Efeito antinociceptivo de complexos de inclusão contendo b-ciclodextrina e (-)-linalol na nocicepção não inflamatória em roedores

Texto

(1)UNIVERSIDADE FEDERAL DE SERGIPE PRÓ-REITORIA DE PÓS-GRADUAÇÃO E PESQUISA PROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM CIÊNCIAS DA SAÚDE. SIMONE DE SOUZA NASCIMENTO. EFEITO ANTINOCICEPTIVO DE COMPLEXOS DE INCLUSÃO CONTENDO β-CICLODEXTRINA E (–)-LINALOL NA NOCICEPÇÃO NÃO INFLAMATÓRIA EM ROEDORES. ARACAJU-SE 2013.

(2) EFEITO ANTINOCICEPTIVO DE COMPLEXOS DE INCLUSÃO CONTENDO SIMONE β-CICLODEXTRINA E (–)-LINALOL NA NOCICEPÇÃO NÃO INFLAMATÓRIA EM NASCIMENTO ROEDORES. 2013.

(3) SIMONE DE SOUZA NASCIMENTO. EFEITO ANTINOCICEPTIVO DE COMPLEXOS DE INCLUSÃO CONTENDO β-CICLODEXTRINA E (–)-LINALOL NA NOCICEPÇÃO NÃO INFLAMATÓRIA EM ROEDORES. Dissertação apresentada ao Programa de PósGraduação em Ciências da Saúde da Universidade Federal de Sergipe como requisito parcial à obtenção do grau de Mestre em Ciências da Saúde.. Orientador: Prof. Dr. Lucindo José Quintans Júnior Co-Orientadora: Profa. Dra. Josimari Melo de Santana. ARACAJU-SE 2013.

(4) FICHA CATALOGRÁFICA ELABORADA PELA BIBLIOTECA DA SAÚDE UNIVERSIDADE FEDERAL DE SERGIPE. N244e. Nascimento, Simone de Souza Efeito antinociceptivo de complexos de inclusão contendo β- ciclodextrina e (-)-linalol na nocicepção não inflamatória em roedores / Simone de Souza Nascimento. -Aracaju, 2013. 75 f.: il. Orientador (a): Prof. Dr. Lucindo José Quintans Júnior. Co-Orientadora: Profa. Dra. Josimari Melo de Santana. Dissertação (Mestrado em Ciências da Saúde) Universidade Federal de Sergipe, Pró-Reitoria de PósGraduação e Pesquisa, Núcleo de Pós-Graduação em Medicina.. 1. Monoterpenos. 2. Fibromialgia. Plantas medicinais. I. Título.. 3. Dor. 4. Farmacologia. 5.. CDU 615.015:582.929.4.

(5) SIMONE DE SOUZA NASCIMENTO. EFEITO ANTINOCICEPTIVO DE COMPLEXOS DE INCLUSÃO CONTENDO β-CICLODEXTRINA E (-)-LINALOL NA NOCICEPÇÃO NÃO INFLAMATÓRIA EM ROEDORES Dissertação apresentada ao Programa de PósGraduação em Ciências da Saúde da Universidade Federal de Sergipe como requisito parcial à obtenção do grau de Mestre em Ciências da Saúde. Aprovada em: 19/06/2013 _________________________________________________ Orientador: Prof. Dr. Lucindo José Quintans Júnior _________________________________________________ Co-Orientadora: Profa. Dra. Josimari Melo de Santana _________________________________________________ 1º Examinador: Prof. Dr. Enilton Aparecido Camargo ________________________________________________ 2º Examinador: Prof. Dr. Leandro Marques de Souza. PARECER _______________________________________________________________________ _______________________________________________________________________ _______________________________________________________________________ _______________________________________________________________________ _______________________________________________________________________ _______________________________________________________________________ _______________________________________________________________________ ______________________________________________________________________.

(6) DEDICATÓRIA. Dedico este trabalho, e todos os outros que vier a conquistar, à maior conquista da minha vida: Meu filho, Marquinho..

