CONTROLE DE QUALIDADE MICROBIOLÓGICO

CONTROLE DE QUALIDADE

MICROBIOLÓGICO

CONTAMINAÇÃO MICROBIANA

• A contaminação microbiana é um evento indesejável na produção de

medicamentos e ocasiona problemas

quando presente. Os microrganismos, por metabolismo de via oxidativa ou

fermentativa, produzem produtos, em sua maioria, de caráter ácido, que alteram o pH do meio onde estão inseridos.

• Os excipientes de fármacos podem sofrer mudança de cor, como o corante amarelo de tartrazina utilizado em xaropes.

Emulsões podem ser quebradas e

suspensões podem precipitar, uma vez

que agentes emulsificantes e suspensores atuam em valores de pH determinados. O mais importante é a hidrólise de

conservantes, como os parabenos,

cloretos de benzalcônio e formaldeídos, que perdem totalmente sua amplitude de ação quando em meios fora do pH ótimo.

• Os princípios ativos de fármacos podem ser degradados por hidrólise também

devido à mudança de pH, ou devido ao seu consumo como fonte de carbono

pelos microrganismos; os medicamentos são meios inóspitos para microrganismos, que devem portanto consumir todas as

fontes de carbono possíveis para sobreviver. A conseqüência é,

independente do caso, a ineficácia terapêutica ou cosmética.

• O produto constituído, de maneira geral, quando na forma sólida ou semi-sólida,

apresenta colônias visualizadas a olho nu, e quando na forma líquida, apresentam

turvação. A fermentação de bactérias,

além dos metabólitos ácidos e alcoólicos usuais, libera gases (CO₂ e H₂S) que

produzem bolhas e odor desagradável na maioria dos fármacos.

MEIOS DE PREVENÇÃO

• Bioburden = biocarga; carga microbiana

natural total (intrínseca; microrganismos não patogênicos) de um item. Fatores de influência na carga microbiana: nutrientes, pH, atividade de água, substâncias

antimicrobianas.

• A estimativa da população microbiana é

determinada, em todo o mundo, de acordo com a EN ISO 11737-1.

Matéria-prima e Princípios Ativos

contato direto com o meio ambiente, e por isso possuem um bioburden muito mais

elevado que as de origem sintética. No caso de fitoterápicos, por exemplo, o bioburden dos componentes varia

conforme a área de coleta da matéria-prima, e a planta produtiva (região de produção).

Água

• Água potável – água clorada, bioburden de 500 UFC/mL; utilizada para limpeza de áreas produtivas e abastecimento do

sistema de tratamento de indústria,pois é a partir desta água que os outros tipos são produzidos.

• Água purificada – PWTR, bioburden de 100 UFC/mL; utilizada na formulação de produtos não estéreis.

Processo Produtivo

• No processo produtivo, as tubulações,

válvulas, mangueiras, tanques e reatores que conduzem ou armazenam os

produtos devem sofrer assepsia e saneamento pois podem reter

quantidades mínimas de substâncias e

desenvolver colônias de microrganismos, contaminando toda uma produção

(biofilme – forma de contaminação massiva).

Ambiente

• As paredes devem ser lisas, laváveis e

sanitizáveis, e os cantos das salas devem ser arredondados, para evitar o acúmulo de microrganismos.

Limpeza e Desinfecção

• A limpeza e desinfecção são feitas através do tratamento diário, periódico ou de

choque de áreas com desinfetantes e

sanitizantes, com o objetivo de reduzir o bioburden de ambientes.

Pessoal

• É a maior fonte de contaminação. São necessários o treinamento e

monitorização do pessoal e sua condição de saúde.

Material de Acondicionamento e

Embalagem

• Os materiais de acondicionamento e

embalagem (vidro, plástico, laminados, moldados, etc.) devem ser lavados com água de qualidade e armazenados de forma adequada (caixas de papelão geram fungos e esporos).

DEFINIÇÕES

Lote

• Lote é definido como uma quantidade de produto de mesma composição e

características físicas, químicas e

sensoriais, produzida e manuseada numa mesma batelada, sob as mesmas

Amostra de lote e unidade de

amostra

• Amostra de lote é uma fração do total

produzido, retirada ao acaso, para avaliar as condições do lote. No caso de

medicamentos acondicionados em

embalagens individuais, é composta de n embalagens individuais.

Planos de amostragem de lotes

lotes em duas categorias, aceitável ou inaceitável, dependendo dos resultados da análise das n unidades de amostra.

São os mais aplicados no caso de ensaios de presença/ausência, como Salmonella, por exemplo, em que ausência é aceitável e a presença em qualquer das n unidades de amostra é inaceitável.

• O plano de três classes classifica os lotes em três categorias, aceitável,

qualidade intermediária mas aceitável e inaceitável. São recomendados para

ensaios qualitativos, para os quais

opadrão não é ausência, mas sim, valores dentro de uma faixa entrem e M.

