For in-vitro diagnostic use. Product Code: FA012, FA012.E. SHEEP ANTI-HUMAN IgM (µ-chain) AFF FITC (Prediluted)

(1)

SHEEP ANTI-HUMAN IgM (

µ-chain) AFF

FITC (Prediluted)

For in-vitro diagnostic use

Product Code: FA012, FA012.E

Product manufactured by:

The Binding Site Ltd, PO Box 11712, Birmingham B14 4ZB, U.K. www.bindingsite.co.uk

Telephone: +44 (0)121 436 1000 Fax: +44 (0)121 430 7061 e-mail: [email protected]

1 INTENDED USE

This product is intended to be used on The Binding Site’s (TBS) Monkey Peripheral nerve slides (FS222) to assist in the qualitative determination of Myelin Associated Glycoprotein (MAG) autoantibodies in patient serum by indirect immunofluorescence. The identification of such autoantibodies aids in the diagnosis of autoimmune diseases. Suitability for use in other IFA combinations has not been assessed but use in such assays should not necessarily be excluded.

2 PRINCIPLE

An indirect immunofluorescence technique is used where patient samples and appropriate controls are incubated with substrate tissue. The unreacted antibodies are washed off and then the conjugate is applied. Unbound conjugate is washed off as before. Slides are viewed with a fluorescence microscope and positive samples are observed as apple green fluorescence which corresponds to the antibody of interest (ref 1 and 2).

3 REAGENT

Antisera is prepared by immunising sheep with IgM purified from human serum. The resulting antiserum is then delipidated and if necessary, adsorbed to monospecificity by use of solid-phase adsorbants. Following adsorption, the antisera is affinity purified by binding to the specific antigen attached to an inert matrix and eluted with chaotrophic buffers. The antiserum is then conjugated with fluorescein isothiocyanate (FITC) and unreacted fluorochrome is isolated by gel filtration. This product is diluted to an optimal concentration for use in indirect immunofluorescence. Preservatives are added and the product 0.2_{µm filtered.}

Evans blue is added to FA012.E as a red counterstain.

4 CAUTION

This product should only be used by suitably trained persons for the purposes stated. Adherence to the given procedure is recommended.

This product contains 0.099% sodium azide and must be handled with caution – do not ingest or allow contact with skin or mucous membranes. If contact does occur wash with a large volume of water and seek medical advice. Explosive metal azides may be formed with lead and copper plumbing; on disposal of reagent, flush with a large volume of water to prevent azide build up.

5 STORAGE AND STABILITY

This product should be stored at 2-8_{°C. DO NOT FREEZE.} It is stable until the expiry date given on the label. Slight precipitation can occur on storage which may be removed by centrifugation and should not affect the performance characteristics.

6 METHODOLOGY

6.1 Materials Supplied

6.1.1 12.5mL Anti Human IgM AFF FITC (Prediluted Conjugate) or Anti Human IgM AFF FITC with Evans Blue (Prediluted Conjugate).

6.1.2 Product insert.

6.2 Additional materials required

6.2.1 Substrate slides.

6.2.2 Phosphate buffered saline (PBS). 6.2.3 Humid chamber for incubation steps. 6.2.4 Negative and positive control sera. 6.2.5 Mounting media and coverslips.

6.2.6 Fluorescence microscope with 495nm exciter filter and 515nm barrier filter.

6.3 Test Procedure (Refer to appropriate slide insert for full details).

6.3.1 Add one drop of FA012/FA012.E to each well. Do not leave wells uncovered for longer than 15 seconds.

7 LIMITATIONS

The light source, filters and optics of different makes of fluorescence microscopes will influence the sensitivity of the assay. The performance of the microscope is significantly influenced by correct maintenance especially centring of the mercury vapour lamp and changing of the lamp after the recommended period of time.

8 REFERENCES

1. Bradwell A.R., et al (1997). Atlas of Autoantibody

Patterns. Pub: The Binding Site Ltd., Birmingham UK.

2. Bradwell A.R., et al (1999). Advanced Atlas of

Autoantibody Patterns. Pub: The Binding Site Ltd., Birmingham UK.

