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Técnica de la prueba de fijación de complemento en la rickettsiasis

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Academic year: 2017

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682 OFICINA BANITARIA PANAMERICANA IAwosto

limitarse a las partes invadidas, según revelan el dolor, sensibilidad, hipertoma 0 parálisis.

Fase convaleciente.-(l) Definición: Con la desaparición del dolor y de la hiperestesia, la poliomielitis pasa a la fase convaleciente que puede durar por espacio de 3 a 12 meses y a veces más, Durante este período es que tiene lugar la máxima mejoría muscular. (2) Asistencia: (a) Adóptense medidas ortopédicas y fisioterapéuticas que ayuden la convalecencia en todas las formas posibles, comprendiendo el sostén mecánico de las partes afectadas y la fisioterapia en forma de masajes, calor irradiado o en otra forma y ejercicio pasivo, de asistencia, activo o reeducativo en carácter, según la intensidad de la debilidad y extensión de la parálisis. (b) Traslado a un hospital general: El tratamiento en esta fase se realiza mejor en un hospital general, por lo que conviene trasladar a los enfermos a hospitales generales apenas pasen a la fase convaleciente. Esto ocurre por lo general en un término de 8 semanas del comienzo de la enfermedad. En casos individuales, se puede con- siderar el traslado a algún Hospital General en el que existan medios de aplicar medidas terapéuticas especiales.

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Fase crónica.-(l) Definición: Cuando ya no existe posibilidad de

mejoría alguna de ciertos grupos de músculos y las deficiencias resi- duales son estables, comienza la fase crónica. (2) Asistencia: Las medidas correctivas posteriores corresponden a los cirujanos ortopédicos que prestan sus servlcios en los hospitales generales a los que se ha llevado a los enfermos en su fase convaleciente.

TGCNICA DE LA PRUEBA DE FIJACIÓN DE COMPLE- MENTO EN LAS RICKETTSIASIS*

Por IDA A. BENGTSON

División de Enfermedades Infecciosas, Instituto Nacional de Sanidad de lMados Unidos

La prueba de fijación de complemento ha sido usada en el estudio de las siguientes rickettsiasis: tifo end6mico (tifo murino); tifo epidémico (tifo europeo) (1, 2, 3); fiebre maculosa de las Montañas Rocosas (4); fiebre de Tobia, Colombia (probablemente idéntica a la anterior) ; y fiebre “Q” de la América del Norte y de Australia (probablemente idénticas) (5).

La prueba es cuantitativa y en este informe expónense sus detalles en forma m$s ,completa que hasta ahora. Para mayor economia y con- veniencia, los varios reactivos se usan en cantidades de 0.2 CC; las pruebas

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se hacen *en tubos de 10-11 X 75 mm; los reactivos, con excepción del suero y del antígeno, se distribuyen en los tubos por medio de una pipeta automática calibrada a 0.2 CC para la solución salina y el complemento, y a 0.4 CC para la mezcla de la hemolisina y los eritrocitos de cordero. Las diluciones de los sueros se hacen por medio de una jeringa-pipeta y el volumen total final de cada tubo es de 1 CC.

REACTIVOS \

Los reactivos comprenden el sistema hemolítico corriente, comple- mento de cobayo, hemolisina anti-hematíes de cordero, eritrocitos de cordero, antígeno y suero patrón.

(a) Eritrocitos de cordero.-Empleados en suspensión al 2% en solución fisiológica salina (0.85%), después de haberlos lavado por lo menos tres veces hasta que el lfquido sobrenadante no muestre matiz rosado. En la titulación de la hemolisina se usan 0.2 CC de la suspensión al 2ojl mientras que en la prueba se usan 0.4 CC de una mezcla de volú- menes iguales de la suspensión al 2% y de la dilución apropiada de hemolisina.

