Pesquisa de agentes entomopatogénicos na Ilha do Pico (Açores).

ANTONIO

MARTINS CARL4 MENDES U R L O S RIBEXRO

JOSE ROSA NELSON ~ l M a l 3

Departamento de Biologia, Universidade dos Aqores

Rua

Mae

de Deus, 58. P-9502 PONTA DELGADA codex

Durante a "Expedi~iio Cienmca Pico

1991"

fez-se a recolha de amostras de solo para pesquisar nedrodos entomopatog4nicos no h b l t o do Project0 de co:olecqiio e

caractetiza~50

da variabilidade genCtica de agenres entomopatog6nicos nos Aqores. Corn o designado "Galleria trap method" isolanm-se dois nemitodos do gknero Steinernema. Urn desses isolados t! morfologicarnente prdximo de S. glaseri ernbora o "cross breeding" produza descendGncia infecunda e o *DNA probes" tambem indicie que se tram de uma espkie dirercnte de 5. glaserl. Urn segunde Stelnernema identificado n%o parasita Galleria rnellonella, Mithymna unipuncta,

Tenebrio molitor e Schistocerca sp.

A survey

for

entomopathogens in soil samples was carried during the "Scientific Expedition Pico 1991" as a part of a project of survey and characterization of insect parasites in the Azores. Two steinernemadds were isolated with the "GaJleria trap method'! me of this is morphologically close to Scejnernema glaserj but in cross breeding tesrs they are enable to produce

a

viable generation and DNA probes indicated a distinct species fram S. glaseri. The second steinernemacid is also

a

Sreinernerna

that is unable to parasitize Galleria

mellonella, Mirhymna unipm cta, Tenebrio molr'tr or Schissocerca sp.

A prospec~%o de a g a t e s pasasitas de insectos que se estP a levar a cabo inscreve-se n u m projecto de colec~%o e caracteriza~%o da varinbllidade genCtica destes microrganismos nos Aqoses, na perspectiva da sua conscrvaq%o e utilizaao.

0 trabalho que se e s d a

realizar

no

Arnbito deste projecto consiste na i)

recolha de amostras de sofa para pesquisa de microrganismos parasitas de insectos, i i ) caraccerizaq20 morfol6gica dos isolados, iii) conservaqiio de uma colecq%o de microrganismos recolhidos

em

condiqdes de viabilidade, iv) caractesiza~3a biotxologica dos iso lados corn vista i sua utilizaqb como agen

res

de controlo microbiol6gico

e

v) criac;%o de uma base de dados

em

que ser2o refesenciados informa~6es bioecolbglcas de cada urn dos microrganismos.

Neste relatkio referemse os trabalhos

de

recolha

e

de

caracteriza~%o

sistemitica de nem5todos en tomopatogf nicos recolhidos duxanre a "Expediqio Cientifica Bico

1991".

Recolha das amosms de solo

Enme 23

e 28

de Junho de 1991 recoIheramse na Ilha do Pico amostras de so10 em 32 estaqties escolhidas ao acaso (Fig. If. 0 s Iocais de recalha representam v&sios dpos de solo e

corn

diverso dpo de ocupaq30, campo de culdvado, pasto

e

vinha Cada estaqiio de recolha foi representada por uma area de cerca de 10x10 rn corn

uma

disaibui@o homogknea da vegemqao. Em cada estaq%o fizeram-se entre

10

e 15 amostras parcelares de solo que foram homogenizadas setupesando-se cerca de I kg de solo

em

sacos de pIistico devidamente idenrificadas

e

mnsportados ao laboratbrio para anhlise.

Tra

camen to das amosms para isoiamenm de nemdtodos

Usilizou-se no tratarnento das amostras recolhldas o m4todo da "Galleria trap" (Bedding e Akhurst, 1975) modiflcado, no qua1 6 larvas de urn Insecto,

Galleria mellonella, @ram colocadas numa caixa contendo 1 kg de solo e se incubava 8 dias a 22"C, flndos os quais os insectos

eram

recuperados e analisados para idendf3caq50 de doencas.

As larvas corn

sintomas

de parasitism0 causado por

nematodos eram

colocadas numa armadilha de Whl te verificando-se diariamente a saida de nernatodos do interior do insecto. 0 s insectos que apresentavam outros sintomas

eram

preparados para observaq2o microsc6pica. 0 s insectos saudaveis

eram

deixados a incubas durante 8 dias a

22°C

em

caixas de

PebS

individuais

corn

aliment0 para pesquisa de d o e n ~ a s corn reveIaq2o tardia. Testou-se

a

patogenicidade de todos os isolados assirn obtidos sobre G, mellonella e sobre

Mithymna unipuncta.

Iden rffica@o dos nemsi todos pasasitas de Jnsectos e das bactPrlas assocladas

0 s isoIados de nem5todos parasitas de insectos foram identiflcados recorrendo 2 morfologia externa e morfomeh-ia do estado infectante e do macho adulto, ao comportamento do

estado

infectante e

"DNA

probes".

Das larvas infectan tes dos nemacod os recuperados procedeu-se % obtenao da bacteria simbionte pelo mCtodo da gota pendenze

(Poinar

e Thomas, 1967). As bacterias isoladas estao a ser caracterizadas por tkcnicas morfoldgicas, bioquimicas e metab61icas.

0 material biof6gico isolada foi consewado segunde tknicas adequadas,

as nemAtodos

foram

mantidos

em

agua esteriI corn arejamento permamente sob ternperatura controlada

(10'C)

e as bac terias simbion tes do nematodo

em

criocansewaqia (-80°C).

