Potencial enzimático de leveduras isoladas de folhas em decomposição

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Potencial enzimático de leveduras

isoladas de folhas em decomposição

Graziela Barbosa Paludo1_;

Thiago Lucas de Abreu-Lima2_;

Solange Cristina Carreiro3_;

1 Professora do Instituto Federal do Tocantins IFTO Campus Palmas; E-mail: grazi_paludo@hotmail.com;

2 Professor do Curso de Engenharia de Alimentos da Universidade Federal do Tocantins Campus Palmas; E-mail: abreulimatl@uft.edu.br; 3 Professora do Curso de Engenharia de Alimentos da Universidade Federal do Tocantins Campus Palmas; E-mail: solange@uft.edu.br;

RESUMO

As enzimas são amplamente utilizadas no mercado industrial e inúmeros trabalhos têm apresentado o potencial de leveduras isoladas de diversas fontes para a produção de diversas enzimas. O objetivo desse trabalho foi avaliar o potencial de leveduras isoladas de folhas em decomposição, provenientes de 3 córregos no município de Taquaruçu, estado do To-cantins, para a produção de enzimas. Foram testadas 205 linhagens quanto à produção de amilase, lipase, celulase e xilanase, utilizando meios sólidos específicos com incubação a 25°C no período de 5 a 15 dias. Os resultados foram dados como Índice Enzimático (IE), que representa a relação entre o diâmetro do halo de hidrólise e o diâmetro da colônia. Das 205 linhagens avaliadas, 143 (69,8%) apresentaram resultado positivo para pelo menos uma das enzimas, sendo 83 para lipase (40,5%), 59 para celulase (28,8%), 30 para xilanase (14,6%) e 35 para amilase (17,1%). Os valores de IE variaram de 1,19 (celulase) a 7,63 (lipase).

Palavras-chave: Amilase. Celulase. Córregos. Lipase. Xilanase.

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Enzymatic potential of yeasts isolated

from decaying leaves

ABSTRACT

The enzymes are widely utilized in industrial market and several researches have been showed the potential of isolated yeasts from various substrates to produce several enzymes. The aim of this work was to evaluate the potential of yeasts isolated from decaying leaves, collected in 3 streams in Taquaruçu, state of Tocantins, to produce enzymes. They were tested 205 strains to amylase, lipase, cellulase and xylanase production, using specific solid media, at 25°C in the period of 5 to 15 days of incubation. The results were given as Enzymatic Index (EI), which is calculated by the ratio between the average diameter of the halo of degradation and the average diameter of the colony. Among the 250 strains analyzed, 143 (69.8%) showed positive results to at least one of the enzymes, being 83 for lipase (40.5%), 59 for cellulase (28.8%), 30 for xylanase (14.6%) and 35 for amylase (17.1%). The EI values ranged from 1.19 (cellulase) to 7.63 (lipase).

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1 INTRODUÇÃO

Enzimas são catalisadores biológicos indis-pensáveis a todas as reações do metabolis-mo celular. Tais proteínas são produzidas por todos os organismos vivos e podem atuar como catalisadores em inúmeras re-ações bioquímicas. Além de serem catali-sadores in vivo, as enzimas também podem ser catalisadores in vitro para várias reações, incluindo diversos processos industriais (JEGANNATHAN e NIELSEN, 2013). En-quanto catalisadores, as enzimas são mais interessantes em relação aos catalisadores químicos, uma vez que atuam em condi-ções mais brandas (pH, temperatura e pres-são atmosférica) e pres-são altamente específicas (SUNDARRAM e MURTHY, 2014). Essas propriedades únicas das enzimas, além de sua biodegradabilidade, permitem aos pro-cessos industriais serem conduzidos sob condições mais amenas, com aumento na produtividade e redução da geração de resí-duos (ADRIO e DEMAIN, 2014).

