TÍTULO: RESPOSTAS IMUNOLÓGICAS E BIOQUÍMICAS FRENTE A UMA SESSÃO DE TREINAMENTO INTERVALADO DE BRAZILIAN JIU-JITSU
TÍTULO:
CATEGORIA: CONCLUÍDO CATEGORIA:
ÁREA: CIÊNCIAS BIOLÓGICAS E SAÚDE ÁREA:
SUBÁREA: BIOMEDICINA SUBÁREA:
INSTITUIÇÃO: FACULDADE INTEGRADA METROPOLITANA DE CAMPINAS INSTITUIÇÃO:
AUTOR(ES): MARIANA ALCÂNTARA CARDOSO FARIA, KARINA DE ARAUJO COSTA AUTOR(ES):
ORIENTADOR(ES): BERNARDO NEME IDE, LÁZARO ALESSANDRO SOARES NUNES ORIENTADOR(ES):
1 1. RESUMO
O sistema imunológico tem a função de proteger o organismo contra infecções e agentes agressores externos. O treinamento físico, de intensidade moderada, melhora o sistema imune, enquanto que o treinamento intenso provoca imunossupressão temporária. O estado de imunossupressão está associado ao risco aumentado de incidência de Infecções Respiratórias do Trato Superior (IRTS). O hemograma é um exame útil para avaliar o sistema imune do atleta, pois quantifica os leucócitos componentes da resposta imune inata e adquirida (neutrófilos, linfócitos, monócitos, eosinófilos e basófilos). Por outro lado a saliva possui alguns metabólitos como uréia, ácido úrico, α–Amilase e imunoglobulina A que podem ser utilizados para avaliar o estresse durante o exercício e o sistema imune do atleta de forma menos invasiva. O objetivo deste estudo foi avaliar a resposta imune frente a uma sessão de treinamento intervalado em lutadores de Brazilian Jiu-Jitsu. Participaram deste estudo 10 atletas de Brazilian Jiu-Jitsu com idade entre 28 ± 6 anos. As amostras de saliva e sangue foram coletadas antes e imediatamente após a sessão. O treinamento intervalado foi caracterizado por 6 séries de 2 minutos com 1 minuto de intervalo do exercício de “raspagem” e “passagem de guarda”. Os resultados das análises bioquímicas (ácido úrico, uréia, α-amilase e IgA) e hematológicas dos atletas em repouso foram comparados aos valores pós treinamento através do teste t de Student para amostras pareadas com nível de significância p<0,05. A contagem de leucócitos (11,6 ± 0,9 x 103cel/μL) e linfócitos (5,4 ± 1,7 x 103cel/μL) apresentou aumento significativo imediatamente após quando comparado ao repouso (7,9 ± 0,1 x 103cel/μL; 3,1 ± 0,1 x 103cel/μL), respectivamente (p<0,05). O mesmo comportamento foi observado para as análises bioquímicas uréia (pré: 27,3 ± 10,1 mg/dL; pós: 58,7 ± 27,1 mg/dL), α-amilase (pré: 110 ± 49,8 U/mL; pós: 744,1 ± 785,2 U/mL) e IgA salivar (pré: 62,5 ± 29,6 μg/min; pós: 134,2 ± 53,7 μg/min) respectivamente (p<0,05). Os resultados obtidos mostram que o treinamento aplicado caracterizou-se como um estímulo estressor capaz de provocar aumento das células e componentes do sistema imune na circulação. Neste sentido, as dosagens em saliva e o hemograma podem ser utilizados com eficiência para monitorar atletas durante treinos e competições.
Palavras-chaves: treinamento físico, saliva, sistema imune, alfa-amilase salivar, imunoglobulina A.
2 2. INTRODUÇÃO
O sistema imunológico tem a função de proteger o organismo contra infecções e agentes agressores externos (COSTA ROSA et al., 2002). Ele pode ser didaticamente dividido em: sistema imune inato e adaptativo. O sistema imune inato é composto por células como os neutrófilos, eosinófilos, basófilos, monócitos e natural killer e também por fatores solúveis (sistema complemento, proteínas de fase aguda e enzimas). O sistema imune adaptativo é constituído por linfócitos T e B, imunoglobulinas e citocinas (COSTA ROSA et al., 2002).
