Soja
Soja
Soja
Soja
Soja
doenças
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expansão da cultura da soja no Brasil deveu-se a vários fatores, tais como adaptação de novas cultivares a regiões de baixa latitude, e resistência a doenças. Assim, ob-servou-se uma evolução a partir do ano de 1970, passando de 1,5 milhão de toneladas para 27 milhões de toneladas em 1999.A produção de soja representa 51% do total de todas as oleaginosas do mundo. No Brasil, a soja tem sido responsável por uma renda de 4,66 bilhões de dólares, o que re-presenta cerca de 11% do PIB.
A partir do momento em que o cultivo da soja se expandiu para novas áreas, no Brasil, começaram a aparecer sintomas de doenças, a maioria delas já conhecidas e descritas nos países tradicionalmente produtores desta le-guminosa. Os níveis de danos causados pelas doenças à soja têm sido muito variáveis, de-pendendo do patógeno envolvido e das con-dições climáticas. Dentre esses organismos causadores de doenças estão incluídos os ví-rus. Até o ano de 1970, cerca de sete viroses
estavam descritas no Brasil, infectando plantas de soja. Perdas estavam associadas ao efeito direto do vírus sobre as plantas, reduzindo o rendimento, bem como pela ação sobre a qua-lidade das sementes colhidas, obrigando ao descarte de lotes de sementes.
Outras viroses têm sido identificadas e muito pouco se conhece sobre os danos cau-sados à soja. A maior parte das viroses descri-tas no mundo, infectando a soja, encontra-se na Ásia, seguindo-se os EUA e América do Sul. Uma idéia da incidência de vírus em soja pode ser feita a partir da análise da tabela.
Mosaico comum
O vírus do mosaico comum da soja (VMCS) foi identificado pela primeira vez no Brasil em 1955. Devido à transmissão pelas sementes é o vírus mais disseminado no país e no mundo. Em geral, as fontes de inóculos primários são as sementes contaminadas, as quais após a emergência servirão de fonte de inóculo para
os insetos vetores (pulgões).
Logo após a emergência já se pode obser-var plântulas infectadas que apresentam as fo-lhas primárias com forte sintoma de mosaico e ou distorções do limbo foliar. Essas plantas não se desenvolvem normalmente. Ao contrário, tornam-se anãs, apresentam retenção foliar e com baixa produção de vagens. As sementes originárias de plantas infectadas são mancha-das. O número de vagens que se desenvolvem também é reduzido. As sementes podem ter redução do peso e normalmente são mancha-das. Plantas infectadas produzem sementes com e sem manchas. Numa mesma vagem podem-se encontrar sementes totalmente, par-cialmente ou sem qualquer mancha.
O vírus do mosaico comum da soja (VMCS) pertence ao grupo dos potyvirus, caracteriza-do por ter partículas alongadas e flexíveis, medindo 710-750 nm x 12-15 nm.
Diversas espécies de pulgões, como, Myzuz persicae, Acyrthosiphon dirhodum, Hysteroneura setariae, Schizaphis graminum,
Vír
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Vírus de soja
us de soja
us de soja
us de soja
us de soja
Viroses respondem por perdas significativas na lavoura e
devem ser controladas para manter a produção em nível rentável
Na foto:
Queima do broto causada por vírus da necrose branca do fumo
O VMCS
dissemina-se
através de
sementes
contaminadas
Rhopalosiphum maydis e Dactninotus ambro-siae, transmitem o VMCS de forma não per-sistente. Outras espécies como Aphis cracci-vores e Rhopalosiphym padi também são ve-tores.
O VMCS dissemina-se através de semen-tes contaminadas. As semensemen-tes germinam e podem originar plântulas infectadas as quais se constituem na fonte de inóculo primário. A porcentagem de transmissão pelas sementes é bastante variável, mas os valores obtidos com cultivares suscetíveis ficam entre 0,5 e 7%. Nos testes de transmissão do vírus por sementes as porcentagens variaram com as cultivares e com a estirpe do vírus. Constatou-se que se-mentes sem manchas podem transmitir o vírus e originar uma plântula infectada. No entanto, nem todas as sementes manchadas originam plântulas infectadas.
É importante observar que no Brasil não há pulgões infestando soja. A transmissão ocor-re através de picadas de prova, de pulgões ala-dos, com pousos casuais sobre plantas infec-tadas, o que termina por disseminar o vírus de plantas infectadas para plantas sadias.