A maioria das enzimas utilizadas industrial-mente são hidrolases, sendo essas emprega-das na degradação de vários substratos na-turais (GURUNG et al, 2013). A utilização de enzimas como aditivos de detergentes representa a principal aplicação de enzi-mas industriais, como as proteases, lipases, amilases, oxidases, peroxidases e celulases. Outras aplicações, porém, vêm ganhando importância e incluem o uso de lipases, xi-lanases e lacases na remoção de trigliceróis e graxas na indústria de celulose (ADRIO e DEMAIN, 2014). Embora as proteases pre-dominem em função de seu extenso uso

na indústria de detergentes e laticínios, ou-tras hidrolases como as amilases e celulases representam a segunda classe de enzimas mais utilizadas (GURUNG et al, 2013). As amilases microbianas têm sido ampla-mente utilizadas devido a sua maior es-tabilidade em comparação às amilases de origem vegetal ou animal. Elas apresentam aplicação em várias indústrias tais como: papel, têxtil, detergentes, bioetanol, ado-çantes, produção de xaropes de glicose, sucos de frutas, panificação e bebidas. A vantagem em se utilizar microrganismos para a produção de amilases reside na sua capacidade produtiva e na facilidade de manipulação para otimizar a produção, o que confere às amilases um importante pa-pel biotecnológico (GURUNG et al, 2013). As lipases representam outro importante grupo de hidrolases, especialmente devido à sua versatilidade de aplicações. Lipases microbianas são amplamente diversificadas em suas propriedades catalíticas e especifi-cidade de substratos, o que as torna úteis em diversos setores industriais. São ainda, catalisadores versáteis e baratos para a hi-drólise de lipídeos e lipases recombinantes e têm sido utilizadas em inúmeras aplica-ções, tais como: na indústria de panifica-ção, detergentes e na conversão de óleos em biodiesel (GURUNG et al, 2013).

Pesquisas envolvendo celulases e hidrola-ses relacionadas tiveram seu início ainda na década de 1950, devido ao seu poten-cial de conversão da lignocelulose, o mais abundante recurso renovável da Terra, em açúcares fermentescíveis. No entanto,

con-68

tínuas pesquisas revelaram seu potencial biotecnológico em várias indústrias, como: alimentos, produção de cervejas e vinhos, alimentação animal, têxtil, polpa e papel (BHAT, 2000). Juntamente com as xilana-ses, as celulases têm importante aplicação na sacarificação da biomassa lignocelulósica pré-tratada para a produção de biocombus-tíveis de segunda geração, além de outras aplicações, como a clarificação de sucos de frutas, melhoramento de produtos de pani-ficação, polimento e lavagem de têxteis e biorremediação (ADRIO e DEMAIN, 2014). As xilanases podem estar associadas a ce-lulases ou não – formando as chamadas

celulase-free xilanases. As primeiras são

uti-lizadas no processamento de alimentos e bebidas, para produção de hidrolisados, na redução da viscosidade, aumento da diges-tibilidade de nutrientes para alimentação animal e produção de xilitol. Já as

celula-se-free xilanases são amplamente utilizadas

na indústria de papel no pré-tratamento da polpa antes no branqueamento, mini-mizando o uso de cloro como agente bran-queador (OTERO et al, 2015).

As enzimas microbianas são de grande im-portância no desenvolvimento de bioproces-sos industriais. Os microrganismos fornecem uma considerável quantidade de catalisado-res com aplicações que vão desde a indústria de alimentos, bebidas, polpa e papel, couro, detergentes, têxtil, alimentação animal, até a química fina, farmacêutica e de biocombus-tíveis (ADRIO e DEMAIN, 2014).

Os microrganismos têm fornecido uma gran-de riqueza gran-de enzimas úteis e o potencial uso

destes como fontes biotecnológicas para pro-dução de enzimas industriais tem estimulado o interesse na investigação da atividade en-zimática extracelular de inúmeros microrga-nismos (SARANRAJ e STELLA, 2013).

Dentre os fungos, as leveduras se apresentam como uma importante fonte alternativa para a produção de enzimas microbianas úteis na indústria. Leveduras não patogênicas são ca-pazes de produzir enzimas industrialmente úteis e têm ganhado cada vez mais impor-tância, já que podem ser facilmente cultiva-das e produzir altos níveis de enzimas extra-celulares (YALÇIN e ÇORBAC, 2013).

Nesse contexto, este trabalho teve como objetivo avaliar o potencial enzimático de linhagens de leveduras isoladas a partir de folhas em decomposição, com foco em ce-lulases, lipases, amilases e xilanases.

