Aclimatação de peixe de respiração aérea facultativa a água
hypóxica: afinidade pelo oxigênio do sangue e agentes alostéricos (*)
Roy £. W e b e r (<) S t e p h e n C . W o o d (') Bonnie J . D a v i s (')
R e s u m o
Afinidades p e l o o x i g ê n i o d o s a n g u e , concentra-ções e r i t r o c i t i c a s do n u c l e o s í d e o trifosfato ( N T P ) e o u t r o s p a r â m e t r o s h e m a t o l ó g i c o s , f o r a m m e d i d o s e m p e i x e s d e r e s p i r a ç ã o a é r e a f a c u l t a t i v a d o A m a -z o n a s , d e p o i s d a a c l i m a t a ç ã o e m á g u a o x i g e n a d a ( " n o r m ó x i c a " ) e á g u a h i p ó x i c a ( P 02 = 125 a 135 e
20 a 25 m m H g , r e s p e c t i v a m e n t e ) . N o b a g r e , H i p o s -t o m u s s p . e P -t e r y g o p l i c h -t y s s p . a h i p o x i a leva a in-t e r m i n e n in-t e s s u b i d a s à superfície p a r a in-t o m a r ar, re-s u l t a n d o e m níveire-s m a i re-s b a i x o re-s d e N T P , principal-mente pelo significativo d e c r é s c i m o de g u a n o s i n a 3-fosíato ( G T P ) . O s s u b s e q ü e n t e s a u m e n t o s n a afi-n i d a d e p e l o 02 d o s a n g u e a p a r e c e m a d a p t a d o s à s
t e n s õ e s de 02 internas m é d i a s e m t e m p o s m a i s
bai-x o s . N e n h u m a t r o c a s e m e l h a n t e foi v i s t a n a e n g u i a S y n b r a n c h u s , a q u a l r e s p i r a q u a s e que continua-m e n t e ar, q u a n d o continua-m a n t i d a e continua-m á g u a h i p ó x i c a . O s r e s u l t a d o s , s ã o d i s c u t i d o s e m t e r m o s de s u a significância a d a p t a t i v a e c o m p a r a d a c o m o s d a d o s s o -bre a t e m p e r a t u r a d o p e i x e .
I N T R O D U Ç Ã O
O rio Amazonas contém a maior fauna ictiológica de água doce do mundo. A s condi-ções físico-químicas de suas águas variam grandemente, no espaço e no tempo e a fauna ictiológica concordantemente exibe divergen-tes e múltiplas adaptações à fisiologia respira-tória. Particularmente notável é a diversidade
de adaptações orgânicas à respiração aérea (cf. Johansen, 1970) que parecem ter
evoluí-do, em resposta às baixas tensões de 02
geral-mente encontradas nos brejos e nos igarapés do Amazonas. Isto inclui modificações das guelras a fim de que eles não se fechem no
ar (enguia amazônica Synbranchus), o
desen-volvimento das papilas bucais (enguia elétrica,
Electrophorus) e a modificação por trocas
res-piratórias gasosas da bexiga de ar (Erythrinus,
Arapaima) ou aparelho gastrointestinal (os
ba-gres Ancistrls, Hypostomus e
Pterygoplich-thys). Muitos destes peixes são de respiração
aérea facultativa os quais respiram por bran-quias em água oxigenada, mas também respi-ram ar em água hipóxica. Este trabalho diz respeito às adaptações no sangue, seguindo a troca de respiração aquática para a aérea e vice-versa.
Estudos anteriores mostraram que a
afini-dade de 02 no sangue do peixe em que falta
a habilidade da respiração bimodal, é modulada
pelas tensões de 02 ambientais,
principalmen-te através das variações nas concentrações eritrociticas de nucleosideos trifosfatos (NTP) adenosina trifosfato (ATP) guanosina trifosfa-to (GTP). (Wood & Johansen, 1972, 1973a;
Wood et al. 1975; Geoghegan & Poluhowich,
1974; Weber et a/., 1975; Kaloustian &
Poluho-wich, 1976). Estes agentes alostéricos
di-minuem a afinidade de 02 da hemoglobina visto
que 2,3-difosforoglicerato (DPG) atua nos gló-bulos vermelhos dos mamíferos (Benesch & Benesch, 1967; Chanutin & Curnish, 1967). Na
enguia Anguilla foi notado que as diminuições
de NTP dos glóbulos vermelhos sob condições
hipóxicas, aumentam a afinidade de 02
sanguí-neo não somente pela interação alostérica di-reta reduzida, mas também, porque afeta a distribuição de Donnan, de prótons, através das membranas dos glóbulos vermelhos. Isto aumenta o pH intraeritrocítico das enguias em ambientes hipóxicos, e assim, a afinidade de Oj da hemoglobina via o efeito Bohr (Wood & Johansen, 1973). Além disso, os efeitos
dire-( * ) — Versâo original inglesa publlcada em Comp. Blochem. Physiol, vol. 62A(1). 1979. ( 1 ) — Department of Zoophysiology, University of Aarhus, DK-8000 Aarhus C , Denmark.
