VALIDACAO SERGIO7 palestra rev02

(1)

VALIDAÇÃO DE MÉTODOS

DE ANÁLISE,

DISPOSITIVOS DE

MEDIÇÃO E PROCESSOS

(2)

VALIDAÇÃO DE MÉTODOS DE ANÁLISE VALIDAÇÃO DE MÉTODOS DE ANÁLISE

VALIDAÇÃO

MÓDULO 1



_{O que é validação ?}



_{Por que validar ?}



_{Melhorias obtidas com a validação}



_{Diretrizes para validação}

(3)

(4)

VALIDAÇÃO

“

“PROCESSO PELO QUAL É ESTABELECIDO, ATRAVÉS PROCESSO PELO QUAL É ESTABELECIDO, ATRAVÉS DE ESTUDOS DE LABORATÓRIO, QUE AS

DE ESTUDOS DE LABORATÓRIO, QUE AS

CARACTERÍSTICAS DE DESEMPENHO DO MÉTODO

ATINGEM OS REQUISITOS PARA AS APLICAÇÕES

ANALÍTICAS PRETENDIDAS.”

USP ( United States Pharmacopeia ) 24,2000 USP ( United States Pharmacopeia ) 24,2000

(5)

VALIDAÇÃO

“

“DEMONSTRAR QUE UM MÉTODO ANALÍTICO É DEMONSTRAR QUE UM MÉTODO ANALÍTICO É ADEQUADO AO SEU PROPÓSITO.”

ADEQUADO AO SEU PROPÓSITO.”

ICH (International Conference on Harmonization of technical Requiriments of Registration of ICH (International Conference on Harmonization of technical Requiriments of Registration of Pharmaceuticals for Humam Use) 24,2000 Pharmaceuticals for Humam Use) 24,2000

(6)

VALIDAÇÃO

“

“CONFIRMAÇÃO POR EXAME E FORNECIMENTO DE CONFIRMAÇÃO POR EXAME E FORNECIMENTO DE EVIDÊNCIA OBJETIVA DE QUE OS REQUISITOS

EVIDÊNCIA OBJETIVA DE QUE OS REQUISITOS

ESPECÍFICOS PARA UM DETERMINADO USO

PRETENDIDO SÃO ATENDIDOS.”

NBR -ISO/IEC 17025:2005 NBR -ISO/IEC 17025:2005

(7)

VALIDAÇÃO

Para validar um método de análise é necessário que as

etapas indicadas no PDCA sejam executadas:

P

C

D

A

SELECIONAR SELECIONAR MÉTODO E MÉTODO E PADRONIZAR PADRONIZAR DESENVOLVER DESENVOLVER MÉTODO E MÉTODO E TESTAR TESTAR ANALISAR ANALISAR RESULTADOS RESULTADOS E E OTIMIZAR SE OTIMIZAR SE NECESSÁRIO NECESSÁRIO COLETAR COLETAR DADOS DADOS

(8)

O QUE COMPREENDE A VALIDAÇÃO

MATÉRIA-PRIMA

VALIDAÇÃO

A validação não compreende apenas o método de

análise, mas todo o sistema de medição – Conformidade do

Sistema.

LOCAL

MEIO AMBIENTE

MEIO AMBIENTE MÁQUINAMÁQUINA MEDIDAMEDIDA

EXATIDÃO

EQUIPAMENTO

MÉTODO

MÉTODO ANALISTAANALISTA

MÃO-DE-OBRA MÃO-DE-OBRA MÉTODO MÉTODO PADRÃO PADRÃO

(9)

O QUE COMPREENDE A VALIDAÇÃO

VALIDAÇÃO VALIDAÇÃO DO MÉTODO DO MÉTODO DE ANÁLISE DE ANÁLISE CALIBRAÇÃO CALIBRAÇÃO LINEARIDADE LINEARIDADE TENDÊNCIA TENDÊNCIA REPETITIVIDADE REPETITIVIDADE ESTABILIDADE ESTABILIDADE SISTEMA DE MEDIÇÃO SISTEMA DE MEDIÇÃO CONFORMIDADE CONFORMIDADE DO SISTEMA DO SISTEMA S IS T E M A D E M E D IÇ Ã O V A L ID A D O S IS T E M A D E M E D IÇ Ã O V A L ID A D O REPRODUTIBILIDADE REPRODUTIBILIDADE

(10)

O QUE COMPREENDE A VALIDAÇÃO

Para validação do sistema de medição podem ser

utilizadas, como referência para requisitos, as normas :

- ASTM – E-691 – 87 – Standard Pratice for Conducting an

interlaboratory Study to Precision of a Teste Method.

