Relação homem e atmosfera sob a objectiva de novas tecnologias

Universidade

de

Évora

I)epartamento

de

Biologia

Metrado

em Análiscs Aerobiológicas

&rrra"

ffirr*

o

_ATnos@rn

_sob

_a

@aüvaab

llovae

ffino@ras

Walison Yinícius

Muúoz

Orientador: Prof.

Ih.

Rui M.

A.

Brandito

"Estc tobülho nõo

hclul

os obsetações e c.rfricas _leilas pelo

_Júrt"

Universidade

de

Évo"a

Departamento

de

Biologia

Mestrado em Análises Aerobiológicas

&frrr,

Hr*u

mo

7\7mvsfia

sob

d

§ürl

À

@jeolfvaab

f\ona,

]íono@rne

',)

,lúf

/4

r

Walison Vinícius Munhoz

Orientador: Prof. Dr. Rui M.

A.

Brmdão

uÁste _{tabalho ttão brchd os observações e}

_eídus

feilos pelo

_Jrlrí"

Prof.

Dr.

_{Jorge Quina}

Ribeiro

de

Araújo

Reitor da Universidade de

Évora

Prof.

Dr.

Lufu Manuel Pais Silva Dias

Presidente do Conselho de departamento de

Biologia

Prof. Dr.

Luiz

Gavarini

Presidente do Conselho CientíÍico da Área

Ilepartamental

de Ciências da Natureza e

Ambiente

Prof. Dr.

Carlos José Manaia Sinógas

I

minha

familia

qrrc mesmo

à

distancia sempÍre

_Frmaneceu

pressnte e,m cada

dia

desüe

Eabalho.

À

minha as66m61s que não deixou que eu desistisse, mesmo abdicando da

minha

presença por dois anos consecúivos.

Agradeço a Deus por todos os ensejos, desde a minha

üda

e saúde, até minhas

realizaçõe

como este mestrado.

A

todas as p€ssoas que direta ou indiretamente, contribuíram para a realizaçâo

deste projecto, agradeço

pla

oportunidade que me proporcionaram.

Ao

Professor

Dr.

Rú

Manuel

de

Almeida

Brandão

poÍ

sua

orientação,

colaboração,

apoio, incentivo

e

acima

de

tudo

que

extrai

de nossa

convivência,

sua

paciência para com minhas inópias.

Ao Dr.

Carlos

José

Manaia

Sinogas,

pelo

convite

a

rertli,zacÃo desta tese e

principalmente pela indicação do orientador que não poderia ser mais recomendado.

À

Pmf." fh.u Carmen Gàlan Por sua

amúilidade

e gentileza em conceder aoesso

a infra-estrutura necesúria para aralizaryão de paÍte crucial

dste

projecüo.

Às Doutoras Elsa Rtúe

Guera

Caeiro e Marta Gómez Domenech pela _"mizade,

disponibilidade, insüuçâo, apoio e confiança

À

Dr." Maria

Lúsa

Lopes pelo coúecime,nto cedido, pela confiança e gentileza

A

empresa Bemin Techologies, pela

oprtunidade

de

rexJiza.go deste trabalho

bem como à Engl. Esmeralda Carv"alho apoiando tecnicamente o projecto.

Ntlo poderia deixar de

registar

meus sinceros agradecimentos aos meus colegas

de formagão, que fizeram o possível paÍa me integrar em sua cultura e círculos social e pe*soal. Nunca permitindo sentiÍ-me só.

À

Ur."

TerszaNogueiro

e ao

gúinete

de relações internacionais de Évora

por

todo o apoio prestado mesmo arües da minha chegada à instituição de acolhimento.

Especialmente

4

minha família,

meus

pais

Silvio

Ap.

Mrmhoz

e

minha

m4le

Suely

T.V.

Munhoz que trrdo

frzeram

para

que eu

seja

alguém,

me

encorajando,

apoiando,

me

amando

em

toda cumplicidade para realizar meus projectos.

E

a

meus

irmãos Hele,n Cristiê e

Silüo

Angusto que nunoa faltaram com sua ajuda e fratemidade, mesmo quando a precisavam e mereciam mais que eu.

A

minha narnorada Ana Claudia de Cawalho, que nem por rml dia deixou de me ligar e acariciar com suas palavraso fortalec€ndo meu ego quando tudo panecia perdido.

Com

o

apoio

do

Programa

AlBan,

Programa de bolsas de

alto nÍvel

da União

íVlva

_{como se fosse}

_morer

_amanhã,

aprenda corno se fosse

viver

para

sempre'

Sumário

.l

ii

Lisa

de

úreviahras

e siglas - Notação

Lista de símbolos...

Lista de llustrações

Justificação

AÁraemEstudo

Enquadramento Geográfi co ...

Cuasrsrizaqàa da Área em Esuxlo

Paísagem... Período de estudo Meteorologia Metodologia. Lista de quadros...

vl

Lista de tabelas

vll

Lista de gráficos.

v

x

2 5 5 7 7 9 9 Introdução.... Objetivos... Método de

Hirst

Método Cyclone

Obtenção dos inquéritos

l0

t2

l5

l6

22 33 34 37 37 38 40 46 46 48 Análises Sintomatológicas

Tratamenüos estatísticos e incrpretação dos resultados

Análise dos Resultados Polínicos....

Parâmetos estatísticos....

Aerobiologia de Évora...

Tipos polínicos anal isados..

Asteraceae....

Cupressaceae 51 56 62 65 6E

7l

74 77

8l

84 90 90

9l

92 93 95 96 97 98 99 Fagaceae Myrtaceae Oleacae... Pinaceae...-... Plmtaginaceae Platanaceae.. Poaceae... Rumex - Polygonaceae Urticaceae.... Diversos... Aceraceae... Apiaceae AÍecaceae. Betulaceae Boraginaceae Cyperaceae...

Eriecae...

Euphorbiaceae Fabaceae Moraceae Saticaceae Typhaceae

Ulnaceae...

Polens totais. Considerações Finais ... Lista de apêndices... Lista de Anexos ... 100 101

tu2

103

r04

108

llE

153

Rquno

Introdução:

Os mélodos volumétricos de recolha de amostras de ar constituem

os

mffios

dominantes actuatmente para

a

monitorizaçao

de

aeroalergenos, sendo a

metodologia

'HiÍsfo

a

dominante

per.a

a

monitorização

do

pólen

atuosférico.

Rece,nte,me,nte tê,m

surgido

algrms

avanços

metodológicos nesta

fuea

combinando tecnologias bioqulmicas

e

imunológicas

pelo

que se empreendeu esüe

estúo

a

fim

ds

oompaÍar uma tecnologia

"Ciclone',

desenvolvida no âmbiüo de um projecto europeu do

programa

LIFE

(LIFEOS

ENV/F/000068),

com

o

referido método

padrão

quanto

à

eficiê,ncia de captaq,áo do pólen atmosférico e à detecaão de aeroalergenos políniçss.

Métodos:

Foram efechradas amostragens do conteúdo

polínico

tuosférico

dos

pnodos

de

polinização

dos

anos

2006

e

2007

mediante

um

colecúor

tipo

*Hirst"

(BurkaÍd@ Seven Day Recording

Volumetric

Spore

Trap$

e

_'m

colecúoÍ

tipo'Ciclone'

(AeoluS@, Corioliss@ da

BeÍtin

Technologies), colocados lado a lado. Foram insialados sobre nma plataforma meteorológica situada no

cento

da cidade de

Evora,

l7m

wima

do

nlvel

do

solo.

As

amostra"s

foram

amalisadas

de

acordo

com os

protocolos

estúelesidos

para cada método.

De forma

complementar

foi

realizada rrma

coffil@

dos

dados

obtidos

eom os

registos

de

inquéritos

sintomarológicos efechrados

por

voluntários das oonsultas externas de Imrmoalergologia

do

hospital

do Esplrito

Santo

em

Évora- Todos

aqueles

que

aprcsentaram queixas respirarórias durante

o

períotlo

primaveril

efecfuaÍam testes

cúlneos

em'?rick"

modificado

aos aeroalergenos mais frsqitentes na regiâo, a

fim

de se determinar o respectivo

perfil

de sensibilidades.

