Identificação de elementos cis-regulatórios putativos para os genes Dact - implicações na descoberta da expressão de Dact1 no pâncreas

(1)

(2)

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(10)

(11)

(12)

(13)

(14)

(15)

(16)

(17)

(18)

(19)

β

(20)

(21)

(22)

(23)

(24)

(25)

(26)



(27)

Espécie

Montagem

Genômica de

Referência

Gene

Intervalo analisado

Tamanho total da

sequência analisada

(em 1.000 pb)

Homo sapiens

GRCh37

DACT1

KIAA0586 - DAAM1

639 DACT2

FRMD1 – SMOC2

359 DACT3

PTGIR – PRKD2

49 Mus musculus

GRCm38

DACT1

KIAA0586 – DAAM1

585 DACT2

MLLT4 – SMOC2

372 DACT3

GNG8 – PRKD2

18 Gallus gallus

Gallus_gallus-

_4.0

DACT1

KIAA0586 – TALPID3

179

(28)

(29)

AVES

MAMÍFEROS

DACT1

x

DACT

2 



DACT1

x

DACT

3 

DACT

2 x

DACT

3 

(30)

(31)



(32)



(33)

(34)

(35)

DACT1

ECR

Forward

GGTTTTATGAGCTGAGTGATGG TCCACCCTACACCCTCCTTT

Reverse

GGTTTATTGGTCCTTACAGGG TTGCCCAAACAGAACACAAGC

TP

484 (isoforma 1) / 595 (isoforma 2)

655 FOXO1

HNF4

KAISO

PAX4

PPARG

Forward

CATCTGCCATGAA_CCGCTTG TTGCTAACACGAT_GCCCTCT TCGCTTGAACCAG_GAAGCA CACCAGCTTTGCAC_TGAAGGG CGGGCTGAGAAG_TCACGTT

Reverse

TGGACTGCTCCTC_AGTTCCT CCTCCCTGGGGT_CTTCTCAA TCAGGGCAGTTA_CTAGGCGT TTCCCAGGACCTGA_CAGTACCAA GCCGAGTCTGTG_GGGATAAA

(36)

(37)

(38)



(39)

(40)

(41)

(42)

(43)

(44)

(45)

(46)

Sequência da ECR identificada

Localização

Tamanho

_(pb)

% ID

Distância em

relação ao

Dact

Dact1: GATTTATTTATTTATTATATGTAAGTACATTGTAGCTGTCTTCA GACACTCCAGAAGAGGGAGTCAGATCTCGTTACGGATGGTT GTAAGCCACCATGTGGTTGCTGGGATTTGAACT Chromosome 12: 71,798,806-71,798,923 118 93.9 479kpb downstream Dact2: GATTTATTTATTTATTATATGTAAGTACACTGTAGCTATCTTCA GACACTCCAGAAGAGGGCATCAGATTTCGTTACGGATGGTG TGAACCACCATGTGGTTGCTGGGATTTGAACT Chromosome 17: 14,147,038-14,147,154 117 48kpb upstream Dact3: GATTTATTTATTTATTATATGTAAGTACACTGTAGCTGTCTTCA GACACACCAGAAGAGGGCATCAGATCTTGTTACGGATGGTT GTGAGCCACCATGTGGTTGCT Chromosome 7: 16,877,593-16,877,698 106 0 (intron 1)

(47)

(48)

Sequência da ECR identificada Localização (ICGSC Gallus_gallus-4.0) Tamanho (pb) % ID Distância em relação ao Dact

Dact1:

TAACTATATTACATATAGTACGAGGGCTGCTCCGAATGTAGTGCCTCCCATTTTA TGATGTCAACCTACAAAGTCAGAGGCAGATGTTGGTGGTGTGACAGTAGAGGT TGAACCTTCTCACCAATATTCCATTACATGTTGTTGCCACGTGACAGATGGCAG CAAGAGGGGCAGTCTGACAGAATGGCACTTGAAGAAGATGGAAGAGCATGTG AAGCAAAGGTATGTCACTGAATTCCTCCGTGTGGAAAAAATGGCACCCATTGAC ATTCATCAGTGCTGGCTGAACATTTATGGAGACCAAACAGTAGATGTGAGCACA GTGAGTGATGTTACGACAGCAGCAGTGGGTCACTTGCGCTAGTACAGACTGTT ACGTGCATGGCATAGAGGTTCTTGTTCATTGCTAGTGAAGATGGATAGCTAATG ATGGTGACTATGATGAAAAAGAATGTCTTGTAGCTGAGAATTTGCTCTATCAAAT ACTGTTGTTGTGCTCTTTGTATCTGCTGTAGTTTCCACGGAAATAAGAAGGCAT TACTTTTGGAACAACC Chromosome 5: 54,971,509 – 54,972,062 554 75.7 19,2kpb upstream