A constatação do efeito desse vírus na pro-dução, em condições de campo, foi feita no
Brasil. Dependendo da idade das plantas na infecção e da proporção de plantas infectadas, as perdas variaram de 20 a 80%.
Os prejuízos causados pelo VMCS podem também ser devidos ao descarte de sementes (valores maiores do que 5% de sementes com manchas). A maturação é atrasada e é comum se encontrar plantas verdes, no meio de plan-tas já amadurecidas. No entanto, devido ao aparecimento de estipes novas, ainda há cerca de 20% de cultivares comerciais suscetíveis. A resistência ao VMCS é condicionada por ale-los dominantes. Existem três loci que contro-lam a resistência, sendo que para o primeiro locus identificado existe uma série alélica Rsv, Rsv e rsv. Um segundo gene para resistência ao VMCS foi encontrado na cultivar Raiden e Designado Rsv2.
Diversos genótipos têm sido descritos no Brasil como sendo resistente ao VMCS. O con-trole deste vírus é obtido através do uso de cultivares resistentes.
Queima do Broto
A infecção se manifesta cerca de 20 a 30 dias após a semeadura. As plantas de soja in-fectadas apresentam o broto com curvatura, necrosado e facilmente
que-brável. Normalmente apre-sentam escurecimento da medula da haste principal, o que se constitui no prin-cipal sinal de diagnose des-ta doença. Após a morte do broto apical as plantas pro-duzem excessiva brotação axilar, com folhas afiladas e
de tamanho reduzido. O crescimento é parali-sado, com aspecto de planta anã, produzindo poucas vagens. Caso a infecção ocorra mais tarde (após 40-45 dias), os danos serão bem menores. As sementes formadas podem apre-sentar manchas associadas à ruptura do tegu-mento.
O Vírus da Queima do Broto da Soja (VQBS) tem partícula esférica com cerca de 25-30 nm de diâmetro e pertence ao grupo dos llarvírus.
O VQBS é transmitido por tripes do gêne-ro Frankliniella. Nos Estados Unidos as espé-cies F. schultzei e Trips tabaci foram citadas como vetoras. No Paraná, as espécies mais co-mumente encontradas nos campos são Frankli-niella sp. e Caliothrips phaseoli, este último considerado não transmissor. Recentemente, demonstrou-se que o VQBS é transmitido pelo pólem aderido ao aparelho bucal dos tripes, adultos ou larvas, em plantas de Chenopodium amaranticolor.
No Paraná, em áreas onde a doença é
en-dêmica, constatou-se a presença de uma hos-pedeira do vírus, conhecida por cravorana (Am-brosia polystachya), espécie pertencente à fa-mília das compostas. Outras espécies vegetais naturalmente infectadas pelo VQBS são algo-dão, tomate, girassol, picão, amendoim, Cro-talaria sp e fumo.
Os danos causados pelo VQBS à soja são variáveis, dependendo das condições climáti-cas (especialmente chuvas) como também do local onde se instala a cultura da soja. Em al-gumas regiões do estado do Paraná, a cultura ficou inviabilizada, pois os prejuízos eram to-tais. Em outras áreas tem-se notado que em anos secos ou quando as chuvas ocorrem em períodos bastante espaçados (grandes inter-valos), há aparecimento da doença, em níveis variáveis de infecção. Sabendo-se que a po-pulação de tripes era reduzida pela ação das chuvas, procurou-se estudar semeaduras atra-sadas, nas áreas consideradas de risco. Após cinco anos de pesquisas, verificou-se que se-meaduras tardias nunca apresentaram, em média, mais que 15% de plantas infectadas, com prejuízos desprezíveis.
O controle químico dos insetos vetores não forneceu controle, visto que os tripes virulífe-ros mantêm a migração durante longo perío-do, de fora para dentro das lavouras e conseguem in-fectar as plantas antes de morrer pelo efeito dos in-seticidas. As levas constan-tes de tripes requereram aplicações continuadas de inseticidas para que hou-vesse maior controle dos vetores.
Não foi possível, até o momento, encon-trar qualquer genótipo de soja resistente ao VQBS. Devido a isso, tem-se retardado a se-meadura com excelentes resultados.
Mosaico Cálico
O Vírus do Mosaico Cálico da Soja (VM-CaS) é transmitido por sementes de soja infec-tadas. As plântulas infectadas apresentam fo-lhas primárias com áreas amarelas. Nas fofo-lhas trifolioladas, os sintomas são variáveis ocor-rendo desde estrias amarelas até intensa clo-rose internerval ou cloclo-rose das bordas do tri-fólio, podendo sugerir fitotoxicidade ou até deficiência nutricional.
