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Revista da Sociedade Brasileira de Medicina Tropical 3 7 ( 6 ) :4 6 0 -4 6 2 , nov-dez, 2 0 0 4
Avaliação da eficácia da azitromicina e pirimetamina em camundongos
infectados por cepa cistogênica de
Toxoplasm a gon dii
Evaluation of the efficacy of azithromycin and pyrimethamine, for treatment of experimental
infection of mice with
To xo pla sm a go ndii
cystogenic strain
Susana A.Z. Lescano
1, Vicente Amato Neto
2, Pedro P. Chieffi
1 , 3, Rita C. Bezerra
2,
Erika Gakiya
2, Cláudio Santos Ferreira
2e Lúcia M.A. Braz
2RESUMO
Fo i a va li a d a a e f i c á c i a d a a d m i n i stra ç ã o p ro lo n ga d a d e a zi tro m i c i n a e p i ri m e ta m i n a e m c a m u n d o n go s i n f e c ta d o s c o m c e p a c i sto gê n i c a d e Toxoplasmagondii. Os a n i m a i s f o ra m i n o c u la d o s i n tra p e ri to n e a lm e n te c o m u m c i sto d e T. gondii e , a p ó s 2 0 d i a s, d i vi d i d o s e m q u a tro gru p o s: GI i n f e c ta d o s n ã o tra ta d o s, GII i n f e c ta d o s e tra ta d o s c o n c o m i ta n te m e n te c o m p i ri m e ta m i n a ( 1 2 ,5 m g/k g/d i a ) e a zi tro m i c i n a ( 1 0 0 m g/k g/d i a ) , GIII i n f e c ta d o s e tra ta d o s c o m a m e sm a d o se d e p i ri m e ta m i n a e GIV i n f e c ta d o s e tra ta d o s d a m e sm a f o rm a c o m a zi tro m i c i n a . O tra ta m e n to , vi a o ra l, e ste n d e u - se p o r 1 2 0 d i a s; a p ó s e ste p e rí o d o o s a n i m a i s f o ra m sa c ri f i c a d o s e f o i f e i ta a c o n ta ge m d o s c i sto s n o c é re b ro . A a sso c i a ç ã o d e a m b o s o s m e d i c a m e n to s p ro p o rc i o n o u m e lh o re s re su lta d o s, d i m i n u i n d o a c o n ta ge m d e c i sto s n o c é re b ro d o s a n i m a i s tra ta d o s d e f o rm a c o n c o m i ta n te .
Pal avr as-chave s: Toxoplasma gondii. Ce p a c i sto gê n i c a . In f e c ç ã o e x p e ri m e n ta l. Azi tro m i c i n a . Pi ri m e ta m i n a .
ABSTRACT
Th e e f f i c a c y o f p ro lo n ge d a d m i n i stra ti o n o f a zi th ro m yc i n a n d p yri m e th a m i n e wa s e va lu a te d i n m i c e e x p e ri m e n ta lly i n f e c te d w i th c ysto ge n i c stra i n o f To xo plasma go ndii. Th e a n i m a ls w e re i n tra p e ri to n e a lly i n o c u la te d w i th o n e c yst o f
T. gondii a n d a f te r 2 0 d a ys we re a llo c a te d i n to f o u r gro u p s: GI, i n f e c te d wi th o u t tre a tm e n t; GII, i n f e c te d a n d tre a te d wi th th e a sso c i a ti o n o f p yri m e th a m i n e ( 1 2 .5 m g/k g/d a y) a n d a zi th ro m yc i n ( 1 0 0 m g/k g/d a y) ; GIII, i n f e c te d a n d tre a te d wi th th e sa m e d o se o f p yri m e th a m i n e ; a n d GIV, i n f e c te d a n d tre a te d i n th e sa m e wa y wi th a zi th ro m yc i n . Th e o ra l tre a tm e n t la ste d 1 2 0 d a ys, a f te r th i s p e ri o d a ll th e a n i m a ls we re sa c ri f i c e d a n d th e c o u n t o f c ysts i n th e b ra i n wa s d o n e . Th e a sso c i a ti o n o f b o th d ru gs p ro vi d e d th e b e st re su lts, b y d i m i n i sh i n g th e c yst c o u n t i n th e b ra i n o f th e a n i m a ls tre a te d i n th i s wa y.