Rsultados:

Esperou-se

com

este

esfudo

testar

a

eficácea

de

_'ma

nova

metodologia

para

detecção

e

análise

de

bioaerossóis, comparativamente

com

a metodologia padrão e com a sua relação sintomaÍologia aÍópica respiraÍória"

Palavras

chave:

aeroalergenos,

polÍnicos, tecnologia

de

monitorização aerobiológica

Absfrad

Relationship between

Mot

and _{Atmosphere under the Perspective of New Technologies}

Introdudion:

Nowadcys volumetric

metlndsfor

bioaerosols sampling

corstituÍe

the main

rnethads

to

monitor the

aeroallergens

whereas

'Hirst"

methadologt

is

the

most dominont method

to

monltor

airborne

pollen

Recently

some metlndological

advances hsve been introdused

in

thk

area matching biochemical alnd

imrumological

technologies

aná

so

a

study was

acconplished

in

ordcr

to

conqrtre

a

"Cyclone"

teclmalogt,

developed

wder

tlre scope

of

an European

project -

the

UFE

progrom

-,

wíth

the merúiorud standord method

in

terms

of eficiency

of airborne

pollm

sompltng

and det e ction

of

aer o aller gens.

Mdhods:

Áir

sanples

_fram

the outdoor envirownznt were collected

àring

the

pollinaton

periad

along

the

yeor

2006

and

2007

with

a

'Hirst"-type

collector

@urkarP

Seven

Day

Recording

Vohmtenic

Spore

Trry@)

ond

a

"Cyclone"-type

collector

(Aeolus@, Coriolka@

Bertin

Technotogies),

placed side

by

side.

They were

lnstalled

on

a

meteorologicat

ptatform

situoted

at

the cenÍer

oÍ

Éwro,

17m

abwe

grüm.d

level. Samples were

anafized

to

tlu

establislud

protocols

_fu

erch

method

In

a

complemenÍry

way

a

data

correlation

was

done

between

the

symptomatologic

inquiries

_from

volunteers

of

tlu

hnnuwallergologt

efiernal

consultations

at

tlu

Hospital Espírito Sawo,

in Évora

Everyorc

declwing

breathing

complainÍs

during

the

spring

season had

doru

modified

skin

"Prick'

tests

to

the most usual aeroallergens

ofthe region

ResUIís:

It

is

waitedÍrom

this study to test tlre

eficiency

of

a

new

metlndologt

for

detectton

and

orulysis

of

bioaerossols,

comprattvely

with the

standwd

nethodologt

and and its

relationwith

the atopic sirnptomotologic

breahing

Kq-Words:

aeroallergew,

airborne

pollea

sampling

technologies

_for

b io aer o s o I s manit oriz

úion

Llsta

de abrevia,uros e siglos - Notação

Ai

obsorbârcia

(nm)

Ae:

volwne da alíquota

pwa

ELISA

_@A

Apuú

(mim)

jmto

q

junro

de,

perto

de, diante de, em,

por,

ra

tempo de, em casa de,

ern

relação

a,

em componhia

de;

(cúação)

do

obra

de, citado

por,

conforme, segundo

_-

Paluvra lotina

usada

para

citações

_{indiretqs; @ireito)}

para

referir-se onde se originau o dacamento citado

Bur:

Unidade

de

meüdo

de pressão

igual

a

105

pascals,

correspondente

o

aproximadomewe 750mmHg ou 0,987

atnosfera

(FERREIRÀ

2004).

C:

corrytrimento da lamela (mm)

C§:

"Cyclone

Sonpler",

nome

do

método

utilizado

que em sua

versão

qortuguesada

tornou-se (métada Ciclone)

cÍ.:

confrre

cotdroüe,

compare

D:

diâmetro devisão do microscópio (mm)

Í:

fluxo

de ar aspirado

_ümrn)

Ibídem:

(aim)

aí

mesma;

no

me$no

lugar,

ru

mssmq

obra,

cqútulo

ou

página-@mprega-se

em

cítoções);

Enndo

a

citação

seguinte

é

do(s)

mesmo(s)

autor(es) e

dt

uma rnesma

obra

L:

lwgwadalmtela

(mm)

,r:

mimero de linhas de

leitura

nm;

Nanômctros

(lüemetros)

rY.'

mimero de testados

Psí;

unidsde

de

medida

de

pressão

(Pound-force

per

squere

ínch)

ou libra

por

polegoda quadrada é

a

anidede de pressão no sistems Inglaterra/americano:

Psi

x

0.07

:

Bm;

Bar

x

14.5

:

Psi (FERREIRA, 2004).

f,.'

volume de líquido de re-suspensão (ml)

RE/I:

Rede Espanhola dc

Áerobiologia

§PÁIC:

Sociedade Portuguesa de

Alergologia

e Imunologio

Clínica

r,.'

volwne deposrtado

ra

lômina (ml)

Vs;

volume analisado

por

lôrnina (ml)

VÍ

volumefinal

de ltquido nn cone (ml)

@:

tenEo de amostragem

(miruÍos)

o

Lísta de

shúolos

#

Octothorpe, ststenido,

Cardinol

oa Cardeal, _Qepresewodo aqui como os

eppedorfes

contendo o

precipitado)

%

Percentagem

&

Ámpersandou"e"

comereisl

*

_Ásterisco,

_(representa

_neste

_trqbqlho

_os

_eppendorfes

_contendo

o

sobrendante)

t

"Para

cima

ou

pcra

baixo"

(up/down" dumentar

ou

reduzir um valor

pogramável)

q

Confirmar

f

Cancelar

/

Por,

(dwaçõo limitada

ou

indeterminoda

de

tempo

ou

unidade

em senÍ'tdo

dktributivo)

e

Tempo dc omosttagem

Lbta

de

quairx

Çaa&o

I

Unidades dos pofunetos melearclógicos Quadro 2 Notação da eryaçio

_-

Httst.

Quadro 3 Notaçdo da eqaoção - Ciclone

fua&o

4 Rqr*axaçdo dos Footílias anolisadas.

Qua&o 5 Notação dos eqoçõa dafolha de calaio eletrôüca.,.

Qua&o 6 Notação de intüpdaçAo

da

tabelas de positividade alétgico.

Quadro 7 Tuaacum sp.

_-

Desaição do tipo polÍnica e de aleryenicidade .

Qaaúo 8 Cherupoditn sp.

_-

DesoiçÃo do tipo polhico e de al*genicidade...

Quaúo 9 Oqrusus sp.

_-

Dessição do tipo polínico e de alugenicidade ..

Qttaúo l0 Querau ila-

-

Dexcrição do tipo polÍttico e de olergenicidade...

Qua*o I

I

_{Q. suber}

_-

Descriçdo do tipo polínico e de alergenicidode Quadro t 2 hrca$ptas sp.

_-

Descriçdo do tipo polínico e de alergenictdade,

Qaa&o 13 Olea ewopeae

_-

Descriçdo do tipo polinico e de alergenicidade,...

Qaa&o 14 Pturus sp.

_-

Desctlçdo do tipo polínico e de alergenicidade...-Quadro l5 Plantago sp.

_-

Descrição do tipo polínico e de alergenicifude...

Qaaúo 16 Platarus _W.

_-

Descriçdo fu tipo polhtico e de alogerricidqde .,'... Quodro 17 Poa sp.

_-

Descrição do tipo polÍnico e dc alergenicidade ....-....

Qaa&o 18

Rwtu

sp.

_-

Dacrição do @o polínico e de alerganicidade.

Qndro 19 Pariúoia sp.

_-

Descriçdo do tipo polínico e de alergenicidade'...'

Quabo 20 tJrtica menbranacea

L -

Descrkão do tipo polínico e de alergenicidade..

Qta&o 2 I Ácer sp.

-

Dac:rtção do tpo polínia e de alergenicidode..---..

Quaúo 22 Foeniaium sp.

_-

Descrlção do lipo polinico e de alug@ticidade.

