B r a z . J . v e t . R e s . a n i m . S c i . , S ã o P a u l o , v . 3 2 , n . 2 , p . 8 3 - 8 , 1 9 9 5 .
U T IL IZ A Ç Ã O D O E L U A T O D E S A N G U E D E S S E C A D O E M P A P E L D E F IL T R O
N O D IA G N Ó S T IC O S O R O L Ó G IC O D A T O X O P L A S M O S E C A P R IN A *
U S E O F D R I E D B L O O D S A M P L E F O R S E R O L O G I C A L D I A G N O S I S O F T O X O P L A S M O S I S I N G O A T S
M a r ia T e r e z in h a B A H I A 1; R ic a r d o W a g n e r d e A lm e id a V I T O R 2; G e o r g e L u iz L in s M a c h a d o C O E L H O 3; R o g é r io P in h e ir o C A L D A S 4; C a r lo s M a u r íc io F ig u e ir e d o A N T U N E S 2; C lé a d e A n d r a d e C H IA R I2
R E S U M O
Foi realizad a p esq u isa de an ticorpos an ti
-T oxoplasm agondii
em 183 am ostras de sangue dessecado em papel de filtro utilizando as reações de im u nofluorescência indireta E L IS A e dot-E L IS A , to m ando com o referência os resultados obtidos nos soros. A análise dos resultados dem onstrou que papéis com sangue dessecado podem ser conservados por um período m ínim o de 45 dias à tem peratura am biente e p o r seis m eses a 4°C , desde que m antidos livres de u m id ad e pela u tilização de agentes dessecantes com o a síü c a -g e l. A reprodutibilidade das reações, avaliad a p o r m eio da curva dos títu lo s de anticorpos no decorrer do tem po após a coleta do sangue em papéis de filtro, dem onstrou um a concordância de 97 a 100% entre os resultados obtidos nos soros e eluatos. O s títulos de anticorpos perm an eceram estáveis durante o p eríodo observado. O s resu ltad o s obtidos co m eluato de sangue dessecado foram sem elhantes na R IF I, E L IS A e dot-E L IS A , indicando que q u alq u er um a das três reaçõ es p ode ser u tilizad a em eluatos de sangue d essecado para o diag n ó stico da to xoplasm ose caprina.U N IT E R M O S : C oleta de am ostras sangüíneas; T oxoplasm ose; C aprinos
IN T R O D U Ç Ã O
A indicação do m étodo m ais adequado p ara coleta de sangue
em tra b a lh o d e c a m p o é e x tre m a m e n te im p o rta n te ,
principalm ente em levantam entos sorológicos. E m inquérito
epidem iológico realizado em grande população ou em área
geográfica de difícil acesso, é fundam ental a utilização de
m étodos de coleta que sejam adequados e de fácil execução.
A coleta de sangue em papel oferece a v antagem de a am ostra
p o d e r se r a c o n d ic io n a d a à te m p e ra tu ra a m b ie n te , ser
transportada p o r longas distân cias sem ex ig ir separação
im ediata do soro. P or essas razões, o em prego do pap el de
filtro na c o le ta do san g u e, p a ra fins de e stim a tiv a de
prevalência de doenças parasitárias, é en contrado em grande
núm ero de trabalhos 6J2,13'17. A análise desses trabalhos
m ostra que são vários os fatores que p o d em influ en ciar a
preservação de im u n oglobulinas em sangue d essecado em
papel de filtro, entre eles a tem peratura, a um id ad e, as técnicas
sorológicas utilizad as, a p o p u lação alv o e os n ív eis de
anticorpos presentes n essa população.
E luatos de sangue dessecado em papel de filtro (SD PF) já
f o ra m u t iliz a d o s e m le v a n ta m e n to s o r o ló g ic o d a
to x o p lasm o se cap rin a2, entretanto os autores não testaram a
re p ro d u tib ilid a d e dos resu ltad o s o b tid o s nos eluatos de
SD PF co m p arativ am en te aos do soro. P osteriorm ente foi
dem onstrada, tam b ém em estudo da toxoplasm ose caprina7,
um a qu ed a significativa nos títulos de anticorpos obtidos nos
e lu a to s d e S D P F , e n s a ia d o s a tr a v é s d a re a ç ã o de
im unofluorescência indireta, em relação aos obtidos no soro.