Unidade analítica

• A unidade de amostra geralmente contém uma quantidade de produto maior do que a necessária para a análise, porque, ao se coletar uma unidade de amostra, há

sempre o cuidado de se tomar

quantidades suficientes para estocagem de contra-amostras e prevenção de

Preparação de Amostras para

Análise

• Assegurar-se de que a área de trabalho está limpa, todos os instrumentos e

utensílios utilizados na abertura das embalagens e retirada das unidades analíticas (tesouras, pinças, facas,

espátulas, etc.) devem ser previamente esterilizados (em autoclave ou estufa de esterilização) ou mergulhados em etanol 70% e flambados no momento do uso.

INTRODUÇÃO ÀS BACTÉRIAS

• A coloração de bactérias (coloração de gram) é realizada da seguinte maneira: preparação de lâmina e adição de corantes básicos por um

minuto (violeta genciana, cristal violeta, azul de metileno); adição de lugol (I2 + KI) para fixação do corante na célula durante um minuto;

descoloração da célula com álcool 95oGL, e lavagem rápida da lâmina com álcool ou

acetona; adição de floxina, corante ácido que colora em trinta minutos. Os resultados variam conforme a estrutura da parede celular

• As bactérias gram positivas possuem

parede celular composta de uma camada espessa de peptidioglicanos que possui

alta afinidade com os corantes básicos; as cores resultantes são: violeta para as

culturas novas, e vermelho para as culturas antigas. As bactérias gram

negativas possuem parede celular com

camada bem mais fina de peptidioglicanos e presença de lipopolissacarídeos, que

possuem alta afinidade com os corantes ácidos; a cor resultante é quase sempre vermelha

AGENTES BACTERIANOS

• Agentes bacteriostáticos: impedem a multiplicação celular – possui ação apenas enquanto em contato com as

bactérias; após ser retirado, a população microbiana volta a se multiplicar sob

condições favoráveis. Como exemplo temos a tetraciclina, o clorafenicol e os novíssimos zyvox e synercidi.

AGENTES BACTERIANOS

• Agentes bactericidas: provocam danos

celulares que levam à morte da população – possui ação definitiva, dependendo da cepa de microrganismo; a população

microbiana é extinta do meio. Como

exemplo temos os antibióticos penicilina, cefalosporina e vancomicina que atuam sobre as enzimas responsáveis pela

Parabenos

conservantes que, ao longo dos anos, têm provado sua funcionalidade como

preservante para formulações cosméticas. São atóxicos, estáveis e efetivos em

baixas concentrações contra uma ampla gama de microorganismos

• O METILPARABENO é solúvel em: facilmente solúvel em água quente, propilenoglicol e etanol

• O PROPILPARABENO é solúvel em:

pouco solúvel em água (mesmo a quente), facilmente solúvel em propilenoglicol e

etanol

• Usados juntos na proporção de 4 partes de metilparabeno p ra 1 parte de

propilparabeno em formulações orais e cosméticas com até 0,1%.

Leveduras

• As leveduras, como os bolores e cogumelos, são fungos.

• Como células simples, as leveduras crescem e se reproduzem mais

rapidamente do que os bolores. São mais eficientes na realização de alterações

químicas, por causa da sua maior relação área/volume.

Bolor

• O bolor ou mofo é uma designação

comum dada a fungos filamentosos que não formam estruturas semelhantes a cogumelos.

Conceito de Atividade de Água

Atividade de Água vs Umidade

• Umidade

• Valor quantitativo de água em uma

amostra em base seca ou base úmida. • Propriedade que depende da quantidade

Atividade de Água vs Umidade

• Atividade de Água

• Medida do estado de energia da água em um sistema (Qualitativo).

• Propriedade que não depende da quantidade de material.

Atividade de Água fornece

informação sobre:

• • Crescimento microbiano • • Migração da Água

• • Estabilidade Química e Bioquímica • • Propriedades físicas

• • Vida útil

Valores de aw mínimos para

desenvolvimento de

microorganismos

• Microorganismos aw

• Item 1 Bactérias deteriorantes 0,90 • Item 2 Leveduras deteriorantes 0,88 • Item 3 Bolores deteriorantes 0,80

ÁGUA NOS MEDICAMENTOS

• ÁGUA LIVRE

• A água fracamente ligada ao substrato, e que funciona como solvente, permitindo o crescimento dos microorganismos e

reações químicas e que é eliminada com relativa facilidade.

ÁGUA NOS MEDICAMENTOS

• ÁGUA COMBINADA

• A água está fortemente ligada ao

substrato, mais difícil de ser eliminada e que não é utilizada como solvente e não permite o desenvolvimento de

microorganismos e retarda as reações químicas.