Quaúo 23 Areca sp.

_-

Descrição do tipo pol[nico e de alergenicidade

Quaúo 24 Baula sp.

_-

Dacrição do ttpo pol*tico e de alergenicidade.. Quadro 25 Alrus sp.

_-

Desoição do tipo poltnico e de alergenicidade..

Qaa&o 27 Cyptas longus L.

_-

DacriçAo do tipo polínico e de aleryenicidode

Qtaiiro 28 Erica sp.

_-

Descição ilo tipo poltnico e de al*genicidade..

Qaodro 29 Mercurialis sp

_-

Desoição do tipo polínico e de alergenicidade-... Quadro 30 Acacia sp.

_-

Dacrição do tipo polinico e de alergentcidade...

Qtta&o 3l Mottts sp.

_-

Descrtção do tipo polínlco e de alergenicüade

Quafuo 32 Salir sp.

_-

Desqição do tipo polbtico e de al.ogenicidade..

Quaho 33 Typho sp.

_-

Descrição do tipo polÍnico e de alugeaicidade

..-...r2 25 26 ...28 ...37 .._...46 ...48 .-62 43

5t

56 65 68 7t 74 77 84

9I

-.-_...---59 ...81 ....87 .---90 ...92 ...93 94 Qua&o 26 Eclriun lwitanicun L.

_-

Dqçição do tipo polfuia e de alugeticldade..',....-...--...'...,9J ..96 ..97 ..98 ..99 ra0

t0I

...t02 ... r03 Qaa&o 34 Ulmus sp.

_-

Descrição do tipo pal[nico e de alergenicidade

Lísta de labelas

Tabela

I

Folha de colcttlo genbica

pua

inserção dos resuludos polÍnicos (represaxaçdo).-..'...--.-...-37

Tabe.la 2 bcala mârica tntervalo J8

Tabela 3 Concenlraçdo polínica mewal ...

Tabelo 4 Positividode alérgica às grortíneas...-.-...,.--... .-.42

Tabela 5 Positivldade alérgica aos tbora polínicos... 43

Tabelq 6 Resun o dos dados relatvos a AsÍeraceae...

Tabela 7 Resumo das dsdos reldivos a Chenapodiaceae ...-49 Tabela E Reswno dos dados de correlaçdo simomaológica por qorelho - Chewpodtaceoe.

Tabela 9 reswo dos dados rela'oos a Ctqressaceae

Tabela l0 Reswto dos dodos de canelação sifitomúológica por

qúelho

- Crya§aceae ..,

Tabela I I Rwano dos dados relotivas a _Querctu

...-....-Tabela 12 Resumo dos dodos de con'elação siiltomatológtca por apoelho

_-

Qtercus sp, . 57 Tabela 13 Resno dos dados relativos a _Quucas suber ... 60 Tabela 14 Raçmro dos dabs de conelnçdo siwomaol&gica por aparelho - Querats suber _{'...'...-...60}

Tabela 15 Resailto dos dados relativos a

lVÍyrtaceae.-....

...'...6J Tabela

l6

Re-rwno dos dados de conelação sintomatalógico por apuelho - Myrtoceae... 63

Tabela l7 Reswno

dx

dados reldtvos a Oleoceae.... ._...66

Tqbela

I8

Resa no dos dados de conelação sixÍomaológica por

quelho

- Oleaceae 66

Tabela 19 Resuna dos dados relativos a Pinaceae-..- 69

Tabela 20 Revuno dos dados ile conelação sinÍomdológÍca por

qoelho

- Pinaceae'...69

Tabela 21 Re.çumo dos dados relalivas a Plawaginaceae 72 Tabela 22 Rquno dos dados de conehçdo sinlotrrdológica por opuelho - Platxoginaceae...-.,...72

Tabela 23 Rquno dos dados relattvos a Plúanscese ._-....75 Tabela 24 Rwano dos dodos de correlação shromatolfulco por

qudho

- Plowwceae...'...'....,.75

Tabela 25 Resumo dos dados reldivos a Poaceae... .,'....,.78 Tabela 26 Rqano du dados de correlação sirtomaológica _{por ryüelho} - Poaceae...,...,,...-..79

Tabela 27 Rqitados do

ELISA

Pl

p5 e concenÍração...

Tabela 28

R*mo

dos dados relaivos a Rans...-...-.... 82 ?abela 29 Renno dos dados de cotelaçdo sintanúológica por aprelho - Ramü..'...--...,...82

Tabela

i0

Resuno dos dodos relativos a Puieluia sp..

Tabela 3I Resnno dos dados de conelação sintomstológica por apuelho

_{- Puiacia}

ry. ...8J

Tabela 32 Resnno dos dados relattvos a Urtica membramacea ...E8

Tabela

3i

Reçumo dos dados de conelaçdo siníomaológica por apoelho

_-

Urtica membranacea...88

Tabela 34 Remtno das dados relativos a somatória dos tipos polínicos.. ...104

Tabela i5 Renno dos dados dc conelaçdo sinlomdológica por apoÍelho

_-

íodos os tipos polinicos...I04

Tabela i6 Duuição mennal ds recolha polínica no poíodo dde

omos'bagem

...,...105

- _{- -.} -- _{----..-..-...--.4}

I

...47 -..-49 ....52 ....53

-"-"-"""""""""""57

.-...85

v[

INa

de gnúficos

Grffict

3 Velocidadp do Venlo l§n/h...".

Grffico 2 Hwtidode Relaiva do Ár ?6 & Precipitaçdo

nm

GrSco 4 Níveis mdeorolfuicos referenes ao Coriolis5o

.---Gráfico 5 Distibuição por sso...

Grffia

6 Histagrona de gen*os e idode...

Grffico 7 Histogrnra de

s*o

e üagústico

Gr$co 8 HMogrono de diagnostico pelo idade...-...."..

...12 -... r3 ...-....34 ...

rJ

.-._-... I 4 34 ..-...35 35

Grffico 9 Composiçdo do xpectro políüco no períada _e/d ...-... ....-.40

Grfico

I0 Coúribui4do na concqúraçAo do espec*ro polínico por

eqúponefia

...,41

Grffico I I Histograna de repraenlação da caplaúo polfuica realizada pelos quipaneflos...-....42

G*lftco 12 Distribuição dt reotividade das gramíneas por sao e por idade... 44

Grffico l3 Distribuiçdo suaol da população alergica analisado por tipo polínico

Gráfico 14 Distribuição etbia dos paciefia anallsados...

Gr$co 15 Dtstribuição dos paciení* pelo diagnostico

Grffico 16 Evoluçfu dt concetraçdo polínica (Srdot/n') - Ástqaceae ....-.... --.-....47

Grüco 17 Evolução da corcattração polfuica (grãoilni)

Ohenopodiaceae

...-...-..49

Grifico l8 Média de cofiingência de cada sintoma com as concenoações encontradas nos quelhos ..50

Grffico 19 Conelaçdo dos méüas sintamdolfuicc com as concenfrações de Chewpodiun pelos

eEtipnru?úos... -._...50

Grddlco 20 Evoluçâo da concearação potízica lupressooeae.---...---*.-.-- ---.-.52

Grófico 2I Média de conttngência de cado sintoma com as concenbaçõ* encorúrados rus aparelhos ,.53

Gnifrco 22 Conelação dos méüas sintomdológicas con as concerírações de Cupr*sus pelos

----.-...-54

Grtífuo 23 Relaçdo entre a conceütraçdo média de Ctqressus por equipane os e aerualergeno Ctq

al

._-...5J

Grffico 24 Conelaçdo do concentraçdo müia de Cup aI pela média stulomatol@ica dos voluntfuios .55

Grdfiu 25 Evolução do concentraçilo polínica - 8uercus...--.. ...,...,..57

Grfia

26 Méüa de cortingência de cado sitoma cam as concentações enantrqdas nos aparelhos ..58

Grffico 27 Correlação das méüos sintomdológicas com as concentraçõa de _Qrcrcts sp. pelos

equiponentos 58

Grffco 2E Evolução da concentação polínica

_-

_{Querats suber...-..}

Grdfico 29 Média de conÍingência de cada sintoma com as concenÍrações encofirada nos apoelhos

Grffico 30 Conelaçdo dns médio.s sintomaÍológicas com as concerúrações de Quoctts xtber pelos

Gr$co

il

Evolu@o da concentraçdo polínica

_-

lvÍyrtaceae....

