Fração ligante de ConA isolada de extrato bruto de Dermatophagoides farinae reconhecida por anticorpos IgE específicos em pacientes atópicos

UNIVERSIDADEFEDERAL

DE

_UBERLANDIA

.

0)

INSTITUTO DE BIOLOGIA

CURSO

DE

_{CIENCIAS BIOLÓGICAS}

Fração ligante

de

_{ConA isolada}

_de

_{extrato bruto}

de

Dermatophagoidesfarínae

_{reconhecida por anticorpos IgE}

específicos em pacientes atópicos

Leandro Hideki

Ynoue

Monografia _{apresentada à}

Coordenação _{do Curso de Ciências}

Biológicas, da Universidade _{Federal de} Uberlândia, para a _{obtenção do grau de}

Bacharel _{em Ciências Biológicas.}

Uberlândia

—

MG

IVERSIDADEFEDERAL

DE

_UBERLANDIA

UN

.

9,

INSTITUTO

DE

_BIOLOGIA

CURSO DE

_{CIENCIAS BIOLÓGICAS}

Fração

_{ligante de ConA}

_isolada

_de

_{extrato bruto}

_de

Dermatophagoidesfarinae

_{reconhecida por anticorpos IgE}

específicos

em

_{pacientes atópicos}

Leandro Hideki Ynoue

Ernesto

Akio

_Taketomi

Monografia _{apresentada à}

Coordenação do _{Curso de Ciências}

Biológicas, da Universidade _{Federal de} Uberlândia, para a _{obtenção do grau de}

Bacharel _{em Ciências Biológicas.}

Uberlândia

—

MG

INSTITUTO

DE

_BIOLOGIA

I

rUNIVERSIDADE

FEDERAL

DE

UBERLÁNDIA

CURSO

DE

_{CIÉNCIAS BIOLÓGICAS}

Fração ligante

de ConA

isolada

de

_{extrato bruto}

_de

Dermatophagoídesfarinae

_{reconhecida por anticorpos IgE}

específicos

em

_{pacientes atópicos}

Leandro Hideki

Ynoue

Aprovado pela Banca Examinadora em

ª/Q/ÉNota

₄₀₀

Dr. _{Ernesto Akio Taketomi} Orientador

!

,r/V _,,

_,

_{, , H} »/,/',.

b,

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'

tuti/ir,

“

[._{«tofu,, turmª—.:— :}

//

Drª Mangareth Leitão Gennari?Cardoso

Meinbro da Banca Examin'ádora

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tb

;LT _Cm

/

_Juª»

Dr“_{Neide Maria da Silva}

Membro da Banca Examinadora

Uberlândia, 25

_dejulho

_{de 2003.} ,

/;zr

/

,?

,

,ff

. v ! ' "CL./,dª“,-, LI,'. Ó fui “'C',,

Agradecimentos

Ao

_professor

Ernesto

Akio Taketomi,

_pela

_{competência, seriedade,}

paciência

e

_por

_{seus ensinamentos ao longo desse período,"}

Aos demais mestres da disciplina de imunologia que sempre se

encontravam dispostos

_{a atender}

_as

dúvidas,“

Á

_{equipe de}

_alergia

_com

_{os quais}

_{pude contar a qualquer}

_hora,

_e

_que

demonstraramser

amigos

de

verdade,-Aos

professores Federico

Monte Alegre

e

Sun—Sang

J.

_Sung

_pela

_doação

de

material

essencial

_para

_{a realização}

do

trabalho;

Ás

_professoras

_Neide

_e

_{Margarethpela gentileza}

_de

_{participarem da etapa}

final

do trabalho, estando

_{presentes na banca examinadora;}

Aos meus

grandes

amigos

do

Curso

de

_Biologia,

_{principalmente aos}

_Los

Coleópteros,

pelos

_{momentos inesquecíveis que}

_{passamosjuntos;}

Á

_{minhafamília}

_por

_estarem

_presentes

_{nos momentos}

_em

_{que mais}

_precisei

deles, demonstrando

_{suapreocupação, carinho}

e

incentivo,"

Á

_{todas as pessoas}

_que

_{participaram da}

_{minha vida}

_e

_deixaram

_comigo

ÍNDICE RESUMO ... OI SUMMARY ... 02 INTRODUÇÃO ... 03 MÉTODOS ... 04 Seleção de indivíduos ... 04

Teste Cutâneo de_{Puntura (TCP)...} 05

Preparação do extrato antigênico ... 05

Cromatografia deafinidade em coluna de Concanavalina A-Sepharose

_...

