RESUMOS DA II REUNIÃO DE CITOGENÉTICA DO BRASIL CENTRAL/2012

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estudos , Goiânia, . 339, n. 2, p . 291-305, abr ./jun. 2012.

ABERRAÇÕES CROMOSSÔMICAS INSTÁVEIS EM LINFÓCITOS T HUMANOS EXPOSTOS ÀS DIFERENTES DOSES DE ISOTRETINOINA (ROACUTAN®)

Hanusch, AL1; Machado, RC1,3; Portis, IG1; da Silva, CC1,2; da Cruz, AD1,2 1-Núcleo de Pesquisas Replicon – Departamento de Biologia – Pontifícia Universidade Católica de Goiás, Goiânia, GO.

2-LaGene – Laboratório de Citogenética Humana e Genética Molecular – LACEN/SES/GO. 3-Bolsista CNPq/PIBIC. E-mail para contato: bioalh@ hotmail.com

ABERRAÇÕES CROMOSSÔMICAS INSTÁVEIS EM LINFÓCITOS T HUMANOS EXPOSTOS ÀS DIFERENTES DOSES DE ISOTRETINOINA (ROACUTAN®)

Hanusch, AL1; Machado, RC1,3; Portis, IG1; da Silva, CC1,2; da Cruz, AD1,2 1-Núcleo de Pesquisas Replicon – Departamento de Biologia – Pontifícia Universidade Católica de Goiás, Goiânia, GO. 2-LaGene – Laboratório de Citogenética Humana e Genética Molecular –

LACEN/SES/GO. 3-Bolsista CNPq/PIBIC. E-mail para contato: bioalh@ hotmail.com

ANÁLISE DE MUTAÇÕES GERMINATIVAS EM LOCUS STR DA GE-RAÇÃO F1 DO GRUPO III DE INDIVÍDUOS OCUPACIONALMENTE EXPOSTOS AO CÉSIO-137

RESUMOS DA

II REUNIÃO

DE CITOGENÉTICA

DO BRASIL

CENTRAL/2012

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Melo AV¹; Godoy FR¹; Lara JC³; Cruz ASP¹; Costa EOA¹; Silva DM¹² e da Cruz AD¹²³ 1Núcleo de Pesquisa Replicon . Departamento de Biologia, Pontificia Universidade Católica de Goiás.

2LaGene – Laboratório de Citogenética Humana e Genética Molecular, LACEN/ SES/ GO. Email para correspondência: aldairvm@hotmail.com

AVALIAÇÃO DO POTENCIAL MUTAGÊNICO DO MEDICAMENTO NORTRIP-TILINA COM A UTILIZAÇÃO DO SISTEMA TESTE DE ALLIUM CEPA

Sousa Junior, HA1; Pena, RV1; Hanusch, AL1; Diniz, LS1; Cunha, DMC1; da Silva, CC1,2; da Cruz, AD1, 2.

1Núcleo de Pesquisa Replicon- Departamento de Biologia, Pontifícia Universidade Católica de Goiás.

2LaGene/LACEN - Laboratório de Saúde Pública Dr. Geovani Cysneiros. Palavras-chave: DNA, Neurotransmissor, Anormalidade, HCL, Membrana.

Introdução: O número de pessoas que tem desenvolvido problemas depressivos na sociedade tem crescido constantemente. A Nortriptilina é um antidepressivo tricíclico que inibe a recaptação do neurotransmissor serotonina. Este medicamento provoca certos efeitos colaterais: Provoca desanimo, alterações no batimento cardíaco, enurese noturna, e tonteiras isso tudo ocorre pelo fato de inibir o neurotransmissor relacionado ao bom humor. Objetivo: O presente estudo teve como objetivo de avaliar o potencial mutagênico de diferentes concentrações do medicamento Nortriptilina utilizando o sistema teste de Allium cepa. Material e Métodos: Foram trabalhados com controle negativo e com grupos expostos ao medicamento Nortriptilina. No controle negativo foi realizado o seguinte procedimento. Inicialmente as cebolas foram colocadas em béqueres de 80ml que possuía H2O para estimular o desenvolvimento de raízes fasciculada. Em seguida as raízes foram colocadas em solução fixadora por um perío-do de 24h. Em um eppenperío-dorf foi colocaperío-do HCl, e em outro eppenperío-dorf foi colocaperío-do Orceína acética. A raiz foi retirada da solução fixadora e colocada inicialmente no HCL por um tempo de 10 min para ocorrer a ruptura da região de membrana para o corante chegar no material genético, em seguida a mesma foi colocado no corante também por um tempo de 10min. Após os 10min a raiz foi retirada do eppendorf com corante e colocado em uma placa de petri, a região de coifa foi destacada com ajuda de um bisturi, a coifa foi transferido para uma lâmina, nesta lâmina foi pingado uma gota de acido acético para clarear o material em seguida foi colocado a lamínula, para colocar lamínula foi realizado uma breve pressão sobre o material visando espalhar as células pela lâmina. Nos grupos expostos foram colocados medicamentos, para realizar o pre-paro das lâminas foi feito a mesma técnica do controle negativo. Resultados: Foram analisadas 1000 células em cada lâmina, quais estavam em divisão e quais estavam em interfase, as que se dividiam foram analisadas 100 metáfase e 100 anáfase, dentre elas

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quais eram anormais e quais eram normais. Foi pipetado no grupo exposto as seguintes concentrações de medicamento 100µL, 50µL, 25µL. Os resultados foram obtidos pelo programa estatístico de Analise de variância, os resultados observados foram os seguintes o valor de p< 0,05. Conclusão: O medicamento Nortriptilina causa danos e problemas nos cromossomos e no DNA, outro resultado pertinente a se observar é o valor do DMS, a partir deste dado concluímos que os tratamentos são diferentes do controle negativo e que não possui diferença entre os tratamentos testados, ambas as concentrações de medicamentos produzem efeitos similares.