- ISO-5725 : 1994 – Precision of Test Methods – Determination of

Repeatibility and Reproducibility for a Standard test Method by a

Inter-laboratory Test.

laboratory Test.

- NBR ISO-16949 : 2002 - Sistemas de Gestão da Qualidade –

Requisitos particulares para aplicação da ISO 9001:2000 para

organizações de produção automotiva e peças de assistência

relevantes.

- NBR ISO/IEC-17025 : 2001 - Requisitos gerais para competência de

(11)

O QUE COMPREENDE A VALIDAÇÃO

Para validação do sistema de medição podem ser

utilizadas, como referência para requisitos, as normas :

-INMETRO -DOQ-CGCRE-008 – Revisão 01 - março/2003_{INMETRO -DOQ-CGCRE-008 – Revisão 01 - março/2003}

-ASTM D-6299 - Estatística aplicada na garantia da qualidade em

técnicas de análise e medida de performance de sistemas de medição.

-NBR 14597 : Precisão de métodos analíticos, Repetibilidade e

Reprodutibilidade de métodos de ensaios de produtos químicos e

análise interlaboratorial.

(12)

O QUE COMPREENDE A VALIDAÇÃO

“

“ENTENDE-SE COMO SISTEMA DE MEDIÇÃO O ENTENDE-SE COMO SISTEMA DE MEDIÇÃO O CONJUNTO DE OPERAÇÕES, PROCEDIMENTOS,

CONJUNTO DE OPERAÇÕES, PROCEDIMENTOS,

EQUIPAMENTOS, SOFTWARE E PESSOAL UTILIZADOS PARA

ATRIBUIR UMA DIMENSÃO A CARACTERÍSTICA QUE ESTÁ

SENDO MEDIDA.”

Definição da ISO/TS-16949 Definição da ISO/TS-16949

(13)

O QUE COMPREENDE A VALIDAÇÃO

Para a validação de um método de análise de forma

eficiente, o sistema de medição deve estar validado, isto é,

comprovado que atende ao uso pretendido.

SISTEMA DE MEDIÇÃO SISTEMA DE MEDIÇÃO VALIDADO ? VALIDADO ? SELECIONAR MÉTODO SELECIONAR MÉTODO DESENVOLVIMENTO DESENVOLVIMENTO VALIDAR SISTEMA VALIDAR SISTEMA

ANÁLISE DOS DADOS ANÁLISE DOS DADOS

VALIDAR MÉTODO

ADEQUADO ?

ADEQUADO ? APRIMORAR MÉTODO APRIMORAR MÉTODO S S S S N N N N INÍCIO INÍCIO FIM FIM

(14)

FONTES PARA PESQUISA

(15)

FONTES PARA PESQUISA

(16)

FONTES PARA PESQUISA

(17)

FONTES PARA PESQUISA

(18)

FONTES PARA PESQUISA

(19)

(20)

VALIDAÇÃO

A validação de métodos de análise permite :

• Obter evidência objetiva de adequação ao uso pretendido._{Obter evidência objetiva de adequação ao uso pretendido.} • Declarar a incerteza do método._{Declarar a incerteza do método.}

• Obter resultados confiáveis, exatos e precisos._{Obter resultados confiáveis, exatos e precisos.}

• Melhorar a organização das rotinas de análise através da _{Melhorar a organização das rotinas de análise através da}

documentação do processo de validação.

• Atender às exigências de normas, recomendações e sistemas _{Atender às exigências de normas, recomendações e sistemas}

de qualidade nacionais e internacionais.

(21)

VALIDAÇÃO

O laboratório que utiliza o método é o responsável por sua validação e deve garantir:

- Controle da documentação; - Adequação ao uso pretendido;

- Controle sobre fontes de erros sistemáticos e aleatórios;

- Conhecimentos técnicos sólidos sobre o método e sua aplicação;

- Conhecimento dos fatores críticos e parâmetros de desempenho.

(22)

Recomendações da NBR ISO/IEC 17025:2005 – Requisitos gerais para competência técnica de laboratórios de calibração e ensaios :

- Item 5.4.5 – Validação de Métodos

“O laboratório deve validar métodos não normalizados, métodos desenvolvidos pelo laboratório, métodos normalizados usados fora do escopo pré-estabelecido ou em produto não especificado na norma, a fim de confirmar que os métodos são adequados ao uso pretendido.”

