MEDIO DE TELURITO PARA AISLAR Y TIPEAR C. DIPHTHERIAE’
Por T. W. GALBRAITH, E. H. BRAMHALL y RTJSSELL S. FRASER~
Las sales de telurio fueron usadas por primera vez por Conradi y Touch en 1912, como agente selectivo para aislar Corynebacterium diphtheriae. Desde entonces se han descrito muchos medios que con- tienen teluratos en diferentes formas, la mayorfa de los cuales fueron avaluados y comparados con el medio corriente de Loeffler por tres in- vestigadores independientes en 1930, que convinieron en que el medio de Clauberg, que contiene telurito de potasio debía ser sustituido por el de Loeffler. Esta comparación se hizo solamente basándose en el creci- miento y separación ; sin mencionar la diferencia entre las colonias de C. diphtheriue. En 1931, Anderson y sus asociados, describieron un medio excelente para el tipeo de las formas “gravis,” “intermedius” y “mitis” del bacilo diftérico; el tipo “minimus” fu6 descrito más tarde. La preparación de medios que contienen telurito por lo general re- quieren una o mas filtraciones y otros procedimientos dificiles, fre- cuentemente tan complicados que por lo general no se encuentran buenos medios diferenciales en los laboratorios de diagnóstico donde usualmente se aisla el C. diphthetiue. En el estudio del bacilo diftérico se necesita un buen medio, fácil de preparar.
Para preparar el medio se pesan 75 gm de agar-infusión (No. 14) 0.4 gm de telurato de potasio, y 10 gm de hemoglobina-Bacto; se mezclan bien en un mortero ; se hace una suspensión de la mezcla en 1,000 ml de agua destilada fría, y se hierve por unos minutos para disolver los in- gredientes; el pH debe ajustarse a 7.2-7.3 ; se esteriliza por 20 minutos al autoclave a 121” C.; déjese enfriar el medio hasta 45-50” C. antes de distribuir (12-15 ml) el medio oscuro en placas de Petri, las que pueden emplearse al solidificarse el medio. El telurito de potasio se reduce al pasar por el autoclave, y esto da el color oscuro. La base es el agar con infusión de carne No. 14 (preparado por Difco) y la fórmula es la siguiente: infusión de 454 gm de corazlón de buey; 20 gm de peptona- protesosa; 5 gm de cloruro de sodio, y 20 gm de agar-Bacto.
Este medio no es selectivo para el bacilo diftérico. Casi todos los microorganismos nasofarfngeos pueden crecer en él. Las características de las colonias del C. diphtheriae son tales, que con un poco de experiencia pueden seleccionarse las que se deseen, empleando una amplificación de 9-12 aumentos, recomendándose un microscopio estereoscópico con luz reflejada. Las colonias del tipo “minimus” no pueden observarse con luz transmitida, ni diferenciarse a simple vista.
A continuación se describen las características de las colonias de los microorganismos nasofarfngeos comunes junto con algunas Coryne- bacterias :
1 Traducido y resumido por la Oficina Sanitaria Panamericana del Pub. Health Rep. sbre. 10, 1948.
* De la División de Laboratorios, Departamento de Salubridad del Estado de Utah, Salt Lake City, Utah.
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.?Mreptococos: Tipo S: convexas, 0.2-0.5 mm de diAmetro, gris oscuro a negras, relucientes, lisas, expansión suave y uniforme cuando se presionan con el ansa; Tipo R: gris oscuras, planas, irregulares y asperas.
Estu$ococos: Convexas, 0.5-2.0 mm de diametro, color gris claro, relucientes, lisas, bordes completos, expansión suave, uniforme, húmeda cuando se presionan con el ansa.
Levaduras: Convexa, 0.5-1.0 mm de diámetro, color gris claro, sin brillo, granulares, bordes completos, expansión suave, granular, seca, cuando se pre- sionan con el ansa.
Microorganismos parecidos al Proteus: De planos a convexos, 1.0-5.0 mm, brillo metfdico verde o rojo, mate y ásperas; expansión granular y húmeda al presionar con el ansa.
Tipo Yhmis”: Cónicas, 0.5-2.0 mm de diametro, mate, color gris-pardo oscuro con los centros mãs intensos que la periferia, estrias radiales marcadas, granulares finas, periferia de escasa a marcadamente dentada, se rompen al presionar con el ansa. Se observan a menudo colonias granulosos (centro de margarita).
Tipo “Milis”: Cónicas, 0.5 a 1.5 mm de dihmetro, color de gris claro mate a gris pardo, pueden tener estrfas radiales limitadas a la periferia, márgenes en- dentados finos en las estrias, rotura al presionar con el ansa.
Tipo “Minimus”: Generalmente expansivas, algunas clases umbonadas, 0.1-1.2 mm de diámetro, mate, gris claro a oscuro, toscamente granulosos con bordes desgastados a lobulados; se rompen al presionar con el ansa.
Difteroides: De cónica a convexa, 0.5-3.0 mm de diámetro, de mate a relucien- tes, de gris claro a gris pardo, lisas a granulares finas, bordes de enteros a irre- gulares, extensión suave, húmeda, semejante a cera al presionar con el ansa.
DISCUSI6N
El número de medios recomendados para aislar el bacilo diftérico conteniendo teluratos es considerable y contimía aumentando, lo que indica en realidad que el medio ideal para aislar el C. diphtheriae no ha sido hallado todavfa. Johnstone y Zinnemann (1943) consideran que tal medio debería poseer las siguientes propiedades: Favorecer el creci- miento de todos los tipos y clases de C. diphtheriae; la diferenciación de los tipos debe ser fácil, o la selectividad completa; las colonias diftéricas deben ser reconocidas por lo menos a las 18 horas: el medio debe ser simple y fácil de preparar.
El medio reducido de telurito de potasio descrito anteriormente, se asemeja a este medio ideal más que ninguno probado hasta la fecha. Favorece el crecimiento de todos los tipos y clases de C. diphtheriae. La mayorfa de los tipos y cepas son tan típicos que se reconocen fácil- mente. El 85y0 de los cultivos positivos puede ser leído a las 18 horas o antes. Empleando el agar de infusión de carne No. 14 (Difco) su preparación es muy sencilla.
Se encuentra, como lo hicieron Cooper y sus asociados (1940), que se obtienen más resultados positivos cuando se usa el medio de agar con telurito y sangre, en vez del medio de Loeffler solamente. Este hecho se recalca axín más al considerar que Ia morfología del tipo “minimus” no es lo suficientemente distintiva para ser identificada en todos los casos en un frote del medio de Loeffler.