Apoio: PROPE-PUC-GO

AVALIAÇÃO DO POTENCIAL MUTAGÊNICO DO MEDICAMENTO PAROXETINA COM A UTILIZAÇÃO DO SISTEMA TESTE DE ALLIUM CEPA

Pena, RV1; Diniz, LS1; Hanusch, AL1; Manso, JAX1; Cunha DMC1; da Silva, CC1, 2; da Cruz, AD1, 2.

1Núcleo de Pesquisa Replicon- Departamento de Biologia, Pontifícia Universidade Católica de Goiás.

2 LaGene- LACEN - Laboratório de Saúde Publica Dr. Geovani Cysneiros Palavras – chave: Metáfase, alteração cromossômica, orceína, anáfase.

Introdução: A paroxetina é o mais potente e seletivo antidepressivo inibidor de recap-tação de serotonina. A potência antidepressiva deste medicamento é equivalente à dos antidepressivos tricíclicos, com uma vantagem de produzir menos efeitos colaterais, equivalendo-se também às demais medicações do mesmo grupo como a sertralina, a fluoxetina e a fluvoxamina. Objetivo: O presente estudo teve como objetivo avaliar o potencial mutagênico de diferentes concentrações do medicamento Paroxetina uti-lizando o sistema teste de Allium cepa. Material e Métodos: Foram trabalhados com controle negativo e com grupos expostos ao medicamento Paroxetina. No controle negativo foi realizado a seguinte técnica. Inicialmente as cebolas foram colocadas em béqueres de 80ml que continham H2O, para estimular o desenvolvimento de raízes. Em seguida, as raízes foram colocadas em solução fixadora por um tempo de 24h. Em um eppendorf foi colocado HCL, e em outro eppendorf foi colocado Orceína (corante fotossensível). A raiz foi retirada da solução fixadora e colocada inicialmente no HCl por um tempo de 10 min para hipoclorizar a raiz, em seguida a mesma foi colocada no corante também por um tempo de 10 min. Logo após os 10 min a raiz foi retirada do corante e colocada em uma placa de petri, a região de coifa foi destacada com o auxilio de um bisturi, a coifa foi transferida para uma lâmina, nesta lâmina foi pingada uma gota de acido acético, em seguida foi colocada a lamínula, para colocar a lamínula foi realizada uma breve pressão sobre o material visando espalhar as células. Nos grupos expostos foram colocados medicamentos, para realizar o preparo de lâminas foi realizado o mesmo procedimento do controle negativo. Foram analisadas 1000 células

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em cada lâmina, quais estavam em divisão e quais estavam em interfase, as que se di-vidiam foram analisadas 100 metáfases e 100 anáfases, dentre elas quais eram normais e quais eram anormais. Resultados e Conclusão: Os resultados foram obtidos pelo programa estatístico de Análise de variância, os resultados observados foram os seguintes no medicamento com a concentração de 20mg observamos uma média de alterações cromossômicas de 141, e no de concentração de 10mg a média de altera-ções cromossômicas é de 116,5 e no de concentração de 5mg a média de alteraaltera-ções cromossômicas é de 103,6 , outro resultado a se observar e que o F calculado foi de 87,8 enquanto o F crítico foi de 3,09, o valor de p<0,05. A partir destes dados concluímos que o medicamento Paroxetina pode induzir alterações cromossômicas de acordo com o aumento na concentração do medicamento.

Apoio: PROPE / PUC-GO

AVALIAÇÃO GENOTÓXICA EM LINFÓCITOS T EXPOSTOS AO CLORIDRATO DE METFORMI-NA POR MEIO DO ENSAIO COMETA

Manso, JAX1; Hanusch, AL1; Machado, RC1,3; Ribeiro, CL1; Cunha, DMC1; da Silva, CC1,2e da Cruz, AD1,2

1-Laboratório Replicon – Departamento de Biologia - Pontifícia Universidade Católica de Goiás.

2-LaGene – Laboratório de Citogenética Humana e Genética Molecular – Vinculado ao LACEN – Laboratório de Saúde Pública Dr. Giovanni Cysneiros – Secretaria de Saúde do Estado de Goiás.

3-Bolsista PIBIC/CNPq.

E-mail para contato: joão.xm@hotmail.com

DIAGNÓSTICO MOLECULAR DA HEMOCROMATOSE De Abreu. JB1; Cruz. ASP1; da Silva CC1,2 e da Cruz AD1,2

1Núcleo de Pesquisa Replicon . Departamento de Biologia, Universidade Católica de Goiás.

2LaGene – Laboratório de Citogenética Humana e Genética Molecular, LACEN/ SES/GO.

Email para correspondência: abreu-juliana@hotmail.com

Palavras–chave: Hemocromatose, PCR, Diagnóstico molecular,Eletroforese.

