For in-vitro diagnostic use. Product Code: FA106 PREDILUTED ANA POSITIVE CONTROL SERUM NUCLEOLAR 5 STORAGE & STABILITY

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PREDILUTED ANA POSITIVE CONTROL

SERUM – NUCLEOLAR

For in-vitro diagnostic use

Product Code: FA106

The Binding Site Ltd, PO Box 11712, Birmingham, B14 4ZB, U.K. www.bindingsite.co.uk

Telephone: +44 (0) 121 436 1000 Fax: +44 (0) 121 430 7061 e-mail: [email protected]

1 INTENDED USE

This product is intended for use in conjunction with The Binding Site’s HEp-2 slides (codes FS001._) as a positive control serum for indirect immunofluorescence (to assist in the qualitative determination of antinuclear antibodies (ANA) in patient serum.) Suitability for use in other IFA combinations has not been assessed but use in such assays should not necessarily be excluded.

2 SUMMARY AND EXPLANATION

Refer to the appropriate slide product insert for details of the indirect immunofluorescence technique.

3 COMPOSITION

The product consists of human serum, optimally diluted in Tris buffer containing 0.099% azide as a preservative. The product is monospecific for the recommended substrate (i.e. one pattern only) and is supplied in liquid form (0.5mL volume).

4 CAUTION

The serum used in this product has been tested at donor level and found to be negative for Hepatitis B surface antigen and antibodies to Hepatitis C virus and Human Immunodeficiency Virus (HIV 1 & 2). However, these tests cannot guarantee the absence of infective agents. Proper handling and disposal methods should be established as for all potentially infective materials and only personnel adequately trained in such methods should be permitted to perform the procedures. This product should only be used by suitably trained persons for the purposes stated. Adherence to the given procedure is recommended.

This product contains sodium azide and must be handled with caution – do not ingest or allow contact with skin or mucous membranes. If contact does occur wash with a large volume of water and seek medical advice. Explosive metal azides may be formed with lead and copper plumbing; on disposal of reagent, flush with a large volume of water to prevent azide build up.

5 STORAGE & STABILITY

This product should be stored at 2-8°C. DO NOT FREEZE. It is stable until the expiry date given on the label.

6 METHODOLOGY

6.1 Materials Supplied

6.1.1 0.5mL ANA Nucleolar IFA Positive control serum (prediluted positive control)

6.1.2 Product insert

6.2 Additional materials required

6.2.1 Substrate slides

6.2.2 Phosphate buffered saline(PBS) 6.2.3 Humid chamber for incubation steps. 6.2.4 Anti-human IgG (H&L) FITC conjugate 6.2.5 Mounting media and coverslips

6.2.6 Fluorescence microscope with 495nm exciter filter and 515nm barrier filter.

6.3 Test procedure (Refer to the instructions provided

with HEp-2 slides for full details)

6.3.1 Use one drop of prediluted positive control.

7 RESULTS

This control should give a large coarse speckled staining pattern within the nucleus (usually less than 6 speckles per cell), when used in conjunction with The Binding Site HEp-2 slides and anti-human IgG (H&L) FITC conjugate (code FA003). For colour photographic examples see reference 1. The nucleolar pattern is caused by ANA’s to PM-Scl, nucleolin, ku and other unidentified nuclear antigens.

High titres are associated with scleroderma.

8 LIMITATIONS

The light source, filters and optics of different makes of fluorescence microscopes will influence the sensitivity of the assay. The performance of the microscope is significantly influenced by correct maintenance especially centring of the mercury vapour lamp and changing of the lamp after the recommended period of time.