(2)

SCHAF ANTI-HUMAN IgM (µ-Kette) AFF

FITC (Vorverdünnt)

Zur in vitro Diagnostik

Bestell-Nr.: FA012, FA012.E

In England hergestellt von:

The Binding Site Ltd, P.O. Box 11712, Birmingham B14 4ZB, United Kingdom. www.bindingsite.co.uk

Vertrieb in Deutschland und Österreich durch: The Binding Site GmbH, Robert-Bosch-Straße 2A D-68723 Schwetzingen, Deutschland

Telefon: +49 (0) 6202 92 62 0 Fax: +49 (0) 6202 92 62 222 e-mail: [email protected]

1 VERWENDUNGSZWECK

Dieses Produkt kann zusammen mit Affen-Periphärer-Nerv (FS222) von The Binding Site (TBS) verwendet werden. Es dient zum qualitativen Nachweis von Autoantikörpern gegen das Myelin-assoziierte Glykoprotein (MAG) in Patientenseren durch die indirekte Immunfloreszenz. Die Identifikation dieser Autoantikörper unterstützt die Diagnose von Autoimmun-Erkrankungen. Die Verwendung dieses Produktes zusammen mit anderen Substraten wurde nicht geprüft, ist aber nicht zwangsläufig ausgeschlossen.

2 TESTPRINZIP

Der Test beruht auf der indirekten Immunfluoreszenz-Technik. Das Patientenserum und entsprechende Kontrollen werden mit dem Substrat inkubiert. In einem Waschschritt werden die nicht reagierenden Antikörper entfernt und dann das Fluoreszein-Konjugat zugegeben. Überschüssiges Konjugat wird durch Waschen entfernt. Die Beurteilung der Objektträger erfolgt unter dem Fluoreszenzmikroskop. Positive Proben zeigen im Bereich der Bindungsstellen zwischen dem Substrat und den Anti-körpern eine apfelgrüne Fluoreszenz (Ref 1 und 2).

3 REAGENZIEN

Das Antiserum wird durch Immunisierung von Schafen mit aus humanem Serum gereinigtem IgM gewonnen. Das Antiserum wird delipidisiert und bei Bedarf durch Festphasen-Adsorption bis zur Monospezifität gereinigt. Nach der Adsorption wird das Antiserum affinitätsgereinigt, dazu wird das spezifische Antigen an eine inerte Matrix gebunden und anschließend mit einem chaotropen Puffer eluiert. Anschließend wird das Antiserum mit Fluoreszein-Isothiocyanat konjugiert und das ungebundene Fluoro-chrom durch Gelfiltration entfernt. Das Reaktionsprodukt (Konjugat) wird optimal für die Verwendung in der indirektenImmunfluoreszenzverdünnt,mit Konservierungs-stoffen versetzt und durch einen 0,2µm Fliter filtriert. Bei dem Produkt mit der Bestell-Nr.: FA012.E wird Evans Blue für die Gegenfärbung (Rotfärbung) hinzugefügt.

4 WARNUNGEN

Dieses Produkt sollte nur von entsprechend geschultem Laborpersonal verwendet werden. Die Einhaltung der Arbeitsvorschrift wird empfohlen.

Dieses Produkt enthält 0,099% Natriumazid und muss mit den entsprechenden Vorsichtsmaßnahmen behandelt werden. Verschlucken sowie Kontakt mit Haut oder Schleimhäuten vermeiden. Nach Kontakt Hautstelle mit viel Wasser abspülen und sich in ärztliche Behandlung geben. Natriumazid kann mit Blei- oder Kupferrohren explosive Metallazide bilden. Nach der Entsorgung mit ausreichender Menge Wasser nachspülen um Azidablagerungen zu vermeiden.

5 LAGERUNG UND STABILITÄT

Dieses Produkt bei 2-8°C lagern. NICHT EINFRIEREN. Es ist so bis zum auf dem Etikett angegebenen Datum haltbar. Während der Lagerung kann eine leichte Präzipitatbildung auftreten. Das Präzipitat durch Zentrifugation entfernen, die Produktqualität wird dadurch nicht beeinträchtigt.

