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TÍTULO: AVALIAÇÃO DA ATIVIDADE ANTICARIOGÊNICA DO EXTRATO BRUTO HIDROALCOÓLICO DAS FOLHAS DE COPAIFERA LUCENS
TÍTULO:
CATEGORIA: EM ANDAMENTO CATEGORIA:
ÁREA: CIÊNCIAS BIOLÓGICAS E SAÚDE ÁREA:
SUBÁREA: BIOMEDICINA SUBÁREA:
INSTITUIÇÃO: UNIVERSIDADE DE FRANCA INSTITUIÇÃO:
AUTOR(ES): VINÍCIUS CRISTIAN OTI DOS SANTOS AUTOR(ES):
ORIENTADOR(ES): CARLOS HENRIQUE GOMES MARTINS ORIENTADOR(ES):
COLABORADOR(ES): RODRIGO CASSIO SOLA VENEZIANI, SERGIO RICARDO AMBROSIO COLABORADOR(ES):
RESUMO
A cárie dentária, devido à sua elevada incidência e prevalência, é considerada um problema de saúde pública. Nos países industrializados estima-se que 60% a 90% da população escolarizada, bem como a maioria dos adultos sejam afetados por esta doença. A distribuição e gravidade desta patologia variam nos diferentes continentes, sendo mais prevalente nas populações desfavorecidas socialmente e economicamente. O estudo farmacológico de Copaifera spp. baseia-se prioritariamente como, anti-inflamatório, antimicrobiano, imunomodulatório, antioxidante, cicatrizante, entre outras. Um dos objetivo deste projeto foi avaliar a atividade anticariogênica do extrato bruto hidroalcoólico das folhas de C. lucens frente bactérias cariogênicas. As bactérias utilizadas foram Streptococcus mutans (ATCC 25175), Streptococcus salivarius (ATCC 25975), Streptococcus sobrinus (ATCC 33478), Streptococcus sanguinis (ATCC 10556), Lactobacillus casei (ATCC 7469) e
Enterococcus faecalis (ATCC 4082) Para essa avaliação foi realizado o método de diluição
em caldo visando à determinação da Concentração Inibitória Mínima (CIM) e a Concentração Bactericida Mínima (CBM). Os resultados obtidos na CIM para Streptococcus salivarius, S.
sobrinus, E. faecalis e L. casei apresentaram um valor superior a 400 μg/mL, sendo que para
bactérias S. mutans e S. sanguinis a CIM foi de 400 μg/mL. Para a bactéria S. mutans a CBM teve efeito bacteriostático e para S. sanguinis, bactericida. Os resultados deste estudo demonstram que o extrato bruto hidroalcoólico de C. lucens não foram considerados promissores nas pesquisas de novos agentes antimicrobianos.
INTRODUÇÃO
A cárie dentária é um termo que designa um biofilme de diversas comunidades microbiológicas, particularmente Streptococcus bucais, contidos numa matriz de polímeros de origem salivar e bacteriana. Dentre as principais bactérias envolvidas no processo cariogênico, destaca-se o Streptococcus mutans, pois foi demonstrado experimentalmente que esta bactéria é a iniciadora de cáries em sulcos, fissuras e superfícies radiculares, para posterior colonização de outros microrganismos, tais como Streptococcus salivarius, S.
sanguinis, S. mitis, Enterococcus sp e Lactobacillus sp (Kang et al, 2008; Sharma et al, 2009),
entre outras.
As árvores do gênero Copaifera sp têm sido amplamente estudadas. Este gênero compreende cerca de 72 espécies das quais 20 estão presentes na flora brasileira, sendo comumente encontrado nas regiões Sudeste, Centro-Oeste e Amazônica. As espécies deste
gênero apresentam diversas propriedades biológicas como anti-inflamatória, antibacteriana e antifúngica. A espécie Copaifera lucens é utiliza para a cicatrização de feridas, tratamento de derrames, dores de garganta e problemas de visão (Souza, 2016). Na literatura podemos encontrar alguns trabalhos relacionados à atividade antimicrobiana dos diterpenos e sesquiterpenos isolados de espécies de copaifera (Tincusi et al., 2002; Souza et al., 2011b; Abrão et al.,2015), como também outras atividades como anti-inflamátoria (Paiva et al., 2002), relaxante muscular (Cunha et al., 2003),), antitumoral (Ohsaki et al., 1994), dentre outras atividades.
OBJETIVOS
Avaliar a atividade antibacteriana in vitro do extrato bruto hidroalcoólico das folhas de
Copaifera lucens frente às bactérias cariogênicas.