Introdução: A Hemocromatose Hereditária (HH) é uma desordem multigênica relacio-nada ao metabolismo do ferro. O desenvolvimento da HH está mais freqüentemente relacionado ao gene HFE, neste cerca de 20 mutações, sendo que há três mutações do

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tipo pontual C282Y, H63D e S65C, já foram identificadas. A Hemocromatose acomete principalmente caucasianos, e em maior porcentagem descendentes de europeus, se caracteriza por uma sobrecarga sistêmica de ferro, devido ao aumento inapropriado da absorção deste pelo intestino que pode acarretar uma série de danos sistêmicos, entre eles hepatomegalia, com evolução para fibrose, cirrose e hepatocarcinoma. Para um melhor diagnóstico além dos exames bioquímicos a associação com um diagnóstico molecular permite minimizar a gravidade da doença, prorrogar o seu início ou mesmo evitar sua ocorrência. Objetivo: Otimizar o protocolo de PCR para o diagnóstico molecular das mutaçoes C282Y, H63D e S65C no gene HFE. Material e Métodos: As amostras de sangue periférico foram coletadas por punção venosa. Para a extração do DNA foi uti-lizado o kit comercial de extração de DNA (Wizard® Genomic DNA Purification Kit, Promega Corporation, Madison, WI, EUA), juntamente com as instruções do fabricante contidas no protocolo. Para o diagnóstico molecular as amostras foram submetidas a reação de amplificação por PCR(Reação em Cadeia da DNA Polimerase). O protocolo de termociclagem para o PCR foi montado a partir do cálculo das temperaturas de anelamento de cada um dos 4 (quatro) Primers utilizados, devido a diferença entre as temperaturas de anelamento foi realizada a PCR em gradiente, visando a otimização deste. Para a análise do produto de PCR foi realizada a eletroforese em gel de agarose a 2%. Resultados e Conclusão: A temperatura ótima de anelamento dos primers foi obtida pela PCR em gradiente, após a

análise do gel da eletroforese as temperaturas ótimas visualisadas foram: 54,6oC para o conjunto de primers A (foward e reverse) e 56,6oC para o conjunto B. A determinação das temperaturas é essencial para que a amplificação das regiões corretas seja realisada e para que o diagnóstico seja possível.

Apoio: PROPE/PUC-Goiás.

DIAGNÓSTICO MOLECULAR DA SÍNDROME DO X-FRÁGIL EM UM LABO-RATÓRIO PÚBLICO DE SAÚDE DO ESTADO DE GOIÁS

Stegani, FC 1,2; Costa, EOA2; Melo, COA2; de Melo, AV2; da Cruz, AD1,2,3; Silva, DM1,2,3

1 Programa de Mestrado em Genética, Pontifícia Universidade Católica de Goiás 2 Núcleo de Pesquisas Replicon, Dep. de Biologia, Pontifícia Universidade Católica de Goiás.

3 LaGene – Laboratório de Citogenética Humana e Genética Molecular, LACEN/SES/ GO. Email para correspondência: fernandastegani@hotmail.com

AVALIAÇÃO GENOTÓXICA DE ISOTRETINOÍNA PELOS TESTES DE ALTERA-ÇÕES NUMÉRICAS EM METÁFASES E MICRONÚCLEOS EM LINFÓCITOS T Portis, IG1; Hanusch, AL1; Machado, RC1; de Abreu, JB1; da Silva, CC1,2; da Cruz, AD1,2

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1Núcleo de Pesquisas Replicon – Departamento de Biologia – Pontifícia Universidade Católica de Goiás, Goiânia, GO.

2LaGene – Laboratório de Citogenética Humana e Genética Molecular – LACEN/SES/GO. E-mail: igaogp@hotmail.com

INFERTILIDADE NA ERA GENÔMICA E A IMPORTÂNCIA DO ACONSELHA-MENTO GENÉTICO

Curado RMOF1,2, Hannum JSS1,2, Silva DM1,2, Castro EC1,2 e da Cruz AD1,2 1Núcleo de Pesquisa Replicon . Departamento de Biologia, Universidade Católica de Goiás.

2LaGene – Laboratório de Citogenética Humana e Genética Molecular, LACEN/ SES/GO. E-mail para correspondência: acruz@pucgoias.edu.br

LIMITE DE DETECÇÃO DA PCR PARA O DNA FETAL BOVINO Costa, EOA1; Da Cruz, AS1; Silva, DC1; da Silva, CC1,2 ; da Cruz, AD1,2

1 Núcleo de Pesquisas Replicon, Depto. de Biologia, Pontifícia Universidade Católica de Goiás.

2 LaGene – Laboratório de Citogenética Humana e Genética Molecular, LACEN/ SES/ GO.

Email para correspondência: acruz@pucgoias.edu.br

Palavras-chave: Melhoramento, Sexo fetal, Sexagem, Idade gestacional.

Introdução: Na última década, têm sido freqüentes as proposições e o melhoramento constante de técnicas laboratoriais voltadas para a identificação do sexo fetal. Recen-temente, a reação em cadeia da polimerase (PCR) tem sido usada na identificação do sexo do concepto em humanos, utilizando-se plasma materno a partir da 7a semana gestacional. Objetivo: O objetivo geral do presente estudo foi avaliar o limite mínimo de detecção do DNA fetal bovino, mediante amplificação por PCR. Metodologia: O grupo amostral foi constituído de 15 vacas fecundadas por monta natural, em gestação variando de 5o a 8o semanas, ambas confirmadas por palpação retal. No presente estudo, foram colhidos 10 ml de sangue periférico para o isolamento do plasma, amostras de DNA foram isoladas usando-se o kit comercial DNA Ilustra Blood GenomicPrep Mini Spin®. Foram usados primers para duas regiões genômicas (autossômico e Y-específico bovino) para a amplificação por PCR multiplex e um par de primers Y-específico para PCR convencional. Resultados: Com as amostras com idade gestacional superior a 7 semanas, a técnica de PCR apresenta-se como uma ferramenta de alta sensibilidade para o diagnóstico precoce do sexo em bovinos, entretanto mesmo algumas amostras apresentarem concordância entre o diagnostico por PCR e observado ao nascimento em idades entre 5 a 6 semanas, possuem característica principal da acusação de apenas a

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região autossômica. Conclusão: Foi permitido uma amplificação do DNA fetal bovino presente no plasma materno a partir da 7 semana de gestação para PCR.