2 MATERIAIS E MÉTODOS

2.1 Leveduras

As 205 linhagens de leveduras utilizadas neste estudo pertencem à coleção de cul-turas microbianas Carlos Rosa da Univer-sidade Federal do Tocantins e foram isola-das de folhas em decomposição coletaisola-das em 3 córregos no município de Taquaruçu, estado do Tocantins: Ribeirão Taquaruçu (TAQ), Córrego Taquaruçu (BIO) e Ribeirão Água Suja (AS). Todas as linhagens estão preservadas a -80°C e foram reativadas em placas contendo ágar Sabouraud (20 g.L-1

de glicose, 5 g.L-1 _{extrato de levedura, 10}

g.L-1 _{de peptona e 18 g.L}-1 _{de ágar e 0,02 g.L} -1 _{de cloranfenicol) a 28ºC±1 por 48 horas.}

69 2.2 Produção de hidrolases em meio sólido

Os ensaios para verificar a produção das hi-drolases foram realizados em meios sólidos específicos em 3 repetições. As linhagens fo-ram inoculadas na superfície dos meios com auxílio de palitos de dente estéreis, sendo inoculadas 6 linhagens por placa. Essas pla-cas foram incubadas a 25°C por 5 dias (ami-lase e lipase), 10 dias (celu(ami-lase) ou 15 dias (xilanase). Após o período de incubação, as placas foram submetidas a tratamentos es-pecíficos, quando necessário, para visuali-zação dos halos de hidrólise, medidos com auxílio de um paquímetro. Os resultados foram dados como Índice Enzimático (IE), que corresponde à relação entre o diâmetro do halo de hidrólise do substrato pelo diâ-metro da colônia do microrganismo, segun-do Hankin e Anagnostakis (1975).

2.2.1 Lipase

A produção de lipase foi determinada de acordo com metodologia descrita por Sierra (1956), em meio contendo 10 g.L-1 _de

pep-tona, 5 g.L-1 _{de NaCl, 0,1 g.L}-1 _{de CaCl} 2, 18

g.L-1 _{de agar e 10 g.L}-1 _{de Tween-20}

(mono-laurato de sorbitan) com pH ajustado para 6,0. Após incubação, os halos de hidrólise foram visualizados como um precipitado cristalizado ao redor das colônias.

2.2.2 Celulase

A produção de celulase foi verificada em meio contendo 4 g.L-1 _de

carboximetilcelu-lose (CMC), 10 g.L-1 _{de extrato de}

levedu-ra, 20 g.L-1 _{de peptona, e 20 g.L}-1 _{de agar}

(STRAUSS et al., 2001). Após incubação, as placas foram coradas durante 30 minutos com solução de vermelho congo (0,3 g.L-1₎

em tampão Tris-HCl 1 mol.L-1_{, pH 7,0 e em}

seguida lavadas 2 vezes com NaCl 1 mol.L-1

(MAIJALA et al., 1991).

2.2.3 Xilanase

A produção de xilanase foi determinada de acordo com metodologia descrita por Men-des et al (2012) em meio contendo 6,7 g.L-1

de Yeast Nitrogen Base (YNB), 10 g.L-1 _de

Xilana (beechwood) e 18 g.L-1 _{de agar. Após}

incubação, as placas foram coradas durante 30 segundos com vapor de iodo (HANKIN e ANAGNOSTAKIS, 1975).

2.2.4 Amilase

A atividade amilolítica foi determinada em meio contendo 20 g.L-1 _{de amido solúvel, 5}

g.L-1 _{de (NH4)}

2SO4, 10 g.L-1 de KH2PO4 e 18

g.L-1 _{de agar (LOODER et al., 1970). Após}

incubação, as placas foram coradas durante 30 segundos com vapor de iodo (HANKIN e ANAGNOSTAKIS, 1975).

2.3 Análise estatística

Utilizou-se um delineamento experimental inteiramente casualizado (DIC), com 3 repeti-ções, aplicando o teste de Tukey a 5% de pro-babilidade para comparar as médias dos trata-mentos, utilizando o programa ASSISTAT 7.0.

