulação não deve ultrapassar três minutos. O final da titulação será em torno de 10 mL da solução padrão de glicose. Registrar os dados no Anexo D do POP POA/SLAV/09.
O título da solução de Fehling (T) será obtido pela fórmula:
Onde:
v = volume gasto de glicose na titulação (mL); m = massa da glicose (g).
6.3 Preparo das amostras
6.3.1 Leite fluido
Pipetar 10 mL da amostra homogeneizada para balão volumétrico de 250 mL.
6.3.2 Leite em pó, leite condensado, creme de leite e requeijão
Pesar em balança analítica exatamente 5 g da amostra em béquer de 150 mL. Dissolver em cerca de 50 mL de água e transferir para um balão volumétrico de 250 mL.
6.4 Determinação de glicídios redutores em lactose
Adicionar às amostras 5 mL de solução de ferrocianeto de potássio a 15% e 5 mL de solução de acetato de zinco a 30% ou sulfato de zinco heptahidratado 30%. Agitar e completar o volume do balão com água. Deixar sedimentar por cerca de 15 minutos e filtrar em papel de filtro, recebendo o filtrado em um erlenmeyer. Transferir o filtrado obtido para uma bureta de 25 mL. Pipetar volumetricamente para um erlenmeyer 5 mL de solução Fehling A e 5 mL de solução Fehling B. Adicionar 40 mL de água e algumas pérolas de vidro. Aquecer até ebulição e gotejar a solução da amostra, sem agitação, até que o líquido sobrenadante fique levemente azulado. Manter a ebulição e adicionar uma gota de azul de metileno a 1%. Continuar a titulação ate a descoloração do indicador (vermelho-tijolo).
Registrar os dados no formulário “Dados brutos – Determinação de lactose, sacarose e amido em produtos lácteos” (Anexo A).
6.5 Determinação de glicídios não redutores em sacarose
Transferir 50 mL do filtrado obtido na determinação da lactose para balão volumétrico de 100 mL. Adicionar 2 mL de ácido clorídrico e levar ao banho-maria a 60ºC por 60 minutos. Esfriar, neutralizar com solução de hidróxido de sódio a 40% e, se necessário, adicionar 5 mL de solução de ferrocianeto de potássio a 15% e 5 mL de solução de sulfato ou acetato de zinco a 30%. Completar o volume para 100 mL. Filtrar e transferir o filtrado para bureta e proceder como na determinação da lactose.
Registrar os dados no formulário “Dados brutos – Determinação de lactose, sacarose e amido em produtos lácteos” (Anexo A).
6.6 Determinação de amido
Lavar no próprio funil o resíduo obtido na determinação de lactose, com porções de álcool etílico e deixar filtrar. Levar o funil para outro erlenmeyer, romper o papel de filtro e transferir o resíduo com 100 mL de água. Adicionar 10 mL de ácido clorídrico. O volume do ácido deve ser proporcional à quantidade de água utilizada para transferir o resíduo. Aquecer sob refluxo em banho-maria durante 2 horas no mínimo, ou em autoclave a 120ºC por 20 minutos. Esfriar e neutralizar com solução de hidróxido de sódio a 40%, usando papel indicador de pH. Transferir para balão volumétrico de 250 mL lavando o erlenmeyer e o papel de filtro. Adicionar 5 mL de
solução de ferrocianeto de potássio a 15% e 5 mL de solução de acetato ou sulfato de zinco a 30%, agitar e completar o volume. Filtrar para erlenmeyer e transferir o filtrado obtido para bureta de 25 mL. Pipetar volumetricamente para um erlenmeyer 5 mL da solução de Fehling A e 5 mL de solução de Fehling B. Adicionar 40 mL de água, aquecer até a ebulição e gotejar a solução da amostra, sem agitação, até que o líquido sobrenadante fique levemente azulado. Manter a ebulição e adicionar uma gota de solução de azul de metileno a 1% e continuar até descoloração do indicador.
Fazer um branco sujeito a todos os procedimentos prescritos para as amostras e descontar o valor gasto do branco para o cálculo da amostra.
Registrar os dados no formulário “Dados brutos – Determinação de lactose, sacarose e amido em produtos lácteos” (Anexo A).
7 Resultados
Os resultados são aceitos se observadas as precauções analíticas e se realizados todos os procedimentos em conformidade com este método. Em caso de quebra de balões volumétricos ou perda de amostra, os resultados são desconsiderados e o ensaio deve ser repetido.
7.1 Cálculos e expressão dos resultados
Os cálculos são realizados através da planilha eletrônica “Cálculos – Determinação de lactose, sacarose e amido em produtos lácteos” (Anexo B), utilizando-se as seguintes fórmulas abaixo:
7.1.1 Cálculo para açúcares redutores em glicose e lactose
Onde:
T = título da solução de Fehling; v = volume de amostra gasto na titulação, em mL; m = massa da amostra em gramas; 1,39 = fator de conversão da glicose para lactose.