Apoio: PROPE / PUC-GO

RELATO DE CASO: A OCORRÊNCIA DE GANHO CROMOSSÔMICO EM 20P ASSOCIADO AO RETARDO MENTAL GRAVE

Grangeiro M; Ribeiro, CL, Cunha, DMC, Silva, GP, Silva, DM, da Silva, CC e da CruzAD Núcleo de Pesquisa Replicon . Departamento de Biologia, Universidade Católica de Goiás. & LaGene – Laboratório de Citogenética Humana e Genética Molecular, LA-CEN/ SES/GO.

E-mail para correspondência: mts_gng@hotmail.com

Palavras–chave: cariótipo, bandeamento, aberrações cromossômicas.

Introdução: As aberrações cromossômicas fazem parte de uma das maiores categorias de doenças genéticas, sendo responsáveis por uma proporção significativa de abortos, malformações congênitas e retardo mental. Cerca de 8,1% de todas as gestações reco-nhecidas clinicamente são atingidas por alterações cromossômicas, porém, a maior parte dos conceptos é abortada espontaneamente. Mesmo assim, de 0,7 a 1% dos nativivos são afetados por anomalias cromossômicas. Em todos os casos diagnosticados de alterações cromossômicas, é fundamental o encaminhamento das famílias ao aconselhamento ge-nético. Esse procedimento é adotado para informar a ocorrência ou risco de recorrência de uma doença genética, além de fornecer detalhes aos indivíduos afetados e seus fami-liares sobre a origem hereditária da doença, possível tratamento, cuidados necessários e planejamento reprodutivo. Objetivo: Relatar o caso de um paciente de 17 anos atendido e aconselhado geneticamente no Núcleo de Pesquisas Replicon (PUC –GO) e no Labo-ratório de Citogenética Humana e Genética Molecular (SES –GO) que apresentou um quadro citogenético desconhecido na literatura. Material e Métodos: A análise cito-genética do paciente e familiares foi realizada em cromossomos metafásicos obtidos a partir de cultura de linfócitos de sangue periférico. Os cromossomos foram corados por bandeamento GTG e classificados segundo o Sistema Internacional de Nomen-clatura Citogenética (ISCN, 2009). Foram analisadas 25 células em metáfase de cada indivíduo. Resultados e Conclusão: A indicação médica para a realização do cariótipo envolveu retardo mental grave, polidactilia unilateral esquerda do polegar e hipotiroidismo. Alterações justificadas pela cromossomopatia observada no paciente (46,XY,der(20),add(20)(p13)). Os familiares apresentaram metafáfases com aspectos morfológicos sem alterações. Conclui-se que o estudo citogenético foi relevante para o diagnóstico, mesmo assim, o caso necessita de estudos mais específicos para esclarecer a origem desconhecida do material adicional encontrado ligado a 20p13.

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SÍNDROME DE DOWN POR TRANSLOCAÇÃO ROBERTSONIANA 21Q;21Q: RELATO DE CASO

Minasi, LB1,3; Ribeiro, CL1; Cunha, DMC1; Silva, GP2; da Silva, CC1,2; da Cruz, AP1,2

1Laboratório Replicon – Departamento de Biologia – Pontifícia Universidade Católica de Goiás.

2LaGene - Laboratório de Citogenética Humana e Genética Molecular / LACEN – Laboratório de Saúde Pública Dr. Giovanni Cysneiros - Secretaria da Saúde do Estado de Goiás.

3Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e Molecular - Universidade Federal de Goiás

E-mail: lysabernardes@yahoo.com.br

Palavras-chave: Cromossomopatias Humanas – FISH – Diagnóstico Citogenético Introdução: Este tipo de rearranjo envolve dois cromossomos acrocêntricos do grupo G que se fundem próximos da região do centrômero com perda de seus braços curtos. O cariótipo resultante apresenta 46 figuras cromossômicas já que, o cromossomo 21 extra se une por fusão com outro cromossomo 21. As translocações robertsonianas envolvendo o cromossomo 21 são observadas com maior frequência nos cromosso-mos acrocêntricos do grupo D, principalmente o crocromosso-mossomo 14. Os indivíduos com Sindrome de Down por translocação robertsoniana, que representam cerca de 3% dos casos em recém-nascidos, apresentam um risco de produção de gametas não-balanceados que podem levar a abortos e a uma prole anormal com chance aumentada de ter des-cendentes com a Síndrome de Down. O presente relato de caso, descreve um paciente de 11 meses de idade, com indicação clínica de prega palmar transversa única , pregas nas pálpebras, hipotônia e língua protrusa. Foi encaminhado pelo médico assistente ao serviço de citogenética humana da Pontifícia Universidade Católica de Goiás com parceria com o LaGene - Laboratório de Citogenética Humana e Genética Molecular vinculado ao Lacen - Laboratório de Saúde Pública Dr. Giovanni Cysneiros - da Secre-taria de Saúde do Estado de Goiás. Objetivo: Determinar o cariótipo do paciente com indicação clínica de Síndrome de Down por estudo de citogenética convencional com bandamento GTG. Material e Métodos: Foi realizada coleta de amostra de sangue periférico com seringas esterilizadas por raios gama devidamente heparinizada para realização de cultura de Linfócitos T de acordo com protocolo estabelecido para obtenção de cromossomos metafásicos. Para análise cromossômica foi utilizado como ferramenta de apoio um sistema de microscopia motorizada (METAFER - 4 Metasystems Corporation, Alemanha) interligado a um software de análise (IKAROS - Metasystems Corporation, Alemanha). Resultados: A amostra analisada foi compatível com o sexo masculino, apresentando em todas as células analisadas, metáfases com trissomia do cromossomo 21 com translocação do tipo fusão cêntrica entre o cromossomo 21 extra e outro cromossomo 21, resultando em um cariótipo 46,XY,rob(21q;21q).