A

amostragem

obtida no Pico considera-se satisfatbria para o tipo de pesquisa em causa. As arnosms distribuem-se por toda a iiha (Fig. I), Das amostras de so10 recolhidas 65% apresenmvam nemgtodos.

As

arnostras posftivas esGo distribuidas de urn

modo

muito hornogkneo pelos solos corn diferentes ocupaqfies (Quadm 1). A maioria dos nemitodos encontrados eram nem5todos de

Qyadro 1. CaracterizaGo das e s t a q k e molhas de nemgtodos efectuadas. Esta-

PI

P2 P3 P4

P5

P6

fY7

P8 P9 PI0 PI 1 P12 P13 P14

P15

Pld

P17

P18 P19 P20 P21 P22 P23

PTA

P25 P26

P27

P28 PZ9 P30 P31 P32

L

d

PmdeS.Jo%o Companhia de Cima PontaS. Jdlo PonodeS.Mateus Areia Larga Areia h g a Ribeirinha kkirinha S. Amaro Prainha C d r h s

(S.

Rape) CatepdaSerre-ta Covas da Mia Bosque da Junqueira Weim da Vila Laja Lajes Lajes Arnfe

F

m

hainha

de

Cima S.Roque CmsdaPico CaisdoPico Tcstada Nova Alto do Barreiro EN3

-

Madalena Madalena CanadadasIhndeiras Bandciras Cais do Calhau Carninho dos

Me

Altitode 10 75 25 25 10 10 225 300 100 75 175 400 725 700 103 350 10 10 50 200 200 1M3 25 25 775 500 250 25 625 100 10 250 Habitat Vhha Vinha Campocultivado Vin ha Vinha Vinha Pastagern Pamgem C a m p cultivado Camp cultivado Pastagem Fastagern Pastagem Pastagem Camp cuItivado Pastagem Camp cdtivado Pastagem Pastagem Camp cuItivado Pastagem Paslagem Pastagem Pastagem Pastagem Pastagern C a m p cultivado C a m p cultivado Pastagem Camp0 cultivado Vinha

Carnpo cul tivado

R m l h a 23.06.9 1 M K e a e 24.M.91 M Q( E( N a e QI K Q( Q( K Q( u 25.06,91 BI B( w N N a 26.06.9 1 B( 28.06.91 Y Nemhtodos

+

+

- -

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- t -

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- -

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- -

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+

f Steinenrema -

+

a)

- - - - - - -

-

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-

- - -

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-

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- -

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-

+

b) HetemrhaMth - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -

-

-

- - - - - - -

-

-

vida livre e fitoparasims que,

como

C dbvio, esdo

fora

do

oalance

deste mbalho. No tocante a nem5tdos en tornoparasitas obtiveram-se dois isolados, rn

em

solo cultivado,

urn

campo de milho situado

na

Piedade (esmqb

Plco

32) a 250

m

de altitude e outro

em

vinha sihlado

em

S . JoZo (estaqzo Pico 2) a 7 5 m de altitude (Wadro 2). Ao prirneiro atribuiu-se a designaqgo de cofecqiio

Az

26 e ao segundo

a

de Az 27.

Corn base

em

dados biom&tricos

os

dois nernltodos isolados ( A d 6 e Az27)

foram

caracterizados crrmo pertencendo

P

familia Steinernernatidae e ao

genera

Stelnernema. 0 s cnsaios de detenninaqio da especie esdo a decorrer constituindo

material

de investigaqiio para mestrado e doutosamento da Lic,

Jose

Silvino

Rosa.

0 isolado A226

4

urn nemgtodo morfol6gicamente prbximo de S. glasen' contudo,

os

resulrados obridos por cross-breeding (Poinar 1966; Bedding & Akhurst, 1978) conduzirarn a uma descendencia estCriI.

"DNA

probes" tambern afastam este nem5todo das especies S. carpocapsae e S. glaseri. Deste nematodo isolou-se uma bacteria sirnbionte do gCnero Xenorhabdus cuja identifica~20 e caractcrizaqiio esti

a

constituir trabalho de APCC da tic. Carla Mendes.

madm 2 .

Resenqa de Nematoda

nos

solos, segundo o habitat.

0 isoIado A224 e s t i

a

lroIocar grandes problemas

de

muldpIicaq%o sobre os hospedeiros ensaiados (G. mellonella,

M.

unipuncra,Tenebria mofimr, Schistocerra sp.) bem come em meios massa usuais. Deste n e d t o d a n3o foi possivel

isolar nenhuma

bacteria simbionte. Espera-se pesquisar

o

hospedeiro natural deste parasita numa prbxirna rniss50. A aparente especificidade deste Sreinernema desperta uma particular curlosidade uma vez que apenas est5 identificada urna espCcie deste genero corn grande especificidade, S. scaprefisci (Nguyen & Smart, 1990)

Habimtat

campo cul dvado vinha

pastagern

0 materia! bioI6gico reeclhido faz parte da CulecqHo de Entomapatbgenos dos A ~ o r e s CEA (DBJUA).

AKHURST,

R.

J.,

E R.

A.

BEDDING.,

1978, A simple cross-breeding technique to

facilitate species determination

in

the genus Neoaplecma. Nematologica

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BEDDING, R. A,

E R.

J. AKHURST., 1975. A simple technique for the detection af Insect parasitic rhabditid nematodes in soil. Nematofogica 2 1: 109-1 16. POENAR

JR.,

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105-108.

POINAR

JR.,

G. O.,

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Pa

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K.B. E

G.C. SMART., 1990. Steinmema scapterisci

n.

sp. (Rhabditida:

Swinernernatidae).

J.

of hremarol. 2 2 : 187-199

Amos

kas Total 10 6

16

corn

Nernatoda 8 4 9 corn

SWnernema

1 1 -