VALIDAÇÃO

(23)

Validar um método conforme requisito da NBR ISO/IEC-17025:2005 ( item 5.4.5.3 – nota 1 ) inclui :

• Especificação dos requisitos

• Determinação das características de desempenho • Verificação de que os requisitos são atendidos

• Declaração da validade

VALIDAR MÉTODO

(24)

Demonstrar através dos princípios teóricos do método e experiência prática :

• Perdas nas etapas de extração • Faixa de aplicação do método • Fatores críticos

• Efeito de interferentes

• Definição clara do analito / concentração / matriz • Fontes significativas de erro e forma de controle

VALIDAR MÉTODO

(25)

MELHORIAS OBTIDAS

COM A VALIDAÇÃO

(26)

Antes da Validação

custo

custo RISCOSRISCOS POSSIBILIDADESPOSSIBILIDADES_TÉCNICAS_TÉCNICAS

Depois da Validação

“

“VALIDAÇÃO É SEMPRE O EQUILÍBRIO VALIDAÇÃO É SEMPRE O EQUILÍBRIO ENTRE CUSTO, RISCOS E

ENTRE CUSTO, RISCOS E

POSSIBILIDADES TÉCNICAS.”

NBR ISO/IEC 17025:2005 (item 5.4.5.3 – nota 3) NBR ISO/IEC 17025:2005 (item 5.4.5.3 – nota 3)

VALIDAR MÉTODO

custocusto RISCOSRISCOS

POSSIBILIDADES

TÉCNICAS

(27)

VALIDAÇÃO

 _{Melhoria da qualidade perante o cliente}_{Melhoria da qualidade perante o cliente}

 _{Melhoria da produtividade e redução de custos}_{Melhoria da produtividade e redução de custos}  _{Melhoria da competitividade}_{Melhoria da competitividade}

 _{Atendimento ao GMP (boas práticas de fabricação)}_{Atendimento ao GMP (boas práticas de fabricação)}  _{Atendimento ao BPL (boas práticas de laboratório)}_{Atendimento ao BPL (boas práticas de laboratório)}  _{Atendimento ao MS (ANVISA)}_{Atendimento ao MS (ANVISA)}

A validação de métodos de análise proporciona diversas melhorias como:

(28)

MÉTODOS NORMALIZADOS

São métodos desenvolvidos e publicados por um

organismo de normalização ou outras organizações, com

reconhecimento nacional ou internacional, cujos métodos são

aceitos pelo setor técnico em questão.

Organismos de normalização :

(29)

MÉTODOS NORMALIZADOS

INTERNACIONAL

(30)

MÉTODOS NORMALIZADOS

Quando utilizar métodos normalizados ou previamente

validados, será necessário verificar se os dados de validação

declarados são adequados ao uso pretendido. Se o método

normalizado não declarar dados de desempenho relevantes

para a aplicação em questão, o laboratório deve

estabelecê-los, levando em consideração a adequação ao uso pretendido.

los, levando em consideração a adequação ao uso pretendido.

(31)

-VALIDAÇÃO DE MÉTODOS DE ANÁLISE VALIDAÇÃO DE MÉTODOS DE ANÁLISE

MÉTODOS NORMALIZADOS

Quando métodos normalizados são utilizados sem

modificações significativas e para o produto indicado em

monografia, não é necessário realizar todo o processo de

validação.

Exemplo de método normalizado, demonstrando dados de

(32)

MÉTODOS NÃO-NORMALIZADOS

São métodos desenvolvidos pelo próprio laboratório ,

outras partes ou adaptados a partir de métodos normalizados e

validados. Por exemplo, métodos publicados em revistas

técnicas, métodos de fabricantes de equipamentos, métodos

utilizando “kits” de ensaio e instrumentos portáteis.

utilizando “kits” de ensaio e instrumentos portáteis. Todos os Todos os métodos não-normalizados devem ser validados.

(33)

MÉTODO NÃO-VALIDADO

Quando o método não é validado o resultado obtido :

- É apenas um número, sem confiabilidade._{É apenas um número, sem confiabilidade.} - Possui baixa qualidade._{Possui baixa qualidade.}

- Consome mais tempo para sua determinação.

- Tem alto custo.

- Tem que ser confirmado (repetido várias vezes).

- Pode gerar riscos ao ser humano (farmacêuticos).

(34)

VERIFICAÇÃO/ REVALIDAÇÃO DO MÉTODO

Todo método deve ser revalidado quando houver

mudança significativa no objeto da análise. As mudanças

podem ser : podem ser : * Matéria-prima * Matéria-prima * Processo de fabricação * Processo de fabricação * Formulação * Formulação

* Períodos definidos em procedimento (em média a

cada 2 anos ), recomendável.