( 2 ) — Department of Physiology, University of New Mexico, Albuquerque, New Mexico 87131, U . S . A . ( 3 ) — Department of Biology, San Francisco State University, San Francisco, California 94132, U . S . A .
tos de NTP parecem ser atribuíveis à alta sen-sibilidade do componente catódico da
hemo-globina ao GTP. (Weber eí al., 1976).
Nossa participação na expedição do barco laboratorio "Alpha Helix no rio Amazonas, pró-ximo de Manaus, Brasil, deu-nos oportunidade para investigar a ocorrência de respostas adap-tacicnais correspondentes, no sangue de pei-xes com respiração aérea facultativa. Esta investigação diz respeito à adaptação à água
hipóxica dos bagres Hypostomus sp. e
Ptery-goplichthys sp. nos quais o estômago foi
mo-dificado para servir nas trocas gasosas entre sangue e o ar ritmicamente respirado (Cárter,
1935) e a enguia Amazônica, Synbranchus
mar-moratus. Estudos paralelos sobre os bagres
investigaram as mudanças no balanço ácido-base e sangue-tampão associado com aclima-tação hipóxida (Wood eí. a/., 1978) e os efeitos dos fatores orgânicos maiores dos glóbulos
vermelhos, sobre a ligação de O2 das
hemo-globinas fracionadas e compostas. (Weber & Wood, 1978).
M A T E R I A L E M É T O D O S
Os espécimes do bagre Hypostomus sp. (*)
Pterygoplichthys sp. (membros da família
Lo-ricariidae, que são extremamente distinguíveis pelo número de raios dorsais, 9 e 13
respec-tivamente) e da enguia da Amazônia
Synbran-chus marmoratus (Synbranchidae) foram
obti-dos do rio Solimões, cerca de 150km a oeste de Manaus, Brasil. Todos os espécimes da
Pterygoplichthys usados, pertencem à
"espé-cie I" (cf. Fink, 1977). Os bagres variaram de 50 a 115g de peso e as enguias de 160 a 550g. Exemplares de cada uma das espécies foram aclimatados, ou em água oxigenada ("normó-xica") ou em água hipóxica por 4 - 7 dias, a cerca de 30°C nos aquários (90 X 50cm) con-tendo 25cm de água aproximadamente. A s
ten-sões de 02 nos tanques normóxlcos variaram
entre 125 e 135 mm de H g . Nos tanques hi-póxicos, os peixes por si mesmos reduziram a
tensão O2 para um nível relativamente estável
entre 20 e 25 mm de H g . Ambos os grupos tinham acesso normal ao ar normal. Em água bem arejada, nenhuma respiração aérea foi observada. No meio ambiente hipóxico, no
en-tanto, o bagre foi observado regularmente na superfície engolindo ar (aproximadamente
ca-da 5 minutos). Em água hipóxica, o
Synbran-chus conservou seu focinho mais ou menos
permanentemente acima da superfície da água. Amostra de sangue foram tiradas através de punção cardíaca, utilizando-se seringas he-parinizadas. Valores de hematócitos foram determinados pela centrifugação do sangue em
tubos capilares. Tensões de O2 puro ou com
N2 puro e misturados anaerobicamente em
pro-porções fixadas de sangue completamente oxi-genada e desoxioxi-genada em tubos capilares de 125 /tl para produzir níveis conhecidos de
sa-turação de O 2 . Um radiómetro BMS-2 Mk II foi
usado para equilibrar as amostras de sangue,
e os valores de PO2 e pH foram medidos com.
eletrodos do Radiómetro, usando-se um BMS-3. Para determinar o efeito Bohr quantidades
va-riáveis de C O 2 foram misturadas com os gases
equilibrantes, usando-se bomba misturadora de gás Wõsthoff.