06

SDS-PAGE ... 06

ELISA para detecção deIgE_{específica ...} 06

Análise estatística ... 07 RESULTADOS ... ' ...07 DISCUSSÃO ... 09 CONCLUSÓES ... IO REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS ... 11 Tabela I_... 14 Figura 1 ... 15 Figura2_... 16 Figura3_... I7 Figura4_... I8 Figura5_... 19

RESUMO

- OBJETIVO.Investigarareatividade deanticorpos séricos IgE aos antígenos glicosilados derivados da fração ligante de Concanavalina A do extrato bruto de Dermatophagoídes

farinae

em pacientes com alergia respiratória a ácaros da poeira domiciliar.

MÉTODOS. Um total de 95 pacientes foi submetido ao

teste

cutâneo de _puntura

(TCP) edivididos em gruposde acordo comohistórico clínico ereatividade cutânea: 35

pacientes com rinite e/ou asma e TCP positivo (Grupo I), 30 pacientes portadores de

rinite e/ou asma e TCP negativo (Grupo II) e 30 indivíduos controles (Grupo III).

Sangue foi _{coletado para análise} de IgE sérica específica a alérgenos de D.

_farinae.

O

extrato do ácaro foi _{fracionado por cromatografia de afinidade em coluna} de

Concanavalina A—Sepharose.

RESULTADOS. Os valores de IgE específica do Grupo I _{apresentaram diferença}

significativa (p < 0,0001) em relação aos outros grupos. Os níveis de _{IgE especificos} anti—Dfeanti-ConA/Df mostraram uma correlação significativa positiva (r = 0,7334) no Grupo I. Não houve associação significativa entre os valores de pápula e os níveis de

IgE específicos. Entretanto, adicionalmente, observou—seuma discreta associação entre maiores valores de medida da pápula com maiores níveis de IgE específica anti—Df e

anti—ConA/Df.

CONCLUSÃO. _{Os resultados sugerem que} a fiação

ConA/Df

é constituída de

importantes componentes alergênicos glicosilados, uma vez que os anticorpos IgE

presentes no soro de pacientes atópicos apresentaram alta reatividade, tanto ao

Df

quanto a ConA—Df. _{Alérgenos potencialmente glicosilados de}

Df

podem ser

considerados como um importante fator de _{sensibilização alergênica} e ser empregados na terapia hiposensibilizante.

SUMMARY

CONA BINDINC FRACTION ISOLATED FROM DERMA TOPHAGOIDES FARINAE

EXTRACT RECOGNIZED BYSPECIFICIGEANTIBODY INATOPIC PATIENTS

OBJECTIVE.lnvestigate the serum IgE antibody reactivity by

glycosilated

antigens

components

of

Concanavalin A _binding

fractionfrom

Dermatophagoides farinae extract

inhouse dust mite

allergic

patients.

METHODS.A

total

of

95

_patients

were submitted to the skin

prick

test (SPY)

and

divided in

_{groups according}

tothe clinic history

and

the skin reactivity: 35

patients

with

rhinitis and/or

asthma

and

positive

SPT

(Group 1), 30

patients

with rhinitis

and/or

asthma and

negative

SPT

(Group II)

and

30 controls subjects (Group HI). Blood was

collected

for

analysis

of

serum D.

_farinae

IgE. The mite

extract

was

fractionated

by

C

oncanaval

inA-Sepharose in

_ajinity

chromatography column.

RESULTS. The _Group

[

_{specific IgE levels showed significant}

diference

(p <

0,001) comparing to the

other

Groups. The levels

_of

specific

IgE

anti—Df

and

anti-ConA/Df

revealed a

positive significant

correlation

(r = 0,7334;

_p

< 0,₀₀₀₁₎ in _Group

1. Do not exist

a signifcant association

between the size

of

wheals

and

the levels

of

specific IgE. However, in addiction, was observed

that

the

higher

wheals values showed

a discreet association

comparing with the levels

_of

specific

IgE anti-Df and

anti-ConA/Df

CONCLUSION. The _{results suggests that} the

_fraction

ConA/Df is

constituted

_of

important

glycosilatedallergenic

components,in_spite

_of

the

_IgE

antibody

present

inthe serum

of

atopic

patients

showed high reactivity to

_Df

_as

much

_as

ConA-Df Allergens

potentially glycosilatedfrom

Df

can

be

consideredas a

important

factor of

allergenic

sensitization

andpotential

inhiposensitization therapy,

INTRODUÇÃO

Alterações nos costumes e a _{presença de móveis} e _{utensílios que provocam} um