Dact2:

TAACAATATTATATATTTTATGAGGGCTACTCTGAAAGTAATGCCTCCTATTTTAT TATGTTGGCCCATGGTGTCAGAGGTGAATGTTGGTGGTATGGCAGTAGAGGTT GAGCCTTCCCACCAACATCCCATTACATTTTGTTGCTGTGTGACAGAAGGCAGC AGAGGGGCAGTCTGACAAAATAGTGTCTGGCATGGAAGTGCTGATGAAACAAA GGTGTGTCATTGAATTCCTCCATGCAGAAAAAATGGCACCCAGTGACATTCTTC AACACTTGTGAACATTTATGGAAACTGAATGGTAGATGTGAGCACAGTGAGGT GATCAGTAATGCATTTCAGCAGTTGTGACAATGACAGTGGGTCACCTTTGCTG GTGCGGATTTTTATGAGCACGTGCAGGCTCTTGTTTATTGCTGGTGAAGATGC ATAGCTAATGGTGGTGACTATGTTGAAAGTTAGTGTTTTGTAGCTGAGATTTTG CTTTCTCAACTAGTGTTATTGTGCTCTTTGTATCAGTTATAGTTTCCTTGGGGCT AAAGAGGAGGCATTACATTCAGAGCAGCC Chromosome 3: 41,134,671 – 41,135,237 567 24,8kpb downstream

(49)

(50)

Dact1 Posição no Genoma Humano _{(GRCh37/hg19)} Tamanho _{(em pb)} Distância em relação _ao_Dact1 Upstream 3 Chr14: 59,028,673 – 59,029,142 470 75,6 kpb Upstream 2 Chr14: 59,071,439 – 59,071,876 438 28,9 kpb Upstream 1 Chr14: 59,082,951 – 59,083,157 207 21,6 kpb Downstream 1 Chr14: 59,244,279 – 59,244,528 250 129 kpb Downstream 2 Chr14: 59,282,228 – 59,282,497 270 167 kpb Downstream 3 Chr14: 59,298,964 – 59,299,212 249 194,2 kbp Downstream 4 Chr14: 59,331,774 – 59,331,996 223 227 kbp Downstream 5 Chr14: 59,349,427 – 59,349,727 301 244,6 kbp

Dact2 Posição no Genoma Humano

(GRCh37/hg19) Tamanho (em pb) Distância em relação ao Dact2 Upstream 6 Chr6: 168,662,684 – 168,662,896 213 44,7 kbp Upstream 5 Chr6: 168,687,361 – 168,687,621 261 19,9 kbp Upstream 4 Chr6: 168,687,790 – 168,687,993 202 19,6 kbp Upstream 3 Chr6: 168,688,321 – 168,688,457 203 19,1 kbp Upstream 2 Chr6: 168,688,798 – 168,688,945 215 18,6 kbp Upstream 1 Chr6: 168,689,217 – 168,689,318 206 18,3 kbp Downstream 1 Chr6: 168,784,291 – 168,784,511 221 63,8 kbp

Dact3 Posição no Genoma Humano _{(GRCh37/hg19)} Tamanho _{(em pb)} Distância em relação _ao_Dact3

(51)

(52)

(53)

(54)

TF Possíveis Funções

AP1 / AP1FJ

Activator Protein 1/FJ. Regula a expressão gênica em resposta a uma variedade de estímulos, incluindo citocinas, fatores de crescimento, stress e infecções bacterianas e virais. Controla vários processos celulares, incluindo diferenciação, proliferação e apoptose.

AP2REP Kruppel-Like Factor 12. FT expresso durante o desenvolvimento e regulador importante da _{expressão gênica no desenvolvimento de vertebrados e na carcinogênese.}

AR Androgen Receptor. Atua como FT ativado por hormônio-esteróide.

