IMPORTÂNCIA DA APLICAÇÃO DE MÉTODOS MOLECULARES PARA DETECÇÃO DO West Nile vírus: UMA REVISÃO SISTEMÁTICA

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_____________________________________________________________ Revista Interdisciplinar de Ciências Médicas - Anais - Teresina-PI CNPJ:14.378.615/0001-60

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IMPORTÂNCIA DA APLICAÇÃO DE MÉTODOS MOLECULARES PARA DETECÇÃO DO West Nile vírus: UMA REVISÃO SISTEMÁTICA

PEREIRA, H.S¹; COSTA, D.S¹; PINTO, A.T.C¹; TELES, L.S¹; MACIEL, M.S.C¹; SANTOS, V.M¹; CORNÉLIO, S.R.L¹; VIEIRA, S.M.A ²; QUEIROZ, J.L; ²; BARROS, E.L.T²

Graduandos em Biomedicina pela Universidade Federal do Piauí-UFPI ¹ Mestranda em Ciências Biomédicas pela Universidade Federal do Piauí-UFPI ² RESUMO

Introdução: O West Nile virus é um arbovírus pertencente à família Flavivirídae,

gênero Flavivírus. Grande parte das infecções causadas por este vírus são assintomáticas e quando sintomáticas, podem evoluir para quadros graves de encefalite, que podem deixar sequelas ou levar o indivíduo ao óbito. Embora a maioria das investigações faça uso de técnicas sorológicas para identificar a presença de vírus, as técnicas moleculares vêm sendo cada vez mais utilizadas, pois permitem realizar a detecção viral nos primeiros dias de infecção. Mediante o exposto, este estudo objetivou demonstrar a importância da implementação de métodos moleculares para a investigação do WNV. Metodologia: Foi realizado um levantamento bibliográfico de publicações indexadas em bases de dados como PubMed, Scielo, Lilacs. Como critérios de inclusão, foram selecionados artigos completos publicados entre 2007 e 2017, tendo como foco o diagnóstico para WNV e que estivessem nos idiomas português e inglês. Resultados e Discussão: A busca resultou na seleção de 71 publicações, das quais 27 utilizaram técnicas moleculares como ferramenta diagnóstica e 44 fizeram uso dos testes sorológicos para investigação de WNV. Os testes sorológicos são utilizados na rotina laboratorial devido ao baixo custo e pela facilidade de acesso, mas podem apresentar reações cruzadas com outros vírus do mesmo gênero. Vários estudos demonstram que os métodos moleculares possuem várias vantagens quando comparados com testes sorológicos, sendo bastante utilizados em laboratórios de referência e de pesquisa. Além disso, permitem a caracterização do vírus através de inferências filogenéticas, com intuito de auxiliar a vigilância epidemiológica no monitoramento da circulação de WNV. Conclusões: Conclui-se que os métodos moleculares estão sendo cada vez mais utilizados na rotina laboratorial por apresentarem várias vantagens tais como sensibilidade, especificidade, rapidez e confiabilidade diante da utilização de métodos sorológicos.

Palavras-chave – Diagnóstico molecular; diagnóstico sorológico; arbovírus.

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ABSTRACT

Introduction: West Nile virus is an arbovirus belonging to the Flaviviridae family,

genus Flavivirus. Most of the infections caused by this virus are asymptomatic and, when symptomatic, can progress to severe encephalitis, which can cause sequelae or lead to death. But most investigations use serological techniques to identify a presence of viruses, such as molecular techniques, more and more, with a viral detection application in the early days of infection. Therefore, this study aimed to demonstrate an important of the implementation of molecular methods for a WNV research. Methodology: A bibliographic survey of publications in databases such as PubMed, Scielo, Lilacs was completed. Inclusion criteria were selected complete articles published between 2007 and 2017, focusing on the diagnosis for WNV and that were in the Portuguese and English languages. Results and Discussion: The search resulted in the selection of 71 publications, in which 27 used molecular techniques as a diagnostic tool and 44 as the use of serological tests for WNV research. Serological tests are used in the laboratory routine due to the low cost and ease of access, but may cross-react with other viruses of the same genus. Several studies demonstrate that molecular methods have several advantages when compared with serological tests, and are widely used in reference and research laboratories. In addition, they allow the characterization of the virus through phylogenetic inferences, in order to assist epidemiological surveillance in the monitoring of WNV circulation. Conclusions: It is concluded that molecular methods are increasingly being used in the laboratory routine because they present several advantages such as sensitivity, specificity, speed and reliability when using serological methods.

Keywords - Molecular diagnosis; serological diagnosis; arbovirus.