aumento da poluição doméstica têm contribuído para a maior prevalência de doenças alérgicas. A _{maior permanência das pessoas no ambiente doméstico ou em ambientes}

fechados contendo particularmente carpetes, cortinas, brinquedos de pelúcia e a

presença constante ou não de _{animais domésticos, são fatores que contribuem para o}

aumento de _{alérgenos inaláveis derivados desses produtos].}

A _exposição de um indivíduo alérgico a um determinado alérgeno poderá dar

origem à hipereatividade brônquica e causar asma. A _{resposta alérgica ocorre quando} um antígeno ativa uma resposta imune com síntese de IgE específica, a qual sensibilizará os mastócitos. Estes, após um segundo contato comoantígeno, irão liberar mediadores pré-formados como histamina, proteases e mediadores lipídicos, como leucotrienos e prostagladinas, produzindo uma reação inflamatória aguda com sintomas de asmaou rinite. Entretanto muitos indivíduos sensibilizados não apresentam sintomas

e _{possuem mínima} ou nenhuma hipereatividade brônquica, sob condições ambientais

com níveis relativamente baixos de _{alérgenos. Portanto,} a quantidade de _alérgenos

necessária para causar hipereatividade brônquicaé _{muito variávelº. Além da exposição,}

vários estudos têm relatado que os fatores genéticos constituem um dos principais

fatores de _{risco para} o _{desenvolvimento da asmaª. Os principais aspectos que}

diferenciam a inflamação alérgica dos outros tipos de inflamação são a síntese de IgE,

ativação de _{mastócitos dependente de} IgE e infiltração da mucosa brônquica com

linfócitos e eosinófilos4. O desencadeamento de _{uma resposta alérgica depende da}

natureza dos estímulos antigênicos. Dentre eles, alérgenos derivados de ácaros da poeira domiciliar sãoum importante fatorna induçãoda _{síntese de IgE.}

Ácaros da familia Pyroglyphidae (Dermatophagoides spp.) são as principais fontes de alérgenos na poeira doméstica5. Três espécies, D.

pteronyssinus,

D.

farínae

e D.

microceras, têm sido reconhecidas como as mais prevalentesó, embora Blomia tropicalis, em áreas tropicais esubtropicais, tem sido relatada como importante fontede

alérgeno domiciliar7. Além disso, Sopelete et al.8, _{em um estudo de prevalência de}

alérgenos de ácaroem _{amostras de poeira domiciliar de Uberlândia, MG, relatam que}D.

adicionais deveriam ser realizados em demais regiões brasileiras para caracterizar a

importância desta espécie na sensibilização alergênica. Até o presente momento, mais

de quinze proteínas de D.

_farinae

foram identificadas como alérgenos potenciais. A

maioria desses alérgenos são proteínas de peso molecular baixo ou glicoproteinas com estrutura diversa e funções biológicas distintasº. Dentre eles, Kawamoto et al.10 relataram que Der

f

], Der

f7,

Der

f

1 1, Der

f

15eDer

f

17 são alérgenos glicosilados,

O uso da lectina Concanavalina A (ConA), originária do feijão

Canavalia

ensiformes, em fracionamento de alérgenos de ácaros da poeira domiciliar não tem sido muito investigado. Almeida et

al.“

identificaram componentes glicosilados em extrato

de Blomía tropicalis, onde a reatividade dos anticorpos IgE de pacientes alérgicos foi

analisada por ELISAeImmunoblottíng, observando-se uma correlação positiva entre os níveis de anticorpos IgEe _{componentes ligantes de Concanavalina} A.

Desta forma, o objetivo deste trabalho foi _investigar a reatividade de anticorpos

séricos IgE aos antígenos derivados da fração ligante de Concanavalina A do extrato bruto de Dermatophagoides

faringe,

em pacientes com alergia a ácaros da poeira domiciliar.

MÉTODOS

Um total de 95 indivíduos foi submetido ao TCP e divididos em três grupos

distintos de _{acordo com} ohistórico clínico e reatividade cutânea ao alérgeno testado. O

Grupo 1 de pacientes com asma e/ou rinite alérgica e positivos ao TCP para

Dermatophagoides

farinae

(n = 35); o Grupo 11 consistiu de pacientes com asma e/ou

rinite alérgica e negativos ao TCP a D.

farinae

(n = 30) e o Grupo III compreendeu indivíduos saudáveis enegativos ao TCP(n = 30).

