Projeto Salmonela
Título do Projeto: Rastreamento e detecção de Salmonella enteritidis através do gene invA, pela técnica de PCR em tempo real, na Avicultura de corte e postura de ovos nas granjas comerciais do Estado do Espírito.
Nome do Coordenador do Projeto: Dr. Fabrício Antonio Ferreira Martins No do Processo: 42798850/2008
Instituição (por extenso): Instituto Tommasi de Pesquisa e Desenvolvimento O projeto vem sendo apoiado pela FAPES desde: 12 / 2008
Período em que se refere a Prestação de Contas: 12/2008 a 03/2009
Resumo das Atividades Executadas no Período de vigência do auxílio.
I - Principais objetivos do projeto original:
1 - Rastrear e detectar Salmonella enteritidis através do gene invA, pela técnica de PCR em tempo real, na Avicultura de corte e postura de ovos nas granjas comerciais do Estado do Espírito,
2 - Ampliar a área de vigilância e fiscalização por diagnóstico molecular de Salmonella enteritidis nas granjas comerciais da COOPEAVI (Cooperativa Centro Serrana – Santa Maria de Jetibá),
3 - Manter aqui no Estado uma unidade de sanidade avícola adequados para Salmonella enteritidis, através de um diagnóstico molecular, com objetivo de exportação, aproveitando nossa estrutura logística disponível (portos e ferrovias)
II - Etapas executadas e metas atingidas no período visando ao alcance dos objetivos:
1 - Cronograma de coleta das amostras na COOPEAVI
Dezembro/2008 Janeiro/2009 Fevereiro/2009 Março/2009 Abril/2009 Maio/2009 1°
Quinzena
10/12/2008 OK 15/01/2009 OK 05/02/2009 OK 05/03/2009 OK 08/04/2009 06/04/2009
2°
Quinzena
22/12/2008 OK 22/01/2009 OK 19/02/2009 OK 18/03/2009 22/04/2009 20/04/2009
Tabela 01: Cronograma de coleta na COOPEAVI
2 – Relação dos Avicultores participantes do Projeto entre 12/2008 a 03/2009
* Coleta de Ovos 1° Coleta 10/12/2008:
Nome do Produtor: Manfredo Kruger Nome Fantasia: Mais Ovos
Endereço: Sitio Kruger, cor rio bonito, s/n zona rural, Santa Maria de Jetiba CPF: 450.440.907-00
IP: 110.031.63-6
Data de fabricação: 10/12/08
Quantidade: Semanal: 130 caixas (aproximadamente), Mensal: 520 caixas (aproximadamente) Tipo coletado: Ovos extra
2° Coleta 22/12/2008:
Nome do Produtor: Diomar Wolfgram
Endereço: Sitio Canto do Sabia – corrego São Sebastião do Meio s/n zona rural - Santa Maria de Jetiba
CPF: 841.206.497-68 IP: 110.589.76-9
Data de Fabricação: 22/12/08
Quantidade: Semanal: 150 caixas (aproximadamente), Mensal: 550 caixas (aproximadamente) Tipo coletado: Ovos extra
3° Coleta 15/01/2009:
Nome do Produtor: Isidoro Reink
Endereço: Sitio São Sebastião, São Sebastião, zona rural, Santa Maria de Jetiba CPF: 772.636.937-04
Data de Fabricação: 09/01/09
Quantidade: Semanal: 85 caixas (aproximadamente), Mensal: 340 caixas (aproximadamente) Tipo coletado: Ovos extra
4° Coleta 22/01/2009:
Nome do Produtor: Eitel Fosch
Endereço: sitio Fosch, São Sebastião, zona rural, Santa Maria de Jetiba CPF: 558.839.907-20
IP: 110.206.75-4
Data de Fabricação: 15/01/09
Quantidade: Semanal: 60 caixas (aproximadamente), mensal: 240 caixas (aproximadamente) Tipo coletado: Ovos grande
5° Coleta 05/02/2009:
Nome do Produtor: Claudia Marcia Ruas Silva
Endereço: Sitio Esperança, Corrego São Sebastiao do Meio, zona rural, Santa Maria de Jetiba CPF: 890.933.137-20
IP: 110.827.27-9
Data de Fabricação: 05/02/09