CDP Homeodomain Protein. Regula expressão gênica, morfogênese e diferenciação, além de _{ter papel na progressão do ciclo celular, particularmente na fase S.} CDXA Homeodomain Protein. Originalmente descrita nos estágios iniciais da morfogênese do _{trato intestinal de galinha. Um dos promotores mais comuns em genes humanos.}

CIZ FT com atividade de shuttiling nucleocitoplásmica. Camundongos mutantes para este FT _{têm fenótico com massa óssea alta. Interage com C-propeptídeos do colágeno tipo 1.}

EN1

Engrailed Homeobox 1. Possui papel importante no desenvolvimento do sistema nervoso central. Supressão epigenética é comum na maioria dos cânceres coloretais, de próstata e astrocitomas.

HNF4 Hepatocyte Nuclear Factor 4. Pode ter função no desenvolvimento do fígado, dos rins e _{intestinos. Mutações já foram associadas ao diabetes tipo 1.}

HSF1 Heat Shock Transcription Factor 1. A transcrição de genes heat-shock é rapidamente _{induzida após stress por temperatura.} LEF1B Lymphoid Enhancer Factor-1. Papel importante na via de sinalização Wnt/Wg, dirigindo a _{diferenciação celular.}

MEIS1 Meis Homeobox 1. Papel crucial no desenvolvimento normal. Além disso, várias _{homeoproteínas estão envolvidas em neoplasia.}

RBPJK Recombination Signal Binding Protein for Immunoglobulin Kappa J Region. FT importante na via de sinalização Notch, envolvida na comunicação celular que regula diversos

destinos celulares.

RFX1 Regulatory Factor X 1. Fator regulatório essencial à expressão de genes MHC classe II.

RORA2 FT com alta afinidade a ácidos retinóicos, os quais são uma importante classe de moléculas sinalizadores durante o desenvolvimento de vertebrados e diferenciação

tecidual. SMAD

Medeia os sinais das proteínas BMPs, envolvidas em diversas atividades biológicas como crescimento celular, apoptose, morfogênese, desenvolvimento e respostas imunes. Sua forma fosforilada forma complexo com SMAD4, importante para sua função como regulador da transcrição.

SMAD4 Mutações no gene deste FT já foram associadas a câncer pancreático, síndrome de _{polipose juvenil e síndrome hereditária telangiectásia.}

SRF c-fos Serum Response Element-binding TF. Estimula a proliferação e diferenciação celular. Regula a atividade de vários genes ativos nos primeiros estágios do desenvolvimento, como o c-fos, e participa na regulação do ciclo celular e apoptose.

STAT6

Signal Transducer and Activator of Transcription 6, interleukin-4 induced. Tem papel central na resposta imune mediada por IL4, na diferenciação de células T helper 2 (Th2), na expressão de marcadores celulares de superfície e na mudança de classe de imunoglobulinas.

TBX5

T-box 5. Envolvido na regulação de processos do desenvolvimento. Pode ter papel central no desenvolvimento do coração e especificação de identidade dos membros. Mutações já foram associadas à síndrome Holt-Oram em humanos, afetando o desenvolvimento do coração e dos membros superiores.

VDR Vitamin D Receptor. Alvos downstream deste receptor hormonal nuclear estão envolvidos _{no metabolismo mineral, na resposta imune e no câncer.} YY1 FT distribuído ubiquamente, envolvido na repressão e ativação de diversos promotores.

(55)

TF Nome / Possíveis funções

AML1 (ou CBF, atual

RUNX1)

Acute myeloid leukemia 1 / Associa-se a diversos enhancers e promotores. Translocações cromossômicas envolvendo o gene deste FT são bem documentadas e associadas a vários tipos de leucemia.

FOX Forkhead box TF / Família de FTs com papéis críticos na regulação de múltiplos processos metabólicos, proliferação celular e expressão gênica durante a ontogênese.

FOXD3

Forkhead box D3 / Atua como repressor e ativador transcricional. Promove o desenvolvimento de células da crista neural a partir de progenitores do tubo neural. Necessário à manutenção da pluripotência em células nas fases pré- e peri-implantação da embriogênese.

FREAC7 Forkhead Box L1 / Necessário à proliferação e diferenciação corretas do epitélio _{gastrointestinal. Relaciona-se à via de sinalização Hedgehog via FTs GLI2 e GLI3.}

HFH3

Forkhead Box I1 / Ativador transcricional necessário ao desenvolvimento normal da audição, senso de equilíbrio, sistema endolinfático no ouvido interno, na função renal e na diferenciação das células intercaladas no epitélio dos túbulos renais distais. HFH4 Forkhead Box J1 / O ortólogo deste gene em camundongo é relacionado à assimetria direita-esquerda. Pode ter papel importante na determinação do destino celular

durante a espermatogênese e o desenvolvimento dos pulmões. HFH8

(ou FREAC1) Forkhead Box F1 / Provável ativador da transcrição de diversos genes específicos dos pulmões. HNF3

(atual FOXD3) Forkhead Box D3 / VER ACIMA.