(35)

VERIFICAÇÃO/ REVALIDAÇÃO DO MÉTODO

“

“Evidência documentada que um método previamente Evidência documentada que um método previamente validado desempenha como pretendido, no ambiente em que

validado desempenha como pretendido, no ambiente em que

está sendo aplicado.”

21 CFR (Code Federal Regulations)211 194 (a) 2

Convém revalidar periodicamente os métodos

estabelecidos em outro laboratório e métodos publicados em

literatura científica com as características de desempenho.

Convém revalidar periodicamente os métodos

estabelecidos em outro laboratório e métodos publicados em

literatura científica com as características de desempenho.

(36)

DIRETRIZES PARA

VALIDAÇÃO

(37)

REQUISITOS PARA VALIDAÇÃO

“

“COMPROVAÇÃO, ATRAVÉS DO FORNECIMENTO COMPROVAÇÃO, ATRAVÉS DO FORNECIMENTO DE EVIDÊNCIA OBJETIVA, DE QUE OS REQUISITOS PARA

DE EVIDÊNCIA OBJETIVA, DE QUE OS REQUISITOS PARA

UMA APLICAÇÃO OU USO ESPECÍFICOS PRETENDIDOS

FORAM ATENDIDOS.”

NBR ISO-9000:2000 NBR ISO-9000:2000

(38)

REQUISITOS PARA VALIDAÇÃO

REQUISITOS DE DESEMPENHO:

• Especificidade_{Especificidade}

• Precisão (reprodutibilidade/repetitividade)_{Precisão (reprodutibilidade/repetitividade)} • Exatidão_Exatidão

• Limite de detecção_{Limite de detecção}

• Limite de quantificação_{Limite de quantificação} • Linearidade_Linearidade

• Faixa de Aplicação_{Faixa de Aplicação} • Robustez_Robustez

(39)

REQUISITOS PARA VALIDAÇÃO

CLASSIFICAÇÃO DOS MÉTODOS ( USP 24,2000 ) :

CATEGORIA APLICAÇÃO ALVO

I Quantificação de macrocomponentes em susbtâncias ativas ou ingredientes ativos. Produtos farmacêuticos acabados II Determinação de impurezas em substâncias ativas ou componentes de degradação. Produtos farmacêuticos acabados

III características físico-Determinação de químicas.

Substâncias ativas ou produtos acabados

(40)

REQUISITOS PARA VALIDAÇÃO

CARACTERÍSTICAS DE DESEMPENHO E CLASSIFICAÇÃO

DOS MÉTODOS (USP 24,2000) :

CATEGORIA CARACTERÍSTICA DE DESEMPENHO I II III IV QUALITATTIVO QUANTITATIVO ESPECIFICIDADE      PRECISÃO      EXATIDÃO      LIMITE DE DETECÇÃO      LIMITE DE QUANTIFICAÇÃO      LINEARIDADE      FAIXA DE APLICAÇÃO      ROBUSTEZ      ESTABILIDADE     

(41)

ESPECIFICIDADE

Capacidade de medir, com exatidão, o analito na presença

de outros componentes que possam estar presentes na matriz da

amostra. amostra. * Testes de identificação * Testes de identificação * Testes de pureza * Testes de pureza

* Testes de teor e impurezas

* Testes de degradação

(42)

ESPECIFICIDADE

TESTE DE IDENTIFICAÇÃO :

- Resultado positivo para amostra de material de referência,

acoplado com ausência de resposta na matriz branca da amostra e

pela confirmação de que uma resposta positiva não é obtida

devido a componentes de estrutura similar.

(43)

ESPECIFICIDADE

TESTE DE PUREZA :

Comparação de amostras a nível de pureza, utilizado para

análises comparativas entre um padrão (Alta pureza) e uma

amostra (Pureza indeterminada).

Estas análises são realizadas em equipamentos como :

HPLC, Difração de raios X, IR e outros que utilizam comprimentos

de onda específicos para “ver” a composição da amostra.

(44)

ESPECIFICIDADE

TESTE DE TEOR E IMPUREZA :

Teste de comparação entre :

* Resultados obtidos na amostra do analito fortalecido com

impurezas e amostra do analito não fortalecido.

* Demonstração da separação e identificação das impurezas e

resolução em relação ao componente principal.

* Resultados obtidos com o método aplicado em material com e

sem degradação. Ex : Óleo lubrificante analisado em condições

normais e depois de aquecimento, agitação e resfriamento.