(7) AGRADECIMENTOS Agradeço a Deus: Pela vida e por mais esta oportunidade. Por me amar tanto e tornar possível tal realização. Por todas as razões abaixo citadas que apenas materializaram o poder e a força de Deus em minha vida. Pela resiliência e superação que me fez chegar até aqui. Por minha família, tão presente e atuante. Meu sincero agradecimento a vocês que são fundamentais para minha existência. Por meu filho lindo, por me fazer tão feliz e por suportar tantas horas em que estive ausente lutando por nosso futuro. Por minha mãe, a mulher que ensina diariamente a ter fé e serenidade para vencer; pelo gigantesco apoio incondicional. Por meus irmãos maravilhosos: Edmeiry, Jussara e Vinícius, pelas inspiradoras vitórias particulares e pela presença e apoio constantes. À Edmeiry, um agradecimento especial pelo direcionamento profissional. Por meus sobrinhos lindos e vitoriosos. À Lorena, muito obrigada pelo apoio dado a Marquinho. À Patrícia Marques, uma amiga-irmã tão maravilhosa e a quem tanto admiro. Ao amigo Fabrício, tão presente em todos os momentos desta caminhada. Pelos meus orientadores, os professores doutores Lucindo José Quintans Júnior e Josimari Melo de Santana, pelo inestimável enriquecimento técnico e científico, pela oportunidade de desenvolver esta parceria e por todas as horas dedicadas a esta pesquisa. Por todas as orientações recebidas, pelas indicações de percurso e discurso a seguir, pelas palavras e tempo dispendido. Aos fundamentais AMIGOS: Makson, Mônica, Renan, Priscila, Douglas, Amanda, Daniele, Clarissa- que tornaram possível o impecável trabalho experimental. Aos amigos de estudo: Adriana e Paula- pelas orientações até nas produtivas madrugadas. Aos amigos: Zak, Fernando Nampo e Denise. Aos amigos muito habilidosos: Fernando Every, Meiryele, Simone Otília, Flávia. Ao professor Antônio pelo apoio e incentivo. Aos membros da Banca: Os professores doutores: Enilton, Leonardo, Antônio, Leandro- muito obrigada pelas enriquecedoras contribuições e apoio. Agradeço a Deus pela vida de cada um de vocês. Pela Universidade Federal de Sergipe, pelo acolhimento e espaço profissional. Ao apoio dos profissionais: Sr. Aloísio, Sr. Oswaldo, Sr. Galego. Ao Prof. Dr. Anselmo Luís pelo comprometimento e dedicação. Meu sincero agradecimento a todos que se sentem parte desta vitória. Finalmente, e graças a Deus, este momento chegou..

(8) RESUMO NASCIMENTO, Simone de Souza. Efeito antinociceptivo de complexos de inclusão contendo β-ciclodextrina e (–)-linalol na nocicepção não inflamatória em roedores 2013. 75 f. Dissertação (Mestrado em Ciências da Saúde) – Programa de Pós-graduação em Ciências da Saúde, Universidade Federal de Sergipe, Aracaju, 2013. O (–)-linalol (LIN) é um monoterpeno alcoólico majoritário nos óleos essenciais de várias espécies aromáticas comumente encontradas no nordeste brasileiro, tais como Ocimum basilicum e Cinnamomum verum. Estudos recentes tem demonstrado que o LIN produz importantes propriedades terapêuticas, incluindo seus efeitos antinociceptivo, antiinflamatório e anticonvulsivante. Apesar dos benefícios supracitados, o LIN, como os monoterpenos em geral, exibe baixa solubilidade em água, alta volatilidade e curta meia vida plasmática; desta forma a incorporação em ciclodextrinas (CDs), especialmente a β-CD, vem se destacando como uma ferramenta importante para melhorar as propriedades físicoquímicas e biológicas deste derivado isoprênico. Assim, foram investigados os possíveis efeitos antinociceptivos do LIN, isolado e incluso em β-CD no modelo animal de hiperalgesia muscular não inflamatória, além dos efeitos do tratamento na atividade motora e a ação central. Camundongos Swiss machos (25-35 g), foram divididos em grupos e submetidos ao protocolo de indução da nocicepção não inflamatória através da injeção de solução salina ácida (pH 4; 20 μL) no ventre do músculo gastrocnêmio esquerdo. Posteriormente, foram tratados, por via oral (v.o.) com LIN (25 mg/kg), LIN/β-CD (25, 50 e 100 mg/kg), tramadol (TRM 4 mg/kg, i.p.) ou veículo (solução salina 0,9%), e avaliados quanto à parâmetros comportamentais durante um período de 27 dias. Os animais foram submetidos aos testes da hiperalgesia mecânica (von Frey digital), da coordenação motora (Rota Rod) e da força muscular (Grip Strength Metter), e para determinar o possível envolvimento de áreas do Sistema Nervoso Central (SNC), os animais foram tratados e, noventa minutos após, foram anestesiados, perfundidos, os cérebros extraídos e cortados em criostato. As secções cerebrais foram submetidas ao protocolo de imunofluorescência para proteína Fos. Os resultados foram expressos como média ± erro padrão da média. As diferenças entre os grupos foram analisadas por meio do teste de variância ANOVA, uma via, seguido pelo teste de Bonferroni. Valores de p < 0,05 foram considerados estatisticamente significantes. O tratamento com LIN e LIN/β-CD apresentou atividade antinociceptiva no modelo animal de hiperalgesia muscular crônica não inflamatória em camundongos, em todas as doses testadas, tendo o LIN/β-CD atividade prolongada em relação a substância isolada, confirmando a possibilidade de melhora significativa na ação terapêutica; o tratamento com LIN e LIN/β-CD não induziu incoordenação motora nem alteração da força muscular. Através da imunofluorescência, observou-se que o tratamento de LIN e LIN/β-CD apresentou ação no SNC, atuando no encéfalo, visto que o córtex restrosplenial e a substância cinzenta periaquedutal são estruturas centrais intimamente relacionadas com os mecanismos modulatórios da dor. Descritores: Monoterpenos, imunofluorescência.. (–)-linalol,. β-ciclodextrina,. fibromialgia,. dor,.