Grflia

32 Médio de conlingência de cadq sintoma eom as ancenlroções encontadw nos aporclhos ..64 ...44 .-...45 ...45 .60 .61 .61

.6i

vur

Grffico 33 Corelação das médias siaomaolhgicas com

6

corrcerúrações de Myrtaceae pelos

equipontenlos - .-..-.-...64

Grüco 34 Evoluçdo da concentroção polfuico

_-

Oleaceae

...óó

Gr@co 35 Média de contirgência dc coda siaoma com os cancetúÍq@es encofiradw nos qoelhos .,67 Gr@co 36 Conelação das médias sintomúolfuicas com as concentrações de Oleaceoe pelos

equlpmtentos -...,... 67

Gnifico 37 Evoluçdo da concentraçdo polínico

_-

Pinoceae. ,...,69

Gráfico 38 Média de contingãcia de cada sintoma com as concaúrações encontradas nos quelhos ..70

Gr$co 39 Conelaçdo das médias sintomdológicas com as concqttrações de Pinoceae pelos

eq.ipanen os. .-....70

Gnifico 40 Evoluçfu da concentraçdo polinica

_-

Plauaginaceae

...,.

...-...72 Gráfico 4l

Müia

de contingência de cada sbtoma com as concefiraçõa encontados nos qoelhos

.,7j

Gràfico 42 Conelação du médias simomaológicas com as cancentrações de Plantaginoceae pelos

eqüipúrefios... -.. - -_-.--73

Grófico 43 Evoluçdo da corcentação polínica

_-

Pldanaceae

Grffico 44 Media de contirryência de cada sbtoma com as concefirações encorffadas nos

Grffrco 45 Co*elação das médias sintonotalôgicos aom

a

concentrações de Plaouceae pelos

equipamerrlos 76

Grúfico 46 Evolu4do da concen*ação polhtica

_-

Poaceae. ...-...78

Grdfico 47 Dilaição do nAc Phl p5 1/1200 ... ...-...79 GrQfuo 48 Diluição do mÁc Phl p5 l/lNM..-. ..-...-...79

Grfico 49 Média de contingência de cada stntoma com as conce? tações encontadas nos apoelhos ..80 Gnifico 50 Correlaçdo das médias sintomatológicas com as coruenlrações de Poaceae pelos

Grúfrco

5l

Evolução da cotrcenlraçdo polínica

_-

kona-

82

Grffico 52 Media de cartbryência de cada sbúoma com as ancentrações encofirada nos apoelhos ..83

Gró1ftco 53 Con'elação das médias simomaolôgicas com as conceflÍa@es de

kolq

pelos eE r?ímtentos

83

Gnifico 54 Evolução da concefirqão polínica

_-

Poietoia sp. *-...--,-..* ...8J

Grffico 55 Média de cowingência de cada sintoma com os concerútaçõB enconlrads flos quelhos ..86

Grdftco 56 Conelação das méüas sifiomatal@icas com as concentratÃes de Püietüia sp. pelos

eqtipamenos - 86

Grfico 57 Evoluçdo da ancenraçdo polínica

_-

Urtiea

metnbronácea

...-...88

Grffico 58

Müia

de cofiingência de csda sitttoma cotn as concenfiações eaanlradts nos quelhos .,89

Grffico 59 Correlaçõo da médias sintomatoló'gicas con

a

concentrações de Urtica membranacea pelos

qttponentos... .,...,.89

...104

Gr$ico 6I Análisefaaorial de conapondênciqs püa determinoçio da relaçio entre Corúagerc

Polínicas e

Sirúomdologia

....,-...JA6

.75

.76

Gtüco 60 Valumes polínieos totais colhidos pelos q*elhos....

Lisüa de

llustrações

Ftgura t Área de Portugat----...-.

Figrra Figtro Figwa Figwa Ftgtra Figtra Figwa

SBar|,sê

T4rypottenwf

9 Esquema mecfutico do aledor Burhod 74ay potlen trap@.

I0 Leiatra adqtada da lânina do métoda Hiãí... I I Stqorte

poa

o tombor...,....

12 Tonbor -

Bwkrd

13 Pinceis para

qlicr

o Silicone

l4

Trwa de segurmça hwkard...

Nwa conqão do tubo de sucção..

Leitura de 1 lâmiru obtida pelo sisrema ciclônico

Esquana do processo ELISA aplicado ao alérgeno Crry a|.... Repraenaçdo da placa de 96 poços EUSÀ Cry aI ...

Esqaena do procqso EUSA aplicado ao olérgeno Phl p5...

Repraenação do ploca de 96 poços ELISÁ Phl p5..-Orgotogra ru de abtenção dos lnqaoitos...

7

I

Figrra 2 Área do Alet tejo....-.,...-.

Fígwa 3 Área de Évoro.,...

Figura 4 Cidade de Évoro -...

Figwa 5 Torre Maeorológica do

INMG-Évora...-..-.--Figura 6 Locatização dos colectora na plaÍdoÍora meÍeorológica do INMG em Évora .t

I

Ftgura 7 Orgmogrmta geral da maodolo§a uada no âmbito do projecto Mono1isa...--...-15

-...8

I

I

...

/6

16 21 22

,,

22

.2i

Figura 15 Topo do mecoismo de _fuaçilo do tanbor ...

Figra

I6 Régua de corte da _frta de Melinq...,... Figwa 17 Etiquaação da lànina Hirst Figura 18 Gota dligua no cenro da üinina....,.... Figna 19 Fbotdo

afia

de Melina Figuta 20 Com as gotqs do coraríefuador...-.... Figwa 2I Ácabado o e.sfregaço com a íaneha... Figura 22 Aeolu§ Figtra 2 3 Coriolis5@ ...,.. -Figwa 24 Processo "Cyclone Sanpler Figtna 25 Patnel do Áeah§... Figura 26 Cwvafina do rubo e cilinfuo de colheita...

Figra

27 Visõo do Coriolis5@ iwtalado pta$orma com sua aba de cú*vetuo Figura 28

ldentqtor

do qoelho, sewor de lannidade e botão de injeçno Figura 29 Painel CoriotisP... ...17 ...17 ...18 ....19 ....19 ....20 ....20 ....21 ....21 ....21 ....---....23 Figrra Figura Figtra

Figra

Figura Figura Figura 30

3I

32

3i

34 35 36 )Á ...24 ,.,...24 .24 ....-...26 ...29 ..,...,.29 .,,...,31 ...32 ...33 ...36

x

Figwa j7 Imagen do mtebraço de um paciente ao realizar o tesle em Prich...

Figura 38 Tocactan sp-.-.

Figra j9

Chempodtwt sp. .-..-...-.-.-.

Figra

40 Crqressus qp...,...,.-.

Figra

4I Cwva de calibração do método EIJSA

pua

Ctq al .

Figura _{42 Çuerczu} sp...

Figro

4

i

_Çuoctts suber...

Figura 44 hrcafuna sp. ....-.,.... Figwa 45 Olea sp. -....--.-...-Ftgura 46 Pirus qp.-....-...-...-Figwa 47 Paltago sp... Figura 48 Plaorus qp. ...

Figra

49 Poaceae Cp... Figtra 50 fuuna sp.,...,...-Figura 5 I Püiet@ia sp...-...

Figwa 52 Í.hica membranacea

Figura 5j Aca sacchtunt...