(45)

ESPECIFICIDADE

RETA NÃO PASSA PELA ORIGEM

RETA PASSA PELA ORIGEM

GRÁFICOS OBTIDOS COM MÉTODO VALIDADO

Se a reta não passa pela origem, significa que o método

possui um erro sistemático (desvio). Verificar e corrigir o erro

sistemático detectado. Caso contrario o método estaria reprovado

para especificidade, pois o erro sistemático é crítico e afeta a

exatidão, o erro aleatório afeta a precisão. A reta em destaque é

chamada de reta de regressão.

(46)

ESPECIFICIDADE

A especificidade também pode ser expressa como o grau de

polarização ( bias ou desvio ) :

• Resultados obtidos com o material por dois métodos distintos._{Resultados obtidos com o material por dois métodos distintos.} • Resultados obtidos com material submetido a teste de _{Resultados obtidos com material submetido a teste de}

degradação e sem degradação.

• Resultados obtidos na amostra do analito fortalecido com _{Resultados obtidos na amostra do analito fortalecido com}

impurezas e sem impurezas.

Para caracterização da especificidade é necessário apenas

uma das três comprovações e pelo menos 7 replicatas.

(47)

PRECISÃO

Precisão é um termo geral para avaliar a dispersão de

resultados entre ensaios independentes, repetidos de uma mesma

amostra, amostras semelhantes ou padrões, em condições

definidas. É normalmente determinada para circunstâncias

específicas de medição e as duas formas mais comuns de

expressá-la são por meio da repetitividade e a reprodutibilidade,

sendo usualmente expressa pelo desvio padrão.

INMETRO

-INMETRO -DOQ-CGCRE-008 – Revisão 01 - março/2003

“

“NÃO USAR O TERMO PRECISÃO PARA EXPRESSAR EXATIDÃO”NÃO USAR O TERMO PRECISÃO PARA EXPRESSAR EXATIDÃO”

(48)

PRECISÃO

O termo

O termo precisãoprecisão

• Indica consistência_{Indica consistência}

• Depende da distribuição dos erros aleatórios_{Depende da distribuição dos erros aleatórios} • Independente da exatidão_{Independente da exatidão}

• Pode ser reportado como DP (desvio padrão), RSD (desvio padrão _{Pode ser reportado como DP (desvio padrão), RSD (desvio padrão}

relativo) ou CV (coeficiente de variação)

• Precisão (Adequação ao uso) deve ter um RSD% de 1/3 a 1/10 do _{Precisão (Adequação ao uso) deve ter um RSD% de 1/3 a 1/10 do}

especificado.

(49)

PRECISÃO

Composição da precisão :

 _{Repetitividade}_{Repetitividade}

 _{Precisão intermediária}_{Precisão intermediária}  _{Reprodutibilidade}_{Reprodutibilidade}

(50)

PRECISÃO

REPETITIVIDADE :

É o grau de concordância entre os resultados de medições

sucessivas de um mesmo mensurando, efetuadas sob as mesmas

condições de medição, chamadas de condições de repetitividade.

(VIM – Vocabulário Internacional de Metrologia)

• Mesma amostra_{Mesma amostra}

• Mesma metodologia_{Mesma metodologia}

• condições ambientais e operacionais iguais_{condições ambientais e operacionais iguais} • Mesmo dia_{Mesmo dia}

(51)

PRECISÃO

CRITÉRIOS PARA

CRITÉRIOS PARA REPETITIVIDADE :REPETITIVIDADE :



 Precisão do método Precisão do método

Múltiplas preparações da mesma amostra homogênea :Múltiplas preparações da mesma amostra homogênea : RSD

RSD ≤ 2%≤ 2%



 Precisão do instrumento Precisão do instrumento

Replicata da mesma preparação da amostra :Replicata da mesma preparação da amostra : RSD

(52)

PRECISÃO

PRECISÃO INTERMEDIÁRIA :

A precisão intermediária refere-se à precisão avaliada sobre

a mesma amostra, amostras idênticas ou padrões, utilizando o

mesmo método, no mesmo laboratório ou em laboratórios

diferentes, mas definindo exatamente quais as condições a variar.

Esta medida de precisão é reconhecida como a mais

representativa da variabilidade dos resultados em um laboratório e,

como tal, mais aconselhável de usar.

INMETRO

(53)

PRECISÃO

PRECISÃO INTERMEDIÁRIA :

• Mesma metodologia_{Mesma metodologia}

• Mesmas condições (Laboratório)_{Mesmas condições (Laboratório)} • Dias diferentes_{Dias diferentes}

• Instrumentos diferentes_{Instrumentos diferentes} • Analistas diferentes_{Analistas diferentes}

Os critérios para precisão intermediária são os mesmos

para repetitividade (RSD). Na prática são as organizações que

especificam qual a faixa do RSD ideal para o método estar

adequado.