6 TESTDURCHFÜHRUNG 6.1 Gelieferte Materialien

6.1.1 12,5mL Anti Human IgM AFF FITC (Prediluted Conjugate) oder Anti Human IgM – AFF FITC with Evans Blue (Prediluted Conjugate).

(Vorverdünntes Konjugat). 6.1.2 Arbeitsanleitung.

6.2 Zusätzlich benötigte Materialien

6.2.1 Substrat-Objektträger.

6.2.2 Phosphat-gepufferte Kochsalzlösung (PBS-Puffer).

6.2.3 Feuchte Kammer für die Inkubationen. 6.2.4 Negativ- und Positivkontrollseren. 6.2.5 Eindeckmedium und Deckgläschen.

6.2.6 Fluoreszenzmikroskop mit einem 495nm An-regungsfilter und 515nm Barrierefilter.

6.3 Testdurchführung (Detailangaben siehe

spezifsche Arbeitsanleitung).

6.3.1 Je einen Tropfen FA012/ FA012.E auf jedes Well geben. Auftragsstellen nicht länger als 15 Sekunden unbedeckt lassen.

7 GRENZEN DES TESTS

Die im Fluoreszenzmikroskop verwendete Lichtquelle, Filter und Optik beeinflussen die Sensitivität des Tests. Die Qualität des Mikroskops wird maßgeblich durch die korrekte Wartung, speziell durch Zentrieren der Queck-silberlampe und deren Austausch nach der empfohlenen Brenndauer, beeinflusst.

8 REFERENZEN

(3)

CONJUGUE AFF FITC DE MOUTON

ANTI IgM (chaîne µ) HUMAINES

(prédilué)

Pour usage in vitro uniquement

Références : FA012, FA012.E

Produit fabriqué en Angleterre par la société :

The Binding Site Ltd, PO Box 11712, Birmingham B14 4ZB, United Kingdom. www.bindingsite.co.uk

Distribués en France par la société :

The Binding Site, 14 rue des Glairaux, BP226, 38522 Saint-Egrève Cedex. Téléphone : 04.38.02.19.19

Fax : 04.38.02.19.20 e-mail : [email protected]

1 UTILISATION

Ces conjugués doivent être utilisés en conjonction avec les lames de nerf périphérique de singe The Binding Site (réf. FS222) pour la détermination qualitative des autoanticorps anti-MAG (glycoprotéine associée à la myéline) dans le sérum humain en immunofluorescence indirecte. L’identification de tels anticorps apporte une aide dans le diagnostic de maladies autoimmunes. L’utilisation de ces réactifs pour d’autres tests en immunofluorescence indirecte n’a pas été évaluée mais ne doit pas être nécessairement exclue.

2 PRINCIPE

Une technique d’immunofluorescence indirecte est utilisée lorque les sérums et les contrôles appropriés sont incubés avec les lames de tissus. Les anticorps non fixés sont éliminés par lavage et le conjugué est déposé. Le conjugué non lié est également éliminé par lavage. Les lames sont ensuite observées sous microscope. Les sérums positifs présentent une fluorescence verte qui correspond à l’anticorps recherché (réf. 1 et 2).

3 REACTIF

L’antisérum est préparé en immunisant un mouton avec des IgM purifiées à partir de sérum humain. L’antisérum qui en résulte est délipidé et si nécessaire adsorbé de façon monospécifique en utilisant des adsorbants en phase solide. Après l’adsorption, l’antisérum est purifié par affinité par liaison de l’antigène spécifique à une matrice inerte, il est élué avec des tampons chaotropiques. L’antisérum est ensuite conjugué à l’isothiocyanate de fluorescéine (FITC) et le fluorochrome non fixé est isolé par filtration sur gel. Le conjugué est dilué à une concentration optimale pour être utilisé en immunofluorescence indirecte. Des conservateurs sont ajoutés et le produit est filtré à 0,2µm.

Du bleu d’Evans est ajouté à la référence FA012.E comme contre-colorant.