3 RESULTADOS E DISCUSSÃO

Das 205 linhagens avaliadas, 141 (68,8%) apresentaram resultado positivo para pelo menos uma das enzimas testadas, sendo 83 para lipase (40,5%), 59 para celulase (28,8%), 30 para xilanase (14,6%) e 35 para amilase (17,1%). Das 141 linhagens positi-vas, 21 (14,9%) apresentaram resultado po-sitivo para 2 enzimas, 13 linhagens (9,2%)

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foram positivas para 3 das enzimas e 6 (4,3%) foram positivas para as 4 enzimas testadas. Os valores médios de IE para lipase ficaram entre 1,27 e 7,63; para celulase, os valores mé-dios de IE ficaram entre 1,19 e 3,07, enquanto que, para amilase e xilanase, esses valores variaram entre 1,37 e 4,55 e entre 1,31 e 5,59, respectivamente. Os resultados dos valores médios de IE para lipase, celulase, xilanase e amilase estão apresentados nas tabelas 1 a 4. As linhagens TAQ164, BIO45 e TAQ54 apresentaram valores de IE para lipase maiores em relação às demais (7,63; 7,12; 7,11 respectivamente). O maior valor de IE para celulase (3,07) foi da linhagem AS122, mas esse valor não diferiu estatisticamente de outras 10 li-nhagens com valores de IE entre 2,90 e 2,49. Os maiores valores de IE para xilanase (5,59) e amilase (4,55) foram das linhagens BIO119 e As110, respectivamente.

Tabela 1: Valores de IE para lipase. Média de 3 repetições.

Linhagens IE médio Linhagens IE médio Linhagens IE médio

TAQ 164 7,63b _{TAQ 141 2,80}h _{AS 46 1,77}i

BIO 45 7,12b _{AS 33 2,74}h _{AS 36 1,77}i

TAQ 54 7,11b _{TAQ 453 2,69}h _{AS 95 1,75}i

TAQ 616 5,58c _{TAQ 518 2,62}h _{TAQ 646 1,71}j

AS 11 5,27c _{TAQ 78 2,53}h _{TAQ 444 1,68}j

TAQ 109 4,98d _{TAQ 72 2,50}h _{AS 18 1,63}j

TAQ 142 4,94d _{AS 07 2,34}h _{BIO 480 1,62}j

TAQ 101 4,75d _{TAQ 114 2,31}h _{TAQ 461 1,61}j

BIO 100 4,69d _{BIO 139 2,20}i _{TAQ 615 1,59}j

BIO 52 4,65d _{TAQ 506 2,18}i _{BIO 609 1,58}j

TAQ 61 4,47e _{TAQ 139 2,14}i _{TAQ 571 1,57}j

TAQ 343 4,45e _{TAQ 03 2,10}i _{BIO 149 1,56}j

TAQ 59 4,41e _{AS 86 2,09}i _{TAQ 396 1,56}j

TAQ 46 4,210e _{TAQ 09 2,09}i _{BIO 521 1,56}j

BIO 76 3,95f _{TAQ 614 2,04}i _{TAQ 653 1,54}j

AS 119 3,83f _{TAQ 354 2,03}i _{TAQ 74 1,53}j AS 125 3,74f _{TAQ 632 2,03}i _{TAQ 669 1,52}j AS 81 3,64f _{TAQ 143 2,02}i _{BIO 119 1,52}j AS 110 3,62f _{TAQ 14 1,94}i _{TAQ 667 1,51}j TAQ 611 3,46g _{AS 138 1,92}i _{TAQ 488 1,48}j AS 121 3,40g _{TAQ 131 1,89}i _{TAQ 75 1,46}j TAQ 16 3,16g _{AS 75 1,88}i _{BIO 43 1,44}j B 142 3,07g _{AS 105 1,87}i _{TAQ 680 1,41}j TAQ 13 3,05g _{AS 34 1,85}i _{TAQ 97 1,39}j TAQ 93 2,98g _{AS 98 1,82}i _{BIO 541 1,34}j TAQ 12 2,95g _{BIO 39 1,81}i _{AS 02 1,33}j AS 64 2,91g _{AS 126 1,79}i _{BIO 231 1,27}j TAQ 02 2,84h _{AS 69 1,78}i

AS = córrego Água suja; BIO = córrego Taquaruçu; TAQ = ribeirão Taquaruçu. Médias seguidas de letras iguais não diferem entre si a 5% de significância.