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INTRODUÇÃO

West Nile virus (WNV) ou vírus do Nilo Ocidental (VNO) é um arbovírus de importância clínica, pertencente à família Flaviviridae (gênero Flavivirus), sendo atualmente apontado como endêmico nas Américas (GRAY, WEBB, 2014). É um membro do complexo do vírus da encefalite japonesa (JEV), considerado um dos principais vírus causadores de encefalites no mundo (DAVID, ABRAHAM, 2016; SAMBRI et al., 2013). Inicialmente a circulação de WNV estava restrita às regiões da Ásia, África e Oriente Médio. Entretanto, espalhou-se ao longo do tempo por várias regiões do mundo, se tornando endêmico principalmente em áreas tropicais e subtropicais do sudeste Asiático, Pacífico e Américas (DAVID, ABRAHAM, 2016). No Brasil, evidências sorológicas mostraram sua circulação em cavalos no ano de 2009 e em 2014 foi relatado o primeiro caso em um humano no Estado do Piauí (MELANDRI et al., 2012; VIEIRA et al., 2015). As manifestações clínicas são bastante inespecíficas, podendo ser assintomáticas ou sintomáticas. Quando sintomáticas (dependendo do estado imune do paciente), podem evoluir

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espontaneamente para a cura ou causar quadros de encefalite (CZANK et al., 2016) Este fato representa um desafio no cenário atual da saúde pública, pois apesar da maioria das infecções serem assintomáticas, o vírus também pode causar doenças neurológicas graves ou até mesmo evoluir ao óbito (FADDY et al., 2016; GRAY, WEBB, 2014). O diagnóstico precoce é de suma importância para identificação do agente viral, onde são implementados testes sorológicos como método diagnóstico para investigação de WNV (SHUKLA et al., 2012; FAGGIONI et al., 2014). Entretanto, estes testes apresentam sensibilidade e especificidade variáveis devido à possibilidade de reatividade cruzada com outros vírus do mesmo gênero (FALL et al., 2016). Nesse contexto, as técnicas moleculares surgem como uma ferramenta diagnóstica sensível e específica, permitindo a detecção precoce do RNA viral nos primeiros 5 dias após o início dos sintomas, o que confere um diagnóstico rápido e confiável (GONZÁLEZ-REICHE et al., 2010; PAPA et al., 2013). Assim, o objetivo deste trabalho foi demonstrar a importância da implementação de métodos moleculares para a investigação do WNV.

METODOLOGIA

Trata-se de uma revisão sistemática da literatura, com base em artigos científicos obtidos das bases de dados PubMed, Scielo, Lilacs. Como critérios de inclusão, foram selecionados artigos completos publicados entre 2007 e 2017, tendo como foco o diagnóstico para WNV e que estivessem nos idiomas português e inglês. Alguns artigos foram excluídos com base no título e por não apresentarem informações relevantes ao tema.

RESULTADOS E DISCUSSÃO

A partir da busca de dados na literatura, foram selecionados 308 artigos, dos quais 237 foram excluídos por não se enquadrarem nos critérios estabelecidos. Dentre os 71 artigos selecionados, 27 utilizaram técnicas moleculares como ferramenta diagnóstica e 44 artigos utilizaram de testes sorológicos para investigação de WNV. Nesse contexto, vale ressaltar que embora a maioria dos estudos tenham empregado técnicas sorológicas para investigação de WNV, uma quantidade expressiva também utilizou técnicas moleculares como método de diagnóstico. Os testes sorológicos, normalmente são utilizados na rotina laboratorial como meio de triagem devido ao baixo custo e pela facilidade de acesso (MELANDRI et al., 2012). Porém os mesmos apresentam algumas desvantagens, das quais destaca-se a possibilidade de reações cruzadas com outros vírus do mesmo gênero (MELANDRI et al., 2012; VIEIRA et al., 2015; MURRAY, WALKER, GOULD, 2011; OMETTO et al., 2013). Outra desvantagem é que os testes sorológicos não permitem identificar o possível genótipo circulante nem a virulência deste em determinada região (SAMBRI et al., 2013). Este é um fator que pode contribuir para o agravamento das manifestações clínicas e dificultar as ações de vigilância em saúde, facilitando a disseminação do vírus para outras regiões (PAUVOLID-CORRÊA et al., 2014). Em geral, estudos demonstram que os métodos moleculares, em especial a RT-PCR convencional e a RT-PCR em tempo real, são uma alternativa de diagnóstico rápido, sensível, específico e confiável, sendo bastante utilizados em laboratórios de referência e de pesquisa (KUMAR, SAXENA, PARIDA, 2014; CSANK et al., 2016; GONZÁLEZ-REICHE et al., 2010; LINKE et al., 2007). Através da utilização de

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técnicas moleculares, é possível realizar análises filogenéticas para a caracterização do vírus em nível de linhagem, disponibilizando, desse modo, dados mais completos para a vigilância epidemiológica, contribuindo para o desenvolvimento de novas estratégias de prevenção e controle (YEH et al., 2010; SHUKLA et al., 2012; KUMAR, SAXENA, PARIDA, 2014). Além da elevada sensibilidade e especificidade, as técnicas moleculares apresentam menor probabilidade de contaminação durante a preparação da amostra, diminuindo as chances de desenvolver resultados falso-positivos (DEL AMO, et al., 2013; PAPA et al., 2013; FAGGIONI et al., 2014).

CONCLUSÕES

Diante das informações apresentadas neste estudo, conclui-se que a utilização de técnicas moleculares tem se tornado essencial para o diagnóstico diferencial de WNV com outros Flavivírus. Além da elevada sensibilidade e especificidade, tornou-se um método diagnóstico de escolha, que vem tornou-sendo utilizado em vários paítornou-ses (especialmente em regiões endêmicas) durante anos, com intuito de obter diagnóstico rápido e confiável. A utilização destas técnicas poderá auxiliar a vigilância epidemiológica no monitoramento da circulação de WNV, bem como na implementação de medidas preventivas e de controle, dando melhor direcionamento para as autoridades de saúde a traçarem estratégias de prevenção mais seguras e eficazes, objetivando a redução de seu impacto na saúde pública.

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