(54)

PRECISÃO

REPRODUTIBILIDADE :

É o grau de concordância entre os resultados das medições

de um mesmo mensurando, efetuadas sob condições variadas de

medição.

(VIM – Vocabulário Internacional de Metrologia)(VIM – Vocabulário Internacional de Metrologia)

Embora a reprodutibilidade não seja um componente de

validação de método executado por um único laboratório, é

considerada importante quando um laboratório busca a verificação

do desempenho dos seus métodos em relação aos dados de

validação obtidos através de comparação interlaboratorial.

INMETRO

(55)

PRECISÃO

• Mesma metodologia_{Mesma metodologia} • Laboratórios diferentes_{Laboratórios diferentes} • Dias diferentes_{Dias diferentes}

• Instrumentos diferentes_{Instrumentos diferentes} • Analistas diferentes_{Analistas diferentes}

• Múltiplas preparações para cada analista, instrumento e _{Múltiplas preparações para cada analista, instrumento e}

laboratório

(56)

PRECISÃO

• A precisão decresce em função da concentração_{A precisão decresce em função da concentração}

• A equação de Horwitz possibilita o cálculo de valores _{A equação de Horwitz possibilita o cálculo de valores}

teóricos de repetitividade e reprodutibilidade (IUPAC,

1990).

- Equação :

- Equação : RSD = 2 RSD = 2 (1- 0,5 log c )(1- 0,5 log c )

RSD ( desvio padrão relativo em % )

c ( concentração expressa em fração decimal )

(57)

PRECISÃO

DESVIO PADRÃO RELATIVO EM FUNÇÃO DA CONCENTRAÇÃO

CONCENTRAÇÃO CONCENTRAÇÃO _FRACIONAL _{(REPETITIVIDADE)}RSD, % _{(REPRODUTIBILIDADE)}RSD, % EXEMPLO

100% 1,0 1,0 2,0 COMPOSTOS PUROS 10% 0,1 1,5 2,8 MACRONUTIRENTES 1% 0,01 2,0 4,0 PROD. FARMACÊUTICOS 0,1% 0,001 3,0 5,7 MICRONUTRIENTES 0,01% 0,0001 5,0 8,0 VITAMINA C EM ALIMENTOS 1 ppm 0,000001 10,0 16,0 RESÍSUO DE PESTICIDA 10 ppB 0,00000001 20,0 32,0 AFLATOXINAS

(58)

PRECISÃO

RECOMENDAÇÃO ASTM

PRECISÃO : REPETITIVIDADE E REPRODUTIBILIDADE

A PRECISÃO PODE SER AVALIADA DE TRÊS FORMAS, CONFORME

DESCRITO A SEGUIR :

I – Através do cálculo da reprodutibilidade e repetitividade utilizando um

programa intralaboratorial, baseando-se na norma ASTM E-691.

II – Calculando a reprodutibilidade e repetitividade através de um programa

intralaboratorial, baseando-se no M S A.

III – Através do cálculo do TPI ( Índice de desempenho )

(59)

PRECISÃO

RECOMENDAÇÃO ASTM

PRECISÃO : REPETITIVIDADE E REPRODUTIBILIDADE

Cálculo do TPI Cálculo do TPI

2,77

repro

S

TPI

ASTM Lab



Onde : Onde : S

S_Lab_Lab = Desvio padrão do laboratório para 25 medições = Desvio padrão do laboratório para 25 medições repro

repro_ASTM_ASTM = Reprodutibilidade do método ASTM = Reprodutibilidade do método ASTM Critério ->

(60)

PRECISÃO

Z Score

Avaliação estatística

onde: X_i = resultado do laboratório

µ = valor médio da população (estimativa do valor verdadeiro)

 = estimativa do desvio padrão da população

Comparação da tendência com o desvio padrão.





)

(





i calc

X

Z

(61)

PRECISÃO

Z Score

Critérios

Z < 1 Bom 1< Z < 2 Satisfatório 2< Z < 3 Questionável Z > 3 Insatisfatório

(62)

EXATIDÃO

Proximidade entre o resultado de uma medição e o valor

real (convencional) do mensurando. A “Exatidão” é um conceito

qualitativo.

qualitativo. _{(VIM – Vocabulário Internacional de Metrologia)}_{(VIM – Vocabulário Internacional de Metrologia)}

Determinada através da comparação de resultados em :

• Ensaios de recuperação_{Ensaios de recuperação}

• Padrões históricos ou de trabalho_{Padrões históricos ou de trabalho} • Método com exatidão conhecida_{Método com exatidão conhecida}

• Materiais de referência certificados (rastreáveis)_{Materiais de referência certificados (rastreáveis)} • Programas interlaboratoriais_{Programas interlaboratoriais}

Para determinar a exatidão, escolher um dos

estudos de comparação.