O s autores concluíram pela inadequação do em prego do
eluato de SD PF no diagnóstico sorológico para levantam entos
d a toxoplasm ose em rebanho caprino.
E ste trabalho objetiva avaliar o uso de eluato de sangue
d essecado em papel de filtro para inquéritos sorológicos da
toxoplasm ose caprina, estipulando condições de conservação
adequadas, em relação à sensibilidade obtida no soro, através
da reação de im uno flu o rescên cia indireta e das reações
im unoenzim áticas E L ISA e dot-E L ISA .
1 -D o u to r - U n iv e rsid a d e d e A lfe n a s - M G
2 -D outor - U n iv e rsid a d e F e d e ra l d e M in as G e ra is - M G 3 -M estre - U n iv e rsid a d e F ed eral d e O u ro P reto - M G 4 -M estre - C A P R IL E IT E - B elo H o riz o n te - M G
■"Trabalho fin a n c ia d o p elo C N P q , F A P E M IG e P R P q - U F M G
B A H IA , M .T .; V IT O R ,R .W .A .;C O E L H O ,G .L .L .M .;C A L D A S ,R .P .; A N T U N E S , C . M . F.; C H IA R I, C . A . U tiliz a ç ã o d o elu a to d e san g u e d e sse c a d o em p ap e l d e filtro n o d ia g n ó stico so ro ló g ic o d a to x o p la sm o se ca p rin a. B r a z . J . v e t. R e s. a n im . S e i., S ão P au lo , v .32, n .2 , p .8 3 -8 , 1995.
M A T E R IA L E M É T O D O
1. A n im a is u tilizad os: as am ostras de sangue foram coletadas
de caprinos de diferentes idades, sexos e raças, procedentes
de cinco criatórios localizados na região periurbana de Belo
H orizonte, M inas G erais.
2. C oleta do san gu e:
os anim ais foram subm etidos à punção
venosa e parte das am ostras de sangue foi utilizada para
obtenção do soro e parte distribuída em papéis de filtro
W hatm an n a 4, que foram transportadas para o laboratório em
frascos contendo sílica-gel.N o laboratório o papel foi picotado
em discos de 6 m m de diâm etro e acondicionado em sacos
plásticos, que foram colocados em frascos contendo agente
dessecante.
3. E x p erim en to I: foram utilizadas
18 am ostras, colhidas em
duplicata e conservadas à tem peratura am biente e a 4°C, até
a hora do exam e. T odas as am ostras foram codificadas e o
estudo realizado de m aneira cega.
4.
E xp erim en to II:
para a avaliação da reprodutibilidade das
reações realizadas em eluato de sangue dessecado em papel
de filtro, no decorrer do tem po, foi coletada um a am ostra de
165 anim ais. Foi u tilizad a a m eto d o lo g ia an terio rm en te
citada e o papel com sangue dessecado m antido a 4°C em
presença da sílica-gel. O s exam es foram realizados no I a , 7 a ,
15a, 3 0 a e 6 0 a dia após a coleta (D A C ), e com ap ro x im ad a
m ente 10% da am ostra (18 am ostras) seis m eses após a coleta.
T odas as am ostras foram codificadas e o estudo realizado de
m an eira ceg a. A p ro x im a d a m e n te 10% da a m o stra (17
am ostras) foram coletados em duplicata para controle técnico.
A diluição do sangue dessecado em papel foi calculada de
acordo com A L V A R E Z et a l.'( 1971), sendo os discos diluídos
em tam pão fosfato pH 7,2 (PB S) até atin g ir a concentração
c o rre sp o n d e n te à d ilu iç ã o de 1:4 do soro. O m aterial
perm aneceu sob agitação po r 30 min. à tem peratura am biente
e em seguida foi titulado utilizando-se o m esm o procedim ento
adotado para o soro.