METODOLOGIA
Para avaliação da atividade antibacteriana foi utilizado o método de diluição em caldo visando à determinação da Concentração Inibitória Mínima (CIM) e a Concentração Bactericida Mínima (CBM), do extrato bruto hidroalcoólico de C. lucens.
DESENVOLVIMENTO
Do extrato bruto hidroalcoólico foi pesado um miligrama e dissolvido em 125 μL de DMSO e depois acrescentado 500 μL de caldo Brain Heart Infusion (BHI). A concentração final de DMSO não foi superior a 5% e a solução nesta porcentagem será utilizada como controle negativo.
Com o auxílio de uma alça de inoculação esterilizada, os microorganismo foram transferido para 3,0 ml de solução salina (estéril) até obter turvação equivalente ao tubo 0,5 da
escala McFarland, que corresponde a aproximadamente a 1,5x108 UFC/mL, e em seguida foi
retirado 500 μL desta turvação para um outro tubo contendo 4,5 ml de solução salina e depois 2.000 μL deste tubo foi passado para um terceiro tubo contendo 13 ml de caldo BHI (estéril). Em uma microplaca esterilizada de 96 orifícios serão depositados um total de 50μL do caldo BHI, 50μL de solução mãe (SM) e posteriormente mais 30 μL do caldo e 20μL suspensão microbiana, a fim de se obter uma concentração de substâncias puras de 0, 195 a 400μg/mL, permitindo determinar a concentração necessária para inibir o crescimento do microrganismo a ser avaliado, sendo que este método foi aplicados as todas as bactérias deste estudo. Em um
dos orifícios será feito o controle da cultura, o qual deve apresentar crescimento bacteriano devido à ausência do agente antimicrobiano. Em outros orifícios o controle de esterilidade do caldo e da amostra, e em outro o controle do solvente (DMSO) utilizado para a solubilização da amostra. A clorexidina será o controle positivo.
As placas foram incubadas a 37°C em estufa bacteriológica com atmosferas adequadas sendo microaerobiose para as bactérias S. sanguinis, S. mutans, S. sobrinus e L. casei, e aerobiose para S. salivarius e E. faecalis Após o tempo de incubação será adicionado em cada poço 30μL de resazurina na concentração padronizada de 0,02 mg/mL (0,2%) preparado em solução aquosa, e as placas serão incubadas novamente por um período de 30 minutos. Para a realização da leitura será observada a mudança de coloração da mesma através de uma reação de oxi-redução, sendo então observada a alteração da cor azul (sem crescimento bacteriano) e a cor rosa (crescimento bacteriano). Para a determinação da concentração bactericida mínima, a solução de menor concentração da amostra proveniente da concentração inibitória mínima (CIM) capaz de impedir o crescimento bacteriano será utilizada para avaliar se o extrato bruto hidroalcoólico das folhas de C. lucens apenas inibem o crescimento (bacteriostático) ou se causa a morte (bactericida) desses microrganismos. O conteúdo do orifício contendo a solução será inoculado em um novo ágar BHI. O meio será incubado a 37°C por 24 horas nas condições atmosféricas adequadas para cada bactéria. O crescimento do microrganismo indicará que o extrato presente na CIM é bacteriostáticos, enquanto que a ausência de crescimento indicará que o este extrato é bactericidas.
RESULTADOS PRELIMINARES
No presente trabalho foi determinada a Concentração Inibitória Mínima (CIM) e a Concentração Bactericida Mínima (CBM) do extrato hidroalcoólico bruto das folhas de C.
lucens. Segundo Ríos & Recio (2005) e Gibbons (2008), extrato brutos vegetais que
apresentarem CIM inferior ou igual 100 μg/mL são considerados promissores nas pesquisas de novos agentes antimicrobianos, sendo assim estes foram os parâmetros utilizados no presente estudo para determinar se o extrato bruto hidroalcoólico foram promissores.
Os resultados demonstram que o extrato bruto hidroalcoólico não foi efetivo contra as bactérias aqui testadas, sendo que para as bactérias, S. salivarius, S. sobrinus, E. faecalis e L.
casei foi observado um valor da CIM superior a 400 μg/mL, não sendo possível a
determinação da CBM. Para as bactérias S. mutans e S. sanguinis a CIM foi de 400 μg/mL, e a CBM teve efeito bacteriostático em S. mutans, e bactericida em S. sanguinis. Concluimos
assim que o extrato bruto hidroalcoólico das folhas de C. lucens não apresentou atividade anticariogênica para nenhuma das bactérias bucais analisadas.
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