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(b) Hemolisina.-La hemolisina se prepara inoculando conejos con

eritrocitos lavados, de acuerdo con el método de Kolmer (6) o de Kilduffe (7), conservándola con un volumen igual de glicerina. Titulación de la hemolisma: Se preparan las siguientes diluciones de una dilución al 1: 100 de hemolisina (2 CC de hemolisina glicerinada al 50% + 98 CC de solución salina (0.85%): 1: 1,000; 1: 1,200; 1:1,600; 1:2,000; 1:2,400; 1:3,000; 1:4,000; 1:5,000; 1:6,000; 1:8,000; l:lO,OOO; y 1:12,000. Colócanse 0.2 CC de estas diluciones en dos tubos y a cada tubo se agregan: 0.2 CC de complemento dilufdo 1:40; 0.4 CC de solución salina; y 0.2 CC de eritrocitos de cordero al 2%. Los tubos se agitan por separado des- pués de agregar cada reactivo y se incuban en el bañomaría a 37°C por 1 hora. La unidad de hemolisina representa 0.2 CC de la dilución más alta que muestra hemólisis completa. En la prueba se uian dos unidades de hemolisina, y por consiguiente la dilución que debe usarse es la que muestre una concentraci6n doble que la unidad (v.g., si la unidad es 0.2 CC de la dilución al 1:3,000, habrá dos unidades en 0.2 CC de la dilución al 1:1,500). -

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guiente; el suero se extrae por medio de una pipeta Pasteur provista de una pera de caucho. Los sueros de todos los tubos se mezclan y centrifugan para separar los glóbulos rojos restantes. En varias ocasiones se han verificado pruebas sobre la actividad hemolítica del complemento, fijacibn no específica, y presencia de hemo- lisinas naturales anti-cordero, y los resultados obtenidos indican que cuando se rednen sueros de un ndmero grande de cobayos, no es necesario repetir estas pruebas individualmente. El complemento se conserva agregándole una canti- dad de solución saturada de NaCl que represente 1/10 del volumen del suero, manteniéndolo en el refrigerador y sacandolo ~610 el tiempo indispensable para extraer la cantidad que va a usarse. Titulación del complemento: Se valora el complemento usando una dilución al 1:40 preparada agregándole a 1 CC de comple- mento 3 CC de agua destilada y 36 CC de solución salina 0.85%. Se usa una pipeta de 0.2 CC graduada en l/lOO para medir las siguientes cantidades de complemento diluido: 0.08; 0.10; 0.12; 0.14; 0.16; 0.18; y 0.20 CC. Esto se hace en duplicado. Se agrega solución salina al 0.85% en una cantidad tal, que el volumen en cada tubo llegue a 0.4 CC; luego se agregan 0.2 CC de antígeno a la misma dilución usada en la prueba’; los tubos se agitan por separado después de agregar cada reactivo.

Las mezclas con el complemento se incuban a 37°C en el bañomaría por 1 hora, agregando después 0.4 CC de eritrocitos de cordero sensibilizados (partes iguales de la suspensi6n al 2% de eritrocitos y de la dilucibn de la hemolisina que contiene 2 unidades en 0.2 CC. muy bien mezcladas 10 minutos antes). La lectura se hace después de una hora de incubación y la unidad de complemento está constituída por la cantidad siguiente a la menor que muestre hemólisis completa. En la prueba se usan 2 unidades de complemento.