4 PRECAUTIONS

Ce produit doit être manipulé par des personnes compétentes en techniques de laboratoire. Il est recommandé de suivre scrupuleusement la procédure d’utilisation.

Ce réactif contient 0,099% de l’azide de sodium, il doit donc être utilisé avec précaution. Ne pas ingérer ou mettre en contact avec la peau ou les muqueuses. En cas de contact, laver à grande eau et consulter un médecin. Des azides de métaux explosifs peuvent se former avec le cuivre et le plomb, laver à grande eau les récipients afin d’éviter la formation des azides de métaux.

5 STOCKAGE ET STABILITE

Ces produits doivent être stockés à 2-8°C dès leur réception, ne pas congeler. Ils sont stables jusqu’à la date de péremption indiquée sur l’étiquette du flacon. De faibles précipitations peuvent avoir lieu lors du stockage qui peuvent être éliminées par centrifugation, ceci n’affecte en rien les performances des réactifs.

6 METHODOLOGIE 6.1 Matériel fourni

6.1.1 12,5mL Anti Human IgM AFF FITC (Prediluted Conjugate) ou Anti Human IgM AFF FITC with Evans Blue (Prediluted Conjugate Conjugué

prédilué (12,5mL). 6.1.2 Fiche technique.

6.2 Matériel nécessaire et non fourni

6.2.1 Lames. 6.2.2 Tampon PBS.

6.2.3 Chambre humide (pour les étapes d’incubation). 6.2.4 Contrôles négatif et positif.

6.2.5 Milieu de montage et lamelles.

6.2.6 Microscope avec filtre excitant à 495nm et filtre barrière à 515nm.

6.3 Procédure (cf fiche technique des lames). 6.3.1 Ajouter une goutte de FA012/FA012.E à chaque

puits. Ne pas laisser les puits non couverts plus de 15 secondes.

7 LIMITES

La source lumineuse, les filtres et les optiques des microscopes influent sur la sensibilité du test. Les performances du microscope dépendent de la qualité de la maintenance (changement de la lampe).

8 BIBLIOGRAPHIE

Patterns. Pub : The Binding Site Ltd., Birmingham UK.

Autoantibody Patterns. Pub : The Binding Site Ltd., Birmingham UK.

(4)

OVEJA ANTI-IgM HUMANA (cadena-

µ) AFF

FITC (Prediluido)

Spanish

Para uso en diagnóstico in vitro

Código Producto: FA012, FA012.E

Producto Fabricado por:

The Binding Site sucursal en España, C/ Balmes 243 4º 3ª, 08006 Barcelona Teléfono 902027750 Fax: 902027752 e-mail: [email protected] web: www.bindingsite.es 1 PRINCIPIO

Este producto está pensado para ser usado con los portas de nervio periférico de mono (FS222) de The Binding Site (TBS) como una ayuda a la detección cualitativa de los anticuerpos contra Glicoproteínas asociadas a la mielina (MAG) en suero del paciente mediante técnica de inmunofluorescencia indirecta. La identificación de estos anticuerpos es una ayuda al diagnóstico de enfermedades autoinmunes. La posibilidad de usarlo con otras combinaciones de IFA no ha sido testada pero no se debe descartar.

2 PRINCIPIO

En la técnica de inmunofluorescencia indirecta, el suero de los pacientes y los controles apropiados se incuban sobre el tejido sustrato. Los anticuerpos que no han reaccionado se eliminan por lavados y se aplica el conjugado. El conjugado no unido se elimina como se ha descrito en el paso anterior. Los portas se visualizan en un microscopio de fluorescencia y las muestras positivas se observan como fluorescentes verde manzana que corresponde al anticuerpo de estudio (ref 1 y 2).

3 REACTIVO

El antisuero se prepare inmunizando una oveja con IgM purificada de suero humano. El antisuero resultante se deslipidiza y si es necesario se adsorbe en fase sólida para obtener monoespecificidades. Después de la adsorción, se realiza una purificación por afinidad mediante unión al antígeno específico en una matriz inerte y elución con tampones caotrópicos. El antisuero se conjuga con fluorescein isothiocyanate (FITC) y el fluorocromo no conjugado se elimina por filtración en gel. El producto está diluido a la concentración óptima para ser usado en inmunofluorescencia indirecta. Se añaden los conservantes y se pasa el producto por filtro de 0,2µm. A la referencia FA012.E se le añade Azul de Evans como contratinción roja.