Fotomicrografias eletrônicas do VMCaS re-velam várias formas e tamanhos de partículas, variáveis desde partículas isométricas, com 18nm de diâmetro, até partículas baciliformes, com comprimentos de 58 a 36nm x 18nm.
Este vírus é transmitido por várias espéci-es de afídeos de maneira não persistente. A
Álvaro ensina quais as doenças viróticas que atacam a soja
As plantas
infectadas pelo
vírus do mosaico
Anão são
geralmente anãs
transmissibilidade do VMCaS por sementes é uma característica muito importante na sua dis-seminação. O VMCaS infecta além de alfafa e soja, outras espécies como feijão, batata, to-mate, ervilha e fumo, além de Chenopodium amaranticolor, Chenopodium quinoa e Malva parviflora.
A taxa de transmissão observada entre al-gumas cultivares de soja variou de 0 a 11,2%, mas, em média, foi sempre inferior a 5%.
É necessário considerar que a transmissão do VMCaS através de sementes, produzidas em plantas infectadas, constitui-se em impor-tante fonte de disseminação do vírus. Normal-mente o vírus do mosaico cálico da soja (VM-CaS) causa pouca redução no desenvolvimen-to da planta. Em alguns casos, plantas infecta-das artificialmente exibem sintomas severos, recuperam-se e voltam mais tarde a exibir os sintomas de intenso mosaico amarelo.
Até o presente momento, o vírus foi de-tectado em baixa intensidade, apenas nos es-tados de São Paulo e Paraná. No entanto, por ser transmitido por sementes e facilmente trans-mitido por afídios de soja-a-soja, o vírus pode apresentar importância ocasionalmente.
O controle é feito por cultivares resisten-tes. Um gene dominante é responsável pela resistência. Genótipos que possuem as culti-vares Pérola e Planalto como ancestrais, são resistentes.
Mosaico Anão
As plantas de soja infectadas pelo Vírus do Mosaico Anão (VME) são geralmente anãs. Alem disso, apresentam também superbrota-mento com redução e deformação do folíolo.
A infecção somente é observada em plantas no estádio de floração. Em plantas mais velhas podem ser observados encarquilhamento do limbo foliar e mosaico. Em alguns casos ob-serva-se o aparecimento de bolhas.
O VME pertence ao grupo dos geminivi-rus, sendo constituído por duas partículas ge-minadas medindo 18 x 32 nm e possui ácido nucléico constituído de uma fita simples e cir-cular de ADN em cada partícula.
O vírus é transmitido através da mosca branca (Bemisia tabaci). Normalmente, duran-te o período de cultivo da soja, encontram-se, no campo ou ao redor dele, plantas de Eu-phorbia sp. infectadas com o vírus e que tam-bém hospedam a mosca branca, a qual, ao migrar para a soja, dissemina o vírus na lavou-ra. O vírus mais comumente isolado é o Vírus do Mosaico da Euphorbia (VME), planta
dani-nha conhecida como leiteiro ou amendoim bra-vo (Euphorbia heterophyla).
Os sintomas em soja são normalmente tar-dios. Uma das explicações é que o vírus multi-plica-se inicialmente na hospedeira H. hetero-phyla, conhecido por leiteiro. Dessa planta o vírus é transmitido às plantas de soja pelas moscas brancas. Por essa razão o VME em soja está associado à presença do leiteiro. Em anos favoráveis à multiplicação do vetor há maior incidência dessa virose. Além de várias cultivares de feijão (Phaseolus vulgaris), o VME infecta a soja, alguns híbridos de fumo e Da-tura stramonium.
Não há estudos quantificando danos por este vírus na soja. No entanto, observações feitas em campo demonstram que plantas no-vas, quando infectadas, sofrem extrema redu-ção de porte e insignificante produredu-ção de va-gens.
Em Londrina, plantas de soja da cv. Bossi-er infectadas com o VME foram identificadas no campo e posteriormente colhidas. A com-paração com plantas sadias mostrou uma mé-dia de 8,85% de redução do número de va-gens e 5,75% de redução no peso dos grãos. Não se constatou mancha nos tegumentos.
Entre 687 genótipos avaliados no campo, próximos às plantas de leiteiro infectadas, não se identificou nenhum genótipo resistente. Como a principal planta hospedeira (E. hete-rophyla) do vírus é também uma planta dani-nha, o agricultor normalmen-te faz o controle da mesma, reduzindo a fonte de inóculo próxima aos campos de cul-tivo.