As concentrações de hemoglobina foram determinadas espectrofotomicamente (espec-trofotômetro Bechman D U ) , usando-se os coe-ficientes de extinção oc e P para oxi-hemoglo-bina humana (Antonini & Brunori, 1971). Para as dosagens de concentração no sangue total, amostras de 20 ¿il foram rapidamente mistura-das com alíquotas de 5 ml de água destilada. Esperimentos de controle mostraram uma boa concordância entre estes valores e aqueles obtidos por conversão ao derivado de cianome-temoglobina (reagentes Clay Adams C o . ) . O s níveis totais de nucleosídeo trifosfato (NTP) no sangue, foram determinados usando-se o teste químico da Sigma. A s contribuições de ATP e GTP foram estimadas pela cromatogra-fia de carnada como previamente descrita
(Weber ef al., 1976). O s níveis de fosfato
celular foram calculados a partir dos níveis de hematócritos, presumindo-se que todos os fos-fatos orgânicos são intracelulares.
R E S U L T A D O S E I N T E R P R E T A Ç Ã O C O M P A R A T I V A
A afinidade pelo oxigênio do sangue de
Hypostomus, aclimatado à água hipóxica são
significativamente maiores do que nos espéci-mes conservados em água oxigenada (normó-xica") (Fig. 1 ) . Em pH 7,4 e a 30°C. os
valo-( • ] — Hypostomus é referido freqüentemente como Plecostomus.
res de PM estão próximos de 15 e 25 mm Hg, respectivamente. Também na hipoxia resultou um efeito Bohr significativamente mais baixo (A log P»/ApH = — 0,18 v s . — 0,32 para peixes normóxicos).
13
o ? oi
2 , 2
7.4 7 i p H
F i g . 1 — T e n s ã o d e s e m i - s a t u r a ç ã o de oxigênio
(Px) e s u a d e p e n d ê n c i a d e p H do s a n g u e d e H y p o s
-t o m u s s p . a c l i m a -t a d o s à á g u a hipóxica (0,PO2 = 20 — 25 m m H g ) e á g u a " n o r m ó x i c a " (O.POj = 125 — 135 m m H g ) . A s e q u a ç õ e s de r e g r e s s ã o p a r a espé-cies h i p ó x i c a s e " n o r m ó x i c a s " s ã o r e s p e c t i v a m e n t e : log Px = 2.5 — 0 . 1 8 p H ( N = 9, r = — 0.72)
espé-c i m e s h i p ó x i espé-c a s ) , e log Px = 3.7 — 0 . 3 2 p H ( N = 10,
r = — 0.89) ( e s p é c i m e s " n o r m ó x i c a s ) .
A afinidade pelo 02 mais elevada nos
pei-xes hipóxicos correlaciona-se com concentra-ções mais baixas de NTP {Tabela I, Fig. 2 ) . A concentração inferior de fosfato em peixe hipóxico é também compatível com o efeito Bohr mais baixo nestes animais, em vista das ligações mais fortes dos anions fosfato, com a diminuição do p H . Separadamente destas in-terações alostéricas diretas, é provável que o nível inferior de NTP em eritrócitos de peixes hipóxicos aumentará posteriormente a
afinida-de afinida-de 02 na hemoglobina, pelo seu efeito no
pH intracelular (Duhm, 1971; Wood & Johan-sen, 1973a). A aclimatação hipóxica induziu a uma diminuição similar nos níveis
eritrocíti-cos de NTP em Pterygoplichthys (Tabela I, Fig.
2) e B. J . Davis (resultados inéditos) tinha
observado a mesma resposta em Ancistris
cha-gresl, uma espécie do Panamá.