5. R eações u tiliza d a s nos ex p erim en to s I e II:
A) R eação de im unofluorescência indireta (R IFI): esta reação
foi executada de acordo com a técnica de C A M A R G O 5
(1964), utilizando taquizoítos de cepa N 14 do
T o x o p l a s m a g o n d i icom o antígeno. O conjugado foi obtido através da
m arcação de um a anti-IgG caprina com isotiocianato de
fluoresceína. A diluição de 1:16 foi considerada discrim inante
de reações positivas e negativas7.
B) R eações im unoenzim áticas E L ISA e dot-E L ISA : para
estas reações foi utilizad a com o antígeno um a suspensão de
84
taquizoítos de
T o x o p l a s m agort</f/(cepaN ) obtida de exudato
p e rito n e a l d e c a m u n d o n g o s,
p u rific a d a p o r la v a g e n s
sucessivas com PBS e tratada por ultra-som , por três períodos
de 1 m in., a 40 Hertz.
A reação im unoenzim ática E L ISA foi realizada de acordo
com a técnica de V O L L E R et a l.15 (1976), utilizando com o
conjugado um a anti-IgG caprina m arcada com peroxidase e
com o substrato ortofenilediam ino. A s leituras das reações
foram feitas em leitor de E L ISA (B io-R ad - M od. 2550)
utilizando filtro de 492 nanôm etros, e os resultados expressos
em valores de absorbância. A reação foi considerada positiva
q uando a leitura em densidade óptica foi m aior do que a m édia
som ada a duas vezes o desvio padrão do valor obtido em
densidade óptica para no m ínim o 10 soros de anim ais não
reagentes, testados em paralelo aos soros avaliados9.
A reação im unoenzim ática dot-E L ISA foi realizada apenas
no experim ento II, tendo sido realizada seis m eses após a
coleta em 134 das 165 am ostras. A reação foi realizada de
a c o rd o co m a té c n ic a de H A W E K E S et a l.10 (1982),
m odificada, utilizando com o conjugado um a anti-IgG caprina
m arcada com fosfatase alcalina e com o substrato 5-brom o-4-
ch lo ro -indolyl-phosphate/nitro blue tétrazolium . A leitura
foi realizada com a observação visual do aparecim ento ou
não de um precipitado de coloração violácea.
Foi considerada, com o discrim inante de reações positivas e
negativas, a diluição de 1:64.
O teste qui-quadrado foi utilizado para pesquisar a existência
d e d ife re n ç a s e s ta tis tic a m e n te s ig n ific a tiv a s e n tre as
proporções calculadas3. Foram calculados os indices de co-
p o s itiv id a d e , c o - n e g a tiv id a d e 4
e c o n c o r d â n c ia de
Y O U N D E N 16 (1950) (J), tom ando-se os valores obtidos nos
soros com o referência.
A análise da reprodutibilidade das reações nos eluatos de
sangue dessecado em papel de filtro foi feita utilizando os
testes de regressão linear e correlação de Pearson3, para
co m p arar os resultados obtidos nos soros e nos eluatos de
sangue d essecado no 1a dia após a coleta (D A C ). Em seguida
foi utilizado um m odelo de regressão linear m últipla com
variáveis “d um m ies” , de acordo com a seguinte eq u ação ":
Y = a + B jD j + B 2D 2 +
Bj
Dj
+ B4D 4
Y = título no eluato
B A H IA , M .T .; V IT O R , R. W . A .; C OE L H O , G .L .L .M .; C A L D A S , R .P .; A N T U N E S , C . M .F .;C H IA R I,C . A . U tiliz a ç ã o d o elu a to d e sa n g u e d esse c a d o e m p ap e l d e filtro n o d iag n ó stico so ro ló g ic o d a to x o p la sm o se ca p rin a . B r a z . J . v e t. R es. a n im . S e i., São P au lo , v .3 2 , n .2 , p .8 3 -8 , 1995.