Mosaico Crespo
Sob a ação do Vírus do Mosaico Crespo (VMCrS), as plantas de soja apresentam folhas com mos-queado com formação de alguma rugosidade e bolhas. Normalmente os sintomas não apa-recem em plantas jovens (20-30 dias), pois na época dos primeiros plantios ainda não há ocor-rência de alta população de mosca branca (Be-misia tabaci) e de plantas de guanxuma (Sida sp) infectadas, ao redor dos campos de cultivo de soja.
O Vírus do Mosaico Crespo da Soja (VMCrS) causa forte clorose e mosqueado em folhas de guanxuma(Sida sp). E é facilmente identificado nessas plantas. O VMCrS possui partículas poliédricas, medindo 18x30mm e ocorre de forma geminada e é classificado como sendo membro do grupo geminivirus. O VMCS é transmitido através da mosca branca (Bemisia tabaci).
exis-tência simultânea de plantas hospedeiras in-fectadas e do vetor, próximos aos campos de soja. No Brasil, os hospedeiros mais comuns são Sida micrantha, Sida rhombifolia, Sida acu-ta, Abutilon striatum, Nicandra physaloides, algodão, batata, quiabo e feijão. A ocorrência desta virose em campos de produção de soja no Paraná é extremamente rara ou até ausen-te. Isto se deve, provavelmente, à baixa capa-cidade de transmissão do vírus da soja infecta-da para a soja sadia, através de mosca branca. Mas, a transmissão a partir de Sida micrantha e Sida rhombifolia para soja é mais alta. O con-trole é feito através da eliminação dessas es-pécies nos campos de cultivo.
Estudos conduzidos experimentalmente com o VMCrS demonstraram que plantas de soja infectadas através de mosca branca tive-ram sua produção reduzida entre 13 a 87%, dependendo da cultivar utilizada. À semelhança do VME, sua ocorrência está
associada à presença de plan-tas infectadas e da população de mosca branca no campo.
Mosaico Rugoso
O Mosaico Rugoso da Soja (VMRuS) foi detectado no Bra-sil, em 1987, infectando
plan-tas de soja das cultivares Doko e Cristalina, no Distrito Federal.
No campo as plantas infectadas exibem mo-saico severo, com leve encarquilhamento das folhas, que às vezes apresentam formação de bolhas verde-escuras circundadas por áreas verdes-claras, levemente translúcidas. Um in-teressante fato observado em plantas de soja infectadas com este vírus foi o aparecimento de sementes manchadas, à semelhança do que ocorre com o VMCS.
O mosaico rugoso da soja é causado no Brasil pelo vírus do mosaico-em-desenho do feijoeiro. Também tem sido descrito na Amé-rica Central e nos EUA, recebendo a denomi-nação de vírus do mosaico rugoso do feijoeiro e pertence ao grupo dos comovirus.
As partículas virais têm cerca de 28-30 nm de diâmetro. O VMRuS é transmitido no Bra-sil mais eficientemente por Cerotoma arcuata do que por Diabrotica speciosa. Há ainda a transmissão por C. ruficornis, Diabrotica bal-teata e D. adelpha. Não se constatou trans-missão do vírus por sementes de feijão.
O vírus do mosaico em desenho do feijo-eiro infecta ervilha e Chenopodium amaranti-color. As características apresentadas por este vírus permitiram incluí-lo no grupo dos como-virus. O vírus infecta várias cultivares de soja, além de ervilha e caupi. O VMRuS causa le-sões locais necróticas em Chenopodium
ama-ranticolor e mosaico sistêmico em Vicia faba. Como este vírus não se transmite por se-mentes de soja, sua principal fonte são plantas de feijão próximas à lavouras de soja. Em al-guns locais, as duas culturas co-existem. Des-sa forma o vírus pode se transferir do feijão para a soja, através dos insetos vetores (vaqui-nhas).
A incidência dessa virose no estado do Pa-raná, nos últimos 4 anos é baixa (< 2%). Ela depende da fonte de inóculo e da população dos vetores. Os danos em soja são variáveis, dependendo da incidência no campo, da ida-de das plantas quando da infecção e das culti-vares. Alguns genótipos são resistentes.
Constatou-se efeito sinérgico com o VMCS, na cultivar OCEPAR-4. A resistência a qualquer um dos dois vírus impede esse siner-gismo.