Muitos estudos mostram que o exercício provoca alterações agudas e crônicas no sistema imune (GLEESON M, 2007), que são dependentes do tipo, intensidade e volume do mesmo (SHEPARD et al.,1994). O treinamento físico de intensidade moderada melhora os sistemas de defesa do organismo, enquanto o mais intenso causa imunossupressão temporária (ANGELI et al., 2004; DA NOBREGA et al., 2005). Durante as duas últimas décadas, muitos estudos produziram evidências que o exercício regular e de intensidade moderada diminui a incidência de infecções, tais como o resfriado. Por outro lado o treinamento físico mais intenso ou exaustivo está associado com o aumento de infecções do trato respiratório superior (ITRS) (GLEESON M, 2007; ROSA et al., 2011; WALSH et al., 2011).
O hemograma é um bom exame para avaliar o sistema imune, pois através dele quantificamos os leucócitos (neutrófilos, linfócitos, monócitos, eosinófilos e basófilos) de maneira simples e rápida. Estudos mostram que imediatamente após a realização de uma sessão de treinamento, há um aumento no número de leucócitos, relacionado com a liberação de cortisol e adrenalina (GLEESON M, 2007).
Os linfócitos apresentam uma resposta bifásica ao treinamento. Há um aumento durante e imediatamente após o exercício físico (especialmente as células natural killer - NK), seguido por uma diminuição que pode durar algumas horas (principalmente de células T e NK). Nesse período o organismo pode estar mais suscetível a infecções (GLESSON M, 2007; PEDERSEN et al., 1998).
Neste sentido, monitorar atletas ao longo de treinos e competições é importante para evitar infecções e inflamações decorrentes dos treinos. Entretanto, um inconveniente para a avaliação de atletas é que na maioria das vezes é necessário a coleta de amostras de sangue venoso, o que para muitos indivíduos é um procedimento desconfortável. Para minimizar o desconforto dos atletas, NUNES et
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al. (2006) mostrou que a punção digital (microcoleta) pode ser uma alternativa interessante a punção venosa. Ela é menos invasiva e estressante na obtenção de amostras de sangue, possibilitando o monitoramento de atletas durante e após treinos ou competições, sem grandes alterações em suas rotinas de treinamento (NUNES et al., 2006).
Além da microcoleta, outros fluidos menos invasivos podem ser utilizados para avaliar os atletas. A utilização da saliva para as análises bioquímicas e imunológicas vem sendo gradativamente utilizada como alternativa ao sangue. Sua coleta forma é também não invasiva e por não apresenta riscos durante a mesma, o que torna seu manejo muito mais seguro (GRÖSCHL, 2008; KAUFMAN & LAMSTER 2002).
A saliva possui concentrações mensuráveis de alguns metabólitos (uréia, acido úrico, lactato), enzimas (α-amilase) e imunoglobulina A (IgA) que podem ser utilizados para avaliar o estresse metabólico, psicológico e o sistema imune do atleta (CHICHARRO et al.,1994; NIEMAN et al., 2002).
A IgA salivar tem sido muito estudada como marcador de função do sistema imune em atletas (GLEESON & PYNE, 2000). Estudos mostraram que a avaliação dos efeitos do exercício físico sobre as concentrações de IgA salivar são inconsistentes. Alguns estudos reportaram uma diminuição após as sessões agudas de exercício de alta intensidade (NIEMAN et al., 2002; WALSH et al., 2002), outros nenhuma mudança (MCDOWELL et al., 1991) e outros um aumento (BLANNIN et al., 1998; SARI-SARRAF et al., 2007).
A α-amilase salivar é uma proteína com funções protetoras importantes na mucosa oral. Vários estudos têm mostrado elevações na concentração de α-amilase salivar durante e após o exercício comparado aos valores basais (CHICHARRO et al., 1998; WALSH et al., 1999; DE OLIVEIRA et al., 2010). A enzima α-amilase salivar mostra uma relação interessante com o estresse físico e psicológico, sendo atualmente muito estudada como marcador de ativação do sistema nervoso simpático (NATER, 2005).
A uréia é o produto final de degradação do nitrogênio originário do metabolismo das proteínas e aminoácidos. Os fatores que influenciam no aumento das concentrações séricas de uréia durante o período de treino são principalmente: aumento de turnover proteico, redução na ingestão de água e reposição inadequada de glicogênio (HARTMANN & MESTER, 2000). As concentrações de uréia (17 - 40
4 mg/dL) na saliva apresentam concentrações similares às encontradas no sangue (REHAK et al., 2000) e por isso sua quantificação pode ser utilizada no monitoramento do metabolismo proteico em atletas (LAC & MASO, 2004).