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Os dados obtidos no presente estudo mostraram um maior percentual de linhagens lipo-líticas (40,5%) em comparação com as outras enzimas estudadas, assim como os maiores valores de IE foram encontrados para lipase. Isso confirma o potencial dessas linhagens para a produção de lipase, característica também descrita por outros autores com percen-tuais próximos aos obtidos nesse estudo. Buzzini e Martini (2002), em um estudo utili-zando 397 linhagens de leveduras isoladas de água, solo, insetos e materiais vegetais, ob-tiveram 40,3% das linhagens com habilidade para produzir enzimas lipolíticas. Fuentefria (2004) encontrou atividade lipolítica em 40% das 84 linhagens de leveduras isoladas do filoplano de Hibiscus rosa-sinensis e Lock (2007) obteve 26% de leveduras lipolíticas de um total de 56 isoladas de bromélias. Goldbeck e Filho (2013), ao fazerem a seleção quanto a atividade lipolítica de 372 leveduras isoladas de flores, frutos e solo de diversos biomas brasileiros, obtiveram 55,6% de linhagens positivas.

O crescente interesse em microrganismos produtores de lipases se justifica pela gama de aplicações dessas enzimas, que vão desde a indústria alimentícia até a farmacêutica e quími-ca fina (SALIHU et al, 2012). Nesse sentido, a busquími-ca por novos microrganismos produtores é de grande interesse biotecnológico e as leveduras têm se destacado nesse contexto, po-dendo representar importantes ferramentas na busca de novos microrganismos lipolíticos.

Tabela 2: Valores de IE para celulase. Média de 3 repetições.

Linhagens IE médio Linhagens IE médio Linhagens IE médio

AS 122 3,07a _{TAQ 505 2,07}de _{AS 04 1,62}mn

TAQ 631 2,90ab _{TAQ 475 1,98}ef _{BIO 119 1,60}no

TAQ 14 2,88ab _{TAQ 296 1,96}f _{AS 155 1,57}no

TAQ 250 2,70ab _{TAQ 614 1,95}f _{TAQ 39 1,53}op

TAQ 512 2,68ab _{TAQ 12 1,93}f _{TAQ 03 1,51}op

TAQ 54 2,66ab _{TAQ 423 1,90}f _{TAQ 544 1,46}pq

TAQ 09 2,53ab _{TAQ 474 1,89}f _{TAQ 95 1,45}pq

TAQ 613 2,53ab _{TAQ 93 1,88}f _{AS 68 1,39}q

TAQ 46 2,52ab _{TAQ 270 1,81}hi _{AS 43 1,38}l

AS 02 2,51ab _{TAQ 52 1,80}ij _{AS 172 1,34}l

AS 52 2,49ab _{TAQ 506 1,79}ij _{TAQ 638 1,31}l

TAQ 232 2,37bc _{TAQ 121 1,79}ab _{TAQ 638 1,30}l

AS 01 2,37bc _{TAQ 11 1,75}j _{AS 141 1,29}l

AS 03 2,35bc _{TAQ 164 1,75}j _{TAQ 08 1,26}l

TAQ 61 2,29bc _{AS 07 1,74}j _{BIO 609 1,25}l

TAQ 344 2,27bc _{TAQ 101 1,73}j _{TAQ 413 1,25}l

TAQ 139 2,22bc _{TAQ 616 1,69}j _{AS 61 1,22}l

TAQ 349 2,18cd _{TAQ 251 1,68}j _{AS 46 1,19}l

TAQ 500 2,13cd _{TAQ 636 1,66}j _{TAQ 10 1,19}l

TAQ 625 2,11cd _{TAQ 31 1,63}j

AS = córrego Água suja; BIO = córrego Taquaruçu; TAQ = ribeirão Taquaruçu. Médias seguidas de letras iguais não diferem entre si a 5% de significância.

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Tabela 3: Valores de IE para xilanase. Média de 3 repetições.