9 REFERENCES

1. Bradwell A. R., R.G. Hughes (2007). Atlas of HEp-2 patterns. (3rd edition) Pub: The Binding Site Ltd., Birmingham UK.

ANA – NUKLEOLÄR VORVERDÜNNTES

POSITIV-KONTROLLSERUM FÜR DIE IFT

Zur in vitro Diagnostik

Bestell-Nr.: FA106

The Binding Site Ltd, PO Box 11712, Birmingham, B14 4ZB, UK. www.bindingsite.co .uk

Vertrieb in Deutschland und Österreich durch: The Binding Site GmbH, Robert-Bosch-StaΒe 2A, D-68723 Schwetzingen, Deutschland

Telefon: +49 (0) 6202 92 62 0 Fax: +49 (0) 6202 92 62 222 e-mail: [email protected]

1 VERWENDUNGSZWECK

Dieses Produkt dient in Verbindung mit den HEp-2-Zellen-Objektträgern (Bestell-Nr.: FS001._) von The Binding Site (TBS) als positives Kontrollserum zum qualitativen Nachweis von Antinukleären-Autoantikörpern (ANA) in der indirekten Immunfluoreszenz. Die Verwendung dieses Produktes zusammen mit anderen Substraten wurde nicht geprüft, ist aber nicht zwangsläufig ausgeschlossen.

2 EINFÜHRUNG

Siehe Arbeitsanleitung der HEp-2-Zellen.

3 REAGENZIEN

Dieses Produkt wurde aus einem humanem Serum gewonnen. Es ist optimal mit TRIS-Puffer, der 0,099% Natriumazid als Konservierungsstoff enthält, verdünnt. Das Produkt ist für das empfohlene Substrat monospezifisch, d. h. zeigt nur ein Fluoreszenzmuster, und liegt als stabilisierte Flüssigkeit (0,5 mL) vor.

4 WARNUNGEN UND VORSICHTSMAßNAHMEN

Jede Einzelspende wurde bezüglich Antikörpern gegen Human-Immunschwäche-Virus (HIV 1 & 2), Hepatitis C-Virus und Hepatitis-B-Oberflächenantigen (HBsAG) untersucht und als negativ befunden. Es gibt aber zur Zeit keine absolut sicheren Testmethoden zum Auschluss von Infektionsträgern. Umgangs- und Entsorgungsmethoden sollten denen für potentiell infektiöses Material entsprechen und der Test nur von entsprechend geschultem Personal durchgeführt werden. Dieses Produkt sollte nur von entsprechend geschultem Laborpersonal für den angegebenen Verwendzungszweck verwendet werden. Die Einhaltung der Arbeitsvorschrift wird empfohlen.

Dieses Kontrollserum enthält Natriumazid und muss mit den entsprechenden Vorsichtsmaßnahmen behandelt werden. Verschlucken sowie Kontakt mit Haut oder Schleimhäuten vermeiden. Nach Kontakt Hautstelle mit viel Wasser abspülen und ärztlichen Rat einholen.

Natriumazid kann mit Blei- oder Kupferrohren explosive Metall-azide bilden. Nach der Entsorgung mit ausreichender Menge Wasser nachspülen um Azidablagerungen zu vermeiden.

5 LAGERUNG UND STABILITÄT

Dieses Produkt bei 2-8°C lagern. NICHT EINFRIEREN. Es ist so bis zum auf dem Etikett angegebenen Datum haltbar.

6 TESTDURCHFÜHRUNG

6.1 Gelieferte Materialien

6.1.1 0,5mL ANA Nucleolar IFA Positive control serum

(vorverdünntes Positiv-Kontrollserum) 6.1.2 Arbeitsanleitung

6.2 Materialien

6.2.1 Substrat-Objektträger

6.2.2 Phosphat-gepufferte Kochsalzlösung (PBS-Puffer) 6.2.3 Feuchte Kammer für die Inkubationen

6.2.4 Anti-human-IgG-(H & L)-FITC-Konjugat 6.2.5 Eindeckmedium und Deckgläschen

6.2.6 Fluoreszenzmikroskop mit einem 495nm Anregungs-filter und 515nm BarriereAnregungs-filter.

6.3 Testdurchführung (Detailangaben siehe spezifsche

Arbeitsanleitung der Objektträger mit HEp-2-Zellen) 6.3.1 1 Tropfen des vorverdünnten Positiv-Kontrollserums

auftragen.