...48 ...J.í ..-...54 ...56 ...5e ...62 .-...65 ...ó8 46 7I ..Et ..84 ..87 ..90 ..91 ..92 ..91 ..94 ..95 ..96 ..97 ...74 Figwa Figwa Figrra Figura Figura Flgwa Figwa Figtra Figura Figwa Figara 54 Foenicahon va|gare... 55 Areca sp. -.... 56 Berulasp... 57 Álnus... 58 Echiun sp. 59 CJtperus sp. 60 Erica sp... 6 I Merc:wialis sp. L... 62 Ácacia sp... 6i Monx sp. .... 64 SaIb sp... 9E 99

Figura 65 Tbpha ongstiÍolia

Figura 66 Umu sp. .,..--...-... ...1U) ...101 ...102 ...-..t0i XI

Introdução

De acordo com a _{Academia Europeia de Arergorogia}

e Imunorogia _crínica

_(EAACI),

a alergia é a doença crônica mais cornum entre crianças em paÍses _da

_união

_Europeia

@u)

(WICKMAN et ar.,

2003).

Além

disso,

_o

_{Estudo Intemacionat}

_de

asma e Alergia

na

tnfãncia

(ISAAC),

_{revela que}

_a

_{prevalência de}

_rinites

alergico sazonal

variou

am partes

diferentes do mundo de 0.g%

a

r4.9o/oem _{crianças no escalâo etário dos}

É7

anos e _{de 1.4% a}

39,7Yono de l3-14-anos (STRACHAN. _{et al_, t99T).}

É

no

contexto _{deste quadro que,}

_"[....1

_o

_conteúdo

_polínico

atmosférico

_tem

_sido

objeÚo de _{estudo em vrírios países do mundo,}

sendo a Europa e a América os _{contínentes com}

maior quantidade _{de trabalhos realizados., (RAJO, 2000).}

De acordo com Rajo (2000), o termo Aerobiologia

_foi

_{utilizado pela primeira vez por}

Meier em 1930 e definindo

como'hma

ciência multidisciplinar, _{que se enca1aega do est.do}

dos esporos

filngicos,

grãos polínicos

_e

_{bactérias presentes na aúnosfera.,,}

Os

capüadores

aerobiológicos são dispositivos

de

colheita

do

contcúdo

_{biológico atrrosférico}

_existindo

actualmente diversos sistemas para

a

captura de partículas suspensas

na

atmosfera, cuja

utilização depende do

tipo

_{de partícula que se quer analisar e/ou da tecnorogia que ss queÍ}

empregar'

_No

_{caso das partículas}

_polínicas,

_a

amostragem assenta basicamente

ern

2 metodologias: o método gravimétrico e o volumétrico.

As &íçniças _{gravimétricas capturam as partícuras de um modo passivo, simplesmente}

tirando proveito _{da graüdade para recolha destas.}

_As

_{fracções polínicas}

são apanhndas em superflcies adesiva ou meios de cultura.

os

metodos _{volumétricos de recolha de amostras}

implicam _{a sucçâo de ar de modo ativo, controlando o volume e o}

fluxo

aéreo impressos na

ünosffa

Os

metodos

_{volumétricos sâo}

_dominantes

_atualmefie

_para

_a

_{monitorização}

de

aeloalergenos,

e

a

tecnologia

Hirst

foi

escolhida

como padriio

_de

_{referência nas}

_redç

aembiológicas em úodo o mundo, por permitir _{uma monitorização contínua da atmosfera com}

alto grau de resolução' É _{claramente a dominante para a monito irlzrçãado pólen atnosférico}

de

arnbientes extraÍnuros.

Nste

método,

as

partículas polínicas

são

idenüficadas e

quantificadas por microscopia óptica.

Na

actualidade,

as

redes

de

_{monitorização aerobiológica apenas}

_identificam

_e

quantificam certos tipos _{de grãos de polens e espoÍos flrngicos fomecendo uma informação}

parcial da alergenicidade

do

ar pois tomam em _{consideração apenas os grâos de pólen de}

certas plantas e não a alergenicidade direta destes polens e esporos na aünosfem

Contudo,

recentemente

têm

surgido alguns

avanços metodológicos

nesta

área,

combinando tecnologias palinológicas, bioquímicas e imunológicas pelo que se empreendeu este e§tudo a

fim

de comparar uma

'hova'

tecnologia Cyclone, desenvolvida no âmbito de

um projeto suropeu do programa

LIFE

(LIFEL|

_{E?,IV/F/00006L) de acrônimo}

_{MDNÁLISÁ_}

"Monitoring

Network Aliergens

by

rmmtmo-lamptin§',

_com

_o

_referido

_{método padrão}

relativo à eficiência de captação das partículas polínicas.

Este

projúo

_{que obteve um apoio da Comissão Europeia rerfure 8 equipas de 7 países}

europeus diferentes.

A

empresa

Bertin

Teçhnologies

(França)

_foi

_a

responsavel pela

adminismaçâo global e financeira do projeto e disponibilizou a sua tecnologia de bio-coletor

Ciclone.

o

prrojeto tem

o

seu término previsfio para

o

final

de

Abril

de 200g.

A

medida da

sensibilidade e _{flexibilidade do} sistema senâ efetuada em 7 locais

bio-geofficos

de climas diferentes na Europa

(nglaterr4

Finlândia

polônia, portugal, _{Espanh4 França e suíça) em}

duas fases, em 2006 e 20O7.

Este projeto vem em busca de satisfazer a _{questâo em que uÍna nova tecnologia como}

a que é proposta no âmbito do projeto

Monallst,

baseado no

tipo

de amos6a recolhida por

Cyclone

(íqüida)

pode

viúilizar,

_{complementar ou atualizar o método}

_l/irsÍ,

_mundialmente adotado como modelo. Apenas com aplicações complemenfares de _{outras tecnologias como a}

de ELISA

_-

"En4tme

Linked

rmmuno

sorbent

Assay",

onde

a

suposta vantagem é

quantificar o potencial alergênico a§nosférico mesmo na ausência dos _{polens envolvidos nos}

processos alérgicos.

O

presente

trúalho

tem

como objetivo

testar

a

efiqícia do

método Cyclone na detecçao dos

níveis de polen aÍnosférico

no

clima

meso-meditenánico, tomando como

refeÉncia o atual método padrão.

JnstificaÉo

o

potencial

da

tecnologia

cytane

sampler

(cs

ou

método

ciclone na

vercâo pormguesa) parece

muito

promissor uma vez que entrega como rezultado do processo de

recolha uma amostra líquida ao inves da vulgar

fita

de

Melinex

com substancias adesivas para aprisionarem o material colhido tomando assim

xta

nova tecnologia compatível com a

maioria das tecnologias de pesquisa achrais inclusive oolmmanoassql', _{PCR, citometria de}

fluxq

_{contagem de partículas e organismos, microscopia e}

_culurr4

_{podendo sugerir ortras} utilidades às amos@s, não apenas no âmbito da Aerobiologia, mas tanbéÍrn da

Alergologi4

Biodefesa

Clínica Privada,

Epidemiologi4 Imunologia

Mioobiologia

e

nas Engenharias Rural, Agrrâria, Ecológica e Florestal.

Objetivos

O

objetivo principal de projecto

MONALISA

é demonstrar

o

uso de um bio-coletor

de

r

de nova geraçâo em associação com métodos de anrílise imunológicos para validar uma

nova

pe§Pectiva

de

monitoramento

do

aÍ

por

medida

directa

de

antigenicidade e

alergenicidade total das partículas aero-navegantes. Objetivos çientíficos e téçnicos:

F

Medir

mtigenicidade

s

alergenicidade de pardculas

no

ar em vez de quantificar os

grãos de pólen pela

morfologi4

>

Atuâlizar

a

classificação

da

carga

de

alergênica

polínica

e

de

outras

prtículas

microbiológicas;

)

Expor

ambos os agentes alergizantes,

o

granulo de

pólur

e

as partículas

menor6

(<lpm)

envolü,las;

D

Atualizar a aruilise _{aerobiológica com um protocolo estandardizado;}

)

Demonstrar a robustez e efiçiência do classificador de ar em 7 climas de biogeografia diferentes.