HNF3alpha

(atual FOXA1)

Hepatocyte nuclear factor 3, alpha / FT envolvido no desenvolvimento embrionário, estabelecimento de expressão gênica específica e regulação da transcrição em diferentes tecidos.

HNF6 (atual ONECUT1)

One cut domain, family member 1 / No fígado, estimula a transcrição de genes expressos no órgão e antagoniza a transcrição estimulada por glicocorticóides. Influencia diversos processos celulares, como o metabolismo da glicose, regulação do ciclo celular e desenvolvimento do câncer.

MYCMAX Controla progressão do ciclo celular, diferenciação e morte das células.

PAX2 Paired box gene 2 / Fator de transcrição com provável papel na diferenciação de células renais, no desenvolvimento do trato urogenital, dos olhos e do sistema nervoso central.

POU3F2 POU domain class 3, transcription factor 2 / Envolvido na diferenciação neuronal e _{estimula a ativação de genes regulados por hormônios liberadores de corticotropinas.} XFD1 e XFD2 Xenopus forkhead domain factors / Não incluídos na pesquisa.

(56)

(57)

Dact1 Fatores de Transcrição Identificados via TRANSFAC

Upstream 3 ARNT; CDXA; CLOCKBMAL; CRX; EBOX; FOXJ2; FOXO1; FREAC4; HFH3; HFH4; HFH8; MAX; MYCMAX; NMYC; PAX2; PBX1; POU6F1; SREBP1; STRA13; USF; USF2; XFD1

Upstream 2 CBF; CEBP; CEBPGAMMA; E4BP4; FREAC2; HLF; ISRE; LEF1; NFAT; PAX5; SOX5; _{VBP; VMYB; ZEC}

Upstream 1 CDPCR3; HOX13; NRF2; TFE

Downstream 1 FREAC2; HFH1; HFH3; HFH4; HFH8; HNF4; LBP1; MYOD; MYOGENIN; PPAR; AP4; CDXA; COMP1; FOX; FOXD3; FOXF2; FOXO1; FOXO3; FOXO4; FOXQ1; PPARG; SMAD; SRY; XFD2; XVENT1

Downstream 2 ALX4; AP4; CDP; CLOX; E47; GR; KAISO; LBP1; PAX4; TEF; VMYB; ZTA

Downstream 3 -- nenhum binding site identificado --

Downstream 4 GATA; TBX5

Downstream 5 CEBPA; CEBPB; DR4; P53; T3R; TST1

Upstream 6 HNF3alpha

Upstream 5 -- nenhum binding site identificado --

Upstream 4 BARBIE

Upstream 3 AREB6; DELTAEF1; IK1; IK3; SRF; TEF1; XPF1

Upstream 2 -- nenhum binding site identificado --

Upstream 1 FOXQ2; HNF4

Downstream 1 -- nenhum binding site identificado --

(58)

(59)

Fator de

Transcrição Função

Downstream1

FOXD3 Regulador direto e upstream de diversos processos pancreáticos pós-natais, como tolerância à glicose, manutenção de células-ß (quantidade e tamanho) e proliferação destas.

FOXF2 Regula o metabolismo de adipócitos.

FOXO1

Envolvido nas vias de sinalização da insulina (inclusive induzindo a resistência ao hormônio em contextos celulares específicos), regula a homeostase metabólica e respostas ao stress oxidativo. Atua na expressão de genes adipogênicos e promove a gliconeogênese em hepatócitos. Controla a função endócrina do esqueleto na regulação do metabolismo da glicose. Regula a ação da insulina no tecido adiposo.

FOXO4 Envolvido na regulação da via de sinalização da insulina.

FOXQ1 Relacionado à via Wnt e identificado em tecido pancreático.

HNF4 Relacionado ao diabetes tipo 1. Regula desenvolvimento de células-_{beta e receptores nucleares.} PPARG Regula a diferenciação de adipócitos e a homeostase da glucose. Implicado na patologia de doenças como obesidade, diabetes,

aterosclerose e câncer.

SMAD Regula proliferação de ilhotas pancreáticas, o desenvolvimento do pâncreas endócrino, diferenciação de adipócitos. O SMAD1 é expresso na insulina de ilhotas e em células alfa pancreáticas.