4 CAUTION

Este producto sólo debe ser usado por personas conocedoras de estas técnicas.

El producto contiene 0.099% de azida sódica que se debe manipular con precaución- no ingerir y evitar el contacto con la piel o mucosas. Si hubiera un contacto accidental lavar con agua abundante y solicitar consejo medico. La azida sódica puede formar ácidas metálicas explosivas en contacto prolongado con tubos de plomo o cobre. Tras la eliminación aclarar con gran cantidad de agua con el fin de evitar depósitos de azida.

5 ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD

El producto, una vez recibido, se debe guardar entre 2-8_{°C, NO CONGELAR. A esta temperatura el producto} será estable hasta la fecha de caducidad. Puede producirse un ligero precipitado cuando se almacena, este se puede eliminar centrifugando sin que esto afecte la funcionalidad del producto.

6 METODOLOGIA

6.1 Material Suministrado

6.1.1 12,5mL Anti Human IgM AFF FITC (Prediluted Conjugate) o Anti Human IgM AFF FITC with Evans Blue (Prediluted Conjugate). (Anti IgM

Humana AFF FITC, (Conjugado Prediluido) o Anti IgM Humana AFF FITC con Azul de Evans (Conjugado Prediluido).

6.1.2 Especificaciones del Producto

6.2 Material requerido

6.2.1 Portaobjetos con sustrato. 6.2.2 Tampón Fosfato Salino (PBS).

6.2.3 Cámara húmeda para las incubaciones. 6.2.4 Sueros control positivo y negativo 6.2.5 Medio de montaje y cubreobjetos.

6.2.6 Microscopio de fluorescencia con filtro excitación 495nm y filtro de barrera 515nm.

6.3 Procedimiento del Test (Seguir las

especificaciones del producto).

6.3.1 Añadir una gota de FA012/FA012.E a cada pocillo. No dejar los pocillos al descubierto por más de 15 segundos.

7 LIMITACIONES

La intensidad de fluorescencia del test puede estar influida por fuentes de luz, filtros y óptica de los distintos microscopios de fluorescencia. El microscopio debe tener un buen mantenimiento, en especial el centrado de la bombilla de mercurio y el cambio periódico de ésta después de un determinado tiempo de uso.

8 REFERENCIAS

2.

Bradwell A.R., et al (1999). Advanced Atlas of Autoantibody Patterns. Pub: The Binding Site Ltd., Birmingham

UK.

(5)

CONJUGADO DE IgM ANTI- HUMANA DE

CARNEIRO (cadeia-

µ) AFF com FITC (Pré

diluído)

Portuguese

Para diagnóstico in vitro

Código do Produto: FA012, FA012.E

Produto fabricado por:

The Binding Site Ltd, PO Box 11712, Birmingham, B14 4ZB, U.K. www.bindingsite.co.uk

Telefone: +44 (0)121 436 1000 Fax: +44 (0)121 430 7061 e-mail: [email protected]

1 UTILIZAÇÃO

Este controlo deve ser utilizado com lâminas contendo nervos periféricos de macaco da The Binding Site (FS222) como auxiliar na determinação qualitativa de autoanticorpos MAG no soro de doentes por imunofluorescência indirecta. A identificação destes autoanticorpos vai auxiliar o diagnóstico de doenças autoimunes. A utilização com outros métodos de I.F. não foi ainda verificada. Contudo não deve ser excluída a utilização neste tipo de testes.

2 PRINCIPIO

Quando é utilizada a técnica de imunofluorescência indirecta, as amostras e os controlos são incubadas com substrato de tecido. Os anticorpos que não reagiram são removidos através de lavagem e é aplicado o conjugado. Em seguida, as lâminas são observadas ao microscópio de fluorescência. A positividade das lâminas manifesta-se através de uma fluorescência; são observadas amostras positivas onde a “verde-maçâ” que corresponde ao anticorpo relevante (ref. 1 e 2).