(9) ABSTRACT NASCIMENTO, Simone de Souza. Antinociceptive effect of inclusion complex containing β-cyclodextrin and (-)-linalool in a non-inflammatory nociception in mice. 2013. 75 f. Dissertação (Mestrado em Ciências da Saúde) – Programa de Pós-graduação em Ciências da Saúde, Universidade Federal de Sergipe, Aracaju, 2013.. (–)-linalool (LIN) is a monoterpene alcohol majority in the essential oils of several aromatic species commonly found in northeastern Brazil, such as Ocimum basilicum and Cinnamomum verum. Recent studies have shown that LIN has important therapeutic properties, including its antinociceptive, anti-inflammatory and anticonvulsant. Despite the benefits described above, the LIN, such as monoterpenes generally exhibits low solubility in water, high volatility and short half-life, thus incorporation into cyclodextrins (CDs), especially β-CD, has emerged as a tool important to improve the physicochemical properties and biological isoprênico this derivative. Thus, we investigated the possible antinociceptive effects of LIN isolated and included in β-CD in chronic non-inflammatory muscle pain model, besides to the effects on the motor activity and the central action. Male Swiss mice (25-35 g) were divided into groups and subjected to induction protocols non-inflammatory nociception by injecting acid saline (pH 4; 20 μL) in the belly left of gastrocnemius muscle. Subsequently, they were treated orally (p.o.) with LIN (25 mg/kg) LIN/β-CD (25, 50 and 100 mg/kg) tramadol (TRM 4 mg/kg, i.p.) or vehicle (solution 0.9% saline), and evaluated for behavioral parameters over a period of 27 days. The animals were subjected to tests of mechanical hyperalgesia (von Frey digital), motor coordination (Rota Rod) and muscle strength (Grip Strength Metter), and to determine the possible involvement of areas of the central nervous system (CNS), the animals were treated and ninety minutes, were anesthetized, perfused, the brains extracted and cut in a cryostat. The brain sections were subjected to immunofluorescence protocol for Fos protein. The results were expressed as mean ± standard error of the mean. Differences between groups were analyzed by ANOVA test, a path followed by Bonferroni test. P values <0.05 were considered statistically significant. Treatment with LIN and LIN/β-CD showed antinociceptive activity in animal model of chronic non-inflammatory muscle hyperalgesia in mice at all doses tested, with the LIN/β-CD prolonged activity against isolated substance, confirming the possibility of significant improvement in the therapeutic action; treatment with LIN and LIN/β-CD did not induce motor incoordination or change in muscle strength. By immunofluorescence, we observed that treatment of LIN and LIN/β-CD presented action in the CNS, acting in the brain, whereas the retrosplenial cortex and periaqueductal gray central structures are strictly related to the mechanisms of pain modulatory. Descriptors: monoterpenes, (–)-linalol, β-ciclodextrin, fibromyalgia, immunofluorescence..

(10) LISTA DE SIGLAS E ABREVIATURAS AINES: anti-inflamatórios não-esteroidais β-CD: β-cyclodextrina CD: ciclodextrina EMA: European Medicines Agency FDA: Foods and Drugs Administration FM: fibromialgia LIN: (–)-Linalol LIN/β-CD: (–)-Linalol/β-cyclodextrina OEs: óleos essenciais SNC: sistema nervoso central.