Downstream2

E47 Liga-se às regiões IEB1 e IEB2, sequências curtas de DNA na região _{de controle da transcrição do gene da insulina.} KAISO Envolvido no processo de adipogênese.

PAX4

Possui papel na diferenciação e no desenvolvimento das células beta e das ilhotas pancreáticas. É, também, repressor transcricional que se liga a um elemento comum aos promoters do glucagon, insulina e somatostatina.

PPAR / PPARG

Regulador-chave na diferenciação de adipócitos e homeostase da glicose. Atua como regulador crítico na homeostase do trato intestinal ao suprimir as repostas pró-inflamatórias mediadas por NF-kappa-B.

(60)

Track Regulatório

Ativado Breve Descrição

CpG Islands

Regiões cromossômicas nas quais sequências de citosinas seguidas imediatamente por guaninas (as “ilhas CpG”), raras em genomas de vertebrados, são encontradas em taxas maiores do que no restante do genoma. São tipicamente associadas a regiões promotoras e comuns próximo aos sítios de início da transcrição. Identificadas especialmente em relação a genes

housekeeping. Layered H3K4Me1

Modificação de histonas (no caso, ‘histona H3 lisina 4 uni-metilação’) sugestivas de enhancers ou, em menor probabilidade, de demais regiões regulatórias. O perfil apresentado nos tracks de histonas delimita ampla região, da qual apenas uma pequena porção refere-se ao elemento regulatório de fato.

H3K27Ac Aceita-se que a acetilação da lisina 27 na proteína histona H3 favorece a _{transcrição ao bloquear a ação de outras histonas repressoras.} H3K4Me3 Modificação de histonas associada a promoters ativos ou em vias de serem _ativados. DNAse Clusters

Track que exibe informações de hipersensibilidade da cromatina à ação da enzima

DNAseI baseado em dados de experimentos com diversas culturas celulares. Regiões regulatórias – promotoras, em especial – apresentam padrão de hipersensibilidade maior.

Txn Factor ChIP

Reúne resultados de dezenas de experimentos de ChIP-seq em linhagens celulares humanas, utilizando anticorpos para dezenas de fatores de transcrição diferentes, e portanto sendo útil na identificação de regiões cromossômicas com binding sites para FT.

ENCODE Histone Modification Tracks –

Broad ChromHMM

Reúne informações acerca de perfis de modificação de histonas baseados em experimentos diversos, realizados por grupos de pesquisa distintos daqueles dos demais tracks de histonas mencionados acima.

ENCODE DNA

(61)

(62)

(63)

ɣ

(64)

(65)

(66)

α

18122014_5A.fcs FITC-A SSC-A 100 101 102 103 104 100 101 102 103 104 536,8 Gate 2 46,48% 18122014_5B.fcs FITC-A SSC-A 100 101 102 103 104 100 101 102 103 104 45,44% Gate 2 553,4 18122014_5C.fcs FITC-A SSC-A 100 101 102 103 104 100 101 102 103 104 569,2 Gate 2 43,95% 18122014_3A.fcs FITC-A S S C -A 100 101 102 103 104 100 101 102 103 104 26,5 Gate 2 3,80% 18122014_3B.fcs FITC-A S S C -A 100 101 102 103 104 100 101 102 103 104 4,72% Gate 2 22,2 18122014_3C.fcs FITC-A S S C -A 100 101 102 103 104 100 101 102 103 104 25,7 Gate 2 4,78% 18122014_4A.fcs FITC-A S S C -A 100 101 102 103 104 100 101 102 103 104 20,5 Gate 2 3,12% 18122014_4B.fcs FITC-A SSC-A 100 101 102 103 104 100 101 102 103 104 2,59% Gate 2 24,1 18122014_4C.fcs FITC-A SSC-A 100 101 102 103 104 100 101 102 103 104 23,7 Gate 2 2,34%

(67)

Tratamentos Nº de células viáveis analisadas (em %) Intensidade de luminescência Controle CMV 1 46,48 536,8 Controle CMV 2 45,44 553,4 Controle CMV 3 43,95 569,2 Controle pTK 1 3,8 26,5 Controle pTK 2 4,72 22,2 Controle pTK 3 4,78 25,7 ECR 1 3,12 20,5 ECR 2 2,59 24,1 ECR 3 2,34 23,7

(68)