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Conclusão: Esta é uma variável não clássica da Síndrome de Down, que representa cerca de 80% dos casos por translocação e que pode ser resultante de uma condição genética existente em um genitor não afetado, denominado portador balanceado. O diag-nóstico da Síndrome de Down por translocação robertsoniana foi estabelecido com base nas observações clínicas associadas aos resultados do ensaio genético apresentado. Apoio: PROPE/PUC-GO

Palavras-chave: Alterações Genéticas, Infertilidade e Aconselhamento Genético. Introdução: O avanço da medicina reprodutiva nos últimos 30 anos permitiu a muitos casais superarem seus problemas de fertilidade, permitindo até o sucesso em casos antes considerados impossíveis. A infertilidade tem causa bastante heterogênea e, recentemente, pelas maiores facilidades em serem diagnosticadas, as causas genéticas têm sido mais valorizadas. A identificação da causa genética subjacente à infertilidade é importante, não somente para que se tenha um diagnóstico completo, mas também para que se verifique a possibilidade de transmissão dessas alterações à prole. Podendo citar como exemplo mutações no gene da Fibrose Cística, em homens que apresentam azoospermia obstrutiva – agenesia de vaso deferente, com risco elevado de conceber uma criança afetada pela doença devido à freqüência dessas mutações na população geral. Entre os fatores genéticos mais comuns relacionados à infertilidade, as alte-rações cromossômicas são provavelmente a causa mais freqüente e mais facilmente diagnosticada. Outras causas genéticas incluem mutações em genes importantes para a gametogênese normal e fertilidade dos indivíduos. A dificuldade de engravidar e as causas relacionadas à infertilidade são sentidos e vivenciados pelo casal de forma negativa. A infertilidade abala o sonho da família, interfere no relacionamento, afeta a confiança e a sexualidade, além de trazer sentimentos de culpa e frustração. A busca de solução do problema pressupõe o envolvimento do casal. Entre 25 a 60% das mulheres inférteis são comuns os sentimentos de perda de auto-estima, depressão, ansiedade, frustração e isolamento familiar. O aconselhamento genético oferece aos casais que estão planejando a gestação, a oportunidade de identificar e reduzir riscos potenciais, planejar procedimentos para riscos conhecidos e orientar cuidados pré-natais precoces para otimizar o curso gestacional. Além do atendimento aos pacientes e seus familiares, os conselheiros podem auxiliar médicos e demais profissionais de saúde no seguimen-to de multidisciplinar casais ou gestantes preocupados com o risco de ocorrência ou recorrência de doenças genéticas, e de pacientes com síndromes genéticas associadas a anomalias morfológicas, isoladas ou múltiplas.

Apoio: PROPE/PUC-GO

Palavras-chave: mutagênese, acne, aneugênico.

Introdução: A acne é uma patologia cutânea, sendo mais presente em adolescentes. Dentre os tratamentos para acne, tem-se a administração de isotretinoina (ácido

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13-estudos , Goiânia, . 39, n. 2, p . 291-305, abr ./jun. 2012.

cis retinóico), que produz resultados rápidos, definitivos e satisfatórios. Este fármaco é lipossolúvel sendo, portanto facilmente absorvido pelo organismo e atravessando com facilidade as membranas biológicas. Isotretinoína é uma substância derivada da vitamina A que é utilizada para o tratamento de acnes graves e acnes expostas a terapêuticas anteriores tornando resistente. Objetivo: O presente estudo tem por objetivo avaliar o potencial mutagênico de diferentes concentrações de isotretinoina em linfócitos T por meio do teste do micronúcleo e da avaliação do numero cromossômico em metáfases. Material e Métodos: Amostras de sangue periférico foram coletadas de pessoas entre 20 e 30 anos. Foram avaliadas as concentrações de 50, 100, 150 e 200ng.ml-1. Para cada teste foram preparados meios de cultura completos no qual foram adicionados o medicamento até alcançar as concentrações desejadas nos grupos expostos, mitomicina C para o grupo controle positivo e uma cultura sem o acréscimo de nenhum composto para o controle negativo. Após 48 horas as culturas para o teste de alterações numéricas foram interrompidas com a adição de colchicina, enquanto que as culturas de micronúcleos tiveram o acréscimo de citocalasina B sendo poste-riormente hipotonizadas e limpas com solução fixadora. Resultados: Foram contadas 500 células binucleadas por tratamento para o teste micronúcleos e 100 metáfases para cada tratamento para a avaliação do numero cromossômico, evidenciando um aumento na freqüência de micronúcleos e de alterações cromossômicas, quando comparamos as culturas expostas com as culturas do grupo não exposto. Foi utilizado o teste ANOVA no qual se teve p<0,05 para ambos os testes. Conclusão: O medicamento isotretinoína em sistemas-teste sem metabolização apresenta ação mutagênica segundo o teste de micronúcleos e adicionalmente, apresenta ação clastogênica. No entanto, ressalta-se a necessidade de novos testes que avaliem o potencial clastogênico deste fármaco, e a ação deste em sistemas com metabolização.