7 ERGEBNISSE

Dieses Positiv-Kontrollserum sollte eine kräftige, apfelgrüne, Fluoreszenzfärbung – große, grobe Sprenkel in den Zellkernen (in der Regel weniger als 6 Sprenkel pro Kern) - erzeugen. (Bei Verwendung zusammen mit The Binding Site HEp-2-Zellen und anti-human-IgG-(H&L)-FITC-Konjugat (Bestell-Nr.: FA003). Farbfotos mit typischem Fluoreszenzmuster siehe Ref. 1.

Das nukleoläre Fluoreszenzmuster wird durch ANA’s gegen Pm-Scl, Nukleolin, ku und andere, noch nicht identifizierte nukleäre Antigene, erzeugt.

Hohe Titer sind mit der Sklerodermie assoziiert.

8 GRENZEN DES TESTS

Die im Fluoreszenzmikroskop verwendete Lichtquelle, Filter und Optik beeinflussen die Sensitivität des Tests. Die Qualität des Mikroskops wird maßgeblich durch die korrekte Wartung, speziell durch Zentrieren der Quecksilberlampe und deren Austausch nach der empfohlenen Brenndauer, beeinflusst.

9 REFERENZEN

1. Bradwell A. R., R.G. Hughes (2007). Atlas of HEp-2 patterns. (3rd _{edition) Pub: The Binding Site Ltd.,}

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SERUM DE CONTRÔLE POSITIF PREDILUE

ANA NUCLEOLAIRE

Pour usage diagnostic in vitro

Référence : FA106

The Binding Site Ltd, PO Box 11712, Birmingham B14 4ZB, United Kingdom. www.bindingsite.co.uk

Distribués en France par la société :

The Binding Site, 14 rue des Glairaux, BP226, 38522 Saint-Egrève Cedex. Téléphone : 04.38.02.19.19

Fax : 04.38.02.19.20 e-mail : [email protected]

1 INDICATIONS

Ce réactif est spécialement conçu pour être utilisé sur les lames Hep2 de la société The Binding Site (référence : FS001._) comme contrôle positif en immunofluorescence indirecte pour l’aide de la détermination qualitative des autoanticorps anti nucléaires circulants (ANA) dans le sérum humain.

Il peut également être utilisé dans d’autres techniques d’immunofluorescence.

2 RESUME ET EXPLICATIONS

Se référer à la fiche technique relative aux lames citées pour avoir des détails sur la technique d’immunofluorescence.

3 COMPOSITION

Ce produit est issu de sérum humain. Il a été dilué de façon optimale dans un tampon Tris contenant 0.099% d’azide de sodium comme conservateur. Ce produit est monospécifique pour le substrat recommandé, c’est à dire qu’il ne correspond qu’à un seul aspect de fluorescence, et fourni sous forme liquide (0,5mL).

4 PRECAUTIONS

Le sérum utilisé dans ce réactif a été soumis aux tests des hépatites B et C, de l’HIV1 et HIV 2 et se sont avérés négatifs. Toutefois ces tests ne peuvent garantir l’absence totale d’agents infectieux. Tous les échantillons doivent donc être considérés comme potentiellement infectieux.

Ce produit doit être manipulé par des personnes compétentes en techniques de laboratoire. Il est recommandé de suivre scrupuleusement la procédure d’utilisation.

Ce produit contenant 0,099% d’azide de sodium, il est nécessaire de le manipuler et de l’éliminer avec précaution. Ne pas ingérer ou mettre en contact avec la peau ou les muqueuses. En cas de contact, laver à grande eau et consulter un médecin. Des azides de métaux explosifs peuvent se former avec le cuivre et le plomb. Laver à grande eau les récipients ayant contenu ce réactif afin d’éviter la formation des azides de métaux.