A" separação cromatográfica de NTP reve-lou que em ambos os bagres, o sangue de in-divíduos normóxicos contém um pouco mais
GTP do que a ATP. Entretanto, considerando que o ATP diminuiu apenas ligeiramente du-rante a aclimatação hipóxica, os níveis de GTP
em Hypostomus e Pterygoplichthys diminuíram
significativamente (P < 0,001 e P < 0,01, res-pectivamente) . Estas descobertas (Tabela I, Fig. 2) sugerem que as trocas observadas na
afinidade pelo 02 do sangue são primariamente
devidas às variações nos níveis eritrocíticos do GTP.
iBi
B
P f f y q o p l i C h t h y s S y n b r o n c h u s
I I G I P
I I ATP
- N o r m o x i e " H y p o x i c " N o r m o x l c " H y p o x i c T í o r m o x i e " H y p o x i c
F i g . 2 — C o n c e n t r a ç õ e s e m m M p o r litros de gló-b u l o s v e r m e l h o s d e A T P ( e s c u r e c i d o ) e G T P (gló-bran- (bran-c o ) e m H y p o s t o m u s , P t e r y g o p l i (bran-c h t h y s , e Synbran-c h u s a Synbran-c l i m a t a d o s a á g u a hipóxiSynbran-ca ou " n o r m ó x i Synbran-c a "
Eritrócitos de Synbranchus continham um
pouco mais de ATP do que GTP (cerca de 2,0 e 1,5 m M x l - ' nos glóbulos vermelhos, respec-tivamente) (Tabela I ) . Em contraste aos resul-tados nos glóbulos vermelhos do bagre, nenhu-ma troca significativa no nível de qualquer fosfato foi observado em condições de aclima-tação hipóxica.
Em nenhuma das espécies estudadas a aclimatação hipóxica afetou significativamente o hematócrito. O s níveis de hemoglobina no sangue do bagre, indicaram as capacidades de
02 de cerca de 11 e 9 vol. % aclimatados
"hi-póxicas" e "normóxicos", respectivamente; em
Synbranchus os valores correspondentes foram
de 22 vol % (Tabela I ) . Estes peixes então
diferem da enguia européia Anguilla onde um
nível aumentado de hemoglobina sob condição
hipóxica aumenta a utilização do O2 ligado à
hemoglobina, resultando em um rendimento
cardíaco menor para uma dada liberação de 0¿
T A B E L A I — A s a f i n i d a d e s d e oxigênio e c a r a c t e r í s t i c a s h e m a t o l ó g i c a s d o s a n g u e d e p e i x e c o m r e s p i r a ç ã o a é r e a f a c u l t a t i v a a c l i m a t a d a s a c o n d i ç õ e s " n o r m ó x i c a s " ( P 02 = 125 a 135 m m H g ) e h i p ó x i c a s ( P O , = 20 a
25 m m H g ) . ( A s c a p a c i d a d e s d e oxigênio d o s a n g u e e s t ã o c a l c u l a d a s p e l a c o n c e n t r a ç ã o de h e m o g l o b i n a ) .
G r a u s de E s p é c i e D i f e r e n ç a s l i b e r d a d e
" N o r m ó r i c a " " H y p ó x i c a " S i g n i f i c a t i v a s ( N + N2- 2 )
H y p o s t o m u s a f i n i d a d e d e oxigênio H c t
[ A T P ] ( m M / 1 c é l u l a ) [ G T P ] ( m M / 1 c é l u l a ) [ A T P + G T P ] ( m M / 1 c é l u l a ) [ H e m e ] ( m M / 1 c é l u l a ) [ A T P + G T P ] / [ h e m e ] ( M / M ) O j c a p a c i d a d e (vol. % , s a n g u e ) Pterygoplichthys H c t
[ A T P ] ( m M / 1 c é l u l a ) [ G T P ] ( m M / 1 c é l u l a ) [ A T P + G T P ] ( m M / 1 c é l u l a ) [ H e m e ] ( m M / 1 c é l u l a )
[ A T P + G T P ] / [ h e m e ] ( M / M ) O j c a p a c i d a d e (vol. % , s a n g u e ) S y n b r a n c h u s H c t
[ A T P ] ( m M / 1 c é l u l a ) [ G T P ] ( m M / 1 c é l u l a ) [ A T P + G T P ] ( m M / 1 c é l u l a ) [ H e m e ] ( m M / 1 c é l u l a ) A T P + G T P / [ h e m e ] ( M / M ) O j c a p a c i d a d e (vol. % , s a n g u e )