A

Area

em

Estudo

Enq uadramento GeográJico

Este estudo

foi

realizado na cidade de Évora, situada a sudoeste da península Ibérica,

no

sul

de Portugal, na província do

Alto

Alentejo distrito e conselho de Évora e sub-região

do Alentejo _{Central, com uma população de cerca de 56 000 habitantes}

(WIKIPÉDIA,

₂₀₀₂

b)

_-

capital de

distrito

que se encontra aproximadamante

no

centro do conselho e

a

uma

latitude de

38"

54'

e uma longitude de

7f

34'

distando do nível de água do mar cerca de 250m

_@RANDÃO,

1996).

'É

sede de um dos maiores municípios de portugal, com 1.30t25

krf

de rírea e 56.525

habitantct subdividido em 19 Aeguesias. O município é limitado a noÍt€ pelo município dc AÍreiolos,

a nordeste por Estremoz, a lestê p€lo Redondo, a sueste por Reguengos de Moosaraz, a sul p,oÍ Portel, a

súoeste por Viana do Alentcjo € a o€stê por Montemor-o.Novo." (WIKIPÉDIA, 2007 b).

Com

uma

área

de 3l.l52km2

"O

Alentejo

ocupa quase

um

terço

de

portugat,

estendendo-se para sul, do rio Tejo ao Algarve. Amplo mar de colinas, douradas pelos trigais

ou

prateadas pelos

olivais."

(GRLJPO

FOLHA,

2002)

é

na verdade constituído

por

uma enorme planície onde aproximadamente 90oá possuem uma altitude inferior a 300 metros e

menos de loÁ acima dos 500 metros do nível do mar

_@RANDÃO,

1996).

7

Figura 2 Árca do Alcntcjo

Figura 3 Arer dc vorr

I

Figur.5 Torll lllct.orológica do II\MG-Évora

Carudertztção da Árca em Estudo

Em relação ao bioclima pode-se classificar como sendo mediterrâneo -pluviestacional

-

eoceânico, mesomediterrâneo

inferior

sub-húmido

_{inferior (RIVAS-MARTINEZ, e/}

_aL, r9ee).

Do ponto de vista _{biogeográfico, segundo a classificação de}

_TAKHTAJAN

_(19g6)a

região alentejana pertence

ao Reino Holoártico.

De

acordo

com COSTA

et

al.

(199gfu

tipologia biogeognífica da zona de estudo é a seguinte: Reino

Holoártico

Região Mediterrânico

S

ubregiõo

Mediteminica Ocidental

S upe rpro v i nc ta Me di t e rr â ni c o Ib er o - Át l.in t i c

a

Provín cia Luso- Ex lre modurence Setor M a

i

án ic o - Monc h iq ue nse

S u b-setor Árace no- P ace ns e

Superdisüto Aho Álentej ano

Pakagem

É muito impotunte conhecer a vegetação que se encontra próxima dos bio-çoletores

dado que de acordo com CORCHERO, (2001) apud

(CAE!RO,20M

p.

09) esta influência

de

maneira decisiva,

a

composição

do

registro

polínico.

A

maioria

dos

tipos

polínicos

recolhidos na atmosfera de uma determinada região são

o

reflexo da vegetação circundante

do local onde está situâdo o bio-coletor

(cAEIRo,

20o4) determinando assim a importância

de citar

o

_{conteúdo arbóreo e arbustivo que circunscreve os captadores, onde se encontram}

jardins

_{de cupressus sp, viburnum sp e}

_citrus

_{sp (ibidem) utilizados na omamentação dos} pátios residenciais e públicos.

É encontrado também

o

géneÍo

Pdietoria

nas ranhuras e frestas dos muros paredes da Torre Meteorológica onde estiio estes captadores. Nas ruas, a câmara municipal parece ter

preferido em ceÍta altura fazer uma arborização extensiva das calçadas com o

platanus

sp, e

outras árvores na maioria frutíferas, a critério _{de cada bairro, como ameixeiras laranjeiras e}

alnoÍelras.

Per[odo de estado

O projecto Monalisa teve o seu início

oficial

no final de 2005 pelo que as análises so

puderam ser iniciadas no ano seguinte, quando

o

aparelho

Aeoluso

ao qual se destinava os testes

foi

disponibilizado para _tal.

Apesar

de no

ano

de

2O06

ls

se

realizado análises, estas revelaram-se pouco

conclusivas no qstudo pelos seguintes motivos:

)

Não adequação dos protocolos

e

suas especificações (os quais foram sendo

aprimorados ao longo dos testes) nomeadamente nos seguintes aspectos;

)

a colheita compreendia o período de 60'r enhe as 13:00 e l4:00h o que

se verificou ser claramente insuficiente em teÍmos de duração;

D

o aparelho permanecia voltado para

o

lado de onde derivava o vento

principal no início da colheita nâo atendendo, portanto, à variabilidade própria deste agente;

!

atraso

no

aÍranque

do

processo

de

amostÍagem,

em

referência

ao

período

polínico principal, o qual apenas teve lugar no dia lgde

Abril

de 2006;

)

esta

primeira

fase

fora

muito curtq

uma

vez

que

por

motivos

mais tarde descobertos. Tivemos o infoúúnio de uma avaria elétrica no

ap

elho.

F

encerrando no dia 26 do mesmo mês,

I

Minutos

)

reiniciado no dia 16 de Maio do mesmo ano,

)

_{onde sofremos uma segunda fatalidade de avaria do aparelho em 30de}

Maio de 2006,

No

ano de 2007

foi

fomecido uma nova versâo do equipamento muito mais robusta e adaptada à diversidade de condições climatológicas d"s 7 _{regiões, Coriolis5o.(Figura 23)}

Em Portugal bem como na Espanha o processo de amostragêm oomeçou antes porque

a estação polínica inicia se precocernente em relação as outras regiões Europeias.

Foram

efectuadas aÍnostragens

do

conteúdo

polínico

atmosférico, praticdnente

diririos

no

período

de 07 de

Fevereiro

e

14 de Julho

de

2Ul? totalizatdo

166

dias compreendidos na estação polínica

principal

da região, mediante

um

bio-coletor

tip

Hirst

(Burkerd Tday

pollen

t"apul

"

uÍn bio-coletor tipo ciclone

(coriolis6\

dispostos lado a lado e instalados sobre uma plataforma meteorológica situada no centro da cidade de

Évor4

l7m

acima do nível do solo e 320m acima do nível do mar.

Figun 6 Locrlizçto dor colcctorrr

lr

plet.Íormt ul.tcorológicr do INMG cm Évore

O cronograma desta nova etapa resune se em:

D

dia 06 de Fevereiro de 2007 (tese);

)

dia 0?

de Fevereiro de 2C07, iniciada

a

colheita de poleng

justificada

pelo

género Cupresrus sp com floração começada em meados de Janeiro;

D

Estejá abrangia o período de 360' de colheita;

F

entre as 08:30 e as l4:30h, do dia 07 de Fevereiro e 24 de Março;

D

entre as 09:30 e l5:30h, do dia 25 de Março a 09 de Maio;

F

por mudança do fuso honírio (verão);

>

entre Írs l0:00 e l6:00h, do dia

I0

de Maio a 14 de Julho de ZOOT;

F

adequação do horririo com o contingente polínico; Meíeorologia

usando

_os

padrões

meteorológicos

fomecidos

pelo

Instituto Nacional

dc

Meteorologia

e

Geofísica Pornrguês

e

os dados colhidos

no

honírio de funcionamento do

equipamento coriolisô@ pode-se observar que o ano de 2007 distinguiu-se dos restantes pelo alto nível de precipitaçâo no inicio do verão.

Qurdro

I

Unidad.i dor Darlmctrm mctcomlósicos

Parâmetros meteoroló{icos Unidades de medida

Precipitação Temperatura máxima Temperatura média Temperatura mínima Humidade relativa do ar Velocidade do vento mm qc qc "C

v,

Km4r

o

gniÍico

I

representa a _{evolução diária do período de análise quanto as temperaturas}

máxímas, médias e mínimas. Indicando uma evolução gradativa do aumento de temperatura característico para o fim do invemo até meados do verão.