5 STOCKAGE ET STABILITE

Ce réactif doit être stocké à 2-8°C. NE PAS CONGELER. Il est stable jusqu’à la date de péremption indiquée sur l’étiquette.

6 METHODOLOGIE

6.1 Matériel fourni

6.1.1 0,5mL ANA Nucleolar IFA Positive control serum (de

sérum de contrôle positif prédilué ANA nucléolaire) 6.1.2 Fiche technique

6.2 Matériel nécessaire et non fourni

6.2.1 Lames 6.2.2 Tampon PBS

6.2.3 Chambre humide pour les étapes d’incubation 6.2.4 Conjugué FITC anti-IgG (H+L) humaines 6.2.5 Milieu de montage et lamelles

6.2.6 Microscope à fluorescence avec un flitre excitant à 495nm et un filtre barrière à 515nm.

6.3 Procédure (Se référer aux instructions fournies dans

la fiche technique des lames Hep2 pour plus de détails).

6.3.1 Déposer une goutte de contrôle positif prédilué.

7 RESULTATS

Ce contrôle doit présenter une fluorescence verte avec un aspect moucheté gros dans le noyau des cellules

(habituellement moins de 6 taches par cellule) lors de son utilisation avec les cellules Hep2 de la société The Binding Site et le conjugué fluorescent anti IgG (H+L) référence FA003. Pour des photographies couleur de cet aspect, cf référence 1.

L’aspect nucléolaire est lié aux anticorps anti-nucléaires suivants : PM-Scl, nucléoline, ku et d’autres antigènes nucléaires non identifiés.

Des titres élevés sont associés à la sclérodermie.

8 LIMITES

La source lumineuse, les filtres et les optiques des microscopes influent sur la sensibilité du test. Les performances du microscope dépendent de la qualité de la maintenance et en particulier le centrage de la lampe à vapeur de mercure et le changement de cette lampe après la période recommandée.

9 RÉFÉRENCES

1. Bradwell A. R., R.G. Hughes (2007). Atlas of HEp-2 patterns. (3rd edition) Pub: The Binding Site Ltd., Birmingham UK.

SUERO DE CONTROL POSITIVO ANA

PREDILUIDO – NUCLEOLAR

Spanish

Para uso diagnóstico in-vitro

Código de producto: FA106

The Binding Site Ltd, PO Box 11712, Birmingham B14 4ZB, U.K. www.bindingsite.co.uk

The Binding Site sucursal en España, C/ Balmes 243 4º 3ª, 08006 Barcelona Teléfono 902027750 Fax: 902027752 e-mail: [email protected] web: www.bindingsite.es 1 APLICACIÓN

Este producto está diseñado para su uso conjunto con los portaobjetos HEp-2 de The Binding Site (códigos FS001._) como suero de control positivo para inmunofluorescencia indirecta, como ayuda en la determinación cualitativa de anticuerpos antinucleares (ANA) en suero. No se ha analizado su compatibilidad de uso con otras combinaciones IFA pero no son necesariamente excluibles entre sí.

2 RESUMEN Y EXPLICACIÓN

Consulte las instrucciones de los portaobjetos en cuestión para los detalles sobre la técnica de inmunofluorescencia indirecta.

3 COMPOSICIÓN

Este producto consiste en suero humano óptimamente diluido en buffer Tris. Contiene 0,099% de azida como conservante. El producto es monoespecifico para el sustrato específico (un solo patrón) y se suministra en forma líquida (0,5mL de volumen).

4 PRECAUCIONES

Los sueros usados en este producto han sido sometidos a análisis para donantes, resultando negativos a la presencia del antígeno de superficie de la hepatitis B y a la presencia de los anticuerpos de los virus VIH1 y VIH2. Sin embargo estos ensayos no garantizan la ausencia de agentes infecciosos. Deben establecerse métodos de manipulación y eliminación adecuados para todos los materiales potencialmente infecciosos y los procedimientos deben permitirse sólo a personal experto y autorizado.

