UNIVERSIDADE FEDERAL DE SANTA CATARINA CENTRO DE CIÊNCIAS BIOLÓGICAS
MESTRADO EM NEUROCIÊNCIAS
LUIZ ARTHUR RANGEL CYRINO
EFEITO DA QUERCETINA NO EXTRAVASAMENTO PLASMÁTICO
INDUZIDO PELA SUBSTÂNCIA P NA DURA-MÁTER, CEREBELO,
BULBO OLFATÓRIO E CÓRTEX DE RATOS.
Orientador: Prof. Dr. Mauro Nicoiau
FLORIANÓPOLIS 2000
LUIZ ARTHUR RANGEL CYRINO
EFEITO DA QUERCETINA NO EXTRAVASAMENTO PLASMÁTICO INDUZIDO PELA SUBSTÂNCIA P NA DURA-MÁTER, CEREBELO, BULBO OLFATÓRIO E
CÓRTEX DE RATOS.
Dissertação apresentada como requisito parcial para a obtenção do grau de Mestre. Curso de Pós-Graduação em Neurociências, Centro de Ciências Biológicas, Universidade Federal de Santa Catarina.
Orientador: Prof. Dr. Mauro Nicolau.
Florianópolis
Dedico esse trabalho com a m o r à L isia n e, M au rício e D ébora e a todos os a m ig o s e p a c ie n te s que com imensa paciência souberam enfrentar os momentos de minha ausência. Dedico também com c a rin h o aos meus p a is , pelo esforço que fizeram para que eu pudesse alcançar esta etapa da minha vida.
A GRADECIMENTOS
Ao professor Mauro Nicolau,
orientador e amigo, que mostrou -sepaciente, habilidoso e apoiador, exemplo de homem e cientista.Aos professores e amigos, Cristina, Moacir e Cláudio,
pela amizade cultivada, pela convivência extremamente agradável e pelos ótimos papos sobre comportamentohumano e animal, evolução, educação epolitic a.
Aos professores,
pelas orientações, sugestões e crescimento profissional durante a execução deste mestrado.Aos amigos e colegas pós-graduandos,
Ana, Dib, Viviane, Vânia, Rosane, Vera, Silvia e Rita pelos momentos prezeirosos e de descontração duran te, as aulas, trabalhos e as festas.A técnica Luciane P. N. Hãckl,
que auxiliou na preparação e execução de todos os trabalhos experimentais.A
amiga Luciane,
que sem sua ajuda este trabalho se tornaria uma tarefa quase impossível.A professora Ana Lucia S. Rodrigues,
pelos incentivos, sugestões e correções construtitivas que ajudaram a despertar um espírito crítico e habilidade para execução do presente trabalho.Aos professores, Petrônio Guimbala, Julio Schruber, Gilmar Rzinger, Jair
Venâncio, Silvio Bertodi e Lenir Krutul,
por terem apoiado meu crescimento profissional.Aos comandantes do S“*Batalhão da Polícia Militar,
por terem sempre colaborado e apoiado a realização deste mestrado.Ao amigo William,
cuja participação e habilidade na área de computação, ajudou a despertar minha curiosidade para esse campo da ciência e auxiliou na execução do presente trabalho.Aos amigos, Ronnie e Bruno,
que me auxiliaram nos experimentos, pela amizade, carinho, companherismo, e pelas boas conversas sobre a v ida e as suas vicissitudes.Aos secretários, Nivaldinho e Gilsa,
pelo apoio dedicado na realização deste trabalho.Aos técnicos, Carlinhos, Nivaldo e Vilma,
pelo auxílio na execução dos expermimentos e pelos cafezinhos e bolos, transformando o ambient e sempre mais agradável.A todos,
que direta ou indiretamente contribuíram para a realização deste trabalho meu profundo agradecimento.“Todos os fenômenos mentais e espirituais são produtos da matéria. Nenhuma noção poderia ser mais perturbadora as profundas tradições do ocidente do que a afirmação de que a mente por mais complexa e poderosa - é simpiesmente um produto do
cérebro.” Darwin
INDICE
R E S U M O A BS TRA CT 1.0.- IN TR O D U Ç Ã O ...01 1.1.- T a q u i c i n i n a s ... 02 1 . 1 . 1 H i s t ó r i c o ...02 1.1.2.- S í n t e s e ... 03 1.1.3.- D i s t r i b u i ç ã o das t a q u i c i n i n a s e r e c e p to r e s -- -0 4 1.1.4.- A g o n i s t a s e a n t a g o n i s t a s ... 10 1.1.5.- M e ca n is m o s i n t r a c e l u l a r e s ... 12 1.1.6.- Enzimas e m e t a b o l i z a ç ã o ... 13 1.1.7.- A s p e c t o s f i s i o p a t o i ó g i c o s ... ...17 1.2.- Inflamação n e u r o g ê n i c a ... 19 1.3.- Extr av as am en to p l a s m á t i c o ...22 1.4.- Q u e r c e t i n a ...-...26 1.5.- Meninges e b a rre ir a h e m a t o e n c e f á l i c a . ... 31 2 .0 .- O B J E T I V O S ...38 3 .0 .- M ATE RI AIS E M É T O D O S ...41 3.1.- A n i m a i s ... 42 3.2.- Es tu d o s do e x t r a v a s a m e n to p l a s m á t i c o ...42 3.2.1.- Azul de Evans co mo m a r c a d o r ...42 3.2.2.- P r o c e d im e n t o e x p e r i m e n t a l ... 43 3.3.- G ru p o s e x p e r i m e n t a i s ...- ... 46 3.3.1. - A v a li a ç ã o do e x tr a v a s a m e n to p la s m á t i c o i n d u z i d o pela s u b s t â n c i a P na d u ra -m át e r,c e re b e lo , b u lb o o l f a t ó r i o e c ó r t e x ...46 3.3.2. - I n v e s t ig a ç ã o da p a r t i c i p a ç ã o da enzima e n d o p e p t i d a s e neutra e da enzima c o n v e r s o r a da a n g i o t e n s i n a atravé s do uso de i n i b i d o r e s e n z im á t i c o s e s p e c í f i c o s ...46 3.3.3. - A v a li a ç ã o do papel da q u e r c e t in a no e x t r a v a s a m e n to p la s m á t ic o ...47 3.3.4. - I d e n t i f i c a ç ã o do m e d i a d o r in f l a m a t ó r i o e n v o l v i d o no e x t r a v a s a m e n to p la s m á ti c o a tra v é s do uso de a n t a g o n i s t a s ...47 3.4.- A n á l i s e e s t a t í s t i c a ... 48 3.5.- D r o g a s ...48 3.6.- E q u i p a m e n t o s ... 49 4.0.- R E S U L T A D O S ...-— 50 5.0.- D I S C U S S Ã O ... 62 6.0.- B IB L IO G R A F I A ... 82
RESUMO
N e s te e s t u d o p r o c u r a m o s a v a l ia r o e fe it o da q u e r c e t i n a no e x t r a v a s a m e n t o p l a s m á t i c o in d u z id o pela s u b s t â n c ia P em d i v e r s o s t e c i d o s do s i s t e m a n e r v o s o ce n t ra l de ratos ( c e r e b e l o , b u lb o o l f a t ó r i o e c ó r te x ) as si m como na d u r a - m á t e r , e e x a m i n a m o s t a m b é m o e f e i t o da in ib iç ã o da e n d o p e p t i d a s e n e u tr a p e lo f o s f o r a m i d o n e da en zi m a c o n v e r s o r a da a n g i o t e n s i n a pe lo c a p t o p r i l e n z i m a s que in a t iv a m a s u b s t â n c i a P. Q u e r c e t i n a , é um f l a v o n ó i d e p r e s e n te na n a tu re z a , que p o s s u i a t i v i d a d e in i b i t ó r i a m u l t i e n z i m á t i c a . A a v a li a ç ã o do e x t r a v a s a m e n t o p l a s m á t i c o foi f e it a com a t é c n ic a do c o r a n t e de azu l de Ev an s, d e t e r m i n a d a por e s p e c t r o f o t o m e t r i a (620 nm) e e x p r e s s o em (xg/g de pe s o de t e c id o seco. A s u b s t â n c ia P (10 n m o l / K g e 30 n m o l /K g , i.v.) a u m e n t o u o e x t r a v a s a m e n t o p l a s m á t i c o de m o d o d o s e r e l a c i o n a d a na d u r a - m á t e r (47,4 ± 4,2 para 72,2 ± 4,9 e 96,1 ± 8,4), não a l t e r a n d o nos o u t ro s t e c i d o s . A i n i b i ç ã o f a r m a c o l ó g i c a s e l e t i v a da e n d o p e p t i d a s e neu tra e da e n z im a c o n v e r s o r a da a n g i o t e n s i n a com f o s f o r a m i d o n e c a p t o p r i l r e s p e c t i v a m e n t e a u m e n t a r a m o e x t r a v a s a m e n t o p l a s m á t i c o i n d u z i d o pela s u b s t â n c i a P na d u r a - m á t e r de r a to s . O p r é - t r a t a m e n t o i s o la d o com q u e r c e t i n a ( 3 0 m g / k g , v . o.) a u m e n t o u o e x t r a v a s a m e n t o p la s m á t ic o , em r e la ç ã o ao c o n t r o l e , em t o d o s os t e c i d o s : d u r a - m á t e r (4 7,4 ± 4,2 para 8 8, 6± 3,6), c e r e b e l o (3 7 , 7 ± 2,1 para 4 9 , 5 + 1,4), b u lb o o l f a t ó r i o (4 1,2 ± 4,1 para 56 ,7 ± 2,1) e c ó r t e x ( 4 2, 4 ± 3,5 para 6 6 ,0 ± 5,9 ). O t r a t a m e n t o p r é v i o dos a n i m a i s com q u e r c e t i n a (30 m g /kg , v.o) p o t e n c i a l i z o u s i g n i f i c a t i v a m e n t e o e x t r a v a s a m e n t o p l a s m á t i c o , i n d u z i d o pela s u b s t â n c i a P e x ó g e n a (10 n m o l /K g , i.v.) na d u r a - m á t e r ( 1 0 0 , 4 ± 8,8), não a l t e r a n d o nos o u t ro s t e c i d o s . A q u e r c e t i n a p r o v o c o u um a u m e n t o no e x t r a v a s a m e n t o p l a s m á t i c o q u a n d o a d m i n i s t r a d a i s o l a d a m e n t e e p o t e n c i a l i z o u o e x t r a v a s a m e n t o p l a s m á t i c o i n d u z id o pe la s u b s t â n c i a P na d u ra - m á te r, t e c i d o o n d e há i n e r v a ç ã o p e p t i d é r g i c a , o que c o i n c i d e com a m o d u l a ç ã o da e n d o p e p t i d a s e n e u t ra e da e n z im a c o n v e r s o r a da a n g i o t e n s i n a . P o r t a n t o , é p o s s í v e l a d m i ti r que a aç ã o p o t e n c i a l i z a d o r a da q u e r c e t i n a seja d e v id o a in ib i ç ã o de uma d e s s a s e n z i m a s . A l é m do ma is, o p r é - t r a t a m e n t o com a n t a g o n i s t a s do s r e c e p t o r e s NK-1 e B2 f o r a m u s a d o s para i d e n t i f i c a r os m e d i a d o r e s do e x t r a v a s a m e n t o p l a s m á t i c o in d u z id o pela q u e r c e t i n a . Os r e s u l t a d o s m o s t r a r a m que s o m e n t e o a n t a g o n i s t a dos r e c e p t o r e s NK-1 b l o q u e o u es te e f e i t o , s u g e r i n d o que a r e d u ç ã o na d e g r a d a ç ã o da s u b s t â n c i a P foi a c a u sa do a u m e n t o no e x t r a v a s a m e n t o p l a s m á t i c o in d u z i d o pela q u e r c e t i n a na d u r a - m á t e r e da p o t e n c i a ç ã o do e f e it o da s u b s t â n c i a P.