Técnicas de diagnose Na virologia, uma das maiores dificuldades é o diagnóstico de amos-tras de plantas aparente-mente infectadas por ví-rus. Em alguns casos, apenas a avaliação dos sintomas é suficiente para caracterizar o vírus envolvido. Em outros casos, há necessidade de se recorrer aos mé-todos tradicionais de sorologia, como o teste de dupla difusão em agar ou a técnicas mais avançadas como ELISA e RT-PCR.
Um explicação resumida dessas técnicas é apresentada a seguir.
No teste de dupla difusão em agar, prepa-ra-se um gel com 0,8% de agar e 1% de azida de sódio. Para o caso de vírus alongados, deve-se adicionar 0,5% de SDS (dodecil sulfato de sódio). Após aquecimento para dissolução dos reagentes, deposita-se 12 ml do meio numa placa de Petri. Após solidificação, perfuram-se perfuram-seis orifícios de 3-5 mm de diâmetro, dis-tanciados de 3 a 5 mm. No orifício central, deposita-se o antissoro, para a qual se quer testar a amostra. E nos orifícios ao redor de-positam-se as amostras (extrato de tecido apa-rentemente infectado, diluído 1;8, em água). Incuba-se em câmara úmida e faz-se leitura após 16-24 h. A presença de uma linha bran-ca signifibran-ca reação positiva.
Já no teste de ELISA indireto, associa-se à formação do complexo antígeno, anticorpo, uma propriedade enzimática, com formação de compostos coloridos. O anticorpo, produzido a partir de um determinado antígeno (vírus) é ligado a uma enzima que reconhecerá seu subs-trato, reagindo com ele e produzindo uma substância colorida cuja intensidade está
as-Na virologia,
uma das maiores
dificuldades é o
diagnóstico de
amostras
Planta do leiteiro infectada Heuphorbia hetrophyla
Planta do leiteiro infectada Heuphorbia hetrophyla
Álvaro Manuel R. Almeida, Embrapa Soja
sociada à concentração do antígeno na amos-tra. Portanto, neste teste têm-se propriedades qualitativas e quantitativas.
O teste de Elisa tem duas variantes princi-pais; ELISA direto tipo sanduíche e ELISA indi-reto. Por ser mais barato, em diagnose utiliza-se rotineiramente o teste indireto. Inicialmente, adiciona-se aos orifícios de uma placa de plásti-co (total de 96 orifícios), o extrato das amos-tras de plantas. Após incubação a 37oC lava-se
a placa e adiciona-se o antissoro purificado (de-nominado IgG) que irá se ligar ao antígeno (já ligado à placa ou à membrana de nitrocelulo-se). Faz-se nova incubação e, posteriormente, lavagem. Adiciona-se um anti-antissoro, produ-zido em outro animal e que está ligado a uma enzima. Normalmente, fosfatase alcalina. Após incubação e lavagem, adiciona-se o substrato que irá reagir com a enzima e produzirá um novo composto, colorido. Através de spectro-fotômetro determina-se a absorbância. Por com-paração com a absorbância do tecido sadio, determina-se se a amostra está ou não, infecta-da.
Normalmente, o limite é estabelecido mul-tiplicando-se a média do desvio padrão obtido com os valores das absorbâncias das amostras de tecido sadio, por 2. Qualquer valor acima desse valor obtido significa que a amostra está infectada.
Resumidamente, a técnica segue os seguin-tes passos;
1. Adicionar o antigeno (extrato de plan-ta) na placa e incubar a 37o C;
2. Lavar, adicionar algG e incubar; 3. Lavar, adicionar aanti-lgG e incubar; 4. Lavar, adicionar o substrato e aguardar a reação. Paralisar a reação e efetuar a leitura de absorbância.
Já a técnica denominada RT-PCR (Reverse Transcriptase – Polymerase Chain Reaction) não será descrita neste trabalho por estar publicada em livros específicos. Ela baseia-se em duas pro-priedades. Inicialmente, obtém-se o rna men-sageiro do vírus, o qual será utilizado para a obtenção de uma cópia de DNA, denominado c-DNA através da enzima transcriptase rever-sa. Esse DNA é necessário à reação seguinte, de PCR, que permitirá a amplificação do mes-mo. Nessa reação é necessário utilizar-se de primers específicos para cada vírus (ou grupo de vírus). O aparecimento de DNA significa que os primers foram adequados e, portanto, existe na amostra o vírus em questão.
Com esse DNA pode-se determinar a se-qüência de parte do genoma viral, permitindo compará-lo a milhares de seqüências descritas e assim identificá-lo.
Sementes de soja infectadas pelo vírus do mosaico comum