Além do estresse metabólico, ocorrem também durante o exercício físico várias reações químicas que levam à formação de radicais livres e espécies reativas de oxigênio (EROS) (PEREIRA, 1994; SEN et al., 2001). Para proteger os tecidos contra possíveis danos causados pelos radicais livres e EROS, as enzimas antioxidantes parecem responder de maneira adaptativa, elevando suas atividades em indivíduos treinados (PEREIRA et al., 1996). O ácido úrico é produto final da degradação das purinas, sendo um dos mais importantes antioxidantes não enzimáticos presente em fluidos como sangue e saliva (LIPPI et al., 2008; NAGLER et al., 2002), sua quantificação é útil no monitoramento da capacidade antioxidante de atletas em treinamento (NUNES et al., 2011).
A avaliação de atletas através de biomarcadores pode contribuir para a compreensão das respostas imunológicas resultantes de uma única sessão de exercício ou do treinamento físico realizado em longo prazo, podendo também auxiliar na ampliação do conhecimento científico e na adequação da prescrição individualizada do esforço, diminuindo o risco de lesões e infecções decorrentes do treinamento intenso.
3. OBJETIVO
O objetivo deste estudo foi observar a resposta imune frente a uma sessão de treinamento intervalado de Brazilian Jiu-jitsu.
4. METODOLOGIA 4.1Sujeitos
O projeto contou com a participação voluntária de 10 atletas de Brazilian Jiu-jitsu, do sexo masculino, com idade de (28 ± 6 anos). Os atletas que aceitaram participar da pesquisa e assinaram um termo de consentimento livre e esclarecido.
4.2 Critérios de Inclusão
No período de execução da pesquisa, foram adotados os seguintes critérios de inclusão: os voluntários deviam ter idade entre 21 a 35 anos e praticar somente Brazilian Jiu-jitsu e/ou treinamento de força tradicional por pelo menos 2 anos.
5 4.3 Critérios de Exclusão
Foram excluídos da pesquisa os voluntários fora da faixa etária selecionada, os que estavam praticando o esporte há menos de 2 anos, os que relataram algum tipo de lesão e aqueles que praticavam o treinamento de endurance concomitantemente aos treinos habituais de força e Brazilian Jiu-jitsu.
4.4 Análises Estatísticas
As análises estatísticas e os gráficos foram realizados através dos programas Microsoft Excel ® e Graph Pad Instat3. Para testar a diferença entre as médias das amostras dos atletas foi utilizado o teste t de Student para amostras pareadas e paramétricas. O nível de significância considerado foi p<0,05.
5. DESENVOLVIMENTO
5.1 Treinamento intervalado simulado
Antes da intervenção os atletas foram submetidos a um aquecimento padrão de 10 minutos constituídos de alongamentos gerais e 5 minutos de exercícios específicos numa razão trabalho/descanso de 30 segundos cada. Após serem equiparados por massa corporal, os participantes realizaram 6 lutas com duração de 2 minutos cada e intercaladas por pausas de 1 minuto. Caso ocorresse uma submissão por parte de algum atleta durante o exercício, o mesmo era interrompido por aproximadamente 10 segundos e em seguida continuava até que fosse completado o tempo inicialmente estipulado. As lutas foram acompanhadas e supervisionadas por um técnico graduado na modalidade.
5.2 Coletas de sangue e saliva
As coletas foram realizadas no próprio local de treino dos atletas e nos momentos pré e imediatamente após a sessão de treinamento intervalado.
A saliva foi coletada de forma espontânea em coletores universais plásticos estéreis pelo próprio voluntário durante 2 minutos.
O sangue capilar foi coletado da polpa digital do dedo médio após assepsia com álcool etílico 70◦GL. Foi utilizado lancetador Accu-chek® Softclix Pro, com agulha descartável. Foram coletados 0,2 mL de sangue total em EDTAK3 utilizando-se o Microvette® Sarstedt 200 de acordo com técnica padronizada (NUNES et al., 2006). As amostras foram armazenadas em cooler com gelo em temperatura monitorada em torno de 4º a 8ºC para transporte ao laboratório no período de 30 minutos.