A B S T R A C T
In t h is w o r k we e v a l u a t e d th e e f f e c t o f q u e r c e t i n , a n a t u r a l l y o c c u r r i n g f l a v o n o i d w h i c h is k n o w n to i n h i b i t a v a r i e t y o f e n z y m e s , on th e p l a s m a e x t r a v a s a t i o n i n d u c e d by s u b s t a n c e P in s e l e c t e d rat c e n t r a l n e r v o u s s y s t e m t i s s u e s ( c e r e b e l l u m , o l f a c t o r y bu lb and c o r t e x ) and d u r a m a t e r . We a l s o e x a m i n e d t h e e f f e c t o f s e l e c t i v e i n h i b i t i o n o f th e s u b s t a n c e P m e t a b o l i s i n g e n z y m e s n e u t r a l e n d o p e p t i d a s e and a n g i o t e n s i n c o n v e r t i n g e n z y m e by p h o s p h o r a m i d o n and c a p t o p r i l , r e s p e c t i v e l y . P l a s m a e x t r a v a s a t i o n was e v a l u a t e d w it h E v a n s b lu e dy e, q u a n t i f i e d by s p e c t r o p h o t o m e t r y ( 6 2 0 nm) and e x p r e s s e d as ^ g / g o f d r y t i s s u e . S u b s t a n c e P (10 n m o l / k g and 30 n m o l / k g , i . v . ) i n c r e a s e d p l a s m a e x t r a v a s a t i o n in a d o s e d e p e n d e n t m a n n e r in t h e d u r a m a t e r ( c o n t r o l 4 7 .4 ± 4 .2 ; s u b s t a n c e P, 10 n m o l / k g , 7 2 . 2 ± 4 .9 ; s u b s t a n c e P, 30 n m o l / k g , 96.1 ± 8 .4 ) w i t h no e f f e c t in th e o t h e r t i s s u e s ; t h is e f f e c t w a s p o t e n t i a t e d by b o t h p h o s p h o r a m i d o n an d c a p t o p r i l . Q u e r c e t i n (30 m g / k g v . o . ) i n c r e a s e d p l a s m a e x t r a v a s a t i o n in r e l a t i o n to c o n t r o l in all o f th e t i s s u e s s t u d i e d ( d u r a m a t e r , 4 7 . 4 ± 4 .2 to 8 8 . 6 ± 3.6; c e r e b e l l u m , 3 7 . 7 ± 2.1 to 4 9 . 5 ± 1.4; o l f a c t o r y b u lb , 4 1 . 2 ± 4.1 to 5 6 . 7 ± 2 .1 ; c o r t e x , 4 2 . 4 ± 3. 5 to 6 6 .0 ± 5 . 8 ). Q u e r c e t i n p r e t r e a t m e n t s i g n i f i c a n t l y p o t e n t i a t e d th e p l a s m a e x t r a v a s a t i o n i n d u c e d by e x o g e n o u s s u b s t a n c e P (10 n m o l / k g ) in th e d u r a m a t e r ( 7 2 . 2 ± 4 . 9 to 1 0 0 . 4 ± 8 . 8 ) . P r e t r e a t m e n t w i t h H OE 140 , b u t n o t RP 6 7 5 8 0 ( s p e c i f i ca n t a g o n i s t s o f NK-1 and B2 r e c e p t o r s , r e s p e c t i v e l y ) b l o c k e d th e q u e r c e t i n e f f e c t on s u b s t a n c e P i n d u c e d p l a s m a e x t r a v a s a t i o n in t h e d u r a m a t e r . T h i s s t u d y s u g g e s t s t h a t th e p l a s m a e x t r a v a s a t i o n i n d u c e d by q u e r c e t i n in rat d u r a m a t e r is m e d i a t e d by t h e i n h i b i t i o n o f s u b s t a n c e P d e g r a d a t i o n and t h e s u b s e q u e n t p o t e n t i a t i o n o f e x o g e n o u s s u b s t a n c e P e f f e c t s . P l a s m a e x t r a v a s a t i o n i n d u c e d by q u e r c e t i n in th e c e n t r a l n e r v o u s s y s t e m t i s s u e s s t u d i e d , w h i c h are b e l i e v e d no t to c o n t a i n a p e p t i d e r g i c i n n e r v a t i o n , r e q u i r e s f u r t h e r i n v e s t i g a t i o n .
1.1. - T a q u i c i n i n a s
T a q u i c i n i n a s p e rt e n c e m à uma f a m í l i a de n e u r o p e p t í d e o s c o n s e r v a d o s e v o l u c i o n a r i a m e n t e (K h a w a ja e R o g e rs , 1996). O nome t a q u i c i n i n a s r e su l to u da s i m i l a r i d a d e f a r m a c o l ó g i c a d e s s e s p e p t í d e o s com a b r a d ic i n i n a , que agia c o m o m e d i a d o r i n f l a m a t ó r i o e n d ó g e n o o qual a p r e s e n t a v a uma c o n t r a ç ã o lenta do íleo de c o b a ia s d i s t i n t a m e n t e do que o c o r r i a com as t a q u i c i n i n a s ao qual tin h a m p e rf il f a r m a c o l ó g i c o s e m e l h a n t e , porém in d u z i a m uma c o n t r a ç ã o im e d i a t a e rá p i d a do m e s m o t e c i d o ( Pe rn o w, 1963). Em m a m í f e r o s , as t a q u i c i n i n a s i n c lu e m os s e g u i n t e s n e u r o p e p tí d e o s : s u b s t â n c ia P, a n e u r o c i n i n a A e n e u r o c i n i n a B, as qu ais e x ib e m a f i n i d a d e p r e f e r e n c i a l pe lo s r e c e p t o r e s e s p e c í f i c o s : NK-1, NK-2 e NK-3, r e s p e c t i v a m e n t e ( R e g o l i et al., 1994). Estas três s u b s t â n c i a s são c a r a c t e r i z a d a s pela s e q ü ê n c ia co mum P h e - X - G l y - L e u - M e t - N H 2 que p a re c e ser e s s e n c i a l para a a ti v i d a d e b io ló g ic a d e s t e s p e p t í d e o s ( E s c h e r e Re g o li et al, 1989). O p r im e i r o m e m b r o da f a m í l i a das t a q u i c i n i n a s a se r d e s c o b e r t o em 1931 por Von E u le r e G a d d u m foi a s u b s t â n c i a P, ob tida do i n t e s t i n o e c é r e b r o de c a v a l o s por
e x t r a ç ã o a l c o ó li c a , c a u s a n d o v a s o d i l a t a ç ã o p e r i f é r i c a e c o n t r a ç ã o i n t e s t in a l enn c o e lh o s a t r o p i n i z a d o s (von E u l e r e G a d d u m , 1931). Qu as e 50 anos d e p o is da d e s c o b e r t a da s u b s t â n c i a P, dua s o u t ra s t a q u i c i n i n a s fo ra m d e s c r i t a s q u a s e que s im u l t a n e a m e n t e por d i f e r e n t e s g r u p o s e se t o r n a r a m c o n h e c id a s co m o n e u r o c i n i n a A e n e u r o c i n i n a B ( K i m u ra et al., 1983; Maggio et al., 1983). 1 . 1 . 2 . - S í n t e s e Estes n e u r o p e p t í d e o s são d e r i v a d o s de p r o t e í n a s p r e c u r s o r a s , as p r é - p r ó - t a q u i c i n i n a s , as q u a is são c o d i f i c a d a s por dois gene s d i f e r e n t e s . O gene c o d i f i c a d o r da p r é - p r ó - t a q u i c i n i n a - A , c o n té m a s e q ü ê n c i a c o d i f i c a d o r a para a s u b s t â n c ia P e n e u r o c i n i n a A, por ou tro lado a p r é - p r ó - t a q u i c i n i n a B que c o d i f i c a s o m e n t e a n e u r o c i n i n a B ( H o lz e r e H o l z e r - P e t s c h e , 1997). A e x p r e s s ã o d e s t a p r o t e í n a s p r e c u r s o r a s são e s p é c ie e t e c i d o s d e p e n d e n t e s . Uma vez s i n t e t i z a d a s , as t a q u i c i n i n a s são e s t o c a d a s em v e s í c u l a s nas t e r m i n a ç õ e s n e rv o s a s , a g u a r d a n d o o e s t í m u l o a p r o p r i a d o ( F lo o r et al., 1982).