log Ps, = 3,7-0,32pH log P ^ = 2,5-0,18pH — 17 31,5 ( ± 6,0 ) 31,1 ( ± 1,4 ) — 6
3,07 ( ± 0,54) 2,38 ( ± 0,23) — 4 4,84 ( ± 0,61) 1,49 ( ± 0,11) P < 0 , 0 0 1 4 7,91 ( ± 1,10) 3,87 ( ± 0,21) P < 0 , 0 1 4 15,59 ( ± 0,22) 12,63 ( ± 0,64) P < 0,001 6
0,47 ( ± 0,09) 0,28 ( ± 0,04) P < 0 , 0 1 6 11,15 ( ± 2,36) 8,81 ( ± 0,64) — 6 28.7 ( ± 6,1 ) 23,4 ( ± 2,9 ) — 6 3,99 ( ± 0,76) 3,66 ( ± 0,66) — 6 5,90 ( ± 0,92) 2,88 ( ± 1,00) ( P < 0 , 0 1 ) 6 9,89 ( ± 1,63) 6,54 ( ± 1,83) ( P < 0 , 0 5 ) 6 17,40 ( ± 2,02) 16,48 ( ± 1,89) — 6
0,57 ( ± 0,10) 0,40 ( ± 0,12) — 6 11,05 ( ± 1,89) 8,64 ( ± 1.60) — 6 48.8 ( ± 5,4 ) 53,5 ( ± 8,1 ) — 5 2,03 ( ± 0,86) 2,16 ( ± 1,03) — 5 1,67 ( ± 0,37) 1,37 ( ± 0,57) — 5 3,70 ( ± 1,21) 3,54 ( ± 0,61) — 5 20,59 ( ± 0,69) 17,63 ( ± 2,44) — 5 0,18 ( ± 0,06) 0,20 ( ± 0,05) — 5 22,49 ( ± 2,68) 21,08 ( ± 4,23) — 5
D I S C U S S Ã O
A s afinidades mais elevadas pelo O 2 no
sangue e as mais baixas concentrações de co-fatores eritrocíticos alostéricos nos peixes hipóxicos, foram inesperados na base da su-posição de que durante a respiração aérea as tensões de oxigênio sanguíneo serão pelo me-nos tão altas quanto as tensões quando o peixe respira água bem oxigenada. A s respostas às propriedades respiratórias do sangue do bagre , entretanto, relembram aquelas previamente re-gistradas em peixes das regiões temperadas, nos quais falta a habilidade de respiração
bi-modsl, onde afinidade aumentada de O2 em
peixes hipóxicos melhora a carga do 02 do
sangue nas guelras e a utilização de 02 pelos
tecidos. O s resultados indicam que, apesar da
respiração aérea, as tensões internas de 02 em
bagres, expostos a águas hipóxicas diminuíram a níveis que são bastante baixos para induzir depressão de fosfato eritrocítíco e que o
au-mento seguinte da afinidade pelo 02 no sangue
é uma resposta às tensões de 02 internas
mé-dias em vez das tensões de 02 no médio
respi-ratório (ar).
Há diversas maneiras pelas quais os
au-mentos das afinidades pelo 02 no sangue
po-dem ser adaptativos ao transporte eficiente de
02 durante a respiração aérea. Primeiramente
ele favorecerá a maior depressão de 02 do ar
respirado pelo peixe, seguindo intervalos maio-res de tempo entre as emersões para a su-perfície da água. Em segundo lugar, poderia ser também importante em vista da evidência da troca gasosa menos eficiente durante a respiração aérea, resultando em tensões
in-feriores de 02 do sangue (Cárter, 1931). Nas
guelras, a vascularização é mais densa, o san-gue está em contato mais restrito com a su-perfície respiratória, e a área respiratória ge-ralmente excede esta no intestino. Cárter
(1931) estimou que no Hoplosternum a
fície intestinal respiratória é aproximadamente a metade desta nas guelras da maioria dos outros peixes.
A pressão seletiva favorecendo a alta
afi-nidade pelo O2 do sangue pode também
depen-der das adaptações circulatórias comuns nos peixes de respiração aérea. Isto se refere ao desvio respiratório do sangue referente no sis-tema venoso, que resulta na perfusão arterial sistêmica com sangue venoso misturado, (Cárter 1935; Johansen 1970) pelo qual uma
afinidade pelo O2 aumentada melhoraria a
per-da de eficiência causaper-da pela condição mista do sangue arterial. Semelhante significância adaptativa está de acordo com a relativamente
alta afinidade pelo O2 do sangue da enguia
elé-trica, Electrophorus (Johansen eí. al. 1968).