7.1.2 Cálculo para açúcares totais em glicose
Onde:
T = título da solução de Fehling; v1 = volume de amostra gasto na titulação, em mL; m1 =
massa da amostra em gramas, na alíquota.
7.1.3 Cálculo para açúcares não redutores em sacarose
Onde: 0,95 = fator de conversão da glicose para sacarose.
7.1.4 Cálculo para amido
Onde:
0,90 = fator de conversão da glicose para amido.
7.2 Validação da planilha
A planilha “Cálculos - Determinação de lactose, sacarose e amido em produtos lácteos” (Anexo B) deve ser validada quinzenalmente, através de cálculos manuais que devem ser registrados no formulário “Validação da Planilha de Cálculos – Determinação de lactose, sacarose e amido em produtos lácteos” (Anexo C).
8 Arquivamento dos registros
O formulário “Dados brutos – Determinação de lactose, sacarose e amido em produtos lácteos” deve ser arquivado na pasta “Dados brutos”. A planilha “Cálculos – Determinação de lactose, sacarose e amido em produtos lácteos” deve ser mantida protegida na pasta eletrônica
“Resultados”. O formulário “Validação da planilha de cálculos” deve ser arquivado na pasta “Validação da planilha de cálculos – Determinação de lactose, sacarose e amido em produtos lácteos” do POA/SLAV.
9 Referências
BRASIL. Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento. Secretaria de Defesa Agropecuária. Instrução Normativa n° 68 de 12 de dezembro de 2006. Métodos analíticos físico-químicos para controle de leite e produtos lácteos. Brasília: Diário Oficial da União, 14/12/2006.
10 Anexos
Anexo A MET POA/SLAV/33/02 Formulário “Dados brutos - Determinação de lactose, sacarose e amido em produtos lácteos”.
Anexo B MET POA/SLAV/33/02 Planilha “Cálculos - Determinação de lactose, sacarose e amido em produtos lácteos”.
Anexo C MET POA/SLAV/33/02 Formulário “Validação da planilha de cálculos – Determinação de lactose, sacarose e amido em produtos lácteos”.
11 Alterações
Título alterado de “Determinação de açúcares redutores em lactose em leite fluído e em pó por titulometria (método Lane-Eynon)” para “Determinação de açúcares redutores em lactose, açúcares não redutores em sacarose e amido em produtos lácteos por oxidimetria”.
Item 1: incluído “açúcares não redutores em sacarose e amido em amostras de leite e derivados por titulometria de oxidação”.
Subitem 3.1: incluído Ácido clorídrico (HCl); Álcool etílico (C2H5OH); Sulfato de zinco
heptahidratado (ZnSO4.7H2O).
Subitem 3.3: incluído bureta 10 mL. Item 4: incluído autoclave e banho Maria.
Item 5: incluído destino dos resíduos e antes de iniciar a determinação quantitativa dos açucares redutores, fazer uma prova qualitativa.
Subitem 6.3.2: incluído “leite condensado, creme de leite e requeijão” e “balão volumétrico de 250 mL; excluído “balão volumétrico de 200 mL”.
Subitens 6.5 e 6.6: incluídos.
Subitens 7.1.1, 7.1.2, 7.1.3 e 7.1.4: incluídos.
Item 8: incluído o arquivamento eletrônico da planilha de cálculos e excluído o arquivamento físico da planilha.
Anexo A: título alterado de “Dados brutos - Determinação de açúcares redutores em lactose em leite fluído e em pó” para ““Dados brutos - Determinação de lactose, sacarose e amido em produtos lácteos” e formato alterado para incluir dados da análise de Amido e Sacarose.
Anexo B: título alterado de “Cálculos - Determinação de açúcares redutores em lactose em leite fluído e em pó” para “Cálculos - Determinação de lactose, sacarose e amido em produtos lácteos” e formato alterado para atender aos cálculos inclusos.
Anexo C: título alterado de “Validação da Planilha de Cálculos – Determinação de açúcares redutores em lactose em leite fluído e em pó” para “Validação da planilha de cálculos – Determinação de lactose, sacarose e amido em produtos lácteos” e formato alterado para atender a verificação dos cálculos inclusos.
Devido às alterações realizadas no MET, há a necessidade de complemento de relatório de confirmação de desempenho.
12 Responsabilidades
O Responsável pelo POA/SLAV deve garantir a elaboração, aprovação, emissão, distribuição de cópias, implementação, capacitação do pessoal para execução, gerenciamento de não conformidades, análise crítica e revisão deste MET.
A UGQ é responsável pela verificação deste MET.
Elaboração/Revisão: Aprovação: Verificação:
Luciano Molognoni – POA/SLAV Heitor Daguer – POA/SLAV Rosane Carlessi – UGQ