1 . 1 . 3 . - D i s t r i b u i ç ã o da s t a q u i c i n i n a s e r e c e p t o r e s
O s i s t e m a t a q u i c i n i n a s é la r g a m e n t e d i s t r i b u í d o no s is te m a n e r v o s o p e r i f é r i c o ( B a r th o e Ho lze r, 1985) e c e n t ra l (M ag gi et al., 1993) de m a m í f e r o s . No s is te m a n e rv o s o p e r i f é r ic o , as t a q u i c i n i n a s são l i b e r a d a s das t e r m i n a ç õ e s dos n e rv o s s e n s o r i a i s e são r e s p o n s á v e i s pelo f e n ô m e n o da i n f l a m a ç ã o n e u r o g ê n i c a o b s e r v a d a em v á r io s t e c id o s tais como, s is te m a r e s p i r a t ó r i o ( L u n d b e r g e Sar ia, 1982; Em a n u e li et al., 1998), s is t e m a g e n i t o u r i n á r i o (Lu et al., 1997), pele (K e n in s et al., 1984) e parte do s i s t e m a d i g e s t i v o (Sa ri a et al., 1983; B e r t h ia u m e et al., 1995). Na m e du la e s p in h a l e no s is te m a n e rv o so c e n t r a l as t a q u i c i n i n a s tem um papel im p o r t a n t e na t r a n s m i s s ã o da dor e p e r c e p ç ã o ( M o s k o w i t z et al., 1987), em a lg u n s r e fl e x o s a u t ô n o m o s e no c o m p o r t a m e n t o (Maggi et al., 1993). Nos ú l t i m o s anos, a lg u n s a u t o re s tem o b s e r v a d o a i n f l a m a ç ã o n e u r o g ê n i c a na d u r a - m á t e r de ratos ( M o u s s a o u i et al., 1993a; E b e r s b e r g e r ef a/., 1999).
No s i s t e m a n e r v o s o c e n t ra l, as t a q u i c i n i n a s tem um papel n e u r o m o d u l a d o r c a u s a d o por uma d e s p o l a r i z a ç ã o da m e m b r a n a n e u ro n a l p r o v a v e l m e n t e por via de re d u ç ã o do in f lu x o de
p o t á s s io no m o m e n t o da r e t i f i c a ç ã o das c o r r e n t e s ( S t a n f i e l d et al., 1995).
N e u r ô n io s c o n t e n d o s u b s t â n c i a P em ratos podem f a z e r s i n a p s e com n e u r ô n i o s d o p a m i n é r g i c o s da s u b s t â n c i a n i gr ans ( M a h a l i l i k , 1988), n e u r ô n io s c o l i n é r g i c o s nos n ú cl e o s b a s a i s (Be a ch et al., 1987), n e u r ô n io s n o r - a d r e n é r g i c o s no l ocus c e r ul eo u s (G u y e n e t e A g h a j a n i a n , 1977) e n e u rô n io s s e r o t o n i n é r g i c o s nos n ú c le o s da rafe ( L j u n g d a h l et al., 1978). A a d m i n i s t r a ç ã o da s u b s t â n c i a P ne s sa s ár ea s in d u z a l i b e r a ç ã o de n e u r o t r a n s m i s s o r e s em ratos (Reid et al., 1990). Com o a l t e r a ç õ e s de c o n c e n t r a ç õ e s de n e u r o t r a n s m i s s o r e s no s is t e m a n e rv o so c e n tr a l p a re c e m e s t a r na base de m u it a s d o e n ç a s n e u r o l ó g i c a s como por e x e m p lo a d o e n ç a de P a r k in s o n , d o e n ç a de A l z h e i m e r , a n s i e d a d e e d e p r e s s ã o , e s t e s e s t u d o s i n d ic a m que as t a q u i c i n i n a s pode m ter um papel i m p o r t a n t e na e t i o l o g i a das d o e n ç a s n e u r o d e g e n e r a t i v a s .
A d e s c o b e r t a da n e u r o c i n i n a A e n e u r o c i n i n a B tem l e v a d o à in t e n sa i n v e s t i g a ç ã o de suas p r o p r i e d a d e s f a r m a c o l ó g i c a s em c o m p a r a ç ã o à s u b s t â n c i a P ( K im u r a et al., 1983). Tem sido d e m o n s t r a d o que e la s p a r t i c i p a m de a t i v i d a d e s b i o l ó g i c a s c o m u n s com a s u b s t â n c i a P, por e x e m p l o na in d u ç ã o de dor, v a s o d i l a t a ç ã o (M ag gi et al., 1987) e e x t r a v a s a m e n t o de
p r o t e í n a s p l a s m á t i c a s em v ê n u la s p ó s - c a p i l a r e s (Hua et al., 1984), t rê s e v e n t o s r e la c io n a d o s com o p r o c e s s o i n f l a m a t ó r i o .
A n e u r o c i n i n a A está l o c a l i z a d a c o n j u n t a m e n t e com a s u b s t â n c i a P em m u ita s ár eas mas, c o m p a r a t i v a m e n t e e n c o n t r a - s e , em m e n o r q u a n t i d a d e e com baix a ou n e n h u m e x p r e s s ã o dos r e c e p t o r e s NK-2 ( T s u c h id a et al., 1990). Os r e c e p t o r e s NK-3 são e n c o n t r a d o s em c e r ta s á r ea s i n c l u i n d o o c o r té x c e r e b r a l , o núcle o do tra to s o l i t á r i o e a raiz d o rs a l da m e du la e s p in h a l. C o n s e q u e n t e m e n t e a m a io ri a dos e f e i t o s das t a q u i c i n i n a s e s t ã o r e l a c i o n a d o s com a ação da s u b s t â n c i a P. ( S t a n f i e l d et al., 1995). Co m o c o m e n t a d o a n te r i o r m e n t e , as t a q u i c i n i n a s e x e r c e m seus e f e it o s b i o l ó g i c o s a tr a v é s da e s t i m u l a ç ã o de r e c e p t o r e s e s p e c í f i c o s d e n o m i n a d o s de NK-1, NK-2 e NK-3. A p e s a r do fa t o das t a q u i c i n i n a s m o s tr a r e m alta a f i n i d a d e para seus p r ó p r i o s r e c e p t o r e s , as t a q u i c i n i n a s de o c o r r ê n c i a e x ó g e n a não são s e l e t i v a s . A s s i m , os r e c e p t o r e s f o ra m i n i c i a l m e n t e c a r a c t e r i z a d o s pe las suas a f i n i d a d e s p r e f e r e n c i a i s em se li g a r com as t a q u i c i n i n a s e n d ó g e n a s s e g u i n d o o c r i t é r i o da or dem de p o t ê n c i a dos a g o n is t a s c o n f o r m e o s e g u in t e e s q u e m a , SP > NKA > NKB para r e c e p t o r e s NK-1; NKA > NKB >SP para r e c e p t o r e s NK-2 e NKB > NKA > SP para r e c e p t o r NK-3 ( M a g g i et al., 1993).
a p r o x i m a d a m e n t e 70% de id e n t i d a d e nos d o m í n i o s t r a n s m e m b r â n i c o s . S e q u ê n c i a s f io m ó l o g a s e n tre e s p é c ie s é em ge ra l m a i o r para o r e c e p t o r NK-1, t e n d o o r e c e p t o r do rato e do h ome m por v o lta de 95% de h o m o lo g ia , d i f e r i n d o s o m e n t e em 22 dos 407 a m i n o á c i d o s (Fong et al., 1992). E n t r e t a n t o a h o m o l o g i a dos r e c e p t o r e s NK-2 e NK-3 é ta m b é m alta, s e n d o a p r o x i m a d a m e n t e de 85 e 88% r e s p e c t i v a m e n t e .
A d i s t r i b u i ç ã o dos r e c e p t o r e s de t a q u i c i n i n a s tem s id o e l u c id a d a u s a n d o - s e ta n t o a s p e c t o s t r a d i c i o n a i s da f a r m a c o l o g i a co m o s u b s t â n c i a s r a d i o m a r c a d a s e b i o l o g i a m o l e c u l a r . Essas f e r r a m e n t a s tem p r o m o v i d o uma i n v e s t i g a ç ã o v a l i o s a não s o m e n te para d i f e r e n c i a r a d e n s id a d e de r e c e p t o r e s em d i f e r e n t e s t e c id o s , mas ta mb ém para d e s e n v o l v e r a n t a g o n i s t a s nov os . Com o uso d e ss a s t é c n i c a s , foi p o s s í v e l m a p e a r a d i s t r i b u i ç ã o dos r e c e p to r e s de t a q u i c i n i n a s , em d i v e r s o s o r gã o s.