Finalmente, a afinidade aumentada pelo O2 do
sangue em bagre durante a respiração aérea,
deveria diminuir a perda de O2 nas águas
hi-póxicas em redor.
Nas espécies de bagres estudadas, as tro-cas quantitativas nos cofatores de fosfato eri-trocítico indicam que o GTP desempenhará um papel mais importante do que o ATP na modu-lação da afinidade pelo oxigênio sanguíneo. Isto está de acordo com as observações sobre outros peixes, que contenham significativas concentrações eritrocíticas de GTP tais como
a enguia Anguilla ou o peixe pulmonado Pro
topterus (Weber ef al., 1975, 1976; Johansen
et al., 1976). Tentou-se especular qual é o
papel do GTP nestas espécies isentas de ATP envolvido no metabolismo energético dos eri-trócitos de peixes metabolicamente ativos. Correlacionando-se o maior efeito de GTP do que ATP sobre a afinidade pelo oxigênio da
hemoglobina do peixe (Lykkeboe ef al., 1975;
Weber et al., 1975; Kaloustian & Poluhowich
1976; Weber & Wood, 1978) está o descobri-mento (Weber, inédito) de que a influência
modulante do GTP sobre a afinidade de 02 é
menos inibida do que a de ATP nas mesmas concentrações, pela complexidade com cátions bivalentes.
Um problema associado com a adoção do hábito de respiração aérea é uma retenção elevá"da de C 02 (Howell, 1970), o qual poderia diminuir o pH do sangue e assim a afinidade
do 02 afetando o resultado dos níveis
diminuí-dos de cofator nos espécimes aclimatadiminuí-dos a hipoxia, conforme foi mostrado em um
traba-lho desta coletânea íWood er al., 1378) isto é
prevenido no bagre pelo aumento de bicarbo-nato no plasma, o qual estabiliza o pH do san-gue durante a respiração aérea.
A ausência de respostas hipóxicas
simila-res na afinidade de 02 e nas concentrações do
cofator no sangue de Synbranchus é
consisten-te com seu comportamento respiratório dife-rente, e com a observação (Johansen, 1966)
de que as saturações arteriais de O2 durante a
respiração aérea excedem daquelas durante a respiração aquática que mostram a alta eficiên-cia das guelras nas trocas gasosas aéreas. A ausência de diminuições adaptativas nos ní-veis eritrocíticos de NTP nesta espécie reforça assim a interpretação de que os níveis dimi-nuídos de fosfato dos glóbulos vermelhos no bagre hipóxico são adaptadas ao transporte
interno de 02 a baixas tensões de 02.
A G R A D E C I M E N T O S
Esta pesquisa foi feita a bordo do barco "Alpha Helix" na expedição ao Amazonas em 1976 e foi financiada pela bolsa PCM-75-06451 da Nation Science Foundation (NSF), da bolsa HL-18026 ( S . W . ) dos National Institutes of Health e da bolsa 5116734 ( R . E . W . ) do Danish Natural Science Research Council. Agradecimentos são também devidos ao go-verno brasileiro por permitir a expedição.
S U M M A R Y
B l o o d o x y g e n affinities, e r y t h r o c y t i c n u c l e o s i d e t r i p h o s p h a t e c o n c e n t r a t i o n s ( N T P ) a n d other h e m a t o l o g i c a l p a r a m e t e r s w e r e m e a s u r e d in f a c u l t a t i v e air-breathing fish f r o m the A m a z o n after a c c l i m a t i o n to well a e r a t e d ( " n o r m o x i c " ) and h y p o x i c w a t e r ( P 02 = 125 to 135 a n d 20 to 25 m m ,
r e s p e c t i v e l y ) . I n the a r m o r e d c a t f i s h H y p o s t o m u s s p . a n d P t e r y g o p l i c h t h y s sp., h y p o x i a i n d u c e s i n t e r m i t t e n t s u r f a c i n g to g u l p air a n d r e s u l t s in l o w e r N T P levels, chiefly t h r o u g h significant d e c r e a s e s in g u a n o s i n e t r i p h o s p h a t e ( G T P ) . The s u b s e q u e n t i n c r e a s e s in b l o o d Oz affinity a p p e a r
a d a p t i v e to l o w e r e d t i m e a v e r a g e internal Oa
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