Quantidade: Semanal: 125 caixas (aproximadamente), Mensal: 500 caixas (aproximadamente) Tipo coletado: Ovos grande
6° Coleta 19/02/2009:
Nome do Produtor: Edgar Agner
Endereço: Sitio São João – Corrego São João do Garrafão, zona rural, Garrafão, Santa Maria de Jetiba
CPF: 077.201.757-35 IP: 110.452.34-8
Data de Fabricação: 18/02/09
Quantidade: Semanal: 70 caixas (aproximadamente), Mensal: 280 caixas (aproximadamente) Tipo coletado: Ovos grande
7° Coleta 05/03/2009
Nome do Produtor: Horacio Antonio Muller
Endereço: sitio Muller – Rod. Afonso Schwab – km 1, zona rural, Santa Maria de Jetiba CPF: 623.271.867-49
IP: 110.301.75-7
Data de fabricação: 04/03/09
Quantidade: Semanal: 100 caixas (aproximadamente), mensal: 400 caixas (aproximadamente) Tipo coletado: grande
* Coleta de Swabs de Cloaca 1° Coleta 22/01/2009:
Nome do Produtor: Elimar Schwambach
Endereço: Sitio Dois Irmãos Schwambach, Corrego do Ouro, zona rural, Santa Maria de Jetiba CPF: 838.786.967-87
IP: 110.186.13-3 hy-line w-36
Data de nascimento: 17/04/2008 Produção: 16.000 aves
2° Coleta 05/02/2009:
Nome do Produtor: Horacio Antonio Muller
Endereço: Sitio Muller, Rodovia Afonso Schwab, km 01, zona rural, Santa Maria de Jetiba CPF: 623.271.867-49
IP: 110.301.75-7 3° Coleta 19/02/2009:
Nome do Produtor: Manfredo Kruger Nome Fantasia: Mais ovos
Endereço: Sitio Kruger, s/n, zona rural, Santa Maria de Jetiba CPF: 450.440.907-00
IP: 110.031.63-6
Data nascimento: 12/06/07 4° Coleta 05/03/2009:
Nome do Produtor: Hilario Roepke
Endereço: Sitio Alegre, corrego São Luiz, s/n, zona rural, Santa Maria de Jetiba CPF: 527.044.677-49
IP: 110.705.08-4
Data da coleta: 05/03/09 Data de nascimento: 05/03/08
Foto 01: Chegada dos Ovos na COOPEAVI
Foto 02: Descarregamento dos Ovos na COOPEAVI
Foto 03: Armazenamento dos Ovos para serem encaminhados para o consumidor
3 - A seleção das granjas e coleta de ovos e Swabs de cloaca são selecionados pelo Médico Veterinário Gabriel Silva Braga CRMV: 0780/VP (Gerente de Veterinária da COOPEAVI), onde seguiu-se o cronograma tabela 01.
Foto 04: Coleta dos ovos pelo Médico Veterinário
Foto 05: Os ovos são acondicionados em sacolas plásticas estéreis para serem encaminhadas para o Instituto Tommasi de Pesquisa e Desenvolvimento (ITPD)
Foto 06: Caixa onde os Ovos e Swabs de cloaca são acondicionados para serem encaminhados ao Laboratório.
III - Apresentação e discussão sucinta dos principais resultados obtidos, deixando claro, os avanços teóricos, experimentais ou práticos obtido pela pesquisa.
Seleção das granjas, coleta e encaminhamento das amostras biológicas: Como já citado anteriormente, a seleção dos avicultores, coleta e encaminhamento das amostras biológicas é realizado pelo Médico Veterinário Gabriel Silva Braga CRMV: 0780/VP (Gerente de Veterinária da COOPEAVI), onde é coletado 100 amostras mensal (76 ovos e 24 swabs de cloaca)
Realização dos testes laboratoriais: Para realização das análises moleculares foi obtido junto ao Instituto Adolfo Lutz (IAL) um controle positivo de Salmonella enteritidis, lote 03/07, seguindo como controle padrão positivo para todas as análises realizadas. Todas as amostras biológicas é realizado tanto análise molecular como cultura microbiológica em meio SS (meio Salmonela Shiguella) para fazermos uma comparação de detecção.