E x p e r i m e n t o s com a g o n i s t a s e a n t a g o n i s t a s s e l e t i v o s para r e c e p t o r e s , tem i n d i c a d o que o r e c e p t o r NK-1 é o maior, ou o ún ico m e d i a d o r do e x t r a v a s a m e n t o de p r o t e í n a s p l a s m á t i c a s p r o d u z id o ta n t o por t a q u i c i n i n a s e x ó g e n a s como e n d ó g e n a s li b e r a d a s pela c a p s a i c i n a ou e s t i m u l a ç ã o ne rvo sa ( M a g g i, 1996). Os r e c e p t o r e s NK-1 são e n c o n t r a d o s ta n to no s i s t e m a n e rv o s o (m e d u la e e s t r i a t o ) q u a n to nos o r gão s p e r i f é r i c o s
( a p a r e lh o d i g e s t ó r i o e u r i n á r io ) do rato (M a n ty h et al., 1988), e ta m b é m no e p i t é l i o de v ia s a é re a s e nas g l â n d u l a s s u b m u c o s a s de f e r r e t t (Me in i et al., 1993).
Os r e c e p to r e s NK-2 são e n c o n t r a d o s p r i n c i p a l m e n t e em o rg ã o s p e r i f é r i c o s in c lu i n d o o a p a re lh o g a s t r o i n t e s t i n a l de ratos e em alta d e n s id a d e nas c é lu l a s m u s c u l a r e s lisa nas v ia s a é re a s de f e rr e t , f a c i l i t a n d o a n e u r o t r a n s m i s s ã o p u l m o n a r c o l i n é r g i c a ( T s u c h id a et al., 1990., Meini et al., 1993; P i e d im o n t e , 1995; Mc Lea n, 1996). E n t r e t a n t o um papel para os r e c e p t o r e s NK-2 no e x t r a v a s a m e n t o p l a s m á t i c o não pode ser t o t a l m e n t e e x c lu í d o , d e s d e que a n e u r o c i n i n a A in d u zi u o e x t r a v a s a m e n t o de p r o t e í n a s p l a s m á t i c a s em b r ô n q u i o s s e c u n d á r i o s de c o b a ia s a t ra v é s da e s t i m u l a ç ã o de r e c e p t o r e s NK-2 ( T o u s i g n a n t et al., 1993). A p r es e n ç a de r e c e p t o r e s NK-2 tem sido c l a r a m e n t e d e m o n s t r a d a em v á r io s á r ea s do c é r e b r o (Hagan et al., 1993). Com o uso de a n t a g o n i s t a s s e l e t i v o s para r e c e p t o r e s NK-2, p o d e -s e e s p e c u l a r que e s t e s r e c e p t o r e s e s tã o e n v o l v i d o s nos p r o c e s s o s de a n s i e d a d e a s s im como na t r a n s m i s s ã o e p e r c e p ç ã o do e s t í m u l o d o l o r o s o (U rban et al., 1992; Hagan e McL ean , 1993). Os s í t io s de li g a ç ã o nos r e c e p t o r e s NK-3 e s t ã o c o n f i n a d o s p r i n c i p a l m e n t e ao s is te m a n e rv o s o c e n tr a l, p r i m a r i a m e n t e ao c ó r te x c e r e b r a l e na c o lu n a do rsa l da m e d u la (Dam et al..
1990), e m bo ra n íve is d e t e c t á v e i s são ta m b é m e n c o n t r a d o s em v á r i o s t e c i d o s p e r i f é r i c o s de rato s i n c l u in d o a b e xig a e o i n t e s t i n o ( T s u c h id a et al., 1990).
As s im , d i f e r e n ç a s e n tr e r e c e p t o r e s NK-1 p e r i f é r i c o s e c e n t r a i s tem sido o b s e r v a d o s em c o b a ia s e ra tos , s u r g i n d o a ss im uma p o s s i b i l i d a d e de d e g r a d a ç ã o d i f e r e n c i a l dos p e p t í d e o s (Lew et al., 1990; Fardin e Ga rret, 1991; Cl e rk , et al., 1992) .
1.1.4. - A g o n i s t a s e a n t a g o n i s t a s
De vi d o a p r es e n ça de ti p o s de r e c e p t o r e s em c o n c e n t r a ç õ e s v a r iá v e i s em d i f e r e n t e s t e c i d o s fo ra m d e s e n v o l v i d o s a g o n is t a s s e l e t i v o s ta is co m o ( P -A la 8 ) NKA (4- 10) para r e c e p t o r e s NK-2 e (Me P h e 7 ( N K B ) ) para r e c e p t o r e s NK-3 ( R e g ol i et al., 1987). Estes c o m p o s t o s fo r a m u s a d o s com s u c e s s o In vl t ro, mas s e nd o p e p t í d e o s eles são r a p i d a m e n t e m e t a b o l i z a d o s e como c o n s e q ü ê n c i a tem cu rta a t i v i d a d e In vi vo.
Os r e c e p t o r e s das t a q u i c i n i n a s tem sido c a r a c t e r i z a d o s a t r a v é s do uso de a n t a g o n is t a s , e s p e c i a l m e n t e por a lg u n s c o m p o s t o s novos i d e n t i f i c a d o s nos ú lt im o s anos. De fato, novos
a n t a g o n i s t a s s e l e t i v o s não p e p t í d i c o s para os r e c e p t o r e s NK-1 (RP 6758 0) ( G a r r e t et al., 1991) e CP 963 45 ( S n id e r et al., 1991) e para r e c e p t o r e s NK-2 (SR 4 8 96 8) ( E m o n d s - A I t et al., 1992) tenn sido d e s c o b e r t o s , e a p r e s e n t a m m a io r e s t a b i l i d a d e que os p e p t í d e o s a n t e r i o r e s . O uso d e s t e s c o m p o s t o s novos tem c o n t r i b u í d o para um m e lh o r e n t e n d i m e n t o do papel e s p e c í f i c o das t a q u i c i n i n a s na f i s i o l o g i a e f i s i o p a t o l o g i a ( W a i t i n g , 1992; Maggi et al., 1993) (Fig 2).
F i g . 2 - E s t r u t u r a q u í m i c a do a n t a g o n i s t a não p e p t í d i c o do r e c e p t o r N K - 1 . E x t r a í d o de P a t a c c h i n i e M a g g i , 1 9 9 5 E s t u d o s r e a l iz a d o s a n t e r i o r m e n t e usando, a n t a g o n is t a s s e l e t i v o s não p e p t í d i c o s do r e c e p t o r NK-1 c o m o RP 675 80 ( S h e p h e a r d et al., 1993) e C P - 9 9 , 9 9 4 ( S h e p h e a r d et al., 1995), i n ib ir a m o e x t r a v a s a m e n t o p l a s m á t i c o in d u z id o pela s u b s t â n c i a P em d iv e r s o s t e c i d o s . Estes e s t u d o s , m o s tr a r a m que RP 67 5 8 0
tem m a io r a f i n i d a d e para r e c e p t o r e s NK-1 de ro e d o r e s e n q u a n t o que o a n t a g o n i s t a C P - 9 9 , 9 9 4 tem m a io r a f i n id a d e para r e c e p t o r e s NK-1 de h u m a n o s ( S h e p h e a r d et al., 1995). 1.1 .5 . - M e c a n i s m o s i n t r a c e l u l a r e s Os r e c e p to r e s de t a q u i c i n i n a s fo ra m c l o n a d o s e c o n té m 7 s e g m e n t o s t r a n s m e m b r â n i c o s . Estes r e c e p t o r e s e s t ã o a c o p l a d o s à p r o t e ín a G. A i n t e r a ç ã o das t a q u i c i n i n a s com os r e c e p t o r e s a tiv am a p r o t e í n a Gq, a qual por sua vez at iva a f o s f o l i p a s e C que irá q u e b r a r a s u b s t â n c ia f o s f a t i d i l i n o s i t o l b i f o s f a t o em in o s it o l t r i f o s f a t o (IP3) e d i a c i l g i i c e r o l (D AG) . T a n t o o IP3 como o DAG agem em lo ca is e s p e c i f í c o s na c é lu la . O IP3 age na m e m b r a n a do r e t í c u l o e n d o p l a s m á t i c o para l i b e r a r o c á lc io a r m a z e n a d o para o c i t o s o l , e n q u a n t o que o DAG age via p ro t e í n a q u in a s e C para a b r i r os c a n a is de c á lc i o tip o L p o s s i b i l i t a n d o a e n t r a d a de c á l c i o via m e m b r a n a p l a s m á t i c a . O a u m e n t o do c á lc i o i n t r a - c e l u l a r indu z a uma re sp o s ta t e c i d u a l (K h a w a ja e Rogers, 1996) (Fig 3).
A t u a l m e n t e b u s c a - s e o d e s e n v o l v i m e n t o de a g o n i s t a s e a n t a g o n i s t a s s e l e t i v o s para cada r e c e p t o r p o d e n d o com isso d e s e n v o l v e r e e l u c i d a r os p a p é is d e s s e s m e d i a d o r e s s o b re o
s i s t e m a n e r v o s o ce n tra l e p e r i f é r ic o e o d e s e n v o l v i m e n t o das r e s p o s t a s i n f l a m a t ó r i a s .
1.1 .6 . - E n z i m a s e m e t a b o l i z a ç ã o
A m a g n i t u d e e a d u ra ç ã o da ação das t a q u i c i n i n a s é re g u la d a pela d e g r a d a ç ã o r e a l iz a d a por duas e n z i m a s p r i n c i p a i s c h a m a d a s e n z im a s c o n v e r s o r a da a n g i o t e n s i n a e a e n d o p e p t i d a s e ne ut ra ( S k id g e l et al., 1984; Bor so n, 1991). Na m o l é c u l a da s u b s t â n c i a P e x is t e m dois s í t io s de c li v a g e m pela e n z im a c o n v e r s o r a da a n g io t e n s i n a , os qu a is est ão e n tr e os a m i n o á c i d o s f e n i l a l a n i n a e g li c in a e en tre a g l i c i n a e a le u c in a . Por o u t ro lado, a e n d o p e p t i d a s e neutra c liv a a s u b s t â n c i a P en tre os a m i n o á c i d o s g l ic in a e f e n i l a l a n i n a , g l i c i n a e le u c in a e f e n i l a l a n i n a e f e n i l a l a n i n a . A m b a s as e n z im a s e s tã o t a m b é m r e l a c i o n a d a s com a m e t a b o l i z a ç ã o de o u tr a s s u b s t â n c i a s ta is c om o a b r a d i c i n i n a (Fig 3).
