Oficina Analítica. Determinação de Escherichia coli e Coliformes termotolerantes. 1 Copyright year IDEXX Laboratories

(1)

1 Copyright year IDEXX Laboratories

Oficina Analítica

Determinação de Escherichia coli e Coliformes

termotolerantes

(2)

(3)

ANEXO 20 DA PORTARIA DE

CONSOLIDAÇÃO N°5

Dispõe sobre os procedimentos de controle e de

vigilância da qualidade da água para consumo humano e

seu padrão de potabilidade.

Parâmetros:

Coliformes Totais e E-coli

Heterotroficas

(4)

RESOLUÇÃO No 357, DE 17 DE MARÇO DE

2005 complemento CONAMA 274

Dispõe sobre a classificação dos corpos de água e

diretrizes ambientais para o seu enquadramento, bem

como estabelece as condições e padrões de lançamento

de efluentes, e dá outras providências.

Parâmetros:

Coliformes Termotolerantes ou

E-coli ou

(5)

Resolução RDC nº 275, de 22 de setembro de

2005

Regulamento técnico de características microbiológicas

para água mineral natural e água natural

Parâmetros:

Coliformes Totais E-coli

Enterococcus

Pseudomonas auruginosa

Clostridium perfringens

(6)

MAPA - Ministério da Agricultura, Pecuária e

Abastecimento

O Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento

(Mapa) é responsável pela gestão das políticas públicas

de estímulo à agropecuária, pelo fomento do agronegócio

e pela regulação e normatização de serviços vinculados

ao setor.

Parâmetros:

Coliformes Totais e E-coli

Enterococcus

Pseudomonas auruginosa

Clostridium perfringens

(7)

(8)

Aprovações

United States Environmental Protection Agency World Health Organization

International Standard Organization (Method 9308-2) International Bottled Water Association

European Bottled Water Association The United States Pharmacopeia

Organizatio

ns

Association of Official analytical Chemists International

U.S. Food and Drug Administration

Standard Methods for the Examination of Water and

(9)

Acreditação ISO

ISO / IEC-17025 acreditação

baseia-se uma avaliação completa dos

sistemas de gestão de qualidade

ISO 11133: 2014 refere-se ao teste

de preparação, produção,

armazenamento e desempenho dos

meios de cultura para alimentos,

ração animal e água.

(10)

Standard Methods

IDEXX Water são os únicos testes comerciais no Standard

Coliform/E. coli Method

Colilert®, Colilert 18® and Colisure®

Enterococcus Method

Enterolert®

Quantification Method

Quanti-Tray® and Quanti-Tray ®/2000

Heterotrophic Plate Count Method

SimPlate®

(11)

11 Copyright year IDEXX Laboratories

METODOS ATUAIS PARA O

CONTROLE DE COLIFORMES EM

AGUA

(12)

BIOINDICADORES

virus, bacterias, parásitos, cianobacterias

QUALIDADES DE UM BIOINDICADOR

Se encontram em abundancia

Resistente as condições ambientais

Fácil determinação

(13)

(14)

(15)

Coliformes fecais(Termotolerantes) :

Representantes

É um sub-set de coliformes totais

Definidos como bacterias que crescem a uma

temperatura de 44.5°C (+/- 0.2 °C)

Consistem das seguintes bacterias coliformes:

E. coli

K. pnuemoniae

Enterobacter spp.

(16)

(17)

METODOS ATUAIS

FILTRAÇÃO POR MEMBRANA

TUBOS MULTIPLOS

ENZIMATICOS

Todos os procedimentos atuais para a detecção de coliformes e E.

coli em agua se definem de acordo com o método utilizado

Detecção de enzimas (β-D- galactosidase e β-D- glucuronidase

Fermentação da lactose, a produção de gás, a reação de indol,

Tolerância térmica (fecal)

(18)

Fermentação por Tubos Múltiplos (MTF)

Método tradicional de fermentação da Lactose

Preparação de meios:

Incubar LTB (caldo de lauril triptosa ) até 48 horas a 35°C

• Teste presuntiva para Coliformes

Confirmação em BGLB (caldo Bilis Verde Brillante) 48 horas a 35°C

• Coliformes totais

Confirmação com meio de cultura EC (+mug) 24 horas a 44.5°C

E.Coli

Leitura dos resultados:

• Limite de quantificação : 1600

• Turbidez

• Produção de gás

(19)

Filtração por Membrana (FM)

• M-Endo

• Resultado presuntivo en 24±2 h

• Resultados confirmados en 3-4 días

• Faixa máxima Quantificação : 80 coliformes totais

• Leitura de Resultados:

• interpretação subjetiva

• crescimento confluente

• colónias sobrepondo

(20)

TECNOLOGIA DO SUBSTRATO

DEFINIDO

(21)

SUSTRATO DEFINIDO Colilert®

Colilert utiliza a Tecnologia do Substrato Definido (DST®) para detectar

simultaneamente coliformes totais e E. coli.