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El antígeno se prepara de rickettsias cultivadas en el ovisaco de huevos fértiles de gallina, según el método de Cox (8), reteniendo ~610 aquellos que contengan gran cantidad de rickettsias. Esto reza con el tifo endémico y el epidémico y la fiebre “Q”. La cosecha de rickettsias en la fiebre maculosa de las Montañas Rocosas es por lo general menor que en las anteriores, pero aun a pesar de no ser las rickettsias numerosas pueden obtenerse antígenos satisfactorios. Las membranas infectadas se pesan y se trituran en un mortero con alundum o en un mezclador “Waring” sin alundum, haciendo una emulsión al 10% con solución salina (0.85%) con 1: 10,000 de mertiolato. Después de una centrifugación lenta para eliminar las partículas más gruesas, la parte sobrenadante se centrifuga en la centrífuga angular a 4,000 r.p.m., por una hora. El precipitado se suspende en solución salina esterilizada que contenga l:lO,OOO de mertiolato. Después de permanecer en el ;efrigerador por una semana o más en tubos de 50 CC, se deposita una considerable cantidad de precipitado, dejando una suspensión más a menos turbia. La porción sobrenadante se saca con una pipeta y es la que se usa como antígeno. Los antígenos así preparados son estables por varios meses cuando se guardan en el refrigerador. La vacuna de tifo epidémico ha sido usada con éxito como antígeno en las pruebas de tifo epidémico, y debido a la intensa fijaci6n cruzada, pueden también usarse provisionalmente para comprobar sueros de casos sospechosos de tifo endémico.

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Los antígenos se titulan contra un suero positivo patrón que se ha diluído en forma apropiada, variando los títulos obtenidos de 1:8 a 1:128 para el tifo endé- mico y epidémico, y algo menos para la fiebre “Q”. En la fiebre maculosa de las Montañas Rocosas, los antígenos se han usado sin diluir y diluidos al 1:2 y 1:4. Puede considerarse como el título o unidad del antígeno la cantidadminimaque dé fijación de I-f++ con el suero patr6n. En la prueba se usan 4 unidades de antígeno.

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SUEROS

Los sueros se inactivan a 56°C por media hora. Las diluciones se preparan con una jeringa-pipeta doblando de 1: 4 hasta 1: 512, y en caso de que no se obtenga el punto terminal, aun más altas. La diluci¿n al 1:4 se prepara agregando 0.3 CC de solución salina a 0.1 CC de suero. A los tubos siguientes que contienen 0.2 de solución salina, se pasan 0.2 CC del tubo anterior y así sucesivamente.

LA PRUEBA

A las diluciones de suero contenidas en los tubos, se agregan 0.2 CC de la dilución apropiada de antígeno (4 unidades) y 0.2 CC de comple- mento (2 unidades). Después de 1 hora de incubación en el bañomarfa a 37”C, se agregan 0.4 CC de los eritrocitos sensibilizados, los 0.2 CC de hemolisina que contienen 2 unidades, y eritrocitos de cordero al 2% preparados 10 minutos antes y bien mezclados. Después de incubar por 1 hora más en el bañomaría a 37”C, las gradillas se colocan en el cuarto frío y se leen a la mañana siguiente. Los resultados positivos se

anotan como ++++, +++, ++, o indicios, y como título considé-

rase la dilución más alta que dé fijación de +++ 6 + +++. En la prueba se incluyen los siguientes testigos:

Suero-A los tubos en duplicado de las cuatro diluciones más bajas, se agregan los mismos reactivos que en la prueba, mas usando en vez de antfgeno solución salina.

Antígeno.-Los testigos de antfgeno contienen un volumen doble de la dilución usada en la prueba, v.g., 0.4 CC. y 0.2 CC de complementoy 0.4 CC de los eritrocitos sensibilizados.

Sistema hemolítico.-El control consiste en cuatro tubos que contienen 0.05,0.1,0.15, y 0.2 CC de la dilución de complemento usada en la prueba, representando estas cantidades 1/2, 1, l-1/2 y 2 unidades. En cada tubo se lleva el volumen a 0.6 CC agregando solución salina esterilizada y se agregan 0.4 CC de eritrocitos sensibilizados. El tubo que contiene 0.05 debe dar fijación de + 6 f+, y los tres tubos restantes estar com- pletamente hemolizados.

Suero patrón.-Se titula con cada prueba un suero patrón, obtenido de la mezcla de varios sueros de cobayos que han mejorado a la infec- ción, usando las mismas diluciones que en el suero examinado.