N E P 2 4 - 1 1 S P A r g l - P r o - L y s - P r o - G J n - G l n - P h e - P h e - G l y L e u - M e t - N H2 A C E A C E B K A r g ^ - P r o - P r o - G l y - P h e - S e r - P r o | í ’h e - A r g N E P 2 4 - 1 1 Fig 3 - M e t a b o l i z a ç ã o da s u b s t â n c i a P e b r a d i c i n i n a p e l a e n z i m a s e n d o p e p t i d a s e n e u t r a ( N E P ) e e n z i m a c o n v e r s o r a da a n g i o t e n s i n a ( A C E ) . E x t r a í d o de D a m a s e t al . , 1 9 9 6 . A e n z im a c o n v e r s o r a da a n g i o t e n s i n a é la r g a m e n t e d i s t r i b u í d a no cor po. Sua p r e s e n ç a no e n d o t é l i o v a s c u la r , m i o c á r d i o , c é r e b r o , t e s t í c u l o s , rins e tr a t o g a s t r o i n t e s t i n a l e s t ã o bem e s t a b e l e c i d a s ( J a c k s o n et al., 1991). E n t r e t a n t o , na p e r i f e r ia , a e n z im a c o n v e r s o r a da a n g i o t e n s i n a tem d e m o n s t r a d o d e g r a d a r a s u b s t â n c i a P em p r e p a r a ç õ e s de m u s c u l a t u r a lisa do s is t e m a v a c u l a r ( R o u is s i et al., 1990 a) e u r o g e n i t a l ( R o u is s i et al., 1990b). Nas via s a é re a s, a e n z im a c o n v e r s o r a da a n g io t e n s i n a está l o c a li z a d a p r i n c i p a l m e n t e no e n d o t é l i o v a s c u l a r , o qual é c o n s i s t e n t e com a o b s e r v a ç ã o que o c a p t o p r il , um i n ib i d o r da e n z im a c o n v e r s o r a da a n g i o t e n s i n a p o t ê n c ia a b r o n c o c o n s t r i c ç ã o c a u s a d a pelo a d m i n i s t r a ç ã o e n d o v e n o s a da s u b s t â n c ia P ( S h o re et al., 1988). No s is te m a n e rv o so c e n tr a l a e n z im a c o n v e r s o r a da
a n g i o t e n s i n a tem si d o e n c o n t r a d a no f l u i d o c é r e b r o e s p i n h a l (L a n t z et al., 1991).
A p r e s e n ç a da e n d o p e p t i d a s e n e u tra no s is t e m a n e r v o s o ce n t ra l, tem t a m b é m sido d e m o n s t r a d o pelo uso dos in ib i d o r e s d e s ta s e n z i m a s i n c l u i n d o o f o s f o r a m i d o n e o t h i o r f a n ( M a ts a s et al., 1985). Na p r e s e n ç a do f o s f o r a m i d o n , um a u m e n t o na a t iv id a d e da s u b s t â n c i a P nas p o r ç õ e s e s t r i a t a i s em p o rc o s e ratos é o b s e r v a d a ( M a t s a s et al., 1983; M a u b o r g n e et al., 1987). Nas e s t r u t u r a s p e r i f é r i c a s a e n d o p e p t i d a s e n e u tra p are ce e s t a r e n v o l v i d a na d e g r a d a ç ã o das t a q u i c i n i n a s em v á r io s o r g ã o s , i n c l u i n d o s i s t e m a d i g e s t i v o e o u t ro s m ú s c u l o s liso s ( R o q u e s et al., 1993). Nas v ia s a é re a s em c o n t r a s t e com a en z im a c o n v e r s o r a da a n g i o t e n s i n a , a e n d o p e p t i d a s e ne ut ra está l o c a l i z a d a p r e d o m i n a n t e m e n t e no e p i t é l i o e g lâ n d u l a s s u b m u c o s a s de um n ú m e ro de e s p é c i e s a n im a i s i n c l u i n d o h u m a n o s ( B o r s o n , 1991). A l é m d is s o , i n i b i d o r e s da e n d o p e p t i d a s e neu tra p o t e n c i a m a r e s p o s t a s e c r e t ó r i a da s u b s t â n c i a P In vitro, em f e r r e t s e via s a ére as h u m a n a s (R o g e r s et al., 1989). O e f e it o dos i n i b i d o r e s da e n d o p e p t i d a s e neutra pode t a m b é m ser d e m o n s t r a d o in vivo, por e x e m p l o na r e g u la ç ã o da m a g n it u d e do e x t r a v a s a m e n t o p l a s m á t i c o em v ia s a é rea s de c o b a ia s i n d u z id o por f u m a ç a de ci ga rro , uma
r e s p o s ta m e d i a d a via a t i v a ç ã o dos ne rvo s s e n s o r i a i s e lib e r a ç ã o de t a q u i c i n i n a s (Lei et al., 1995).
As c é l u la s v a s c u l a r e s e n d o t e l i a i s , p o s s u e m em sua s u p e r f í c i e as e n z i m a s e n d o p e p t i d a s e n eu tra , e a e n z im a c o n v e r s o r a da a n g i o t e n s i n a que h i d r o l is a a s u b s t â n c ia P. A lo c a l i z a ç ã o das e n z i m a s e n d o p e p t i d a s e n e u tra e e n z im a c o n v e r s o r a a n g i o t e n s i n a nas p r o x i m i d a d e s a n a t ô m ic a s dos r e c e p t o r e s da s u b s t â n c i a P nas c é l u l a s e n d o t e l i a i s pós- c a p il a r e s das v ê n u la s , s u g e re m que elas te n h a m um papel i m p o r t a n t e na m o d u l a ç ã o da r e s p o s ta da in f l a m a ç ã o n e u r o g ê n ic a ( In o u e et al., 1996). A d e g r a d a ç ã o e n z i m á t i c a das t a q u i c i n i n a s em t e c i d o s p e r i f é r i c o s é r e a l iz a d a por v á r ia s e n z im a s das q u a is a mais i m p o r t a n t e é a e n d o p e p t i d a s e neu tra (N ad ei, 1991). Em t r a q u é i a s de ratos, a c o m b i n a ç ã o do c a p t o p r il e f o s f o r a m i d o n , i n i b id o r e s da e n z im a c o n v e r s o r a da a n g i o t e n s i n a e e n d o p e p t i d a s e neutra r e s p e c t i v a m e n t e , tem sido r e l a c i o n a d a s com o a u m e n t o do e x t r a v a s a m e n t o p l a s m á t i c o ( B r o k a w e W h i t e , 1994). I n ib iç ã o da e n d o p e p t i d a s e neutra ou I da e n z im a c o n v e r s o r a da a n g i o t e n s i n a p o t ê n c ia o a u m e n t o do e x t r a v a s a m e n t o p l a s m á t i c o p ro d u z id o pela in je ç ã o e x ó g e n a de s u b s t â n c ia P no p u lm ã o ( P i e d i m o n t e , 1995). Sa b e -s e que a e x p r e s s ã o da e n d o p e p t i d a s e neutra j u n t o a m e m b r a n a c e l u l a r a c e le ra a d e g r a d a ç ã o da s u b s t â n c ia P, e a
d e g r a d a ç ã o foi re du zi d a pelo s in ib i d o r e s t h i o r f a n e f o s f o r a m i d o n ( O k a m o t o et al., 1994).
A e n d o p e p t i d a s e neutra tem uma i m p o r t a n t e ação na r e g u l a ç ã o da p e r m e a b i l i d a d e ba sa l da m i c r o v a s c u l a t u r a por d e g r a d a r a s u b s t â n c ia P e a b r a d i c i n i n a , e pode r e g u la r a p r e s s ã o s a n g u in e a a p a rt ir de um m e c a n i s m o que é i n d e p e n d e n t e da s u b s t â n c ia P, b r a d i c i n i n a e ó x i d o n í t r ic o (Lu et al., 1997). A e n d o p e p t i d a s e neutra regu la o s i s t e m a c i r c u l a t ó r i o em m ú l t i p l o s níveis. S u b s t â n c i a P e b r a d i c i n i n a são m a n t i d o s em n í v e is b a s a is b ai xo s pela e n d o p e p t i d a s e n eu tra . A a u s ê n c ia d e s t a e n z im a causa um e x t r a v a s a m e n t o p l a s m á t i c o e x t e n s o , que é m e d ia d o pelo r e c e p to r e s NK-1 e B2, g e ra n d o uma h i p o t e n s ã o a c e n t u a d a . A a u s ê n c ia da e n d o p e p t i d a s e n e u tra a u m e n t a a s u s c e t i b i l i d a d e para o cho q u e e n d o t ó x i c o , p o d e n d o c o n t r i b u i r para a h ip o t e n s ã o e p r o c e s s o i n f l a m a t ó r i o i n t e n s o (Lu et al., 1997).