3 REAGENTES

O antisoro é obtido através da imunização do carneiro com o imunogénio referido acima. O antisoro que resulta daí é adsorvido para o tornar monoespecifico e depois é purificado para lhe conferir uma elevada afinidade. Reactividade cruzada com proteínas séricas de bovino, rato e ratazana é reduzida por subsequente adsorção insolúvel. O antisoro é então conjugado com FITC. O Fluorocromo que não reagiu é removido através de filtração por gel. São adicionados conservantes e o produto é filtrado (0,2µm).

È adicionado Evans blue a FA012.E como contrastante.

4 PRECAUÇÕES

Deve proceder-se a um manuseamento e métodos de inutilização adequados para todo o material potencialmente infectado e apenas a pessoal treinado adequadamente nestes métodos deverá ser permitida a execução destes procedimentos.

Os componentes do kit contêm azida de sódio como conservante, pelo que terão que ser manuseados com precaução – não ingerir nem permitir o contacto com a pele ou membranas mucosas. Se ocorrer um contacto com o produto, deve-se lavar abundantemente com água e consultar um médico. Em contacto com canalizações de chumbo ou cobre, podem-se formar sais explosivos; para evitar que tal aconteça, fazer correr abundante quantidade de água aquando da inutilização dos reagentes.

5 CONSERVAÇÃO E ESTABILIDADE

Este produto deve ser conservado entre 2-8°C. NÃO CONGELAR. Permanece estável até a data de validade indicada no rótulo. Pode ocorrer ligeira precipitação, esta pode ser removida através de centrifugação, o que não afecta as características da performance do produto.

6 METODOLOGIA

6.1 Material Fornecido

6.1.1 12,5mL Anti Human IgM AFF FITC (Prediluted Conjugate) ou Anti Human IgM AFF FITC com Evans Blue (Conjugado Pré-diluido).

6.1.2 Folheto de instruções

6.2 Material Adicional Necessário

6.2.1 Conjugado de IgM Anti-humana AFF com FITC 6.2.2 Lâminas com Substrato.

6.2.3 Tampão (PBS).

6.2.4 Câmara húmida para as etapas de incubação. 6.2.5 Soro controlo negativo e positivo.

6.2.6 Meio de Montagem e lamelas.

6.2.7 Microscópio Fluorescente com filtro de excitação de 495nm e filtro de barreira de 515nm.

6.3 Procedimento do Teste (Consultar folheto de

instruções das lâminas para mais detalhes). 6.3.1 Adicionar uma gota de FA012/FA012.E a cada

poço. Não deixar os poços descobertos por mais de 15 segundos.

7 LIMITAÇÕES

A fonte emissora de luz, filtros e ópticas de diferentes tipos de microscópicos fluorescentes podem influenciar a sensibilidade do teste. A performance do microscópio é influenciada de forma significativa pela manutenção correcta do microscópio principalmente no que diz respeito à lâmpada de vapor de mercúrio e mudar a mesma após a duração recomendada.

8 REFERENCIAS

(6)

ANTI-IgM UMANE DI PECORA (catena-

µ)

AFF FITC (Prediluito)

Italian

Per uso diagnostico in vitro

Codice Prodotto: FA012, FA012.E

Prodotto da:

Telefono: +44 (0)121 436 1000 Fax : +44 (0)121 430 7061 e-mail: [email protected]

1 INDICAZIONI

Questo prodotto è utilizzato sui vetrini The Binding Site (TBS) di nervo periferico di scimmia (FS222) come prodotto complementare nella determinazione qualitativa degli autoanticorpi verso la glicoproteina associata alla mielina (MAG) nel siero umano, mediante immunofluorescenza indiretta. L’identificazione di tali autoanticorpi costituisce un sussidio nella diagnosi delle malattie autoimmuni. L’idoneità all’uso in altre combinazioni IFA non è stata valutata ma l’utilizzo in tali dosaggi non deve essere necessariamente escluso.