Tratamentos Nº de células viáveis analisadas (em %) Intensidade de luminescência Controle CMV 1 15,3 1357,7 Controle CMV 2 19,3 1199,5 Controle CMV 3 17,3 1108,9 Controle CMV 4 17,6 1394,1 Controle pTK 1 4,2 30,7 Controle pTK 2 4,7 29,7 Controle pTK 3 5,5 45,5 Controle pTK 4 4,8 34,9 ECR 1 5,3 44,8 ECR 2 6,8 36,5 ECR 3 7,2 47,5 ECR 4 7,2 44,9

(69)

(70)

Silvio 23012015_Tube_017.fcs FITC-A S S C -A 100 101 102 103 104 100 101 102 103 104 15,3% Gate 2 1357,7 Silvio 23012015_Tube_018.fcs FITC-A S S C -A 100 101 102 103 104 100 101 102 103 104 1199,5 Gate 2 19,3% Silvio 23012015_Tube_019.fcs FITC-A S S C -A 100 101 102 103 104 100 101 102 103 104 17,3% Gate 2 1108,9 Silvio 23012015_Tube_020.fcs FITC-A S S C -A 100 101 102 103 104 100 101 102 103 104 1394,1 Gate 2 17,6% Silvio 23012015_Tube_009.fcs FITC-A S S C -A 100 101 102 103 104 100 101 102 103 104 4,2% Gate 2 30,7 Silvio 23012015_Tube_010.fcs FITC-A S S C -A 100 101 102 103 104 100 101 102 103 104 29,7 Gate 2 4,7% Silvio 23012015_Tube_011.fcs FITC-A S S C -A 100 101 102 103 104 100 101 102 103 104 5,5% Gate 2 45,5 Silvio 23012015_Tube_012.fcs FITC-A S S C -A 100 101 102 103 104 100 101 102 103 104 34,9 Gate 2 4,8% Silvio 23012015_Tube_014.fcs FITC-A S S C -A 100 101 102 103 104 100 101 102 103 104 36,5 Gate 2 6,8% Silvio 23012015_Tube_015.fcs FITC-A S S C -A 100 101 102 103 104 100 101 102 103 104 7,2% Gate 2 47,5 Silvio 23012015_Tube_016.fcs FITC-A S S C -A 100 101 102 103 104 100 101 102 103 104 44,9 Gate 2 7,2% Silvio 23012015_Tube_013.fcs FITC-A S S C -A 100 101 102 103 104 100 101 102 103 104 5,3% Gate 2 44,8

(71)

(72)

(73)

Experimento 1 Nº de células viáveis _{analisadas (em %)} Intensidade de luminescência Proporção GFP/Renilla

Renilla 1:10 1,1 14,3 0,02

Controle pTK 59,4 982,5 2,22

ECR 62,2 1093,2 1,69

Renilla 1:10 1,2 19,6 0,07

Controle pTK 48 700,7 1

ECR 53,4 822,5 2,15

Renilla 1:10 0,2 14,7 0,01

Controle pTK 34 836,6 0,92

ECR 33,6 888,1 1,2

Renilla 1:10 1,9 14,9 0,02

Controle pTK 55,67 193,5 1,48

ECR 54 220,7 0,96

Renilla 1:10 0,8 29,7 0,02 Controle pTK 34,6 210,2 0,5 ECR 34,5 258,3 0,7 Experimento 1 2 3 4 5 Fold-Change ECR/pTK 0,76 2,16 1,31 0,65 1,58

(74)

(75)

(76)

(77)

(78)

(79)

(80)

(81)

(82)

(83)

(84)



γ

(85)

β

(86)

β

(87)