1.1. 7. - A s p e c t o s f i s i o p a t o i ó g i c o s
São g r a n d e s as q u a n t i d a d e s de p e s q u is a s que tem si d o f e i t a s para d e m o n s t r a r p a pé is f i s i o l ó g i c o s para as t a q u i c i n i n a s .
o uso de a g o n is t a s e a n t a g o n i s t a s s e l e t i v o s c o m o f e r r a m e n t a s f a r m a c o l ó g i c a s tem nos f o r n e c i d o i n f o r m a ç õ e s de gra n d e va lia para os e f e it o s das s u b s t â n c i a s e n d ó g e n a s como as t a q u i c i n i n a s . Com o os r e c e p t o r e s NK-1, NK-2, e NK-3 e s tã o la r g a m e n t e d is t r i b u í d o s tan to no s is t e m a n e rv o s o ce n t ra l co m o no p e r i fé r ic o , e com isso a a d m i n i s t r a ç ã o dos a g o n i s t a s de r e c e p t o r e s de t a q u i c i n i n a s podem p r o d u z i r uma gama de e f e i t o s f i s i o l ó g i c o s . Os e s tu d o s mais c o m u n s c o n t u d o são a q u e l e s nos q u a is as fu n ç õ e s f i s i o l ó g i c a s e s tã o a l t e r a d a s por a n t a g o n i s t a s s e l e t i v o s . No s is t e m a n e rv o so c e n t ra l a s u b s t â n c i a P, é a p r i n c ip a l t a q u i c i n i n a n e u r o t r a n s m i s s o r a com a p r e v a lê n c ia do r e c e p t o r NK-1 ( T s u c h id a et al., 1990).
As t a q u i c i n i n a s a p re s e n t a m uma v a r i e d a d e de ações tão d iv e r s a s e com isto faz s u r g i r um n ú m e ro m u ito g r an d e de p o s s i b i l i d a d e s t e r a p ê u t i c a s . Com o d e s e n v o l v i m e n t o de d r o g a s a n t a g o n i s t a s não p e p t í d i c a s a l t a m e n t e s e l e t i v a s , a b r e m - s e as p o s s i b i l i d a d e s para o t r a t a m e n t o para v á r i a s c o n d i ç õ e s c l í n i c a s in c l u í n d o - s e a dor c rô ni c a, a d o en ça de P a r k i n s o n , d o en ça de A l z h e i m e r , d e p r e s s ã o , a r tr it e r e m a t ó id e , s í n d r o m e do cólo n ir r i t á v e l , asma e e n x a q u e c a ( K h a w a ja e Ro g e rs , 1996).
A s s i m , o uso de i n ib id o r e s ta is co m o o f o s f o r a m i d o n e c a p t o p r i l os q u a is atuam so bre a e n z i m a e n d o p e p t i d a s e ne ut ra e a e n z im a c o n v e r s o r a da a n g i o t e n s i n a r e s p e c t i v a m e n t e ou o
uso de a n t a g o n i s t a s não p e p t í d i c o da s u b s t â n c i a P (RP 6 75 80 ) ( S n id e r et al., 1991) ou um a n t a g o n i s t a s e l e t i v o não p e p t í d i c o da b r a d i c i n i n a (HO E 140) ( W ir th et al., 1991), são e x e m p lo s de s u b s t â n c i a s e n v o l v i d a s na m e d i a ç ã o do e x t r a v a s a m e n t o p l a s m á t i c o em a lg u n s te c id o s do s is t e m a n e rv o s o c e n tra l, des te modo é p o s s iv e l a m p l i a r os c o n h e c i m e n t o s já e x i s t e n t e s s o b re os m e c a n is m o s da i n f l a m a ç ã o n e u ro g ê n ic a . 1.2. - I n f l a m a ç ã o n e u r o g ê n i c a A i n f l a m a ç ã o n e u r o g ê n ic a é um im p o r t a n t e m e c a n is m o e n d ó g e n o de d e f e s a e p r o m o v e uma das p r i m e i r a s r e sp o s ta s lo ca is à in jú r ia t e c id u a l, a c e l e r a n d o e m o d u la n d o o d e s e n v o l v i m e n t o do p r o c e s s o i n f l a m a t ó r i o . O f e n ô m e n o c o n h e c i d o por i n f l a m a ç ã o n e u ro g ê n ic a , c a r a c t e r i z a - s e pela l i b e r a ç ã o de p e p tí d e o s que e s t ã o c o n t id o s no i n t e r i o r das f i b r a s a f e r e n t e s e su as c o n c e n t r a ç õ e s podem ser a lt e r a d a s a p a r t i r de um e s t í m u l o e l é t r i c o , q u ím ic o , m e c â n ic o ou por um da no no nervo ( L e v i n e et al., 1993; H o k f e it et al., 1994). E v i d ê n c i a s f a r m a c o l ó g i c a s e n e u r o f i s i o l ó g i c a s da i n f la m a ç ã o n e u r o g ê n i c a tem sido o b s e r v a d a s por d i v e r s o s a u to re s a t ra v é s do uso de a g o n is t a s e a n t a g o n i s t a s ( B e rtr a n d et al., 1993; N ic o ia u et al., 1993; D o n n e r e r et al., 1993). Estas
e v i d ê n c i a s i n d i c a m que r e s p o s t a s lo c a is i n f l a m a t ó r i a s c a u s a d a s pela e s t i m u l a ç ã o dos ne rvo s s e n s o r i a i s são d e v id o s aos e f e i t o s de n e u r o p e p t i d e o s li b e r a d o s d e s ta s t e r m i n a ç õ e s n e r v o s a s ( M a g g i, 1991).
Os n e u r o p e p t í d e o s que f o r m a m a f a m í l i a das t a q u i c i n i n a s são a s u b s t â n c i a P, n e u r o c in in a A, n e u r o c i n in a B e o p e p tí d e o gen e r e l a c i o n a d o com a c a l c i t o n i n a e e st ã o p r e s e n t e s nas f i b r a s não m i e l i n i z a d a s tip o C, se n d o os p r i n c i p a i s r e s p o n s á v e i s pelo f e n ô m e n o ch a m a d o i n f l a m a ç ã o n e u r o g ê n ic a ( R i c c i a r d o l o et al., 1994).
O papel da s u b s t â n c i a P na i n f l a m a ç ã o n e u ro g ê n ic a tem sido c la r a m e n t e d e m o n s t r a d o . Este n e u r o p e p t í d e o causa a d e g r a n u l a ç ã o dos m a s t ó c i t o s , e x t r a v a s a m e n t o p la s m á t i c o com a s u b s e q u e n t e l i b e r a ç ã o de o u t ro s a lg ó g e n o s ( b r a d i c i n i n a e s e r o t o n i n a ) e a t iv a ç ã o de ou tra s c é lu la s i n f l a m a t ó r i a s ( m a c r ó f a g o s , m o n ó c i t o s e l i n f ó c i t o s ) . A lé m do m ais, a s u b s t â n c i a P é c a p a z de i n d u z i r a p r o d u ç ã o de óxido n ít ri c o , o u tr o v a s o d i l a t a d o r da c a m a d a e n d o t e l i a l dos va so s s a n g ü í n e o s ( B e s s o n , 1999). A a t i v a ç ã o d e s te s d i f e r e n t e s c o m p o n e n t e s da r e s p o s t a i n f l a m a t ó r i a r e s u l t a no a u m e n t o do f lu xo s a n g ü í n e o para a área l e sa da e com a u m e n t o da p e r m e a b i l i d a d e dos v a s o s s a n g ü í n e o ( B h o o la , 1996).
A s s i m e st e s n e u r ô n i o s s e n s o r i a i s a fe r e n t e s , c o n t e n d o t a q u i c i n i n a s , p r i n c i p a l m e n t e a s u b s t â n c i a P, fo ra m e n c o n t r a d o s li g a d o s ao c o n t r o l e da p e r m e a b i l i d a d e v a s c u l a r em n u m e r o s o s t e c i d o s co m o a pele (K e n in s et al., 1984), as via s a é re a s e m u c o s a nasal ( L u n d b e r g e Saria, 1982; E m a n u e l i et al., 1998), b e x ig a u r in á r i a (Lu et al., 1997), olho s e a r t i c u l a ç õ e s ( M o s k o w i t z et al., 1979), a p a r e lh o d i g e s t ó r i o (Saria et al., 1983) e mais r e c e n t e m e n t e te m - s e o b s e r v a d o ta m b é m na d u ra - m á t e r de ratos ( M o u s s a o u i et al., 1993a; E b e r s b e r g e r et al., 1999). A i n f l a m a ç ã o n e u r o g ê n ic a na d u r a - m á t e r tem sido s u g e r i d a co m o um dos m e c a n i s m o s e n v o l v i d o s na p r o d u ç ã o dos q u a d r o s de e n x a q u e c a ( M o s k o w it z , 1992; M o u s sa o u i et al., 1993a). A d u r a - m á t e r e os v a s o s s a n g ü í n e o s são in e r v a d o s pelas f ib r a s a f e r e n t e s s e n s ó r i a s do nervo t ri g ê m io , as q u a is q u a n d o a t i v a d a s , l i b e r a m n e u r o p e p t í d e o s co m o por e x e m p l o a s u b s t â n c i a P e o p e p t í d e o gen e r e la c io n a d o com a c a l c i t o n i n a r e s u l t a n d o em v a s o d i l a t a ç ã o e e x t r a v a s a m e n t o p l a s m á t ic o . As f i b r a s t r i g e m i n a i s ta m b é m se p ro je ta m para o núcleo c a u d a l t r i g e m i n a l d e n t r o da m e du la o b lo n g a onde f a ze m s in a p s e com n e u r ô n i o s s e c u n d á r i o s s e n s o r i a i s que se p r o j e t a m para c e n t r o s s u p e r i o r e s do c é r e b r o . A a t iv a ç ã o d e s t a s vi a s da d u r a - m á t e r p o s s i v e l m e n t e e s tã o r e la c i o n a d a s com as c r is e s de e n x a q u e c a
e p r o v a v e l m e n t e p od em f a z e r s u r g i r as dores, n á u s e a s e ou tro s s i n t o m a s m e d i a d o s c e n t r a l m e n t e , a s s o c i a d o s com esta s í n d r o m e ( F e r ra r i, 1998). A s s im , o a u m e n t o do e x t r a v a s a m e n t o p l a s m á t i c o como v e r e m o s a se g u ir , é um i m p o r t a n t e c o m p o n e n t e da i n f l a m a ç ã o n e u ro g ê n ic a , s e n d o um f e n ô m e n o c a r a c t e r í s t i c o dos te c id o s p e p t i d é r g i c o s p o d e n d o d e s e n c a d e a r m e c a n i s m o s de dor no s i s t e m a n e rv o so c e n t r a l ( F ig in i et al., 1997). 1.3. - E x t r a v a s a m e n t o p l a s m á t i c o Em c o n d i ç õ e s f i s i o l ó g i c a s , o b a la n ç o dos f lu í d o s é m a n t id o por dois c o n j u n t o s de f o r ç a s que se o p õ e m . A p r e ss ã o h i d r o s t á t i c a que p r o m o v e no leito v a s c u l a r o m o v i m e n t o dos f l u í d o s para fo ra do vas o, e n q u a n t o que em co n tra p a rti d a t e m o s a p r e s s ã o c o l o i d o s m ó t i c a , que é a p r e s s ã o o s m ó t ic a p r o v o c a d a pela s p r o t e í n a s p l a s m á t i c a s que ca u sa m o m o v i m e n t o dos f l u í d o s para d e n t ro do lum em v a s c u l a r (G o re e M cD o n a g h , 1980).