(11) SUMÁRIO 1 INTRODUÇÃO................................................................................................................... 10 1.1 REFERÊNCIAS .............................................................................................................. 17 2 OBJETIVO.......................................................................................................................... 20 3 DESENVOLVIMENTO .................................................................................................... 21 3.1 ARTIGO 1: OUTCOME MEASURES OF MEDICINAL PLANTS OR RELATEDNATURAL PRODUCTS FOR FIBROMYALGIA: A SYSTEMATIC REVIEW ................ 22 3.2 ARTIGO 2: UTILIZAÇÃO DE PLANTAS MEDICINAIS NO TRATAMENTO DA FIBROMIALGIA: UMA PROSPECÇÃO TECNOLÓGICA ................................................ 33 4 PARTE EXPERIMENTAL .............................................................................................. 42 4.1 ARTIGO 3: LINALOOL AND LINALOOL-COMPLEXED IN Β-CYCLODEXTRIN PRODUCE ANTINOCICEPTIVE ACTIVITY IN CHRONIC NON-INFLAMMATORY MUSCLE PAIN MODEL WITH INVOLVEMENT OF DESCENDING PAIN-INHIBITORY MECHANISMS …………………………………………………………………………...... 42 5 CONCLUSÃO .................................................................................................................... 68 6 PERSPECTIVAS ............................................................................................................... 69 ANEXO 1 – PROTOCOLO DE SUBMISSÃO AO PERIÓDICO THE JOURNAL OF PAIN....................................................................................................................................... 70 ANEXO 2 – NORMAS DE SUBMISSÃO AO PERIÓDICO THE JOURNAL OF PAIN .................................................................................................................................................. 71 ANEXO 3 – PROTOCOLO DE APROVAÇÃO NO COMITÊ DE ÉTICA EM PESQUISA ANIMAL DA UNIVERSIDADE FEDERAL DE SERGIPE ................................................. 75.

(12) 1 INTRODUÇÃO. A fibromialgia (FM) é uma doença reumatológica que cursa com dor musculoesquelética difusa e crônica, tipicamente associada à fadiga, distúrbios do sono, alterações do humor, depressão, entre outros sintomas. Embora sua patogênese ainda não esteja totalmente esclarecida, as maiores evidências apontam para um distúrbio na modulação central da dor ou um processamento alterado do sistema nervoso central (SNC) em resposta a um estímulo nociceptivo (DADABHOY et al., 2008; NIELSEN e HENRIKSSON, 2007; PILLEMER et al., 2005; STAUD et al., 2001; STAUD et al., 2005). A terapia farmacológica é um dos recursos utilizados para o tratamento de um dos sintomas da FM que mais geram queixas pelo pacientes: a dor. Dentre os medicamentos mais utilizados, estão os opióides, as drogas anti-inflamatórias nãoesteroidais (AINEs), as drogas miorelaxantes, os analgésicos periféricos e os antidepressivos (CAVALCANTE et al., 2006). No entanto, entre 40% a 60% dos pacientes fibromiálgicos não respondem bem à farmacoterapia atual, mostrando baixa adesão terapêutica devido aos efeitos colaterais ou inefetividade ao tratamento (PILLEMER et al., 2005). Progressos recentes na terapêutica atual têm estimulado o uso de produtos naturais em todo o mundo, incluindo as plantas medicinais, para tratar diversas doenças devido as suas propriedades farmacológicas (EDDOUKS et al., 2012). Dessa forma, a pesquisa utilizando plantas medicinais vem recentemente apresentando atividades terapêuticas importantes no tratamento da FM, com melhora significativa de sintomas tais como dor (CASANUEVA et al., 2012), insônia (WARE et al., 2010), qualidade de vida (LISTER, 2002) e ansiedade (SKRABEK et al., 2008). Neste sentido, realizamos uma revisão sistemática de literatura para avaliar a eficácia e segurança das plantas medicinais ou produtos relacionados a naturais em pacientes com FM. Nossa análise demonstrou que são encontrados benefícios significativos na melhoria dos sintomas da FM. (NASCIMENTO et al., 2013) Ainda neste sentido, realizamos uma prospecção para rastreamento de produtos tecnológicos relacionados à utilização de plantas medicinais como abordagem terapêutica da FM. A prospecção foi realizada, tendo como base, os pedidos de patente depositados no European Patent Office (Espacenet), no World Intellectual Property.