6 5.3 Análises hematológicas
As análises hematológicas foram realizadas no aparelho automatizado KX-21N Sysmex® e incluíram: contagem total de leucócitos, contagem de linfócitos e neutrófilos.
5.4 Análises de saliva
As amostras bioquímicas (IgA e α-amilase) foram realizadas através de kits comerciais da marca Biotécnica® e o ácido úrico e a uréia com kits Laborclin® no aparelho semiautomático de bioquímica marca BioPlus 2000.
As amostras de saliva foram centrifugadas a 3500 RPM durante 10 minutos e, do sobrenadante obtido, foram determinadas as concentrações de IgA, uréia, ácido úrico e a atividade da alfa-amilase. Para dosagem de alfa-amilase as amostras coletadas antes da luta foram diluídas 100 vezes e as amostras coletadas após a luta foram diluídas novamente 1:1000. A partir dos resultados obtidos foram calculados a média, desvio padrão e a taxa de secreção salivar. IgA, ácido úrico e uréia não necessitaram de diluição prévia e foram ensaiadas diretamente no sobrenadante. Os valores de IgA foram corrigidos pela taxa de secreção e os resultados expressos em μg/min (Tabela 1).
Todas as análises foram executadas em paralelo com o soro controle comercial (Controlab®) que foi utilizado para o cálculo do coeficiente de variação analítico (CVA).
6. RESULTADOS
Comparado às análises bioquímicas pré e pós-treinamento, observou-se um aumento significativo (p<0,05) imediatamente após em uréia, α-amilase e IgA. A Tabela 1 e Figura 2 mostram os valores dos parâmetros bioquímicos em saliva.
7 Tabela 1. Parâmetros bioquímicos dos atletas pré e pós-competição simulada.
Análises CVA
(%)
Pré Pós P
Alfa amilase salivar (U/mL) 0,4 110 ± 49,8 744,1 ± 785,6 <0,020* IgA salivar (μg/min)
Acido Úrico (mg/dL) Uréia (mg/dL) 0,7 2,8 1,7 62,5 ± 29,6 3,5 ± 1,0 27,3 ± 10,1 134,2 ± 53,7 5,2 ± 3,7 58,7 ± 27,1 < 0,001* 0,130* <0,001*
Taxa de secreção (mL/min) - 0,8 ± 0,2 0,8 ± 0,3 0,716*
Volume Salivar (mL) - 1,5 ± 0,5 1,6 ± 0,7 0,716*
Valores apresentados em média ± desvio padrão; *em relação às análises pré (nível de significância p<0,05); CVA= coeficiente de variação analítica.
Figura 1. Parâmetros hematológicos (média e erro padrão) pré e pós-competição simulada. LEUC= leucócitos LINF= linfócitos NEUTR= Neutrófilos * p<0,05 diferença estatisticamente significativa em relação às análises pré. CVA = Leucócitos (1,5%); Linfócitos (3%) e Neutrófilos (2,2%).
A contagem de leucócitos (11,6 ± 0,9 x 10³cel/μL) e linfócitos (5,4 ± 1,7 x 10³cel/μL) apresentou aumento significativo imediatamente após a competição simulada quando comparado ao repouso (7,9 ± 0,1 x 10³cel/μL; 3,1 ± 0,1 x 10³cel/μL), respectivamente (p<0,05).
8 Figura 2. Dados dos parâmetros bioquímicos em saliva referente à média e erro padrão, pré e pós-treinamento. *p<0,05 diferença estatisticamente significativa em relação às análises pré.
A alfa-amilase apresentou um aumento significativo após o treinamento, refletindo a intensidade e ativação do SNS durante o exercício (DE OLIVEIRA et al., 2010). O aumento de alfa-amilase da saliva após o exercício pode melhorar o efeito protetor da saliva, uma vez que esta enzima é conhecida por inibir a fixação bacteriana às superfícies orais (WALSH et al., 1999). Os resultados observados na IgA salivar reforçam este comportamento protetor, visto que o aumento de anticorpos nas mucosas é importante fator de prevenção, principalmente nos casos IRTS.
7. CONSIDERAÇÕES FINAIS
Os resultados obtidos mostram que uma sessão de treinamento intervalado Brazilian Jiu-Jitsu é um estímulo estressor capaz de provocar aumento das células do sistema imune na circulação bem como do estresse metabólico. Neste sentido, as dosagens em saliva e o hemograma podem ser utilizados com eficiência para monitorar atletas durante treinos e competições.
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