40,'c 35,.C 30,"c 25,"C 20,"c l5,"C 10,"c 5,'C ,"C -MaxMed -Min

qE.?+

_{E E E}

_Eà+ã-b

ã ã

ã

E

ã

s

É

_{5 EEE}

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_É

_R

_§

.E

i

_§

t

.:i

é

_Ê

_§

-!

_S

_{E Ã}

_§

áitx.;§

Gr{íico I Tempcrrtura "C

O

segundo gráfico refere

à

humidade relativa

do

ar

(%)

durante este período com picos informando quantos milímetros precipitou durante a temporada mais húmida.

Também

é

demonstrado pelo

Gnífico

2

uma redução cada vez mais acentuada de

precipitação indicando o verão seco comum do clima meso-mediúerânico presente _{no local.}

tzú/o 1000/o 80o/o 60% 4ú/o 20o/o 0% l8 l6

l4

- PÍEcipila4ão l2

1o_M*

I

6

_{_M"d}

4

2

_{_}

1.1;n 0

Gúlico 2 Eumidadc Rçletive do Ar ,!ó _{& Prccipitiçio mltr}

O terceiro alude à velocidade do vento dirírio, indicando as mráximas e médias.

Foram desconsiderados

os

temas isolados

do

dia

como as calmarias onde não se

encontram ventos anâlis{iveis e também as rajadas que elevam imensamente as máximas não representando a realidade.

-Ma

+

_"?

q

+

Ê E E

E

Ê Ê Ê

Ê

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_{§GiÉs óe= Er}

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ó0,0 J0,0 «),0 30,0 20,0 10,0 0,0

q++eEiR§

\o .o ô i.. .1 - a..l ôl v

ê++'EEÊEEEããEããã

À

_{à §}

_*

i

_E

I

_À

_{À;'§I*'-'É'}

Gráfiro 3 Vdocidrdc do Vcnto

Kn/t

nl

lt

I

h

o

quarto gnáfico meteorológico representa as variantes climatorógicas que _{influem o} coriolis6@ portanto as analises foram realizadas ao início e termino de cada colheita.

I

Umidade rêlâtiva lnício E::= Ümidrdç Írlativa

Fim

-Tafip.,.atura

final

TclÍp€t-at!Íâ inici8l

GÉ6co 4 Nívêi! m.tcorológitoc rcfcrcntcr ro Corfuliqa

os

valores disponíveis para os honírios de

inicio

e finalização da colheita

coriolisr.

foram obtidos pelo portal

(II-IE

WEATI{ER

UNDERGROIIND,

Inc.,

1995) ao

fim

de cada

dia analisado. 36qC 3l"c 269c 21Y ló"c I tqc 6"C tqc t2F/.

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Metodologia

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Figu.a 7 OrgrDogrrmr gcml d. m.todologi. usrd. rlo âtrlbito do projccto Momlisr

MI.INHOZ,

eta1.,2007 a;2007 b)

I

Figurr 8 BürL.rd@ Tdey pollcn trepo

(BLTRKARD MANUTACTURING Co. Ltd

2001)

Método de

Hirct

o

método de amostragem convencional, adotado

atualmente

na

maioria

das

redes aerobiológicas

é

o

método

Hirst,

do

qual

existem algumas

versões

tecnológicas,

que

consistem

_num

processo

de

compactação das partículas sobre uma

fita

de melinex usando-se para o efeito _{um bio-coletor do}

_tipo

_Burkard@

@urkard

7-day polten trap@, Burkard@ CO.,

UK).

Estes captadores aspiram

ar a

uma

taxa

de

l0

likos por

minuto, (aprox.

equivalente

_{ao fluxo}

_da

respiração humana). O _{ar aspirado incide sobre uma}

_fita

de

pkástico transparente

(Melinex)

cobeÍta

por

uma

substância adesiva

de

grande estabilidade (solução de

silicone,

Lanzoni@,

Itália)

a

diferentes

condições

ambientais

imprimindo assim

uma

amostra

do

aÍ

referente aquele exato momento.

Esta

fita

é montada em um tambor que gira com

um

movimento

cronometrado

à

2mmlh

em

sentido dextrogiro dando uma volta completa em uma semana.

Baseia-se numa câmara na qual o ar é retirado por

uma turbina elétrica causando uma pressão negativa no

interior desta que por uma fissura, em forma de bico de pato, permite a entrada de ar sendo injetado contara a

Íita

pegajosa.

O

aparelho apresenta

esta

fissura

sempre

contra

o

vento por acção de um cata-vento

fixo,

possui também uma aba meÍálica sobre

a

entrada de ar que o

protege da chuva.

A

fita é substituída semanalmente.

Cada

preparação

contém partículas

colectâdas dwante um período de 24 horas.

No

entanto a leitura

foi

adaptâda,

de

forma

a

que

o

período

de

análise fosse idêntico para ambos os equipamentos.

Figura 9 Lsqucma mccinico do rol.ctor

Burkffd 7-dry pollcn trâpo

Figun l0

Liturr

rdaptada da lÂmine

do método Hirit

hotocolo de prucessatten o dos antostros

_flirst

o

protocolo desta técnica encontra-se bem difundido na literatura da especialidade e

padmnizado

pelo

que

aqui

apenas se descreve

tal

como estií apresentado

no

manual da

British

Aerobiology

Federation

(1995)

_e

do

recente manual "Management

and

_euality

Manual" da Rede Espanhola de Aerobiologia - REA

(SOLDEVILLA,

et

at.,2B7).

Preparação do

Tambor

A preparação do tambor deve seguir o seguinúe protocolo:

l.

Desinfetar o material com etanol sempre ao iniciar qualquer procedimento,

a.

Estes _{Procedimentos devem ser realizados em uma capela2}

2.

Montar

o

tambor

em

posiçâo

_no

suporte enviado pelo fabricante,

3.

Entre as marcas azuis de iniciação do processo,

a.

sem

retiraÍ a

pÍoteção superior, colar a

fita dupla-face longitudinalmente no tambor,

4.

Cortar

a

fita

dupla-face, com

o

auxilio

de um

Figora

ll

SupoÉe pem o trmbol

estilete de modo que Íique no interior do

trilho

da

fita

Melinex,

5.

Retirar

a

proteção superior da

fita

dupla-face, com o auxílio do estilete,

6.

Fixar a ponta da

fita Melinex

no centro da

fita

dupla-face,

a.

Deixar metade

da

fita

dupla

face exposta

7 Estenda a fita sobre o tambor, observando paÍa que não entorte e/ou saia do

trilho

(ver

Figura

l2),

8.

Ao término da volta, colar a fita sobre a porção ainda exposta da dupla-fac€,

2

ComPartimento fechado e envidraçado, nos laboratorios, no qual se realizam as reações qulmicas qrrc dcsprendem gases d€letérios(FERREIR q, 200,1)

Figür. 12 Trmbor - Bürkârd 6

a.

Utilize uma pinça para ajudar a fixar a fita sobre a oulra fita adesiva,

9.

cortar o Melinex paralelamente a dupla face com cerca de 0,5cm acima de si mesmo,

para além da volta completa (ver marca verde na Figura

l2),

a.

Utilize

uma tesoura

fina

para este procedimento,

a

lim

de

não marcar ou acidentalmente cortar a parte da Íita sobreposta"

l0'

Guardar o preparado em seu _{recipiente especial (caixa de armazenamento) até}

_a

_data

anterior â que sení utilizâdo,

I

l.

No dia anterior a que será armadilhado no equipamento Burkerd@,

a.

Esterilizar

com

etânol todos

os

materiais que serão utilizados, inclusive a

superÍície da fita Melinex.

b.

Novamente montar o tambor em posição no suporte da Figura I

I

Suporte para

o tambor,

12. Banhar a ponta de um pincel com a largura da

Íita

e

cerdas macias

em acrílico

(Iamanho

16)

em

silicone especial (Ietraclotero _{de carbono q4,2}

<

C

<

98,2),

13.

Girar

o

tambor

por

meio

da

manivela

do suporte no sentido dextrogiro, e espalhando

o

acrílico

sobre a fita,

a.