a = título no eluato quando o título no 1
a DAC
era zero
B ,, B2 e B 3 = coeficientes de regressão
Dj, D2
e
D, =
variáveis “dum m ies” . O s valores das variáveis
“dum m ies” foram , de acordo com o m odelo: 1
a DAC, Dj
=
1, D 2 = 0, D 3 = -1, D 4 = 1; 7“ D A C, D , = -1, D 2 = 0, D 3 = 1,
D4 = 1; 15a D A C , D, = 0 , D 2 = - 1 ,D 3 = 1, D 4 =‘ l; 3 0 a D A C ,
D. = 0, D , = 1, D , =
D 3 = 0 ,D 4" = - 4 .
D 4 = 1; 6 0 a D A C , D , = 0, D 2 = 0,
R E S U L T A D O S
No experimento I, realizado com o objetivo de avaliar a forma de
conservação dos papéis embebidos em sangue, foi observada uma
concordância de 100% entre os resultados obtidos por meio da RIFI
e da ELISA em 18 soros e eluatos de sangue dessecado em papel de
filtro conservados à temperatura ambiente ou a 4°C, em sacos
plásticos lacrados, em presença de sílica-gel.
No experimento II a análise dos resultados obtidos através da RIFI
e da ELISA, nas 165 amostras, mostrou não existir diferença
significativa entre a proporção de resultados positivos obtidos em
soros e eluatos até o 602 dia após a coleta (DAC) (Tab. 1,2).
Os resultados de 10% da am ostra (18 anim ais), ensaiada
através da R IFI e da ELISA , m ostraram que a reatividade dos
eluatos não foi alterada m esm o seis m eses após a coleta.
Resultados sem elhantes foram observados, quando 134 amostras
de sangue dessecado, conservadas durante seis meses a 4°C em
frasco s co n ten d o sílic a -g e l, fo ram testad as p ela reação
im unoenzim ática dot-ELISA . Na Tab. 3 pode-se observar a alta
concordância obtida entre os resultados dos soros e eluatos.
A análise da dispersão dos títulos de anticorpos, das am ostras
de soros e eluatos de sangue dessecado em papel de filtro
ensaiados pela R IFI, por m eio da regressão linear, m ostrou
existir um a correlação significativa (r = 0,94) entre os títulos
de anticorpos observados nos soros e nos eluatos no 12 DAC
(Fig. 1) e evidencia não haver diferença significativa entre os
títulos de anticorpos obtidos. A com paração dos títulos de
anticorpos obtidos entre os eluatos ao 7 a , 152, 3 0 a e 6 0 a DAC
com o título do eluato no 1a D A C (referência), utilizando-se
o teste de regressão linear m últipla (Fig.2), forneceu valores
de F calculados para os coeficientes de regressão das variáveis
indicadoras (D 1 = -0,89; D 2 = -0,017; D3 = 0,017; D 4 = 0,12)
e indicou não ex istir diferença significativa, em nível de con
fiança de 0,01, entre os títulos obtidos nos eluatos no decorrer
do tem po.
R esultados sem elhantes foram observados na E L ISA quando
com paradas às absorbâncias obtidas nos soros e eluatos no 12
D A C ( Fig. 3). A análise de regressão linear m ostrou existir
um a correlação significativa (r = 0,91) entre as absorbâncias.
T A B E L A 1
D istribuição de resultados positivos (P O S ) e neg ativ o s (N E G ), índices de co-positividade (icp), co-negatividade (ien) e concordância (J), obtidos por m eio da reação de im u n o flu o rescên cia indireta, realizad a em 164 soros de caprinos e eluatos de sangue dessecado em papel de filtro (SD PF), conservados p o r diferentes perío d o s de tem po a 4°C em sacos p lásticos contendo sílica-gel. B elo H orizonte - M G , m arço a ju n h o de 1992.