Seleção de indivíduos

Sessenta e cinco indivíduos, de _{ambos os sexos, com idade de} 18 _a 54 _{anos, foram}

selecionados e atendidos no Ambulatório de Alergia do Hospital de Clínicas da Universidade Federal de Uberlândia, mediante aprovação do Comitê de Ética em Pesquisa. Todos os indivíduos responderam a um questionário clínico segundo os critérios adotados pelo

International

Study

of

Asthma

and

Allergíes in Childhood (ISAAC, 1998)”. Um total de 30 indivíduos controles sem história clínica de doença

)lilrlilii»)iiriiiilii—ii) ll-ll) l»li1iiv1i)1i, )i'i)))l)l)ª llifiill'

)

₎

l

)

atópica e negativos ao teste cutâneo a diferentes alérgenos inaláveis foram também recrutados. Indivíduos que estavam em tratamento com corticoesteróides, tópico ou

sistêmico. ou anti-histamínicos de _{primeira ou segunda geração foram excluídos do}

estudo. Os _{pacientes assinaram um termo de consentimento, onde foram esclarecidos}

sobre todos os procedimentos adotados, podendo desistir a qualquer momento, sem acarretar prejuízo ou constrangimento.

Teste Cmáneo de

_Puntura

_(TCP)

Os pacientes foram submetidos ao TCP, segundo atécnica de

Ownby'ª,

utilizando extratos dos ácaros Dermatophagoídes

faringe,

Dermatophagoides

pteronyssinus

e

Blomia tropicalis, aplicando—seuma gota do extrato alergênico sobre apele, seguida de

uma pequena punção com lanceta apropriada (Aiko, Rio de Janeiro, Brasil). Como controle positivo foi utilizada a histamina (IPI/ASAC Brasil, São Paulo, Brasil) _e

solução salina como controle negativo (IPI/ASAC Brasil, São Paulo, Brasil). A leitura

foi feita após 15 _{minutos, através da determinação do valor médio da pápula em sentido}

ortogonal, sendo que o resultado foi _{considerado positivo para uma pápula maior ou}

igual a 3 _{mm que 0 controle}

negativo".

_{Em paralelo, foi realizada a coleta de sangue}

dos pacientes para posterior análise invitro dos níveis séricosde IgE específica.

Preparação

do extrato antigênico

A _{extração das proteínas do ácaro}D.

_farinae

foi _{realizada de acordo com Kummar}

etal.lS _{com modificações. Uma alíquota de 20 g de ácaro em cultivo (cedido pelo Prof.} Dr. _{Federico Montealegre} - Ponce University

of

_{Medicine, Porto Rico, Estados Unidos)}

foi macerada em nitrogênio líquido,eadicionada de 75_{mL de éter etílico,} incubando—se

por 24 horas a _{4ºC. Após evaporação total do éter,} a amostra foi _{diluída em solução}

salina tamponada com fosfato0,01 M, pH 7,2, _{(PBS) contendo inibidores de proteases}

(PMSF 1 mM. Benzamidina lmM, Aprotinina 0,2 %,

Leupeptina

lmM

- _Sigma

Chemical Co., St. Louis, EUA) e incubada 18 horas a

4ºC

_{em agitação orbital. Após}

dois ciclos de centrifugação a 3.000 gdurante 15 _{minutos a 4ºC e um ciclo a 30.000 g}

por 45 minutos a

4ºC

o sobrenadante foi _{coletado, e dialisado contra PBS em sistema}

Amicon (W.R. Grace & Co., Bervely, EUA), utilizando membrana YM10 (cut—of 10

O ensaio de cromatografia foi realizado utilizando extrato total de Dermatophagoides

farinae

(Df) à _{concentração protéica total de} 45 _{mg em coluna} de

afinidade de ConA- Sepharose.

A Figura 1 apresenta o perfil cromatografico deste ensaio. Cada tubo coletor

conteve 2 _{mL de amostra fracionada pela coluna, sendo estes monitorados a280 nm.}O

primeiro pico representa 0 Void, _{fração protéica que não apresentou interação com} a

coluna. Este apresentou densidade óptica (D.C.) máxima de 1,953. As amostras contidas nos tubos de número 1 e 2 não apresentaram valores de absorbância legíveis pelo

espectrofotômetro, portanto foram excluídas do gráfico.

0

segundo pico representa a fração ligante de ConA (ConA/Dt), eluída através da _{adição de}

metil-a-D-manopiranosídeo. As amostras dos tubos de l _a 13 do Void e dos tubos 42 a 54 de

ConA/Df

foram misturadas e, posteriormente, dialisadas e _{concentradas, sendo que a}

massa final obtida foi de _{aproximadamente} 4 _{mg/mL para} o void e 0,2 mg/mL para ConA/Df.