Foto 07: Amostras no fluxo laminar prontas para serem extraídas
Foto 08: Extração da gema e clara dos ovos para detecção de Salmonella enteritidis
Foto 09: Amostras enriquecidas em meio BHI e Água Peptonada e após semeadas em meio SS
Detecção e amplificação do material genético: Para amplificação e detecção do material genético de Salmonella enteritidis, utilizamos o Kit de detecção TaqMan Salmonella enterica para amplificar o gene invA, (Applied Biosystems nº 4366104).
As reações de PCR são realizadas em um PCR em tempo real (7300 real time PCR System - Applied Biosystems).
Resultados das análises moleculares: Até o presente momento todas as análises moleculares das amostras pesquisadas como ovo (tanto a gema como a clara), casca dos ovos e swabs de cloaca deram indetectável para Salmonella enteritidis, que foi confirmado posteriormente com as culturas microbiológicas (segue em anexo laudos dos exames realizados até o presente momento de alguns avicultores).
Foto 10: 1) Controle positivo de Salmonela enteritidis (Adolfo Lutz)
2) Amostras de swab de cloaca do Avicultor Elimar Schwambach e controle negativo indetectável para Salmonela
Foto 11: 1) Controle positivo de Salmonela enteritidis (Adolfo Lutz)
2) Amostras de swab de cloaca do Avicultor Manfredo Kruger, ovos do avicultor Edgar Agner e controle negativo indetectável para Salmonela
Resultados das análises microbiológicas: Todas as culturas também deram indetectável para Salmonella enteritidis, principalmente cultura da gema e clara dos ovos. Já em relação a cultura de cascas dos ovos e swabs de cloaca houve o crescimento de algumas bactérias que são comuns a flora de cloaca das aves, que são Escherichia coli, Pseudomonas oryzihahitans, Leclecia adecarboxylata e Proteus mirabilis, como mostra as figuras abaixo.
Foto 12: Placas em meio SS de swab de cloaca com crescimento bacteriano de Escherichia coli e Proteus mirabilis
Foto 13: Placas em meio SS de swab de cloaca com crescimento bacteriano de Escherichia coli e Pseudomonas oryzihahitans
Foto 14: Placas em meio SS de swab de cloaca e casca de ovos com crescimento bacteriano de Escherichia coli e Leclecia adecarboxylata
IV - Relacione os principais fatores negativos e positivos que interferiram na execução do projeto.
- Fatores negativos:
Falta de apoio da AVES (Associação dos Avicultores do Espírito Santo), em relação a coleta das amostras biológicas de Frangos de corte.
- Fatores positivos:
Total apoio e reconhecimento da Cooperativa Agropecuária Centro Serrana (COOPEAVI) sobre a importância do projeto pelos seguintes motivos:
1) Possibilidade de diagnóstico em tempo real.
2) Conhecimento preciso da qualidade sanitária dos produtos comercializados e do plantel de aves dos avicultores associados .
3) Implantação de métodos de controle que permitam a exportação de ovos.
V - Contatos Nacionais e Internacionais efetivamente ocorridos em função do projeto, como:
convênios, pesquisadores visitantes, etc.
NOME ESPECIALIDADE INSTITUIÇÃO PAÍS
TIPO DE COLABORAÇÃO
Júlio Huber Jornalista Jornal do
Agronegócio - ES
Brasil Matéria sobre o Projeto
VI - Informe os trabalhos publicados e/ ou aceitos para publicação no período, relacionados com o projeto em pauta: livros, capítulos de livros, artigos em periódicos nacionais e internacionais, resumos em congressos, reuniões científicas e semelhantes. Anexe a primeira página dos trabalhos publicados (observar a necessidade de citação da FAPES como agência de suporte financeiro da publicação).
O Projeto em si e seus resultados serão apresentados neste ano em um congresso a nível Nacional na área de avicultura.
Vitória – ES 03/08/2011
Dr. Fabrício Antônio Ferreira Martins, MSc
Coordenador de Virologia e Bacteriologia Molecular do InstitutoTommasi http://www.institutotommasi.org.br
R. Dr. Jair de Andrade, loja 02, n° 321 - Itapuã - Vila Velha - ES CEP 29101-700
Tel.FAX: +55-27-3329-6628 - Cel: +55-27-9941-5931 CV: http://lattes.cnpq.br/2979927772461639