Linhagens IE médio Linhagens IE médio Linhagens IE médio

BIO 119 5,59a _{BIO 120 2,20}fghijl _{AS 14 1,59}lmnop

TAQ 461 4,03b _{TAQ 11 2,19}fghijlm _{TAQ 164 1,57}mnop

TAQ 54 3,46bc _{AS 24 2,05}ghijlmn _{AS 47 1,57}mnop

TAQ 131 3,36cd _{BIO 121 2,03}ghijlmn _{TAQ 506 1,53}nop

TAQ 139 2,82def _{TAQ 93 2,03}ghijlmn _{AS 86 1,52}nop

TAQ 616 2,77def _{TAQ 638 2,03}ghijlmno _{TAQ 61 1,47}nop

TAQ 631 2,60efg _{AS 58 1,99}ghijlmno _{TAQ 615 1,43}nop

AS 36 2,47fgh _{TAQ 46 1,88}hijlmnop _{TAQ 59 1,40}op

TAQ 143 2,39fghi _{TAQ 611 1,70}jlmnop _{BIO 45 1,33}p

AS 27 2,27fghij _{TAQ 13 1,68}jlmnop _{BIO 76 1,31}p

AS = córrego Água suja; BIO = córrego Taquaruçu; TAQ = ribeirão Taquaruçu. Médias seguidas de letras iguais não diferem entre si a 5% de significância.

Fonte: Autor.

Embora a atividade celulolítica não seja uma característica comum entre as leveduras, alguns trabalhos têm demonstrado essa capacidade em leveduras isoladas de substratos vegetais, solo e água. O estudo de microrganismos celulolíticos torna-se especialmente importante pela aplicação de celulases extracelulares na conversão de resíduos lignoce-lulósicos (DASHTBAN et al, 2009). Fuentefria (2004), em estudo envolvendo microrga-nismos isolados a partir de filoplano de Hibiscus rosa-sinensis, encontrou 24% de levedu-ras produtolevedu-ras de celulases, percentual similar ao encontrado no presente estudo. Farias (2008), avaliando a habilidade de 440 leveduras isoladas de solo em degradar celulose, obteve 11,4% das linhagens com atividade celulolítica e Souza et al (2013) obtiveram 9,1% de linhagens celulolíticas entre 317 leveduras isoladas de solo. Atividade celulolítica também foi descrita em 3 dentre 20 leveduras termofílicas isoladas de fontes termais e não termais (KHELIL e CHEBA, 2014).

De maneira similar ao que ocorre com as celulases, as xilanases são enzimas amplamente obtidas a partir de fungos filamentosos e bactérias e há poucos relatos acerca de leveduras produtoras de xilanases. Otero et al (2015) avaliaram a atividade xilanolítica de 119 leve-duras isoladas de diferentes vegetais, grãos, frutos e resíduos agroindustriais, encontrando 23 linhagens (19,3%) capazes de degradar xilana, percentual similar ao encontrado no presente trabalho. Por outro lado, Lopes et al (2011) encontraram apenas 2,6% de linha-gens positivas quando avaliaram a capacidade xilanolítica de 349 leveduras isoladas de solo, frutos e flores, assim como Rao et al (2008) obtiveram 2,1% de linhagens positivas entre 239 leveduras isoladas a partir de cascas de árvores. Apesar do baixo percentual obtido, Lopes et al (2011) consideram que as linhagens estudadas apresentam potencial

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aplicação para a produção industrial de xilanases, o que reforça a necessidade de buscar novas linhagens produtoras dessas enzimas.

Considerando que as leveduras estão presentes tanto nos estágios iniciais quanto nos avançados da decomposição de folhas e restos de caule (BLANCHETTE, 1978), além de apresentarem associações simbiônticas com insetos herbívoros, produzindo enzimas que auxiliam na decomposição de materiais vegetais (VEGA e DOWD, 2005), a produção de enzimas envolvidas na hidrólise desses materiais, como celulases e xilanases, pode ser uma característica de importância biotecnológica a ser explorada.

Tabela 4: Valores de IE para amilase. Média de 3 repetições.