A Figura 2 mostra o perfil das bandas nestas amostras com as respectivas massas moleculares de referência (Mr). No extrato total (Df), foram detectadas um grande espectro de bandas, principalmente com peso molecular estimado de 107, 92, 80, 63,53, 34, 30, 28,23 e 16_{kDa. As principais bandas visualizadas no Voidcorrespondem a 107,}

92, 23 e 16 kDa.A _{ConA/Df apresentou} um perfil eletroforético com bandas de 104, 77, 71, 28,

22,15

e 10kDa.

O ensaio imunenzimático ELISA foi _{utilizado para quantificar os níveis de IgE}

especifica ao extrato bruto (anti—Df) e a fração ligante de ConA (anti—ConA/Df). A

Figura 3 _representa a distribuição dos níveis de IgE especifica

anti-Df

e anti-ConA/Df, medidos em Índice ELISA (IE), nos três grupos analisados. Todos os indivíduos do grupo I _{apresentaram níveis de lgE específica ao}

Df

maiores ou iguais _{a 1,0 (IE 2 1,0).}

Enquanto que 32 _(91,4 %) dos indivíduos apresentaram valores de IE _{positivos para a}

fração ConA/Df. No grupo 11, nenhum indivíduo apresentou IgE específica anti—

ConA/Df

acima do cut-off(1E= 1,0). Entretanto, 2(6,7%) _{indivíduos apresentaram lgE}

específica anti—Df _{acima deste ponto (IE} = 1,2 e IE = 1,3). Todos os níveis de IgE específica nos indivíduos do grupo 111 _{apresentaram valores de lE inferiores a 1,0. A}

média geométrica dos níveis de _{lgE específicos anti-Df} e

anti-ConA/Df

foram

respectivamente), comparado aos demais grupos (Grupo ll: 0,7e 0,8 para

anti-Df

e

anti-ConA/Df, respectivamente; Grupo III: 0,8 _{para ambos), apresentando diferença}

significativa (p <

_0,000!)

entre os niveis de _{lgE específica do Grupo} I _{em relação aos}

demais grupos.

A _Figura 4 mostra a distribuição dos níveis médios de IgE específicos em relação aos valores das pápulas nos indivíduos do grupo 1, divididos em classes distintas. Não

.

houve associação significativa entre os valores de pápula eos níveis de IgE especificos. Entretanto, adicionalmente, observou—seuma discreta associação entre maiores valores

de medida da pápula com maiores níveis de _{lgE especifica}

anti-Df

e anti—ConA/Df.

Entretanto, os niveis de _{lgE especificos}

anti-Df

e

anti-ConA/Df

mostraram uma

correlação significativa positiva (r = 0,7334; p < 0,0001) no Grupo I, como demonstrado na Figura5.

DISCUSSÃO

Os ácaros da poeira domiciliar apresentam papel importante na sensibilização alergênica, sendo considerado um dos grandes fatores de risco para desenvolvimento de

alergias respiratórias, incluindo a asma. O ácaro

Dermatophagoides

farinae

constitui uma das principais fontes de alérgenos na poeira domiciliar na cidade de Uberlândia, MG, como reportado por Sopelete et al.20 _{Altos níveis (> Zug de Der}

f

_l/g

_{de poeira)}

destes alérgenos, particularmente foram encontrados nas residências, confirmando asua importância na sensibilização alergênica por ácaros da poeira domiciliar.

O extrato alergênico é constituído de proteínas e glicoproteínas, além de outros compostos. A concanavalina A é _{uma lectina ligante de manose, apresentando alta}

afinidade por compostos glicosilados que contem estes sacárides. Esta lectina vem sendo muito utilizada para isolamento de fração glicosilada de vários antígenos de

agentes infecciosos, tais como Almeida et

al."

Entretanto, para alérgenos de ácaros da poeira domiciliar, há _{poucos relatos} na literatura sobre sua aplicação. Em ácaros da

espécie Dermatophagoides pteronyssinus, oalérgeno glicosilado Derp 4 foi purificado

em coluna de afinidade utilizando esta lectina para caracterização fisico-quimica de suas isoformasºl.

Neste estudo, a concanavalina A foi _{utilizada para isolar alérgenos glicosilados} de D.