β

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=================================== Dact1 > ECR Upstream 3 hg19 chr14:59028673-59029142 CTTTTCATGAAGGAGGGACTCCAACTTTCCTTGGGAATTATCTAAACAAAGTCACGTGTC TCCTTTTCTCTGTTCCATCTTCACATGAGAAAGCATAAATCATGTAACCCAACAAATAAA CACAATTGACATGTTATTTCTTTTTCTATAGAGACATCAGTTCTTTAATCTCCTATTTCT TGTAAGCAGGCCTGCTTTGGGGGACTGAAATCCTAATGTATACACAATGGTATTCTGTAA GTAAGAAAGAAACTCTAATGGAACTCTATGTTAGAGAAATTTAATGTAACATGACTATAT GAATACCTCTTGCTGTTTTGCTTCTCTCATCCCATTTAGCTATAAAAACCAGAAAGCATT CCTGCTGAAAGGAAAGGAACAGCTAGCTAAGAGGAAAAATCTAACCGTAAAGTGCTGGCA ATGCTCGGTGCCAAGAACCTGAGACTCTCTTTTTTTAAGCATGATGTTGT > ECR Upstream 2 hg19 chr14:59071439-59071876 AGCCTAATGCAGCACATTATCATTTGTTATTTGGGTTTAATAATTTTGACATCTTTTCAC TCATACACAAAAAGTCAGAACTGGTTTTATTTACTGTTGATTTCATCCTCCTGTGGATGA AATAACTGAAGCCTAAAGGAATGGACTAGTGCTACTGACCTGTTTGTTTAAATTATTTTT GTGTTAATAGTACACTTTGAGTATCTTTTTCCACATTACAAACTTTCTGAATTATAAATG TTTTCCTTACATTATTTAACAATGTACACTTTAAAAAATATAAAAGTTCAAACTTCAGGG GTTTCTCAGCAGTCATTAATTGTACATTTTGCACTAACTCTGGGTGTTGCGTTTCTTGTA AGATCGCGCTTTGTGCTTCAGTTTGTTACCTTTGTAGACTTATTTAATGAAATCATTCAA ATAAACCAAACTTGCTTT

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> ECR Upstream 1 hg19 chr14:59082951-59083157 TCCTCAGTCTTTTCTTGAATGCCTGGATAAAAGTCTATCATGTGTACTAAGTATGGTGTG TGCTTCTCCATTATTCATGGGTGTCAACTGCACAGGCACATTTCAATAGTAATTGTTATT ATGTAAATAATCGAATCTGAAATTACTAATACATGTAATTTCACCTGAACTAACTGTAAT GAATCTTGAGTGTGTAGTTGCATTGAC > ECR Downstream 1 TGCCGTGAACTGGGAAGTGGAAAGGCAGCAATTGGGCTGTGAGAGCCTCCTGGGTCTCCT ACTGCTGACTTCCTCCTATAAATCAGCCACAGACAGCTGCATCCACTCGCACCATGGGAT AGAAAAATAGACCCTGTTGCTAGACAGCAACACAGGCTCCACAAACACCATGGGGTCAGA GGGCAAGGGGTCTTAAGCCAGGCACTAGCCAAGCAGGCCCAGCAGCCCCGCAGATCCATT TGTTTATTTT > ECR Downstream 2 CCTTGGGGATGATGCTGGCCAGAAAGAATGTGCATGGCTATTATTGTGCCAATTTTATAA TTCATCTTTTAATAATCTGTAACTGAAGAGCTGAATGGAATTTATCAAACCCTGCCTTGT TTCTCACTGGGGAACTTTCTGTGTTTTGTTACTGAGCCAAGGCTGAATGCAGCTGTTGGA GCTGTCACCAGCATTCTGGTTCACCCAAATATTGATAATAATTACTTCTGCTTCACATGG AAAGAATTTATTTAAATATCTGTAATGGAA > ECR Downstream 3 AGGCAGCAACTCTGTGCCAGGCATCGGACTTCCAGGCTCATAAATGTGGAATCTGTCAGG CTGAGAACATAAGTTGCTCCAGCCCATTATTAGCCAGTAGAAAGCTTATAAAAAAGGACT TTATAAACCAAGGCACGAGTACATAATTTCATGAGCAAAGCTGCAGTGTGGCAGTTCTTG GTTTAAAGCTGAAAGCCTTTCTAATGTGTTGCCAGAGGATTAAACGCTATCACCATGTTT CAGGCAGTG > ECR Downstream 4 TGGGGCTTTTGCCAAAAAAGCCAGAACGCCCTTAATCTCCTCTTTCCTCATGAAACTCAC AGCTTTGGTTCGTCACAGATCTTGCAGATCTTGGCGGTGCTCTCCTACTCCCCAGTTTTG TCTCAGCACCATATGGCTTTTGACAAAGTCAGGCCACAGCTTCAACCTAAACAGCTTAAC ATTATCGAAAGCCCAGCCCACTGAGGAAATAACAGTTCTCGTT > ECR Downstream 5 ATAACACTTGTAATTTGCGATGTCATCAGCTAAAATAAGAGACAATTATTACAAATCATA TTGCTAATATTTTGAGAAACTGAGATCTAATGTTGCTAAATCAAATTCCTGTGAATTCCA CAGGGCGCTCAGCGCATTATAAGATTACCCTGTGCTCTAAGCATGTCCTCATTAAGGCTG CTGGCTACTGTGTTTTTATTGCTCCCCTGGGAGGTTTGTTGAGTTAATGCTGCCAGTAGG AAGTCGTGTTTTCCTAGCCTCCCTGGTATACAGGCCTCCCAAATAGGTCTGCAGCCAATG A =================================== Dact2 > ECR Upstream 6 hg19 chr6:168662684-168662896 CCTTCAGAAGTCGGAGAAGGCCAAAGTCCCACTGAATAAACTGCAGATGAAAGAGACTCA TGGGTCCTCAGAAGGAGGCATATGGCTGCTCTCGGGATCTTGACTTTTGAAATATTTGTT TAAAGCAAACACTTGCAGTGGCCGTGGAAAGCCTCCCGTTTCCTCTGGACCCTCAGCCTC TCCCTCGCAGGGCACCGGGCTCTCTCCCTCGGG > ECR Upstream 5 hg19 chr6:168687361-168687621 TTAATCAAATTAAAATAGTTATACTATCTAGAATAAAATAAAATGGAAACAATTTATTCA TAAGATTCATATTTAAATCATCCTTATTTACAAAATACTATCCTAAGAATTATAATTCCA TTAAGTTTCAATATGAGCAAAAGTGTAATCACTTGAGTAACAGCAGTTACTTAAACTGAA AATGAGATCAGTGAAAATGACTTTTGAAGAGAGCAAAAATATTGTCAGGTTTCTTGCTGT GGTTCTGATGTTCCGTAGCAG