Este producto sólo debe ser utilizado por personas con una formación adecuada para los propósitos establecidos. Se recomienda atenerse al procedimiento.

Este producto contiene azida sódica como conservante y debe manipularse con precaución – no trague ni permita el contacto con la piel o las mucosas. En caso de contacto, lave con abundante agua y consulte a un médico. Con el plomo y el cobre pueden formarse azidas metálicas explosivas. Cuando se elimine el reactivo, lave con mucha agua los recipientes para evitar la acumulación de azida.

5 ESTABILIDAD Y ALMACENAMIENTO

Este producto se debe almacenar a 2-8°C. NO CONGELAR. Es estable hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta.

6 METODOLOGÍA

6.1 Materiales Suministrados

6.1.1 0,5mL de ANA Nucleolar IFA Positive control serum (control positivo prediluído)

6.1.2 Instrucciones del producto

6.2 Materiales adicionales requeridos

6.2.1 Portaobjetos de sustrato 6.2.2 Buffer fosfato salino (PBS) 6.2.3 Cámara húmeda para incubación 6.2.4 Conjugado IgG (H&L) FITC anti-humana 6.2.5 Material de montaje y cubreobjetos

6.2.6 Microscopio de fluorescencia con un filtro excitador de 495nm y un filtro de barrera de 515nm.

6.3 Procedimiento de la prueba (Consultar las

instrucciones de los portaobjetos HEp-2 para más información)

6.3.1 Usar una gota de control positivo prediluído.

7 RESULTADOS

Este control debería dar una tinción con motas grandes y gruesas en el núcleo (generalmente un número inferior a 6 por célula), al usarlo junto con los portaobjetos HEp-2 y el conjugado IgG (H&L) anti-humana FITC de The Binding Site (código FA003). Para ejemplos en fotografía en color ver la referencia 1.

El patrón nucleolar lo causan los ANA’s a PM-Scl, nucleolina, ku y otros antígenos nucleares sin identificar.

Los niveles altos están asociados con escleroderma.

8 LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO

La fuente de luz, los filtros y objetivos de los diferentes tipos de microscopios de fluorescencia influirán en la sensibilidad del ensayo. El funcionamiento del microscopio depende considerablemente de su correcto mantenimiento, en especial de la lámpara de vapor de mercurio.

9 REFERENCIAS

1. Bradwell A. R., R.G. Hughes (2007). Atlas of HEp-2 patterns. (3rd edition) Pub: The Binding Site Ltd., Birmingham UK

th

SORO CONTROLO POSITIVO ANA–

NUCLEOLAR, PRÉ-DILUIDO

Portuguese

Para diagnóstico in vitro

Código do Produto: FA106

The Binding Site Ltd, PO Box 11712, Birmingham B14 4ZB, U.K. www.bindingsite.co.uk

Telefone: +44 (0)121 436 1000 Fax : +44 (0)121 430 7061 e-mail: [email protected]

1 UTILIZAÇÃO

A utilização deste controlo deve ser feita com lâminas HEp-2 da The Binding Site (cod. FS001) como soro controlo positivo para imunofluorescência indirecta no auxílio da determinação qualitativa de anticorpos anti nucleares (ANA) no sangue. A possibilidade de utilização com outras combinações IFA não foi ainda verificada, contudo esta hipótese não deverá ser excluída.

2 RESUMO E EXPLICAÇÃO

Consultar o folheto de instruções do produto (lâminas) para mais detalhes acerca da técnica de imunofluorescência indirecta.

3 COMPOSIÇÃO

Este produto é constituído por soro humano, diluído em tampão Tris contendo 0,099% de azida como conservante. O produto é monoespecifico para o substrato recomendado (ex. apenas um padrão) é fornecido em forma liquida (0,5mL de volume).