_farinae,

utilizando metil—a—D-manopiranosídeo como sacarideo eluente. Na análise

em SDS—PAGE,esta fração ligante (ConA/Df) apresentou um perfil protéico de bandas predominantemente de alto peso molecular (104, 77, 71 _{kDa), sendo evidenciadas}

também, bandas de _{baixo peso (28, 22,} 15 _e 10 _{kDa). Segundo Kawamoto et ai.“), as}

proteínas que apresentam sítios de glicosilação da espécie D,

_farinae

são Der

f

1 (25

kDa), Der

f

7 (22 kDa), Der

f

1 l (83 kDa), Der

f

15 (61 kDa) e Der

f

17 (40 kDa). O

fato de algumas destas proteinas estarem presentes na fração ConA/Df pode sugerir que estes compostos glicosilados apresentam afinidade pela concanavalina A e segundo

22

Agnes et al. , podem ser até cem vezes mais imunogênicos do que partes não

glicosiladas. Desta forma, estudos posteriores visando a caracterização destes compostos glicosilados e a reatividade de células T a _{estes compostos devem ser}

conduzidos para melhor conhecimento de suas propriedades imunogênicas.

De _{acordo com os resultados, os niveis de anticorpos lgE especificos à fração}

ligante de concanavalina A _{(anti-ConA/Dt) no soro de pacientes com alergia}

respiratória foram significativamente maiores nos pacientes do Grupo 1 comparado aos

demais grupos, como também ocorreu para IgE anti-Df. Além disso, a correlação significativamente positiva entre níveis de _{IgE detectados pelo extrato total}

_Df

_e

ConA/Df

_{mostra que} a fração

ConA/Df

é _{amplamente reconhecida por soros} de

pacientes atópicos.

Estudos envolvendo a reatividade de anticorpos IgE a diferentes bandas de

ConA/Df, por lmmunoblotting deverão ser realizados para identificação dos alérgenos glicosilados imunodominantes, o que permitirá esclarecer diversos aspectos quanto à

reatividade entre alérgenos ligantes de concanavalina A e_{anticorpos IgE, bem como seu}

perfil na imunogenicidadee imunoterapia da doença alérgica.

CONCLUSÓES

Os níveisde IgEespecíficos a_{fração ligante de concanavalina A se correlacionaram}

com os niveis destes anticorpos específicos ao extrato bruto, onde em pacientes alérgicos a Dermatophagoides

farinae

estes niveis foram mais altos comparados aos não alérgicos.

Alérgenos potencialmente glicosilados de

Df

_{podem ser considerados como um}

importante fatorde _{sensibilização alergênica.}

A fração ConA/Df é _{constituída de vários componentes alergênicos glicosilados,}

uma vez que os anticorpos IgE presentes no soro de pacientes atópicos apresentam alta reatividade tanto ao

Df

quantoaConA/Df.

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the head

of

bacteriophage T4. Nature 1970; 227: 680-5.

18.Friedman RD. Comparison

of

four different silver-staining techniques for salivary protein detection in _{alkaline polyacrylamide gels. Anal Biochem 1982;}

1261346-349.

19. _{Silva DAO, Gervásio AM, Sopelete MC,} Arruda—Chaves E, _{Arruda LK, Chapman}

MD, et al. A sensitive reverse ELISA for the measurement

of

specific IgE to Der_p

2, a major Dermatophagoídes

pteronyssinus

allergen. Ann Allergy Asthma lmmunol 2001;86,545-50.

20. Sopelete MC, Silva DAO, Arruda LK, Chapman MD, Taketomi EA.

Dermatophagoidesfarinae

(Der

f

1)and Dermatophagoides

_{pteronyssinus}

_{(Der p ])}

allergen exposure among subjects living in Uberlândia, Brazil. International Archives

of

Allergyand _lmmunology 2000;122:257—63.

21. Stewart GA, TurnerKJ. Physicochemical and immunochemical characterization

of

the high molecular weight allergens from Dermatophagoídes

pteronyssinus

with particular reference to the tridacnin, Con-A and 8107 reactive components. Aust J

ExpBiol MedSci 1980;58:275-88.

22. Agnes MC, Tan A, Jordens R, Geluk A, Roep BO,

Ottenhoff

T, et al. Strongly increased efficiency

of

altered peptide ligands by mannosylation. Int lmmunol

1998;10:1299—304.