Apoio: PROPE/PUC-GO

Palavras-chave: síndrome do X-frágil. diagnóstico molecular, retardo mental.

Introdução: A síndrome do cromossomo X Frágil (SXF) é a forma mais freqüente, mais pesquisada e melhor documentada de deficiência mental herdável em seres humanos. No âmbito das etiologias genéticas mais freqüentes de deficiência mental, a SXF é precedida apenas pela trissomia do cromossomo 21. O fenótipo da SXF está associado a mutações no gene FMR1 (Fragile X-linked Mental Retardation 1) e abrange um amplo espectro de envolvimento físico e comportamental, refletindo sua expressividade clínica variável. É causada por uma expansão de trinucleotídeos CGG no primeiro éxon do gene FMR-1 (Fragile X-linked Mental Retardation type 1), localizado na região Xq27.3 no cromossomo X. Em função de sua diversidade fenotípica, esta doença tem sido subdiagnosticada na população pediátrica. A importância do reconhecimento clínico e diagnóstico específico da síndrome do X-Frágil vem do fato de que teoricamente todos os casos são hereditários e familiais. Objetivo: Realizar o diagnóstico molecular simplificado e de baixo custo, por PCR, de pacientes do sexo masculino, com suspeita da SXF, que apresentarem retardo mental. Material & Métodos: Nessa pesquisa foram selecionados

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20 meninos, com idades variando de 9 a 19 anos (χ= 10,5 anos, DP: + 2,3), todos com suspeita da Síndrome do X-frágil. Esses pacientes foram encaminhados por pediatras e/ ou neuropediatras do Hospital das Clínicas, da Universidade Federal de Goiás (HC/ UFG), ao LaGene, entre junho a setembro do ano corrente. Foram coletados 5 ml de sangue heparinizado dos pacientes e o DNA foi extraído com a utilização do Kit Wizard Genomic DNA (Promega, EUA). A reação de PCR foi realizada segundo Ha-ddad et al. 1996, com pequenas modificações. As concentrações finais dos reagentes, em um volume final de 25 ul foram de: Tampão para PCR 1 X, 2 mM de MgCl2, 200 uM de dATP, de CTP e de TTP, 50 uM de dGTP e 150 uM de 7-deaza-dGTP. Foram utilizados 03 primers (Eag-L, Eag-U e f), com a concentração de 20 pmol cada um. Os primers L e U geraram um fragmento de 147 pb, o qual serve como um controle interno da reação. Após a reação de PCR, os fragmentos obtidos foram visualizados em gel de poliacriamida a 6%. Posteriormente, os géis foram secos e colocados em papel celofane para arquivamento. Resultados e Conclusão: Os 20 pacientes selecionados apresentaram mutação completa do gene FMR1, confirmando a Síndrome do X-frágil nos meninos com retardo mental, por uma técnica eficaz e de baixo custo. Posteriormente, as famílias receberão aconselhamento genético e acompanhamento psicológico.

Apoio: PROPE/PUC-GO, FAPEG e CAPES

Palavras Chave: Diabetes, Mutagênese, Citotoxicidade, Genotoxidade.

Introdução: Diabetes mellitus é uma doença caracterizada pelo aumento anormal de glicose no sangue, em se tratando de diabete melito tipo II, o aumento de glicose ocorre quando há uma diminuição na resposta dos receptores de insulina presentes em determi-nadas células que absorvem a glicose, promovendo assim a glicogênese. A deficiência na produção de insulina promove a não absorção de glicose que desencadeia um quadro de hiperglicemia. Para este tipo de diabete o principal medicamento utilizado é Cloridrato de Metformina o qual promove o aumento da sensibilidade à insulina pelas células. Objetivo: Aaliar os possíveis danos ao DNA de linfócitos T expostos a diferentes con-centrações do Cloridrato de Metformina. Material e Métodos: As amostras de sangue periférico foram obtidas por punção venosa de um voluntário saudável, não etilista e/ou tabagista. O sangue foi adicionado ao meio de cultura RPMI1640, enriquecido com soro fetal bovino e L-Glutamina sendo acrescidos das soluções teste de Metformina. As amostras foram incubadas a 37ºC por 3 horas. Durante a confecção das lâminas, estas, foram previamente cobertas com agarose normal “melting” 1,5% diluída em tampão fosfato (PBS). Após as 3 horas de exposição, cada amostra foi homogeneizada com agarose “low melting point” 0,5%, sendo depositadas sobre as lâminas e levadas a solução de lise à temperatura de 4°C por período over night. Posteriormente as lâ-minas foram depositadas sobre uma cuba de eletroforese horizontal contendo tampão alcalino e em seguida iniciou-se eletroforese a 25 V e 300 mA por 25 min. Logo após a eletroforese as lâminas foram neutralizadas com solução Tris 0,4 M, fixadas em etanol absoluto e coradas no momento da análise com brometo de etídio. Resultados: Foram avaliados 50 núcleos por grupo controle negativo e exposto (0,5 µg.mL-1; 1 µg.mL-1;