A u m e n t o na p e r m e a b i l i d a d e dos v a s o s in d u z id o por i n f l a m a ç ã o c o n d u z à saí da de um p la s m a rico em p r o t e í n a s para o meio e x tr a v a s c u l a r ( e x t r a v a s a m e n t o p la s m á t i c o ) . O e x t r a v a s a m e n t o de m a c r o m o l é c u l a s p l a s m á t i c a s para o meio
in t e r s t i c i a l a u m e n t a a o s m o l a r i d a d e d e s te meio e ca us a m a io r e x t r a v a s a m e n t o p l a s m á t i c o ( R a p o p o r t et al., 1979; M o r r is o n e Ryan, 1987).
O m o v im e n t o dos f l u i d o s e n t re os m e io s intra e ext ra v a s c u l a r e s é r e g u la d o pelo e n d o t é l i o v a s c u l a r o qual fo rm a uma b a r r e ir a com p e r m e a b i l i d a d e s e l e t i v a . N o r m a l m e n t e as t r o c a s são d e p e n d e n t e s de um e n d o t é l i o i n t a c t o o qual p e r m it e a livre p a s s a g e m de água, íons, e p e q u e n o s s o lu to s , mas li m i t a a p a s s a g e m de m a c r o m o l é c u l a s p l a s m á t i c a s ( G o l d i e e P e d e rs e n , 1995). J u n ç õ e s i n t e r e n d o t e l i a i s a p a r e n t a m ser as r e g iõ e s ao n d e a m a i o r i a das t r o c a s de s o l u t o s e t r a n s f e r ê n c i a s de m a c r o m o l é c u l a s o c o rr e m ( S v e n s j o e Grega , 1986). A i n t e g r i d a d e d e s t a s j u n ç õ e s é a s s im o p r in c ip a l d e t e r m i n a n t e da p e r m e a b i l i d a d e e n d o t e l i a l . O e x t r a v a s a m e n t o p l a s m á t i c o i n d u z i d o p o r m e d i a d o r e s i n f l a m a t ó r i o s o c o r r e e x c l u s i v a m e n t e nas v ê n u l a s p ó s - c a p i l a r e s . A f o r m a ç ã o de p o r o s i n d u z i d o s por m e d i a d o r e s i n f l a m a t ó r i o s nas c é l u l a s e n d o t e l i a i s é p r o v a v e l m e n t e d e v i d o à c o n t r a ç õ e s e m o d i f i c a ç õ e s da sua f o r m a . Na v e r d a d e as c é l u l a s e n d o t e l i a i s c o n t e m p r o t e í n a s c o n t r á t e i s c o m o a a c t i n a e a m i o s i n a , s i m i l a r e s às e n c o n t r a d a s nas c é l u l a s da m u s c u l a t u r a li s a . A s s i m , a c o n t r a ç ã o das c é l u l a s e n d o t e l i a i s p r o v o c a r i a o a u m e n t o da p e r m e a b i l i d a d e das m a c r o m o l é c u l a s
( D r e n c k h a h n e W a g n e r , 1986; R e n k i n , 1 9 8 6 ). Os c a p i l a r e s de d i f e r e n t e s t e c i d o s v a r i a m c o n s i d e r a v e l m e n t e , t a n t o a n a t ô m i c a q u a n t o f u n c i o n a l m e n t e . E n t r e c é l u l a s e n d o t e l i a i s a d j a c e n t e s , os p o ro s e as f e n d a s p o d e m v a r i a r de 50 à 90 A° de l a r g u r a q u a n d o as c é l u l a s e s t ã o c o n t r a í d a s . Q u a n d o r e l a x a d a s os p o ro s p od em v a r i a r e n t r e 30 e 40 A°. O c i t o p l a s m a d a s c é l u l a s e n d o t e l i a i s a p r e s e n t a m v e s í c u l a s p i n o c í t i c a s q u e e s t ã o r e l a c i o n a d a s co m o t r a n s p o r t e de s u b s t â n c i a s a t r a v é s da s c é l u l a s . B a s i c a m e n t e t r ê s t i p o s d i f e r e n t e s de e s t r u t u r a s c a p i l a r e s são o b s e r v a d a s com a m i c r o s c o p i a e l e t r ô n i c a o n d e p o d e m o s d i s t i n g u i r q u a n t o a b a s e de c o n t i n u i d a d e , d i f e r e n t e s b a r r e i r a s de f i l t r a g e m ( M a j n o , 1965; Z h a o et al ., 1 9 9 8 ). O p r i m e i r o t ip o s ã o c h a m a d o s de c a p i l a r e s d e s c o n t í n u o s , q u e se c a r a c t e r i z a m p o r a p r e s e n t a r e m l a r g o s p o r o s com g r a n d e p e r m e a b i l i d a d e t a n t o pa ra p r o t e í n a s c o m o para c é l u l a s . E n c o n t r a m o s es te t i p o de c a p i l a r p r i n c i p a l m e n t e no f í g a d o , m e d u l a ó s s e a , e b a ç o . O s e g u n d o t i p o de c a p i l a r se c a r a c t e r i z a por f e n e s t r a ç õ e s , q u e são p o r o s qu e se a b r e m ou f e c h a m c o n f o r m e as n e c e s s i d a d e s do t e c i d o . E n c o n t r a m o s p r i n c i p a l m e n t e nas c é l u l a s g l a n d u l a r e s , nas v i l o s i d a d e s i n t e s t i n a i s , g l o m é r u l o s e na d u r a - m á t e r . O t e r c e i r o t ip o são c h a m a d o s de c a p i l a r e s c o n t í n u o s , o n d e não o c o r r e a f o r m a ç ã o de a b e r t u r a s
i n t e r c e l u l a r e s mas o t r a n s p o r t e é f e i t o p r i n c i p a l m e n t e por p i n o c i t o s e . V a m o s e n c o n t r a r e st e t i p o p r i n c i p a l m e n t e no e n d o t é l i o c e r e b r a l , e nos n ó d u l o s l i n f á t i c o s ( K o r n e r , 1974; T u o m a n e n et a/., 19 9 3 ) (Fi g 4). A l g u n s c o r a n t e s c o m o por e x e m p lo o A z u l de Eva ns p o d e m se li g a r à p r o t e í n a s , e com isto p o d e m o s d e t e c t a r e q u a n t i f i c a r o e x t r a v a s a m e n t o p l a s m á t i c o ( P e t e r s s o n et al., 1993) (Fig 4). C O N T IN U O U S F E N E S T K A T E O «c=». D IS C O N T I N U O U S Fig 4 - D i f e r e n t e s t i p o s de e s t r u t u r a s c a p i l a r e s em d i f e r e n t e s t e c i d o s . E x t r a í d o s de C o o p e r e t al , 1 9 9 6 .
A m e di da do e x t r a v a s a m e n t o de azul de Ev a n s tem sido u sa d o para a v a l i a r a p e r m e a b i l i d a d e do c é r e b r o e m e du la em
m o d e lo s a n im a i s de is q u e m i a , t r a u m a e h e m o r r a g ia , e a e s p e c t r o f o t o m e t r i a é uma das t é c n i c a s d e s e n v o l v i d a s para q u a n t i f i c a r o e x t r a v a s a m e n t o de azul de Eva ns no t e c id o ne ural. ( W a r w i c k et al, 1995) 1.4. - Q u e r c e t i n a B i o f i a v o n ó i d e s são c o m p o s t o s p o l i f e n ó l i c o s n a t u r a l m e n t e p r e s e n t e s no reino v e g e t a l. Os b i o f i a v o n ó i d e s são e n c o n t r a d o s em v á r io s p ro d u t o s a l i m e n t a r e s e p la n ta s, i n c l u i n d o f ru t a s , v e g e t a i s c há s e vin h o ti n to ( S h o s k e s , 1998). O c o n s u m o d iá r io é e s t i m a d o de 3 a 8mg, se n d o que em mais de 50% dos b i o f i a v o n ó i d e s e n c o n t r a d o s são c o m p o s t o s pela q u e r c e t i n a ( H e rt o g et al., 1995) (Fig 5). Eles são a b s o r v i d o s a t ra v é s da in g e s tã o de a li m e n to s e l e n t a m e n t e e l i m i n a d o s a tr a v é s do dia (H o li m a n et al., 1996). Os f l a v o n ó i d e s fo ra m c o n s i d e r a d o s in e r te s e não e s s e n c i a i s a sa úd e h u m a n a d u r a n t e mu ito t e m p o . E n tr e t a n t o , e s t u d o s r e c e n t e s tem d e m o n s t r a d o que e s te s c o m p o s t o s a f e ta m v á r io s s i s t e m a s b i o l ó g i c o s nos m a m í f e r o s ( M i d d i e t o n e K a n d a s w a m i , 1993; R i c e - E v a n s et al., 1997). A q u e r c e t i n a é um b i o f i a v o n ó i d e c o m p o n e n t e de v á r io s e x t r a t o s v e g e t a i s co m o A c h y r o c l l n e s a t u r e o i d e s c o n h e c i d a p o p u l a r m e n t e co m o m a rc e la . O e x tr a to h i d r o a l c o ó l i c o des ta p l a n ta
d e m o n s tr o u a ti v i d a d e a n t i - i n f l a m a t ó r i a em ratos ( S im õ e s et al., 1988).