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> ECR Upstream 4 hg19 chr6:168687826-168687993 CTGGAGGAGGTGGGGGGAAAGGAGGTGCTCTTCTCATGAACGGGCCCCTTGTATCCACTG GAAACAGTGGACCTCTGATTGGAGCAAGAGGTGGAGGAACAAAGCCAGGGCCAGCTGCTT CATTTTCAGCGGGGAGAGATGAATCAGGCACATTTAAATTACCAAGAT > ECR Upstream 3 hg19 chr6:168688321-168688457 TTGAGCCTCTTCCTTCTCCCCCTGGAGGCGAAGGTGAGAGTCTGAGTGGACCCTTCCACA GAGTTGGAGGATAGAGAAAAGCTCTCGTTTCAGATGAAGGCCGACCCAGTGGTGAGGGAC CATATGGGGAATGCTCT > ECR Upstream 2 hg19 chr6:168688798-168688945 ATTTCCTGTAGAGTTTCATTTCATTTTCTTTATATAATTCAGTCATTACTTTAAGTTTCT GTTGAAGCTTCTGATTCTCACTTTCAAAATGTGTGTTTTCTAACTGCAAAGATGCTTGTT CAGTCTGAAGATTTTTAATATGCTCTGT > ECR Upstream 1 hg19 chr6:168689217-168689318 TTAGAACTTGTTCTGTGTGTACTTTGGAGTCTTCAAATGTTCTTTTCTGTTTATTAAGTT CACTCACTTCTTCTTTCCATACTTCAGCTTCTTGCAAAAGCT > ECR Downstream 1 hg19 chr6:168784291-168784393 GTGCGTGCGTCTGTGTGCATGTGTGTGCGTGTGTGTGCACGCGTGCATGTTTGCGTGTGT GTGCGTGCGTGTGTGTGCGTGTTTGCATGCATGTGTGTGCGTG =================================== Dact3 > ECR Upstream 1 hg19 chr19:47142617-47143048 GGAGGAGCATCTTTACTGCAGTCGGCCCACCCTAACTCGGTTTTCACCGCCTGGACAGGG AAGGGAGACGGGCGGGGAGGGGACCCCGACCCGAGTCCCTGGTGGAGATTTGGGTCTCGG ACCCTAGCTCCCCTCCCCCCTCCCCTTGCGGGCTCAACGGGGCCAGATAAAGGAGGGAAA CCAAGCCCACATCTGGAAAGCATCAGGCGCGCCGGACGTGCCAGGGCCCCAGGCCCGGCT GCGGAAGAGGGGAGGGGAGCCAAGGCGCTCCTCGCCCCGCCATCGGGGTCCGCCGGCGCC GAGGAGGGGCCTGGGCGTGTGCCGAGCCTCCGCGCCTCTCGCAGCTGGTTTCTATCAGCA GTCTGGCCTGGGCAGCCCCCGAGGAGGAAACCAGCTCAGAGAGGGGGAAGACAGGGTGAC GATCCAGTCTTC

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