4 PRECAUÇÕES

O soro humano que é fornecido neste kit foi testado, tendo-se revelado negativos para os antigénios de superfície da Hepatite B (HBsAg), para os anticorpos do vírus da imunodeficiência humana (HIV1 e HIV2) e para o vírus da Hepatite C. Contudo, estes testes não podem garantir a ausência de agentes infecciosos.

Deve proceder-se a um manuseamento e métodos de inutilização adequados para todo o material potencialmente infectado e apenas a pessoal treinado adequadamente nestes métodos deverá ser permitida a execução destes procedimentos.

Os componentes do kit contêm azida de sódio como conservante, pelo que terão que ser manuseados com precaução – não ingerir nem permitir o contacto com a pele ou membranas mucosas. Se ocorrer um contacto com o produto, deve-se lavar abundantemente com água e consultar um médico. Em contacto com canalizações de chumbo ou cobre, podem-se formar sais explosivos; para evitar que tal aconteça, fazer correr abundante quantidade de água aquando da inutilização dos reagentes.

5 CONSERVAÇÃO E ESTABILIDADE

Este produto deve ser conservado entre 2-8°C. NÃO CONGELAR. Permanece estável até a data de validade indicada no rótulo.

6 METODOLOGIA

6.1 Materiais Fornecidos

6.1.1 0,5mL ANA Nucleolar IFA Positive control serum

(controlo positivo pré diluído) 6.1.2 Folheto de Instruções

6.2 Materiais Adicionais Necessários

6.2.1 Lâminas com Substrato 6.2.2 Tampão (PBS).

6.2.3

Câmara de Migração para as etapas de

incubação.

6.2.4 Conjugado de IgG Anti-humana (H&L) com FITC 6.2.5 Meio de Montagem e lamelas.

6.2.6

Microscópio de Fluoresceina com filtro de

495nm e filtro de barreira de 515nm.

6.3 Procedimento do Teste (Consultar folheto de

instruções das lâminas HEp-2 para mais detalhes) 6.3.1 Utilizar uma gota de controlo positivo pré diluído.

7 RESULTADOS

Este controlo deve apresentar, de forma rude, uma larga banda de coloração no interior do núcleo (normalmente menos de 6 manchas por célula), quando utilizado em conjunto com lâminas HEp-2 da The Binding Site e o conjugado FITC (cod. FA003) de IgG anti-humana. (H&L) Ver exemplos de imagens na referencia 1.

O padrão nucleolar é provocado por ANA anti- PM-Scl, nucleolin, ku e outros antigénios nucleares não identificados. Títulos elevados estão associados com escleroderma.

8 LIMITAÇÕES

A fonte emissora de luz, filtros e ópticas de diferentes tipos de microscópicos fluorescentes podem influenciar a sensibilidade do teste. A performance do microscópio é influenciada de forma significativa pela manutenção correcta do microscópio principalmente no que diz respeito à lâmpada de vapor de mercúrio e mudar a mesma após a duração recomendada.

9 REFERENCIAS

1. Bradwell A. R., R.G. Hughes (2007). Atlas of HEp-2 patterns. (3rd edition) Pub: The Binding Site Ltd., Birmingham UK.

SIERO DI CONTROLLO POSITIVO ANA

PREDILUITO - NUCLEOLARE

Italian

Per uso diagnostico in vitro

Codice prodotto: FA106

The Binding Site Ltd, PO Box 11712, Birmingham, B14 4ZB, U.K. www.bindingsite.co.uk

Telefono: +44 (0)121 436 1000 Fax : +44 (0)121 430 7061 e-mail: [email protected]

1 INDICAZIONI

Questo prodotto è utilizzato sui vetrini HEp-2 The Binding Site (codice FS001._), come siero di controllo positivo complementare nella determinazione qualitativa degli anticorpi anti-nucleo (ANA) nel siero dei pazienti, mediante immunofluorescenza indiretta. L’idoneità all’uso in altre combinazioni IFA non è stata valutata ma l’utilizzo in tali dosaggi non deve essere necessariamente escluso.