(63)

EXATIDÃO

Exemplo de determinação da exatidão utilizando um

material de referência certificado :

* Medir o material no mínimo 5 vezes* Medir o material no mínimo 5 vezes

* Calcular a média* Calcular a média

* Aplicar intervalo de confiança* Aplicar intervalo de confiança

(64)

EXATIDÃO

INTERVALO DE CONFIANÇA : INTERVALO DE CONFIANÇA :

n

S

)

,

(

X

IC





t



GL

X= Média das medições = Média das medições S

S = Desvio padrão das medições = Desvio padrão das medições n

n = Número de medições = Número de medições

t

t = Tabela t-Student = Tabela t-Student

GL

GL = Graus de liberdade = = Graus de liberdade = n-1n-1



 = Nível de confiança de 95% = 0,05 ou 5% = Nível de confiança de 95% = 0,05 ou 5%

- IC

X X + IC



{

(65)

EXATIDÃO

ENSAIOS DE RECUPERAÇÃO

Ensaios de recuperação demonstram a capacidade do

método em detectar variações do analito. Uma baixa recuperação

do analito pode representar uma fonte de erro sistemático.

Cálculo da recuperação :

Cálculo da recuperação : R% = 100 x ( C1 – C2 )/ C3R% = 100 x ( C1 – C2 )/ C3

C1

C1 = Concentração com adição do analito ou padrão ( fortalecida ) = Concentração com adição do analito ou padrão ( fortalecida ) C2

C2 = Concentração sem adição do analito ou padrão = Concentração sem adição do analito ou padrão C3

(66)

EXATIDÃO

ENSAIOS DE RECUPERAÇÃO

Amostras com adição de analito podem ser preparadas em

triplicata com 5 níveis de concentração de 50% a 150% da

concentração típica. Também é aceitável triplicatas de 3 níveis de

concentração de 80% a 120% da concentração típica.

A recuperação pode ser aplicada na análise de impurezas,

preparando em triplicata 3 níveis de concentração dentro da faixa

do teor esperado de impureza na amostra.

(67)

EXATIDÃO

ENSAIOS DE RECUPERAÇÃO ENSAIOS DE RECUPERAÇÃO Critérios : Critérios :

CONCENTRAÇÃO CONCENTRAÇÃO _FRACIONAL RECUPERAÇÃO _{MÉDIA, %}

100% 1,0 98 a102 10% 0,1 98 a 102 1% 0,01 97 a 103 0,1% 0,001 95 a 105 0,01% 0,0001 90 a 107 1 ppm 0,000001 80 a 110 10 ppb 0,00000001 60 a 115

(68)

EXATIDÃO

Pode ser expressa como :



 Porcentagem de recuperação de concentrações Porcentagem de recuperação de concentrações

conhecidas de analito ou padrão.



 Diferença entre a média de resultados obtidos com o Diferença entre a média de resultados obtidos com o

método e o valor de referência ( certificado ) utilizado, desde que

este valor esteja dentro do intervalo de confiança ou incerteza

calculado para a média.

(69)

LINEARIDADE

Determina a capacidade do método em detectar valores

proporcionais a concentração do analito, dentro de uma faixa

especificada.

A linearidade define um intervalo de confiança para o

analito nas diversas faixas de medição, demonstrando a exatidão e

precisão requeridas.

Na determinação da linearidade são utilizados como

ferramentas estatísticas : ferramentas estatísticas : * Gráfico de dispersão * Gráfico de dispersão * Regressão linear * Regressão linear

(70)

LINEARIDADE

A linearidade é determinada utilizando-se no mínimo 5

padrões de faixas distintas com medição em triplicata para cada

faixa.

- Fazer a média de cada faixa.

- Plotar gráfico de dispersão

- Plotar gráfico de dispersão Valor certficado x valor Valor certficado x valor encontrado.

encontrado.

- Plotar a reta de regressão.

- Determinar a equação da reta de melhor ajuste.

- Calcular o coeficiente de correlação

(71)

LINEARIDADE

Critério :

- A reta de regressão deve passar pela origem ( ausência de

erros sistemáticos relevantes).

- O coeficiente de correlação deve ser

- O coeficiente de correlação deve ser ≥ 0,999≥ 0,999.. Se o

Se o r (coeficiente de correlação) r (coeficiente de correlação) estiver dentro do critério, estiver dentro do critério, pode-se considerar que o método possui boa linearidade. O gráfico

pode-se considerar que o método possui boa linearidade. O gráfico

serve como evidencia qualitativa da linearidade do método.