D e p e n d e n d o de suas e s t r u t u r a s m o l e c u l a r e s , e em p a r t ic u l a r a p o s iç ã o do gr up o h i d r o x i l a no anel fenil, a lg un s a u to re s tem d e m o n s t r a d o que isto i n f l u e n c i a e modula a p o te nte ação i n i b i t ó r i a que os f l a v o n ò i d e s a p r e s e n ta m so bre in ú m er a s q u i n a s e s e n v o l v i d a s na t r a n s d u ç ã o de s in a is , p r in c i p a l m e n t e so b re a p ro t e í n a q u i n a s e C e t ir o s in a q u in a s e (Nd et al., 1987; G e a h ie n et al., 1989; F o r m ic a e R e ge lso n, 1995). Mu itos d e s t e s e f e it o s são d i r i g i d o s no s e n t id o de c o m p e ti r a tr a v é s dos s í t io s de li g a ç ã o do ATP s o b re o s ít io de d o m ín io c a t a l í t i c o do f o s f a t i d i l i n o s i t o l 3 - q u i n a s e , e m b o r a ainda outros m e c a n i s m o s p o s sa m e x i s t i r ( F e r r i o l a et al., 1989; Cu sh m an et al., 1991; M id d l e to n e K a n d a s w a m i, 1993; A g u l l o et al., 1997).
Fig 5 - E s t r u t u r a s q u í m i c a da m o l é c u l a d e q u e r c e t i n a . E x t r a í d o de A g u l l o e t a l . , 1 9 9 7
D e p e n d e n d o de suas e s t r u t u r a s m o le c u l a r e s , e em p a r t i c u l a r a p o s iç ã o do gr up o h i d r o x i la no anel fe nil, a lg u n s a u t o re s tem d e m o n s t r a d o que isto in f lu e n c ia e m o du la a p o t e n te ação i n i b i t ó r ia que os f la v o n ó i d e s a p r e s e n t a m s o b re i n ú m e r a s q u in a s e s e n v o l v i d a s na t r a n s d u ç ã o de s in a is , p r i n c i p a l m e n t e so bre a p r o t e í n a q u in a s e C e t i r o s in a q u in a s e (Nd et al., 1987; Ge a h ie n et al., 1989; Fo rm ic a e R e g e ls o n , 1995). Mu itos d e s te s e f e i t o s são d ir i g i d o s no s e n t i d o de c o m p e t i r a t ra v é s dos s í t io s de li g a ç ã o do ATP s ob re o s í t io de d o m í n io c a t a l í t i c o do f o s f a t i d i l i n o s i t o l 3 - q u in a s e , e m b o r a a ind a o u tr o s m e c a n is m o s p o ss a m e x i s t i r ( F e r r io la et al., 1989; C u s h m a n et al., 1991; M id d l e to n e K a n d a sw a m í, 1993; A g u l l o et al., 1997). V á r io s e s t u d o s tem d e m o n s t r a d o que f l a v o n ó i d e s e c o m p o s t o s r e la c io n a d o s são e f i c i e n t e s para in ib ir a s ín t e s e e a l i b e r a ç ã o de m e d i a d o r e s q u í m i c o s da i n f la m a ç ã o c o m o a h i s t a m i n a as sim como a f o s f o l i p a s e A2, a e n z im a r e s p o n s á v e l pela s í n t e s e do ác ido a r a q u i d ô n i c o e a s u b s e q u e n t e fo r m a ç ã o de p r o s t a n ó i d e s e le u c o t r i e n o s (L in d a h l e T a g e s s o n , 1993). A q u e r c e t i n a em p a r t i c u l a r m o s tr o u s i g n i f i c a t i v a a t i v id a d e pró- i n f l a m a t ó r i a a t ra v é s da in ib i ç ã o de e n z im a s do m e t a b o l i s m o das c in i n a s como a en zim a c o n v e r s o r a da a n g io t e n s i n a (EC A) ( F o r m ic a e Re g e ls o n , 1995; H ansen et al., 1995).
Os b i o f i a v o n ó i d e s t a m b é m d im in u e m a in jú r ia t e c id u a l pós r e p e r f u s ã o em um t e c id o is q u ê m i c o e a p r e s e n t a m c a r a c t e r í s t i c a s im u n o s u p r e s s s o r a s ( S h o s k e s , 1998). A s s i m a q u e r c e t i n a f u n c io n a como um p o d e r o s o a n t i o x i d a n te , a tu a n d o d e s s e m o do co m o um f a t o r de p r o t e ç ã o c a r d i o v a s c u l a r por d i m i n u i r a o x i d a ç ã o do LDL que é uma das e t a p a s da f o r m a ç ã o das p la c a s a t e r o s c l e r ó t i c a (He rtog et al., 1995; Manach et al., 1998; Van A c k e r et al., 1998). Al ém dis so , e x ib e e f e it o s a n ti- t u m o r a i s In vitro, in ib i n d o o d e s e n v o l v i m e n t o do c â n c e r em m o d e lo s e x p e r i m e n t a i s em a n i m a i s (Mor an d et al., 1998), a p r e s e n t a n d o t a m b é m a p r o p r ie d a d e de p r o t e g e r as c é lu la s da a p o p t o s e (Y o ko o e K i ta m u ra , 1997). Ta m b é m inibe a in d u ç ã o de i n t e r l e u c i n a - 8 e li b e r a ç ã o de la c t a t o pelas c é lu l a s g l ia is C6, bem c o m o a e x p r e s s ã o da prot eí na -1 de q u i m i o a t r a ç ã o de m o n ó c i t o s pelo f a t o r alfa de ne c ro s e tu m o r a l (Sa to et al., 1997; V o lk et al., 1997). A l ém dis so , a q u e r c e t i n a tem d e m o n s t r a d o p o s s u i r a t i v i d a d e a n t i v i r a l e c a r c i n o s t á t i c a e e f e i t o s a n t i o x i d a n t e s (M o re i et al., 1993; Fo r m ic a e Reg e lso n , 1995; K o s ty u k et al., 1996; S k a p e r et al., 1997). R e c e n te s e s t u d o s r e l a c i o n a d o s a r e s p o s ta c e lu la r ao ch oq ue t é r m ic o tem d e m o n s t r a d o que a q u e r c e t in a s u p r i m e tal re s p o st a por r e g u l a ç ã o in i b i t ó r i a do f a t o r de c h o q u e t é r m i c o (HSF), s e nd o que as c é l u l a s e x p o s t a s a s i t u a ç õ e s de e s t r e s s e ca u sa d a pelo
c a l o r não s i n t e t i z a r a m esta p ro t e í n a (N a g ai et al., 1995). F i n a l m e n t e a e x p r e s s ã o do RNAm da m e t a l o t i o n e í n a em c u l t u r a s de a s t r ó c i t o s p r i m á r i o s em ratos n e o n a ta l foi in ib id a pela q u e r c e t i n a (C o n k li n et al., 1998).
Ce rt os f la v o n ò i d e s são c o n h e c i d o s por i n t e r f e r i r e m com in ú m e r a s e n z im a s im p l i c a d a s em p r o c e s s o s p a t o l ó g i c o s tais c o m o a d e n o s in a d e a m i n a s e (Koch et al., 1992); A M P c f o s f o d i e s t e r a s e e HIV-1 p r o t e in a s e . ( M id d le t o n e K a n d a s w a m i, 1993; C a p a s s o et al., 1998). Na i n i b i ç ã o da le u ci n a a m i n o p e p t i d a s e pelos f l a v o n ò i d e s , so m e n t e a q u e le s c o m p o s t o s com uma dupla li g a ç ã o no s e g u n d o e t e r c e i r o ca r b o n o d e m o n s t r a r a m a t i v id a d e . Estas d u p la s li g a ç õ e s c o n f e r e m aos f l a v o n ò i d e s ce r ta s p r o p r i e d a d e s c o n f o r m a c i o n a i s que os c a p a c i t a m para in t e r a g i r com as m e m b r a n a s c e lu la r e s . Desta fo rm a uma d e t e r m i n a d a c o n f o r m a ç ã o p a rec e ser n e c e s s á r ia para p o d e r i n ib ir as m e t a l o p e p t i d a s e s de m e m b r a n a ( P r ic e e M id d le t o n , 1986; P a r e ll a d a e G u in e a , 1995). A l g u n s b i o f i a v o n ó i d e s são i n i b i d o r e s e s p e c í f i c o s de p r o t e í n a s t ir o s in a q u i n a s e s ( A k iy a m a et al., 1987), ao p a s so que para a q u e r c e t i n a suas p r o p r i e d a d e s in i b i t ó r i a s não são s e le t iv a s , e x t e n d e n d o - s e a v á r i a s p r o t e í n a s s e r i n a / t r e o n i n a q u in a s e s e li p í d i o s q u in a s e s ( G e s c h w e n d t et al., 1983; Levy et al., 1984; End et al., 1987). Estes i n i b i d o r e s podem se r f e r r a m e n t a s úteis