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1,5 µg.mL-1; 2 µg.mL-1; 2,5 µg.mL-1) sendo os níveis de dano quantificados com o uso do software CometscoreTM v1.5. A análise estatística dos dados foi feita pelo teste ANOVA e teste de Tukey a 5% de significância no qual se teve p < 0,05. A concentração de 2,5 µg.mL-1 referente a superdosagem apresentou efeito genotóxico possuindo um elevado nível de dano (26,68 ± 13,26) quando comparado ao grupo controle (16,51 ± 14,15). Conclusão: O medicamento Cloridrato de Metformina na concentração sérica e suas respectivas diluições avaliadas neste estudo, não induziram a formação de danos genotóxicos quando considerado o teste cometa em linfócitos T, sendo este um sistema-teste que não utilizou mecanismos de metabolização.

Apoio: PROPE-PUC-GO ³Universidade Federal de Goiás

Palavras-chave: 1) Radiação Ionizante, 2) Microssatélite, 3) Acidente.

Introdução: Em Goiânia no ano de 1986, foram liberadas 19,26 gramas de Cloreto de Césio-137, através do rompimento de uma máquina de radioterapia, expondo a população local a radiação ionizante. A radiação é sendo estas absorvidas de forma diferenciada levando em consideração o organismo, a parte afetada, faixa etária,distância e intensi-dade da fonte emissora. A prole de indivíduos expostos a altos índices de radiação tem probabilidade maior de ter mutações, sendo mais comumente encontradas em regiões de repetições em tandem em regiões não gênicas do DNA. Os microssatélites (STR) são repetições curtas em tandem altamente sugestivas na detecção de mutações, mesmo em pequenas populações. Objetivo: A obtenção da freqüência de mutações em indivíduos expostos a radiação ionizante de Césio 137. Material & Métodos: Foram analisados 34 familias de indivíduos expostos ao Césio 137. Coletou-se 10 mL de sangue periférico e foi utilizado 100 µL de anel leucocitário para a extração e purificação do DNA pelo kit da Invitrogen (Easy® DNA Purification Kit), e o restante do sangue armazenado para pesquisas futuras. Posteriormente o DNA foi quantificado pelo espectrofotômetro GeneQuantTM Amersham Biosciences e feita PCR dos mesmos no termociclador DNA IQ5® da Bio-Rad . A PCR utilizou-se solução final de 12,5 µL e protocolo especificado pelo fabricante do seqüenciador. A análise das amostras foi realizado nos marcadores TPOX, D3S1358, FGA, D5S818 sendo aferidas através do software Fragment Profiler® v1 no qual é feita a análise das amostras. Resultados e Conclusão: A análise não obteve mutação nos locus utilizados, fato este que pode se presumir ser devido a baixa dose de radiação, baixo número amostral ou número reduzido de marcadores todos estes fatores podem ter mascarado possíveis mutações, sendo assim necessários mais pesquisas com número amostral maior e outros grupos de pessoas expostas.

Apoio: CNPq, FAPEG

Palavras-chave: Acne; Ação Mutagênica e Genotóxica; Roacutan.

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patológi-estudos , Goiânia, . 339, n. 2, p . 291-305, abr ./jun. 2012.

cos, sendo estas moléculas muitas vezes obtidas sinteticamente. A maioria destes medicamentos não apresenta uma ação conhecida sobre o material genético, podendo acarretar no desenvolvimento de doenças decorrentes de efeito acumulativo. A acne é uma doença cutânea, crônica e muito comum em adolescentes, afetando mais de 90% dos homens e 80% das mulheres em todos os grupos étnicos. A isotretinoina (Roa-cutan®) ou ácido 13-cis-retinóico é um membro da classe de retinóides relacionados com a vitamina A (retinol), indicado no tratamento de acnes graves. Objetivo: O presente estudo tem por objetivo avaliar o potencial clastogênico de diferentes concentrações de isotretinoina em linfócitos T humanos utilizando o teste de quebras cromossômicas. Materiais e Métodos: As concentrações do medicamento utilizadas neste estudo foram 50 ng. ml-1, 100 ng. ml-1, 150 ng. ml-1 e 200ng. ml-1 referentes a concentração plas-mática terapêutica constante de 120 ng. ml-1 a 200 ng.ml-1. Foram preparados meios de cultura completos contendo fitohemaglutinina para a indução da divisão celular e isotretinoina nas concentrações desejadas. Após 48 horas as culturas foram interrompidas com a adição de colchicina, sendo posteriormente hipotonizadas e fixadas em Carnoy. As lâminas foram preparadas por gotejamento e coradas pelo Instant-Prov®. Foram avaliadas 100 metáfases por tratamento, sendo consideradas alterações estruturais, como fragmentos acêntricos, quebras cromossômicas e cromatídicas, cromossomos dicêntricos e cromossomos em anel. Resultados e Conclusão: Para análise estatís-tica foi usado o teste de ANOVA (p<0,05). O teste de Tukey indicou em que todos os tratamentos diferiam do controle negativo, indicando que o ácido 13-cis-retinóico apresenta potencial clastogênico. A concentração de 50ng. ml-1 apresentou uma média de aberrações cromossômicas 7 vezes maior do que a média de danos no controle negativo. No entanto ressaltamos a necessidade da realização de mais testes de mu-tagenicidade para validar o resultado deste estudo, afim de que possa ser confirmado o potencial clastogênico deste fármaco em linfócitos T do sangue periférico humano. Apoio: PROPE / PUCGO

Palavras-chave: Acne; Ação Mutagênica e Genotóxica; Roacutan.