Tabela

1 _- Resultados do Teste Cutâneo de Puntura (TCP) aos alérgeno

de

_{Dermatophagoidesfarinae}

_{(Df) com ou sem reatividade aos alérgeno} de Dermatophagoídes

_{pteronyssínus}

_{(Dpt) e/ou Blomia}

_tropicalis

_(Bt)c

65 _{pacientes sintomáticos.}

Pacientes sintomáticos

Resultados

do

TCP

_{Grupo I}

_Grupo

_II

(n = 35) (n = 30)

Df

+ 35 —

Df+/Dpt+

35(100%)

-Df+

/ Dpt- O

-Df+

/Bt + 31 _(88,6%)

-Df+/Bt-

4(11,4%)

-Df

- _{- 30}

Df-

/ Dpt + _ 0 Df—/ Dpt _- — 30 (100%)

Df

-

/

Bt+ - 2_(6,6%) Df—

/

Bt_- — 28 (93,4%) Tamanho da pápula (mm) 10,5ir 2,7ª 4,0

1

0,7b a= média aritmética

i

_{desvio-padrão (Df)}

b= média aritmética

i

_{desvio-padrão (Bt)}

(+) Positivo;(-) Negativo

2,0 _, ,

A

Void : ConA—Df % :

g

1,5 -

_.

I

N

1

g

Í

.8

1,0 « j : O | (D , | rã & : % 0,5 — l ª

.

l , 1 | l I I I

Figura

1 — Perfil

cromatográflco do extrato total

de D.

farinae

(Df)

em

coluna

de

afmidade de Concanavalina A

—

Sepharose.

O

Void

foi

obtido

pela

eluição com PBS. Obteve-se o eluato

ConA—Df

_{pela adição}

de metil-a—D-manopiranosídeo

0,2M (linha pontilhada). Volume

da coluna: 5,0 mL;

amostra aplicada:

45 mg

de

Df

em

um volume

de

3,0

mL.

Nº

de tubos

Figura

2 - _{Perfil eletroforético (SDS-PAGE 12%) de (a)}

Df, (b) Void e (c) _{ConA/Df. Coloração por nitrato de prata. Mr:}

massa molecular de _{referência, em kDa.} Mr (kDa) 12 83

28—

22—

16

Figura

3 -

Níveis

_de

_{IgE específica a alérgenos}

_{de D.}

farinae

em

extrato

bruto (Df) e

_{em fração glicosílada obtida em coluna de}

Concanavalina

A

_{(ConA-Df), expressos}

_em

_{índice ELISA (IE),}

determinados nos soros de

35

_{pacientes do Grupo}

_I,

_{30 pacientes do}

Grupo

II e 30

_{indivíduos do Grupo}

_{III. As}

_{barras horizontais indicam}

a

_{média geométrica de cada grupo.}

_mg.:

_{média geométrica.}

_*

p

<

0.00].

M0 No Níveis de IgE específica anti-Df ,,*,,

,,

,,

, - anti-Df . º antn—ConA/Df 5—115

,,,,,

,,,,l,”

,,,

_ “_ , Q

_.,

_*,

<

₈

10 0 <.)

«

º "e:! _o C

'

ºoo m

-_-:

o

º

5

_'.

Og () ººâgºãªº

«m'

º

em?“

W

m₉ 3 6 2 7 _{0,7 08 0 8 0 8} 17

Figura

4 -

Níveis

de

_{IgE específica (IE)}

_ao

_{extrato bruto}

_{de D.}

pteronyssinus

(Df) e

_{fração ligante}

de

_{ConA (ConA/Df) em relação}

_ao

tamanho

da

_{pápula (mm) em pacientes}

_do

_Grupo

_{I. As}

_{barras indicam}

a

_{média aritmética das medidas}

_de

_pápula

_e

_{das linhas verticais}

posteriores indicam

o

desvio-padrão.

15 _

-anti—Df

A

_{Danti—ConA/Df}

mª_J & E.“

%%

%g

10 —

һo

HJ;

QE

_º

(U

%%

í

ººo

Z.;

_

ZE

<

5 , 0

J

Ot—3 3f—6 6l—9 9i—12 ₂₁₂

Média

_{da pápula}

_(mm)

18

Figura

5-

_{Correlação entre os níveis de IgE específica}

_&

_alérgenos

_de

extrato

bruto

de

D.

_farínae

_(Dt)

_{e de}

_{fração glicosilada obtida}

_em

coluna

de

Concanavalina

A

_{(ConA-Df), expressos em índice ELISA}

(IE),

_{determinados nos soros}

de 35

_{pacientes do Grupo}

_I.

ªº“

r =

0,7334

p

<

0,0001

n =

35

15— 10— lgE específica anti—ConA/Df (IE) 01 o I l _l

*l

0 5 10 15 ₂₀

IgÉ

_específica

_{anti-Df (IÉ)}

A—R

))

NORMAS_{PARA PUBLICAÇÃO}

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Os artigos originais deverão conter, obrigatoriamente, Introdução, _{Métodos, Resultados, Discussão,}

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antes das Referências Bibliográficas.