Para os coliformes crescerem no Colilert, eles usam β-galactosidase para

metabolizar ONPG e alterá-lo de incolor para amarelo.

E. coli utiliza β-glucuronidase para metabolizar o MUG e criar fluorescência.

Como a maioria dos não-coliformes não possuem estas enzimas, eles são

incapazes de crescer e interferir.

(22)

Materiais necessários

• Reagente Colilert

• Frasco com ou sem tiossulfato de sódio

• Estufa regulada a 35 °C

• Lâmpada UV de 365 nm e 6 W de potência

• Comparador colorimétrico (opcional)

(23)

Determinação Qualitativa (P/A) de

Coliformes totais e E.coli

Incubação:

24 horas

(24)

LEITURA

.

Amostra incolor

NEGATIVO

POSITIVO para

Coliformes totais a amostra

fica amarelo

POSITIVO para

E. Coli a amotra

emite fluorescencia

(25)

(26)

Determinação Quantitaiva dos Coliformes totais

e E.coli com Quanti-tray

1 Incubação:

24 horas

(27)

(28)

Quanti-Tray 51 MPN Table

No wells

giving

positive

reaction

MPN per

100ml

sample

95%

Lower

Confidenc

e Limit

95%

Upper

Confidenc

e Limit

0 <1

0

3.7

15

17.8

10.8

29.4

35

59.1

42

84.4

51 >200.5

146.1 infinity

(29)

(30)

Quanti-Tray 2000 MPN Table

No of large

wells giving

positive

reaction

No of small

wells giving

positive

reaction

MPN per

100ml

sample

95% Lower

Confidence

Limit

95% Upper

Confidence

Limit

10

2

13.2

7.1

22.0

30

12

64

46.8

85.1

47

40

509.9

393.4

652.5

(31)

Colilert-18

Protocolo especifico para analise de termotolerante,

método com incubação em 44.5ºC

Ensaio para realização de balneabilidade (água salobra)

Ensaio realizado em apenas 18h

(32)

Colisure

Kit para analise de coliformes e e-coli

Visualização em CPRG-MUG, Mudança do positivo

para magenta.

(33)

Validade e Armazenamento dos KITS

Colilert – 12 meses de fabricação ( Brasil chega com 9

meses)

Coliter-18 – 15 meses de fabricação ( Brasil chega com

13 meses)

Colisure - 12 meses de fabricação ( Brasil chega com 9

meses)

(34)

QC – Kit para controle de Qualidade

Realize as etapas seguintes à temperatura ambiente:

Etapa1: Retire os frascos da caixa. Deixe a temperatura ambiente por 15 minutos.

Etapa 2: Abra um frasco e transfira de forma asséptica o disco colorido, localizado sobre o tampão de

algodão, para um frasco contendo 200mL de água estéril, não tamponada e sem oxidantes. Identifique

a amostra (A, B, C). Eventualmente é possível que o disco grude no frasco.

Se isto ocorrer, utilize pinças estéreis para remover o disco com cuidado.

Etapa 3: Agite a amostra e deixe repousar por 15 minutos.

O disco deve dissolver-se completamente. Após ser dissolvido, misture invertendo

o frasco por 10 vezes.

Etapa 4: Realize a análise (determinação quantitativa) em

duplicata no período de 30 minutos após

hidratação conforme seus procedimentos de rotina.

Repita as etapas para os demais frascos.

(35)

Perguntas frequentes

o

Quais são as condições de armazenamento recomendadas para

os testes de microbiologia IDEXX-QC?

o

Os testes de microbiologia IDEXX-QC devem ser armazenados

fechados –10ºC ou menos.

o

Qual é a vida útil dos testes de microbiologia IDEXX-QC?

o

Consulte o

certificado de análise

para saber qual a vida útil do

produto.

o

Os controles de CQ são rastreáveis ou são fornecidos por um

fabricante aprovado para cumprir a norma NELAC?

o

Estas duas opções aplicam-se aos controles de CQ.

(36)

www.idexx.com.br/agua

Certificados de analise

Vídeos de treinamento

Documentos técnicos

Aprovações

(37)

(38)

Contato: Patrícia Gonçalves Vinksnaitis

E-mail:

patricia-Vinksnaitis@idexx.com