Continue girando

o

tâmbor enquanto o

acrílico evapora para assegurar uma camada

uniformg

-30"

14. Guardar novamente em seu _{recipiente devidamente estéril, para a troca de taÍnbores}

no bio-co letor.

trigurr l3 Plícdr p.ir rplicrr o Siticotrc

Mudança do

tambor

A

troca dos _{tambores deve seguir o seguinte protocolo:}

l.

Desligar o aparelho da corrente elétric4

2.

Bloquear a _{"cabeça" giratória do bio-coletor}

Figur| ld Trryr dc leguretçr Burlcrd

a.

_{Faça-o colocando o pino no colarinho}

(trava giratória) _{pÍesente na junção quê sustenta a}

câmara de sucção sobre o motor

3.

Marcar

a

fita

com

um

objeto longo

e

pontiagudo, indicando o término da amostragem,

4.

Deprimir

a

trava

superior

do

equipamento, liberando o topo,

a.

As

seguintes

tarefas

deverão

ser realizadas _{com agilidade e cuidado, contrariando a} direção do vento, a

fim

de

witar

contaminações,

5.

Remover o topo pela alça presente,

6.

Desprender

e

_retirar

_o

_tambor

_do

relógiol fixado na coluna do topo.

7.

Para Íal, soltar a rosca que

o

Íixa

ao

relógio, com uma das

mãos

segurando

todo

o

complexo com a outra

8.

Extremo cuidado

deve

ser

tomado

Figutr lsropo do m.c.ris'o dc fireção

do

para

não

danificar

o

mecanismo

de relógio'

ou

trnbor

lacerar a fita.

ffil*""

M^""FACT['RrNG co'

Ltd,

g.

Trocar os tambores (relógio z,S- Recipiente)

a.

Segurar o tambor por seu flange,

i.

Nunca tocar na fita,

10. Com o novo tambor no relógio

a'

Alinhar

o

ponteiro indicador

do

topo com

o

marçador vermelho _{rateral do}

tambor

b.

Pender com a rosca nesla posição

'

Mecanismo cronomcü-ador que movimenta a fita Melinex

I

l.

Dar corda ao relógio

12. Colocar o topo à cabeça do equipamento

a.

Prendê-lo com a trava superior,

13. Marcar o início da amostragem com um objeto longo e pontiagudo,

14. Desbloquear a região giratória do aparelho (Figura

l4

Trava de segurança Burkard),

a.

Tomar cuidado com a cauda do cata-vento,

15. Ligar o Burkard@ à comente elétrica,

16. Certi{icar-se do seu funcionamento, escute o funcionamento do motor.

Preparação das lâminas

A

montagem das lâminas,

a

partir

de

fita

de Melinex,

segue

um

protocolo muito

semelhante

ao

utilizado pela

Rede

Espanhola

de

Aerobiologia

_-

REA

descrito

em

(SOLDEVILLA,

et al., 2007).

L

Desinfetar todo o material a ser utilizado com etanol,

2.

A

fita deverá ser retirada do tambor e colocada sobre a régua transparente apropriada,

que virá de

fíbricajunto

ao aparelho,

3.

Proceder o corte da frta em 7 segmentos de 48mm cada, onde cada um corresponde a

24 horas de amostragem (Figura I 7),

336mÍr

Fragmento representando 24h

Figur. 16 Rlglrl dc .ortc dr lits dc Mclitr.r

4.

Fixar uma etiqueta com a data e local de colheita ao lado esquerdo da lâmina, em

,.,

7:

cada uma das 7,

5.

Depositar uma gotra _{de água no centro da lâmina a}

_fim

_{de aumentar a aderência do}

segmento de fita à

lâmin4

6

Figurr lE Gotr d'ógur ro c.raro d.lâminr

AssentaÍ

o

segmento previamente

_{cortado sobre}

_a

_{lâmina verificando}

_a

correspondênci a da data,

Fitür. 19 Firetrdo r

ft,

dÊ Mditcr

7

.

Apliar

₂ a 3 gotas _{do corante fixador de fucsina básica e gelatina glicerinada}

_(fucsim

básica) sobre cada um dos segmentos,

Figurr 20 CoE |r gotü do corrltc

fr.dor

Cobrir a preparação com a lamela,

:é

E=

IÊ

Figure 2l Acabrdo o erfrêgiço com a lxmcL

Limpar com etanol o tambor e seu recipiente, antes da mont gem da nova Íita,

a'

A

fim

de eliminar _{eventuais contaminações que} possam _{ter Íicado agarradas à}

estrutura do tambor e _{seu invórucro prevenindo uma contaminação à amostra}

seguinte

"Os esfregaços podem

persistir

em

temlorahra

_{ambiente duronte 2 ímos, ou}

muito mais temqn se

_forem

lacrados

com

,'terniz

de

unho.

nas extremidades após

seu ertrij ecimento ".

R 9

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>ô

z)

ÉE

(D-..ã

z:

2l

Método Cyclone

como

se referiu anteriormente esta metodologia

foi

desenvolvida no râmbito de um projecto "LlFE-Erwironment demonstration projects" _{envolvendo 7 universidades da}

_união

Europeia e uma empresa tecnológica que criou

o

novo aparelho sujeito aos testes

(BERTIN

TECHNOLOGIES, 2005).

As

versões tecnológicas dos equipamentos utilizados com base nesta metodologia foram o AeoluSÔ o Coriolis6@, ambos bio-coletores de amostra em solução líquida.

Figure 22 Ácolu§o Figun 2:l Coriolirs'

Nos modelos CS convencionais, um vórtice

é projetado em um tubo cônico e onde encontra-se

um volume de

liquido

o

qual captará as partículas

que entrem.

,E

tT

O ciclone é conseguido graças a uma bomba de sucção a qual retira

o

ar contido dentro do cone

causando pressão negativq a qual força o ar extemo entraÍ por um

orificio

estrategicamente colocado na tangente superior

do

cone, fazendo

com

que este

entre

com

pressão

contra

as

paredes

dando

ao menos uma volta completa antes de ser sugado pela bomba.

O

facto deste

fluxo

ser em alta pressão faz

l

w

com que as partículas mais pesadas, entre elas os

polens, fiquem retidas ao liquido.

O equipamento AeoluS@

Mostrado na Figura 22 o equipamento era constituído por um bloco, onde fica situada

a

bomba

de

sucção

do tipo

turbina

elétric4 um

painel de

controle

digital e

a

tela

de

programação constituida por uma faixa se cristal liquido.

Volume de ar aspirado por minüto

olume dc líquido injetado inicialmente

Duraçâo

Timer dc espera para iniçiar

Volume d€ liquido,/minuto

Figura 25 Peircl do Acolusc

O

bloco

contém

na paÍte

posterior

_um

gabinete onde se encontrava

um

pequeÍro tanque utilizado na reposição de liquido evaporado no pro€esso,

o

qual

por

uma bomba de injeçõo peristálticaa injeta o volume liquido programado por minuto utilizando de um

ftbo

que part€ do tanque ao recipiente de colheita (cone).

Figun 26 Cnrvatúr. do tubo

c

ciüldro d.

colhcit

Na parte superior do bloco encaixada sobre si um tubo meuilico para a sucção de ar. Este possui

um

encaixe

para

fixação

no

bloco

em

sua

extremidade

inferior,

e

na

zuperior contém uma

curvafura onde encontta se

um

encaixe

de

rosca

para

o

cilindro

de

colheita,

que

por

sua

vez comporla o cone através de um anel com rosca que o prende.

-

n [..'] Bombas peristiíúticas são principalmente _{usadas em laboratórios químicos, nras eles podem scr}

usados para mjeção de substâncias químicãs, sistemas biomedicos fechados e

",

iirt".r.

ae iniga6o

pequenos. sua capacidade é limitada- e.a maioria dsles produz urna pressão de apenas 30 a aopsil seu fimcionamento baseia-se num hrbo flexível aperado por um jogo de rolos e um flu*o

pri*

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p*aúa"'pí

"sa

ação.[...](tIAMAN, ct aI., Original púlication date May l99O_ Rcvierr,ed Junc 2003.)'