2 RIASSUNTO E DESCRIZIONE

Far riferimento alla scheda tecnica dei vetrini in questione per maggiori dettagli sulla tecnica di immunofluorescenza indiretta.

3 COMPOSIZIONE

Il prodotto è composto da siero umano diluito ad una concentrazione ottimale in tampone TRIS con lo 0,099% di azide come conservante. Il prodotto è monospecifico per il substrato indicato (i.e. solo un pattern) e viene fornito in formato liquido (volume: 0,5mL).

4 PRECAUZIONI

Il siero utilizzato nel presente prodotto è stato sottoposto a screening per donatori, risultando negativo per l’antigene di superficie dell’epatite B e per gli anticorpi verso i virus HIV1, HIV2 e HCV. I suddetti dosaggi tuttavia non garantiscono la totale assenza di agenti infettivi. È opportuno quindi stabilire delle apposite modalità per la manipolazione e lo smaltimento di tali materiali. L’uso del presente kit deve essere consentito solamente a personale qualificato per la gestione di materiali potenzialmente infetti.

Il presente prodotto deve essere utilizzato da personale specializzato. Si raccomanda di osservare la procedura del test alla lettera.

Il prodotto contiene sodio azide e deve essere trattato con cautela – non ingerire né permettere il contatto con la pelle o le mucose. In caso di contatto, lavare con molta acqua e rivolgersi al medico. Azotidrati metallici esplosivi si possono formare con il rame e il piombo; per evitare l’accumulo di tali composti, far scorrere abbondante acqua sui reagenti eliminati.

5 CONSERVAZIONE E STABILITA’

Il prodotto deve essere conservato a 2-8°C ed è stabile fino alla data di scadenza indicata sull’etichetta. NON CONGELARE.

6 METODOLOGIA

6.1 Materiali forniti

6.1.1 0,5 mL ANA Nucleolar IFA Positive control serum

(Siero di Controllo Positivo IFA ANA Nucleolare, prediluito).

6.1.2 Scheda tecnica.

6.2 Materiale necessario ma non fornito

6.2.1 Vetrini con substrato. 6.2.2 Tampone PBS.

6.2.3 Camera umida per le fasi d’incubazione. 6.2.4 Coniugato anti-IgG umane (H&L) FITC. 6.2.5 Soluzioni di montaggio e vetrini coprioggetti.

6.2.6 Microscopio a fluorescenza con filtro a 495nm (exciter) e filtro a 515nm (barrier).

6.3 Procedura (Far riferimento alla metodica fornita con i

vetrini HEp-2 per maggiori dettagli).

6.3.1 Utilizzare una goccia di controllo positivo prediluito.

7 RISULTATI

Questo controllo, utilizzato sui vetrini The Binding Site HEp-2 ed il coniugato di anti-IgG umane (H&L) FITC (codice FA003), deve presentare un pattern di colorazione con granuli grandi e grossolani all’interno del nucleo (generalmente meno di 6 granuli per cellula). Vedi il Riferimento 1 per un esempio fotografico a colori.

Il pattern nucleolare è causato dagli ANA diretti verso: PM-Scl, nucleolina, Ku ed altri antigeni nucleari non identificati. Titoli elevati sono associati alla sclerodermia.

8 LIMITI DELLA PROCEDURA

La fonte luminosa, i filtri e l’ottica dei microscopi a fluorescenza di diverse marche influiranno sulla sensibilità del kit. La performance del microscopio è influenzata notevolmente da una corretta manutenzione, e in particolare dalla centratura e dalla sostituzione della lampada a vapori di mercurio dopo il periodo di tempo consigliato.

9 BIBLIOGRAFIA

1. Bradwell A. R., R.G. Hughes (2007). Atlas of HEp-2 patterns. (3rd _{edition) Pub: The Binding Site Ltd.,}