DIA A PÓ S
A C O L ETA PO S
SO R O N E G
E L U A T O D E SD PF
PO S N E G
icp ien J X 2,gl
0 1 “ 110 54 109 55 0,99 0,96 0,95 0,0
O IO 110 54 108 56 0,99 0,95 0,94 0,25
15“ 110 54 107 57 0,99 0,93 0,92 0,8
U
J
O IO 110 54 107 57 0,99 0,95 0,94 0,8
O
n
O IO 110 54 108 56 0,99 0,95 0,94 0,25
T A B E L A 2
D istribuição de resu ltad o s p o sitiv o s (P O S ) neg ativ o s (N E G ), ín d ices de co -p o sitiv id ad e (icp), co -n eg ativ id ad e (ien) co n cordância (J), obtid o s com a reação im u n o en zim ática E L IS A , realizad a em 165 so ro s de cap rin o s e e lu ato s de sangue d essecad o em papel de filtro (S D P F ), co n serv ad o s p o r d iferen tes p erío d o s de tem p o a 4°C sm sacos p lástico s co n ten d o sílica-g el. B elo H o rizo n te - M G , m arço a ju n h o de 1992.
DIA A PÓ S SO R O E L U A T O D E SD PF icp ien
J
X 2,glA C O L E T A POS N E G POS N E G
0 1 a 108 57 109 56 0,99 1,00 0,99 0,0
0 7 a 108 57 109 56 0,99 1,00 0,99 0,0
15a 108 57 107 58 1,00 0,98 0,95 0,0
O
I
O
108 57 108 57 0,99 0,98 0,97 0,5
B A H IA , M .T .; V IT O R ,R .W .A .; C OE L H O , G .L .L .M .; C A L D A S , R .P .; A N T U N E S ,C .M .F .;C H IA R I,C . A. U tiliz a ç ã o d o e lu a to d e sa n g u e d e s se c a d o e m p ap e l d e filtro no d ia g n ó stico so ro ló g ic o d a to x o p la sm o se ca p rin a . B r a z . J . v e t. R e s. a n im . S e i., S ã o P au lo , v .3 2 , n .2 , p .8 3 -8 , 1995.
T A B E L A 3
D istribuição cruzada de reações positivas (P O S ) e negativas (N E G ) em soros de caprino e eluatos de sangue dessecado em papel de filtro, conservados du ran te seis m eses em frascos contendo sílica- gel a tem peratura de 4°C, p o r m eio da reação im unoenzim ática dot- ELISA. B elo H orizonte - M G , outubro de 1992.
E L U A T O
T O T A L
POS N EG
POS 85 01 86
SO RO
N EG 0 48 48
T O T A L 85 49 134
X 2,gl = 0,0 icp = 0,99 ien = 1,00 J = 0,99
RECÍPROCA DO TÍTULO x 1000 - ELUATO DE SDPF
• ELUATO DE SDPF I a D AC Y = 0,0266 + 0.943X
F IG U R A 1
D ispersão da recíproca dos títulos de an ticorpos obtidos pela reação de im u n o flu o rescên cia in d ireta em so ro s e elu ato s de sangue dessecado em papel de filtro (S D P F ) no I a d ia após a coleta (D A C ) de 164 caprinos e a equação da reta pelo teste de regressão linear.
RECÍPROCA DO TÍTULO x 1000 - ELUATO DE SDPF
ELUATO DE SDPF • 7* + 17» DAC a 30- DAC ■ 60» DAC Y = 1,96 - 0.005D1 - 0.00106D2 + 0.0076D3 + 0.004D4
F IG U R A 2
D isp ersão da recíp ro ca dos títu lo s de an tico rp o s o b tid o s p ela reação de im u n o flu o re sc ê n c ia in d ire ta em e lu a to s de san g u e d essecado em pap el de filtro (S D P F ) no 12 d ia após a co leta (D A C ) e elu ato s no 7 a , 15a , 3 0 a e 6 0 a D A C , co letad o s de 164 cap rin o s e a equação da reta pelo teste de reg ressão lin ear m útipla.