Ke y-words: Toxoplasma gondii. Cysto ge n i c stra i n . Ex p e ri m e n ta l i n f e c ti o n . Azi th ro m yc i n . Pyri m e th a m i n e .
1 . Laboratório de Imunopatologia da Esquistossomose ( LIM 0 6 ) da Universidade de São Paulo, São Paulo, SP. 2 . Laboratório de Investigaç ão Médic a do Departamento de Parasito lo gia ( LIM 4 6 ) do Ho spital das Clínic as da Fac uldade de Medic ina da Universidade de São Paulo , São Paulo , SP. 3 . Fac uldade de Ciênc ias Médic as da Santa Casa de São Paulo , São Paulo , SP.
Supo rte financ eiro : Labo rató rio s Pfizer.
En de r e ço par a cor r e spon dê n ci a:Dra. Susana Zevallo s Lesc ano . Instituto de Medic ina Tro pic al de São Paulo . R. Dr. Enéas de Carvalho Aguiar 4 7 0 , Prédio II/2 º andar, Cerqueira César, 0 5 4 0 3 -0 0 0 São Paulo , SP.
Tel: 1 1 3 0 6 6 -7 0 6 3 . e-mail: c hio ng@ uo l.c o m.br
Rec ebido para public aç ão em 0 5 /1 2 /0 3 Ac eito em 1 9 /8 /2 0 0 4
To xo pla sm a go n dii, agente c ausal da toxoplasmose em hospedeiros imunocompetentes provoca infecção usualmente a s s in to m á tic a ; po r é m e m pa c ie n te s im un o de pr im ido s , submetidos a transplante de órgãos ou em tratamento por quimioterapia e, a partir da década de 8 0 , infectados pelo vírus da imunodeficiência humana ( HIV) , a encefalite toxoplasmótica é a manifestação mais comum como resultante da reativação de
uma infecção crônica passada e, se não tratada, pode ocasionar graves lesões cerebrais e mesmo ser fatal4 6 9 1 1 1 3.
O tratamento padrão para a toxoplasmose adquirida é a c ombinaç ão sinérgic a de pirimetamina e sulfonamidas. No entanto, devido a sua toxicidade, a eficácia terapêutica desta combinação pode ser seriamente limitada nos imunodeprimidos, pois estes fármacos causam distúrbios colaterais expressivos.
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Lescano SAZ e t al
Novos agentes quimioterápicos menos tóxicos foram ensaiados em estudos clínicos, incluindo os antibióticos macrolídeos, entre eles a azitromic ina que apresenta marc ada afinidade pelos tecidos e meia-vida prolongada, ocasionando efeitos colaterais menos adversos1 8 1 0 1 5 1 6.
A pirimetamina, in vitro , inibe o crescimento dos taquizoítos em c onc entraç ões
≥
0 ,0 5 mg/L e é parasitic ida. Em modelos mur ino s de to xo plasmo se aguda te m mo str ado atividade protetora, porém a sua acumulação nos tecidos é retardada, pe lo q ue de ve s e r a dm in is tr a da e m c o m b in a ç ã o c o m sulfonamidas ou outras drogas. A azitromicina, cuja meia vida é pr o lo ngada e o c asio na me no s e fe ito s adve r so s do que a eritromicina, em modelos de toxoplasmose aguda, só apresenta efeito moderado sobre a infecção no cérebro; esta droga também fo i efic az i n vi tro , porém não i n vi vo c ontra bradizoítos intracísticos5.Estudos utilizando a associação azitromicina-pirimetamina em camundongos com toxoplasmose aguda mostraram a eliminação do parasita do sangue e pulmões resultando em proteção dos animais infectados e tratados3 8 10 11 13.
No presente trabalho, avaliamos a eficiência da azitromicina e pirimetamina, de forma isolada ou concomitante, na infecção murina experimental c om c epa c istogênic a de To xo pla sm a go ndii, produtora de infecções crônicas.