REFERENCIAS

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(1) Bengtson, Ida A.: Complement Fixation in Endemic Typhus. Pub. Health Bep., 649.1941. (2) Bengtmn, Ida A. & Topping. Norman H.: The Speoiiioity of the Complement Fiiation Test in En-

demic Typhus Fever Using Rickettaial Antigen, Pub. Health Rep., 1723, 1941.

(3) Bengtson, Ids A. & Topping, Norman H.: Complement Fixation in Rickett&l Diwases, Am. JOUT. Pd. Hazlth, 48,1942.

(4) Plotz, Harry. Br Wertman, K.: Tb Use of the Complement Fixation Te& in Rocky Mounttin Spotted Fever. Sciencc, 441, 1942.

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(8) Kolmer, J. A.: The Kohwr Complement Fixrition Test for Syphili, Supp. No. 11. Ven. Dis. In!., 56, 1940.

(7) Kilduffe, R. A.: A Note Upon a Method for the Preparation of Anti-sheep Hemolysin, Jour. Lab. & Clin. Med., 682, 1925.

(8) Cox, H. R.: Usa of Yolk SSO of Devoloping Chick Embryo &B Medium for Growing Rickettsiae of Rocky Mountain Spotted Fever and Typhus Groups, Pd. Heallh Rep., 2241,1938.

OBLIGACIONESDELAPROFI~~~ÓNMI~DICAHACIAEL

CANCEROSO*

Por el Dr. FRANCIS CARTER WOOD

Nada hay más desconsolador que el aumento en la mortalidad can- cerosa a pesar de los esfuerzos que realiza la profesión médica. Parte de este aumento aparente es sin duda resultado del mejor diagnóstico que se puede hacer hoy, y parte debido al aumento de población del grupo etario de más de 40 años en el que el cáncer es más frecuente. Mientras la cirugía y la curieterapia suministren las únicas formas efica- ces de tratamiento, existirá cierto número de casos que no pueden cu- rarse por esos métodos, ya sea porque los tumores son altamente resisten- tes como sucede con los del tubo gastrointestinal o porque estén en tal posición en el cuerpo, que tanto la irradiación como la cirugía resultan imposibles o sumamente diffciles como sucede en el cáncer del cerebro, pulmones, hígado y páncreas. Las neoplasias del riñón y las adrenales, si el diagnóstico puede hacerse temprano, pueden curarse en un bajo porcentaje de casos con la extirpación cruenta.

En la otra parte del cuadro tenemos el hecho de que nadie debe morir de cáncer de la piel, pues todos pueden curarse por medio del tratamiento apropiado. El cáncer de la mama debe ahora tratarse con resultados bastantes buenos en una población inteligente que busque el diagnós- b, tic0 temprano. La cirugía es efectiva en unos pocos casos de cáncer del estómago y en un gran número de los del recto. El cáncer del útero está siendo eficazmente combatido, y las estadísticas demuestran que, cuando se busca el tratamiento y diagnóstico tempranos, las curaciones de cinco años llegan hasta 50%.

¿Qué debe hacer el médico para ayudar en esta grave situacibn? En primer lugar el punto m&s importante y que no debe olvidarse es que el cáncer puede presentarse en cualquier persona y que no produce síntomas característicos. Los síntomas son producidos por presión u obstrucción en la función de órganos im- portantes, o por hemorragias del intestino o el titero que no siempre denotan can- cer; en otras palabras, no hay síntomas característicos del cáncer, y solamente se puede hacer el diagnóstico absoluto por el examen microscópico de un fragmento del tejido sospechoso. Por eso debe pensarse siempre en la posibilidad de cancer en toda enfermedad obscura, y tratar de excluirlo, si es posible, en todo paciente que presente sintomas raros. Cuando esa sospecha racae en una persona de más

Referências

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