ABSORBÂNCIA - ELUATO DE SDPF 1- DAC
ABSORBÂNCIA - SORO ELUATO DE SDPF
• 1°DAC Y = 0,021 +0.993X F IG U R A 3
D ispersão da absorbância obtida pela E L ISA em soros e elu ato s de sangue dessecado em papel de filtro (S D P F ) no I a dia após a coleta das am ostras de 165 caprinos e a equação da reta pelo teste de regressão linear.
ABSORBÂNCIA - ELUATO DE SDPF
ELUATO DE SDPF
I a D A C - 15a DAC 30* DAC - 60- DAC
Y = 2,67 - 0.0283D1 + 0.010D2 - 0.014D3 - 0.00218D4 F IG U R A 4
D ispersão da ab sorbância obtida p ela E L IS A em eluatos de sangue dessecado em papel de filtro (S D P F ) no 1a d ia após a coleta (D A C ) e eluatos no 7 a, 15a, 3 0 a e 6 0 a D A C , coletados de 165 caprinos e a equação da reta pelo teste de regressão linear m últipla.
A com paração entre as absorbâncias observadas nos eluatos
até o 6 0 2 D A C , tom ando-se os resultados do 1a D A C com o
referência, estão apresentados na Fig. 4. O s valores de F,
calculados para os coeficientes de regressão das variáveis
indicadoras (D l = 0,267; D 2 = 0,001; D3 = 0,001; D 4 =
0,016), indicam não ex istir diferença significativa na leitura
em absorbância no decorrer do tem po de arm azenam ento do
sangue d essecado em papel de filtro.
A dispersão dos títulos de anticorpos entre soros e eluatos,
ensaiados através da dot-ELISA , estão apresentados na Fig. 5.
A análise de regressão linear e correlação m ostrou relação
significativa entre os títulos de anticorpos obtidos entre os soros
e os eluatos (r = 0,96), ou seja, não existe diferença significativa
entre a dispersão dos títulos de anticorpos entre soros e eluatos
conservados seis m eses em presença de agente dessecante.
B A H IA , M .T .; V IT O R , R .W .A .;C OE L H O ,G .L .L .M .;C A L D A S ,R .P .; A N T U N E S , C . M . F .;C H IA R I,C . A . U tiliz a ç ã o d o e lu a to d e san g u e d e s se c a d o em p ap e l d e filtro n o d ia g n ó stico so ro ló g ic o d a to x o p la sm o se ca p rin a. B ra z . J . v e t. R e s. a n im . S ei., S ão P au lo , v .32, n .2 , p .8 3 -8 , 1995.
RECÍPROCA DO TÍTULO x 1000 - ELUATO DE SDPF
RECÍPROCA DO TÍTULO x 1000 - SORO • ELUATO 180“ DAC Y = 0,0303 + 0.979X
F IG U R A 5
D ispersão da recíproca dos títu lo s de anticorpos o btidos pela reação im unoenzim ática dot-E L IS A em soros e eluatos de sangue dessecado em papel de filtro (S D P F ) no I - dia após a coleta das am ostras de
134 caprinos e a equação da reta pelo teste de regressão linear.
D IS C U S S Ã O
Os resultados m ostraram que quando os papéis de filtro
em bebidos em sangue são m antidos em presença de agentes
dessecantes a reatividade da am ostra perm anece inalterada,
quando avaliada pela R IFI, E L ISA e dot-E L ISA , m esm o
quando m antidas à tem peratura am biente p o r 45 dias.