(72)

LIMITE DE DETECÇÃO

Indica a menor quantidade do analito presente na amostra

que pode ser detectado mas não quantificado com exatidão em

condições experimentais determinadas.

O limite de detecção do equipamento (

O limite de detecção do equipamento (LDELDE) é definido como ) é definido como a concentração do analito que produz um sinal de três a cinco

a concentração do analito que produz um sinal de três a cinco

vezes a razão ruído/sinal do equipamento.

O limite de detecção do método (

O limite de detecção do método (LDMLDM) é definido como a ) é definido como a concentração mínima de uma substância medida e declarada com

concentração mínima de uma substância medida e declarada com

95% ou 99% de confiança de que a concentração do analito é maior

que zero. O LDM é determinado através de análise completa de uma

dada matriz contendo o analito.

INMETRO

(73)

LIMITE DE DETECÇÃO

É necessário para a validação de um método analítico, que

seja possível fornecer uma indicação do nível em que a detecção

do analito começa a ficar problemática, ou seja,

do analito começa a ficar problemática, ou seja, “Branco + 3s” e “0 “Branco + 3s” e “0 + 3s”,

+ 3s”, considerando análise de sete ou mais amostras de branco e considerando análise de sete ou mais amostras de branco e de brancos com adição de analito.

de brancos com adição de analito.

INMETRO

LDM = t (n-1,

LDM = t (n-1, _x Sx S onde:

onde:

LDM

LDM = Limite de detecção do método = Limite de detecção do método t

t = = t t (Student) para nível de confiança de 95% e (n-1) graus de (Student) para nível de confiança de 95% e (n-1) graus de liberdade.

(74)

LIMITE DE DETECÇÃO

REPLICATAS

REPLICATAS MATRIZMATRIZ CÁLCULOCÁLCULO OBSERVAÇÃOOBSERVAÇÃO

 77 Branco Branco da da amostra amostra LD= + t x S LD= + t x S

= média dos = média dos valores do branco. valores do branco. S= Desvio padrão S= Desvio padrão dos brancos dos brancos

A média e o desvio padrão dos

brancos da amostra são

dependentes da matriz.

Válido somente quando os

valores dos brancos

apresentarem um desvio padrão

diferente de zero. diferente de zero. X X  77 Branco Branco com adição com adição da menor da menor concentra-ção ção aceitável aceitável LD= 0 + t x S LD= 0 + t x S S= Desvio padrão S= Desvio padrão

dos brancos com

adição do analito

A menor concentração aceitável

é aquela tida como a

concentração mais baixa para

qual um grau aceitável de

incerteza pode ser alcançado.

ou

(75)

LIMITE DE QUANTIFICAÇÃO

INMETRO

O Limite de Quantificação é a menor concentração do

analito que pode ser determinada com um nível aceitável de

precisão e veracidade. Pode ser considerado como sendo a

concentração do analito correspondente ao valor da média do

branco mais 5, 6 ou 10 desvios-padrão.

Este limite, após ter sido determinado, deve ser testado

para averiguar se a exatidão e precisão conseguidas são

satisfatórias. A diferença entre os Limites de Detecção e de

Quantificação é a ordem de grandeza das incertezas associadas

(76)

LIMITE DE QUANTIFICAÇÃO

INMETRO

-INMETRO -DOQ-CGCRE-008 – Revisão 01 - março/2003 REPLICATAS

 77 Branco Branco da da amostra amostra LQ= + 5S ou + 6S ou + 10S LQ= + 5S ou + 6S ou + 10S

= média dos valores do branco.= média dos valores do branco. S= Desvio padrão dos brancos

S= Desvio padrão dos brancos

Pode ser difícil a

obtenção do obtenção do branco branco verdadeiro verdadeiro X X X X

(77)

LIMITE DE QUANTIFICAÇÃO

REPLICATAS

 77 Branco Branco com com adição de adição de concen-trações trações próximas próximas ao LD ao LD

- Medir, uma vez cada, 7 replicatas

independentes a cada nível de

concentração.

- Calcular o desvio padrão “S” do

valor do analito, para cada

concentração.

- Fazer o gráfico “S” versus

concentração e atribuir um valor

para o LQ, por inspeção.

- Expressar o LQ como a

concentração mais baixa do

analito que pode ser determinada

com um nível aceitável de

incerteza. incerteza. Normalmente o Normalmente o LQ faz parte do LQ faz parte do estudo para estudo para determinação da determinação da faixa de trabalho faixa de trabalho