RESUMO/SUMMARY

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resumo, com no máximo 250 palavras, deverá conter objetivo, métodos,_{resultadose conclusões. Após o}

resumo deverão ser indicados, no máximo, seis Unitermos (recomenda-se _{o vocabulário controlado do}

"Decs-Descritores em_{Ciências da Saúde', publicação da Bireme}

-_{Centro Latino-Americanoedo Caribe de}

Informação em_{Ciências da Saúde (www.bireme.br/terminologiaemsaude).}

O_{Summary visa permitir aperfeita}

compreensão do artigo. Apresentado _{em folha separada. seguiro}

mesmo modelo do resumo: Background,

Methods, Results, Conclusions. Deve ser seguido deKey words.

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um em _{português e outroem}

inglês (Summary). Artigos escritosem_{espanhol devem apresentar resumos}

em _{inglês (Summary) eportuguês.}

O_{resumo deve identificar os objetivos, metodos, resultados}

e_{conclusões do trabalho e ser, preferencialmente,}

estruturado.

REFERÉNCIAS BIBLIOGRÁFICAS

As referências bibliográficas devem ser dispostas_{porordem de entrada no textoe}

numeradas consecutivamente. sendo obrigatória sua citação.

Devem ser citados todos os autores, quando até seis; acima deste número _{citam-se os seis primeiros seguidos}

deetal.

0

_{periódico deverá ter seu nome abreviado de acordo com}

a_{LIST OF JOURNALS INDEXED IN}

INDEX MEDICUS do ano corrente, disponível tambémon—line _nosite:

www.nlm.nih.gov/tsd/serials/lji.html,

ou. se não possível, a_{Associação de Normas Técnicas (ABNT).}

Exemplos:

disease. Ann lntern Med_{l996;lZ4:980-3.}

3._{The Cardiac SocietyofAustralia}

and New Zealand. Clinical exercise stress testing. Safety and performance

guidelines. Med.!Aust 1996:164-282-4,

4.Cancerin _{South Africa [editorial].SAfrMed J}

l994;84:lS.

5.

Phillips SJ, Whisnant JP. Hypertension and stroke. ln: Laragh JH Brener BM, editors._{Hypertension:}

CITAÇÓES BlBLlOGRÁFlCAS

As citações bibliográficas no texto devem ser numeradas com algarismos_{arábicos sobrescritos, na ordem}

em

que aparecem no texto. Exemplo: Atéem _{situações de normoglicemiaó}

FIGURASETABELAS dos dados.

)

iii)—T"

)

_d)a) As figuras. sempreestar na legenda._(Tada empretoebranco,devem ser Originaisede boa qualidade. As letras e símbolos devam

figura deverá conter, no verso,0_{nome do primeiro autore onúmero da n}

ser indicada com seta, Figuras etabelas,em _{folhas individuais, deverão}

algarismo arábico. na ordemem_{que aparecem no texto.}

gura,e_{sua posição deverá}

ser numeradas separadamente, usando

ABREVIAÇÓES/_NOMENCLATURA

O

uso de abreviações deve ser minimo. Quando expressões extensas devem_{ser repetidas,recomenda—se}

que

suas iniciais maiúsculasas_{substituam após a primeira menção. Esta deve ser seguida das iniciais}

entre

parênteses. Todas as abreviaçõesem tabelase_{figuras devem ser definidas nas respectivas legendas. Apenas}

o

nome genérico do medicamento utilizado deve ser citado no trabalho.

Anatomistas (FlAA). As indicações bibliográficas para consulta são_{as seguintes: FCAT}—lFAA (1998)

-International Anatomical Terminology - _Stuttgart-Alemanha -_{Georg Thieme Verlag ou CTA-SEA (2001)}

-Terminologia Anatômica- S.Paulo-_{Editora Manole.}

SEÇÓES

Á _beira

do Leito: Perguntas com respostas objetivas sobre condutas práticas.

Atualização:_{Relatam avanços aplicáveis na prática clínica}

em_{suas res}

máximo de l20linhasem_corpo 12_{ematé70toques.}

Comentários:_{seção destinada somente aos comentários sobre artigos}

ori '

profissional convidado ou_{pelos integrantes do Corpo Editorial. Caracteristicas do texto: máximo de 29 linhas}

em_{corpo |Z}c mate' _{70 toques.}

Correspondência:_{Cartas contendo sugestões, comentários sobre trabalhos publicados}