A alta concordância observada entre os resultados dos soros
e eluatos (97 a 99% até os seis m eses) e os índices de co-
positividade e co-negatividade m ostram que as condições de
coleta e conservação foram suficientes para a m anutenção
dos níveis de anticorpos iniciais em todas as técnicas testadas,
m ostrando que qualquer um a delas pode ser utilizada na
toxoplasm ose caprina. O s resultados obtidos neste trabalho
são m ais anim adores do que os obtidos em estudo sorológico
da toxoplasm ose caprina, através da R IFI7, onde foi observada
queda significativa de títulos de anticorpos entre o I a e o 5 a
DAC. E ssas divergências observadas provavelm ente estão
relacionadas às condições de m anutenção do sangue dessecado,
pois os autores conservaram os papéis a -20°C em envelopes
de papel, portanto, sem controle de um idade. O utros fatores,
além da um idade, poderiam ter influenciado as divergências
citad as acim a, p ois, segundo C O E L H 0 8(1990), técnicas
sorológicas consideradas m ais sensíveis, com o a EL ISA , são
m ais adequadas para utilização em eluatos de sangue dessecado
em papel de filtro. D evem ser lem brados, ainda, os trabalhos
realizados em M alária e doença de C hagas, que m ostram um a
grande p ercentagem de negativação em am ostras de eluatos,
sem pre relacionadas com títulos baixos de an tico rp o s12,17.
D eve ser ressaltado que n a toxoplasm ose caprina observa-se
um a grande p ercentagem de níveis baixos de anticorpos.
Sendo assim , o sucesso deste experim ento não poderia estar
ligado a nenhum dos dois fatores citados anteriorm ente, isto
é, aos n ív eis de an tico rp o s ou à reação u tilizad a, m as
provavelm ente ao m étodo de conservação do sangue dessecado
em papel de filtro, pois o controle da um idade parece ser
prim ordial na conservação das im unoglobulinas. E sse fato já
havia sido sugerido em estudos sobre a reprodutibilidade da
reação de hem aglutinação indireta no diagnóstico da doença
de C h ag as com o em prego de e lu a to s 17. E sses autores
concluíram que quanto m aior a um idade relativa do ar e m ais
alta a tem peratura, m enor é o tem po de conservação dos
títulos de anticorpos no papel de filtro.
C O N C L U S Ã O
O s dados obtidos perm item concluir que o eluato de sangue
dessecado em papel de filtro pode ser utilizado no diagnóstico
sorológico da toxoplasm ose caprina, já que a reatividade
inicial da am ostra é conservada m esm o quando os níveis
iniciais de im unoglobulinas são baixos, desde que o m aterial
seja conservado livre de um idade. A lém disto, o papel com
san g u e d essecad o , m an tid o livre de u m idade, pode ser
conservado até o 45 a D A C à tem peratura am biente (não foi
testado além desse período), tem po suficiente para a execução
da sorologia ou o transporte ao laboratório; ou por um período
m ínim o de seis m eses a 4 aC , sem p erda de reatividade.
A G R A D E C IM E N T O S
A o p ro fesso r Paul W illiam s pela revisão do texto em inglês.
A sra. R osálida E stevam N azar L opes e ao sr. José Luiz de
F aria pelos auxílios técnicos.
S U M M A R Y
E luates o f 183 dried caprine blood sam ples on filter p ap er w ere tested fo r
anti-Toxoplasma gon dii
antibodies, using 1FA, E LISA and dot-E L ISA , and co m p ared w ith results obtained by direct ob serv atio n s on com parable sera, usin the sam e tests.The results has show ed th at papers w ith dried blood can b e preserv ed fo r up to 45 days at room tem perature and fo r six m onths at 4°C , provided they are protected against hum id conditions b y using desiccating agents such as silica-gel. C om parison betw een serum and eluate reactions revelated 97-100% correspondance. T he antibody titers rem ained co n stan t throughout th e study period.
B A H IA , M .T .; V I T O R ,R .W .A .;C OE L H O ,G .L .L .M .;C A L D A S ,R .P .; A N T U N E S ,C .M .F .;C H IA R I,C . A . U tiliz a ç ã o d o e lu a to d e sa n g u e d e s se c a d o em p ap e l d e filtro no d ia g n ó stic o s o ro ló g ic o d a to x o p la sm o se c a p rin a. B r a z . J . v e t. R e s . a n im . S e i., S ão P au lo , v .3 2 , n .2 , p .8 3 -8 , 1995.