2 PRINCIPIO

Viene impiegata una tecnica di immunofluorescenza indiretta in cui i campioni dei pazienti e i relativi controlli sono incubati con i tessuti. Gli anticorpi non specifici sono eliminati con il lavaggio, quindi viene applicato un coniugato fluoresceinato. I vetrini vengono poi lavati come prima per eliminare il coniugato non legato. Per la lettura dei vetrini si utilizza un microscopio a fluorescenza. I campioni positivi presentano una fluorescenza di colore verde brillante che corrisponde all’autoanticorpo che si vuole determinare (rif. 1 e 2).

3 REAGENTE

L’antisiero viene preparato immunizzando le pecore con IgM purificate da siero umano. L’antisiero che ne risulta viene poi delipidato e se necessario adsorbito a monospecificità mediante fasi solide adsorbenti. Dopo l’adsorbimento, l’antisiero viene purificato per affinità mediante un legame con l’antigene specifico adeso ad una matrice inerte ed eluito con tamponi caotropici. L’antisiero viene poi coniugato con isotiocianato di fluoresceina (FITC) ed il fluorocromo non legato viene isolato mediante gel-filtrazione. Il presente prodotto è stato diluito ad una concentrazione ottimale per l’utilizzo in immuno-fluorescenza indiretta. Vengono aggiunti infine dei conservanti ed il prodotto viene filtrato a 0,2µm.

Il Blu di Evans viene aggiunto al FA012.E, come colorazione rossa di contrasto.

4 PRECAUZIONI

Il presente prodotto deve essere utilizzato da personale specializzato. Si raccomanda di osservare la procedura del

Il prodotto contiene sodio azide allo 0.099% e deve essere trattato con cautela – non ingerire né permettere il contatto con la pelle o le mucose. In caso di contatto, lavare con molta acqua e rivolgersi al medico. Azotidrati metallici esplosivi si possono formare con il rame e il piombo; per evitare l’accumulo di tali composti, far scorrere abbondante acqua sui reagenti eliminati.

5 CONSERVAZIONE E STABILITA’

Il prodotto deve essere conservato a 2-8°C ed è stabile fino alla data di scadenza indicata sull’etichetta. NON CONGELARE. In fase di conservazione si potrà osservare una lieve precipitazione eliminabile mediante centrifugazione, che non influirà sulle caratteristiche del dosaggio.

6 METODOLOGIA 6.1 Materiali forniti

6.1.1 12,5mL Anti Human IgM AFF FITC (Prediluted Conjugate o Anti Human IgM AFF FITC with Evans Blue (Prediluted Conjugate (Anti-IgM

umane AFF FITC (coniugato prediluito) o Anti-IgM umane AFF FITC con Blu di Evans (coniugato prediluito).

6.1.2 Scheda tecnica.

6.2 Materiale necessario ma non fornito

6.2.1 Vetrini con substrato. 6.2.2 Tampone PBS.

6.2.3 Camera umida per le fasi d’incubazione. 6.2.4 Sieri di controllo positivi e negativi.

6.2.5 Soluzioni di montaggio e vetrini coprioggetti. 6.2.6 Microscopio a fluorescenza con filtro a 495nm

(exciter) e filtro a 515nm (barrier).

6.3 Procedura (Far riferimento alla metodica del

vetrino per maggiori dettagli).

6.3.1 Aggiungere una goccia di FA012/FA012.E in ciascun pozzetto. Non lasciare i pozzetti scoperti per oltre 15 secondi.

7 LIMITI DELLA PROCEDURA

La fonte luminosa, i filtri e l’ottica dei microscopi a fluorescenza di diverse marche influiranno sulla sensibilità del kit. La performance del microscopio è influenzata notevolmente da una corretta manutenzione, e in particolare dalla centratura e dalla sostituzione della lampada a vapori di mercurio dopo il periodo di tempo consigliato.

8 BIBLIOGRAFIA

1. Bradwell A R et al (1997). Atlas of autoantibody patterns on tissues. Publ. The Binding Site Ltd., Birmingham UK.

2. Bradwell A R et al (1999). Advanced atlas of autoantibody patterns. Publ. The Binding Site Ltd., Birmingham UK.