Introdução: Os fármacos alopáticos têm ação direta na reversão dos quadros patológi-cos, sendo estas moléculas muitas vezes obtidas sinteticamente. A maioria destes medicamentos não apresenta uma ação conhecida sobre o material genético, podendo acarretar no desenvolvimento de doenças decorrentes de efeito acumulativo. A acne é uma doença cutânea, crônica e muito comum em adolescentes, afetando mais de 90% dos homens e 80% das mulheres em todos os grupos étnicos. A isotretinoina (Roacutan®) ou ácido 13-cis-retinóico é um membro da classe de retinóides relacionados com a vitamina A (retinol), indicado no tratamento de acnes graves. Objetivo: O presente estudo tem por objetivo avaliar o potencial clastogênico de diferentes concentrações de isotretinoina em linfócitos T humanos utilizando o teste de quebras cromossômicas. Materiais e Métodos: As concentrações do medicamento utilizadas neste estudo foram 50 ng. ml-1, 100 ng. ml-1, 150 ng. ml-1 e 200ng. ml-1 referentes a concentração plas-mática terapêutica constante de 120 ng. ml-1 a 200 ng.ml-1. Foram preparados meios

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de cultura completos contendo fitohemaglutinina para a indução da divisão celular e isotretinoina nas concentrações desejadas. Após 48 horas as culturas foram interrompidas com a adição de colchicina, sendo posteriormente hipotonizadas e fixadas em Carnoy. As lâminas foram preparadas por gotejamento e coradas pelo Instant-Prov®. Foram avaliadas 100 metáfases por tratamento, sendo consideradas alterações estruturais, como fragmentos acêntricos, quebras cromossômicas e cromatídicas, cromossomos dicêntricos e cromossomos em anel. Resultados e Conclusão: Para análise estatís-tica foi usado o teste de ANOVA (p<0,05). O teste de Tukey indicou em que todos os tratamentos diferiam do controle negativo, indicando que o ácido 13-cis-retinóico apresenta potencial clastogênico. A concentração de 50ng. ml-1 apresentou uma média de aberrações cromossômicas 7 vezes maior do que a média de danos no controle negativo. No entanto ressaltamos a necessidade da realização de mais testes de mu-tagenicidade para validar o resultado deste estudo, afim de que possa ser confirmado o potencial clastogênico deste fármaco em linfócitos T do sangue periférico humano. Apoio: PROPE / PUCGO

SÍNDROME DO TRIPLO X: RELATO DE CASO

Godoy, FR1, Ribeiro, CL1; Cunha, DMC1; Silva, GP2; da Silva, CC1,2; da Cruz, AD1,2 1Laboratório Replicon – Departamento de Biologia – Pontifícia Universidade Católica de Goiás.

2LaGene - Laboratório de Citogenética Humana e Genética Molecular - Vinculado ao Lacen – Laboratório de Saúde Pública Dr. Giovanni Cysneiros - Secretaria da Saúde do Estado de Goiás.

Email:cristianoluiz@ucg.br

Palavras-chave: Síndrome; gametogênese; cromossomos, cariótipo e trissomia

]Introdução: A síndrome do triplo X também conhecida como síndrome da superfêmea é uma malformação relacionada a alterações genéticas decorrentes do erro de segregação dos cromossomos que ocorre no processo de divisão meiótica na fase de pro-dução de gametas. Esta alteração na gametogênese pode ocorrer em células de linhagens maternas ou paternas, sendo uma aneuploidia relativamente rara que atinge cerca de 1 : 1.000 pacientes nativivos do sexo feminino. O presente relato de caso, descreve uma paciente de 13 anos de idade com indicação clínica de baixa estatura e déficit cogniti-vo que buscou o serviço de citogenética humana da Pontifícia Universidade Católica de Goiás em parceria com o LaGene - Laboratório de Citogenética Humana e Genética Molecular vinculado ao Lacen - Laboratório de Saúde Pública Dr. Giovanni Cysneiros - da Secretaria de Saúde do Estado de Goiás. Objetivo: Determinar o cariótipo da paciente com indicação clínica de baixa estatura e déficit cognitivo por estudo de citogenética convencional com bandamento GTG. Material e Métodos: Foi realizada coleta de amostra de sangue periférico com seringas esterilizadas por

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raios gama devidamente heparinizada para realização de cultura de Linfócitos T de acordo com protocolo estabelecido para obtenção de cromossomos metafásicos. Para análise cromossômica foi utilizado como ferramenta de apoio um sistema de micros-copia motorizada (METAFER - 4 Metasystems Corporation, Alemanha) interligado a um software de análise (IKAROS - Metasystems Corporation, Alemanha). Resultados: A amostra analisada foi compatível com o sexo feminino, apresentado em todas as células analisadas, metáfases com trissomia do cromossomo X e cariótipo 47,XXX. Conclusão: Esta síndrome esta associada a indivíduos do sexo feminino que geralmente não apresentam alterações fenotípicas na sua aparência física. As pacientes portadoras deste cromossomo X extra são férteis, podendo gerar 50% dos seus gametas normais. O diagnóstico da síndrome do triplo X foi estabelecido com base nas observações clínicas a anamnese associadas aos resultados do ensaio genético apresentado.