MATERIAL E MÉTODOS
Foram utilizados 6 0 camundongos BALB/c, machos, com 6 -8 semanas, inoc ulados intraperitonealmente c om um c isto de
T. go ndii ( cepa isolada na Universidade de Campinas, em 1 9 7 8 , e mantida por repiques sucessivos em camundongos) em 0 ,2 ml de solução salina. Os animais foram divididos, após 2 0 dias de infecção, em quatro grupos de 1 5 animais cada:
GI: Infectados mantidos sem tratamento. GII: Infectados e tratados, de forma concomitante, com pirimetamina ( Daraprim-Glaxo Wellc ome) na dose de 1 2 ,5 mg/kg/dia e azitromic ina ( Zitromax, Pfizer) na dose de 1 0 0 mg/kg/dia. GIII: Infectados e tratados da mesma forma com pirimetamina. G IV: Infectados e tratados com a mesma dose de azitromicina.
O tratamento, pela via oral, iniciou-se após 20 dias de infecção e extendeu-se por 120 dias, após os quais os animais sobreviventes foram sacrificados e foi feita a contagem de cistos na metade do cérebro de cada camundongo e a outra metade foi fixada para, posteriormente, ser submetida a cortes histológicos.
Para a contagem dos cistos, metade do cérebro de cada animal foi suspensa em PBS e passada dez vezes através de seringa de 5 ml com agulha 2 2 g ( 0 ,9 mm) . O líquido resultante foi centrifugado a 3 .0 0 0 rpm por 1 0 minutos à temperatura de 4oC e o número total de cistos em cada cérebro foi determinado
pela leitura microscópica de sucessivas alíquotas de 2 5
µ
l, até esgotar o sedimento de cada tubo8.Foram determinadas médias, desvio padrão e intervalos de c onfianç a da c ontagem de c istos no c érebro dos animais ( Média ± 2 xdp)
RESULTADOS
A Tabela 1 abaixo mostra a taxa de sobrevivênc ia dos c amundongos nos quatro grupos estudados, bem c omo o número médio de cistos de T. go ndii recuperados após necrópsia desses animais. A análise estatística desses resultados revelou que os animais tratados concomitantemente com azitromicina e pirimetamina apresentaram menor número de cistos no sistema nervoso central.
Ta bela 1 - Percenta gem de so brevivência e núm ero m édio de cisto s de
Toxoplasma gondii re cupe ra do s do s ca m undo ngo s do s q ua tro grupo s estuda do s.
Grupo Animais no início Animais Número médio Intervalos de Confiança
do experimento sobreviventes de cistos da contagem de cistos
no no %
G I 15 11 73,3 174,4 151,0 a 197,0
G II 15 12 80,0 14,8* 6,2 a 23,4
G III 15 12 80,0 35,0 21,8 a 48,2
G IV 15 14 93,3 78,6 56 a 101,2
* p < 0,05
DISCUSSÃO
Estudos terapêuticos utilizando a associação azitromicina-pirimetamina em c amundo ngo s c o m to xo plasmo se aguda mostraram a eliminação dos parasitas do sangue e pulmões de camundongos infectados, e redução da taxa de mortalidade, revelando proteção significativa dos animais tratados quando c omparados c om os c ontroles infec tados não tratados3 4. A
azitromic ina também é efic az c ontra bradizoítos intrac ístic os
in vitro mas a administração desta droga a longo prazo em camundongos cronicamente infectados não conseguiu reduzir o número médio de cistos no cérebro; no entanto foi observada reduç ão na resposta inflamatória no c érebro dos animais infectados e tratados5 8.
Os resultados da presente comunicação indicam que tanto a azitromicina quanto a pirimetamina, mesmo administradas por um período de mais de três meses, não conseguiram produzir a cura parasitológica dos camundongos. Entretanto, observou-se decréscimo significativo no número de cistos entre os animais tratados com ambas as drogas quando comparado com os não tratados, indicando que o seu uso concomitante é mais eficaz do q ue a adm inistr aç ão iso lada. B o sc h- Dr e sse r e c o l2,
empregando essa associação em pacientes com lesões oculares de toxoplasmose, obtiveram resultados semelhantes aos da associação pirimetamina-sulfadiazina com relação à eficácia, porém observaram menor incidência de efeitos colaterais.
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