Linhagens IE médio Linhagens IE médio Linhagens IE médio

AS 110 4,55a _{BIO 76 2,58}defghijlm _{AS 57 2,14}lmno

BIO 121 3,39b _{TAQ 611 2,56}efghijlm _{TAQ 59 2,13}lmno

TAQ 100 3,37bc _{TAQ 93 2,51}efghijlm _{BIO 104 2,12}mnop

BIO 119 3,36bc _{BIO 141 2,48}fghijlm _{AS 90 2,09}mnop

AS 122 3,18bcd _{TAQ 615 2,47}fghijlm _{TAQ 52 2,04}mnop

TAQ 3 3,11bcde _{BIO 77 2,34}ghijlm _{AS 11 2,04}mnop

TAQ 74 3,03bcdef _{TAQ 616 2,31}ghijlmn _{TAQ 13 1,73}nopq

AS 49 2,88bcdefg _{AS 99 2,31}ghijlmno _{TAQ 330 1,72}nopq

TAQ 465 2,87bcdefgh _{TAQ 11 2,28}hijlmno _{AS 119 1,71}opq

TAQ 14 2,78cdefghi _{TAQ 646 2,24}ijlmno _{AS 142 1,52}pq

TAQ 61 2,75defghij _{TAQ 54 2,20}ijlmno _{TAQ 86 1,37}q

TAQ 46 2,70defghijl _{BIO 45 2,15}jlmno

AS = córrego Água suja; BIO = córrego Taquaruçu; TAQ = ribeirão Taquaruçu. Médias seguidas de letras iguais não diferem entre si a 5% de significância.

Fonte: Autor.

Landell et al (2009), analisando o IE de linhagens amilolíticas isoladas de bromélias, ob-tiveram 13% de isolados positivos, enquanto que Costa et al (2011), em um teste de tria-gem com 98 leveduras isoladas de batata doce, encontraram 16,3% de linhagens positivas para a atividade amilolítica. Yalçın e Çorbac (2013) testaram a atividade amilolítica de 25 isolados provenientes de diferentes fontes (solo, pão, arroz e farinha de arroz) e encontra-ram 12 linhagens amilolíticas (48%). Esses resultados, assim como os obtidos no presente estudo, demonstram o potencial amilolítico de leveduras isoladas de diferentes substratos. As amilases estão entre as mais importantes enzimas para todas as indústrias baseadas em produtos amiláceos, com aplicações em diversos processos industriais e as amilases microbianas têm substituído completamente a hidrólise química na indústria de proces-samento de amido (SARANRAJ e STELLA, 2013). Isso leva a um aumento na demanda

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por enzimas amilolíticas e a busca por microrganismos produtores dessas enzimas é uma etapa fundamental desse processo.

Atualmente, há a necessidade de busca por novas enzimas, no sentido de se desenvolve-rem processos produtivos mais competitivos e sustentáveis (ADRIO e DEMAIN, 2014), além da otimização das condições de produção. Um primeiro passo para o desenvolvi-mento de um processo industrial visando a produção de enzimas é o isoladesenvolvi-mento de linha-gens potencialmente produtoras, portanto, estudos de bioprospecção para a seleção de microrganismos de interesse biotecnológico são fundamentais nesse contexto.

4 CONSIDERAÇÕES FINAIS

As linhagens de levedura estudadas demonstraram importante capacidade para produção de enzimas, especialmente para lipase, já que cerca de 40% dos isolados foram positivos para essa enzima. Desta forma, a microbiota de leveduras associada às folhas em decom-posição pode representar uma rica fonte de linhagens para os estudos de produção de enzimas de interesse industrial. Estudos posteriores, em cultivos submersos, envolvendo a quantificação das enzimas produzidas, bem como a avaliação das condições de cultivo para a produção dessas enzimas, devem ser conduzidos a fim de se avaliar o potencial de produção das leveduras para essas enzimas.

AGRADECIMENTOS

O presente trabalho foi realizado com apoio da coordenação de aperfeiçoamento de pes-soal de nível superior – Brasil (CAPES) – Código de financiamento 001. Os autores agrade-cem à Profª Drª Paula Benevides de Morais do Laboratório de Microbiologia e Biotecnolo-gia da UFT pela cessão das linhagens de leveduras.

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