(13) Organization (WIPO), no Derwent World Patents Index (DWPI) e no Banco de dados do Instituto Nacional de Propriedade Industrial (INPI) do Brasil. De fato, há um número crescente de depósitos no período de 2008 a 2012, mas poucos produtos tem se dedicado ao tratamento específico da fibromialgia havendo uma carência em novas tecnologias que sejam inovadoras e que atendam a completude da terapêutica (NASCIMENTO et al., 2013). Por estes motivos, a busca por novas alternativas terapêuticas continua sendo constante em todo o mundo, e os produtos naturais vêm ocupando grande destaque na indústria farmacêutica mundial (MISHRA e TIWARI, 2011). Entre 2005 e 2010, a FDA e a European Medicines Agency (EMA) aprovaram um total de 19 medicamentos baseados em produtos naturais, a exemplo do Dronabinol (Sativex®), Exenatide (Byetta®) e Romidepsin (Istodax®), indicados no tratamento álgico, diabético e oncológico, respectivamente. Destes medicamentos, sete correspondem a produtos naturais, 10 são produtos naturais semissintéticos e dois são drogas derivadas de produtos naturais (MISHRA e TIWARI, 2011), mostrando o potencial inovador desta linha de produção. Um exemplo disso aconteceu no Brasil, em 2004, com o registro na Agência Nacional de Vigilância Sanitária (ANVISA), do anti-inflamatório tópico Acheflan®, do Laboratório Aché – um produto totalmente produzido a partir do óleo essencial da planta Cordia verbenacea, rico em terpenóides. Ao ser lançado no mercado em 2005, passou a ocupar o ranking do antiinflamatório tópico mais prescrito pelos médicos, correspondendo a cerca de 40% do total de prescrições (BAKKALI et al., 2008). Dentre os produtos naturais promissores para a terapêutica e a indústria farmacêutica, destacam-se os monoterpenos, que representam cerca de 90% dos constituintes dos óleos essenciais (OEs) obtidos de espécies vegetais aromáticas (BAKKALI et al., 2008). Novos compostos biológicos de produtos naturais, incluindo os terpenóides, têm sido estudados na tentativa de controlar a dor, tais como plantas medicinais ou seus metabólitos secundários (GUIMARÃES et al., 2013) e pesquisas com plantas medicinais apresentou recentemente atividades terapêuticas importantes para o tratamento de FM, com melhora significativa dos sintomas, como dor, insônia, ansiedade e qualidade de vida (NASCIMENTO et al., 2013). Os óleos essenciais têm atraído a atenção da indústria e da pesquisa científica devido ao seu uso potencial como um conservante natural, como estes são Geralmente Reconhecidos como Seguros (GRAS) (Gutierrez et al., 2009.). Food and.

(14) Drug Administration considerou linalol como GRAS, sendo uma substância aromatizante sintética. O óleo essencial de Ocimum basilicum L. é rico em monoterpenos, sendo que o constituinte químico mais abundante é o linalol. O (–)linalol (Figura 1B) é um dos enantiômeros do linalol, composto natural de muitos óleos essenciais, que vem demonstrando várias atividades farmacológicas promissoras, tais como depressor do SNC, atividade analgésica e anti-inflamatória em modelos animais (PEANA et al., 2003; PEANA et al., 2002) e redução da alodinia em modelos de dor neuropática induzida (BERLIOCCHI et al., 2009); adicionalmente, demonstrou atividade antinociceptiva e modulação glutamatérgica mediada por mecanismos centrais, com envolvimento dos sistemas opióide, dopaminérgico e colinérgico. Tais efeitos sugerem sua possível aplicação no tratamento da dor crônica (BATISTA et al., 2010; BERLIOCCHI et al., 2009; PEANA et al., 2004; PEANA et al., 2006). Apesar dos benefícios promissores supracitados, aproximadamente 40% destas novas entidades químicas exibem fraca solubilidade em água, representando um grande desafio para a sua utilização na terapêutica, pois leva à baixa disponibilidade (MENEZES et al., 2012; RAJESH, 2013; SHARMA, 2012), o que pode comprometer a utilização de óleos essenciais e seus metabólitos secundários no desenvolvimento de preparações farmacêuticas (MARRETO et al., 2008; SERAFINI et al., 2012). Os monoterpenos, tais como (–)-linalol, apresentam fraca solubilidade em água e suas propriedades farmacológicas têm uma meia-vida curta limitando sua utilização em condições dolorosas (QUINTANS-JÚNIOR et al., 2013), porém várias abordagens vêm sendo utilizadas para melhorar as propriedades farmacêuticas dos monoterpenos, incluindo o encapsulamento molecular (compostos de inclusão) ou vetorização, que promove estabilidade e liberação controlada dos materiais inclusos (CHALLA et al., 2005; HĂDĂRUGĂ, 2012). Ciclodextrinas podem representar um dos mais simples sistemas de inclusão (CIOBANU et al., 2012), aumentando a solubilidade aquosa e as propriedades farmacológicas de moléculas hóspedes, sem alterar sua capacidade intrínseca de permear membranas lipofílicas. Dentre as moléculas-hospedeiras, a β-ciclodextrina (βCD) (Figura 1A) é amplamente utilizada para melhorar a biodisponibilidade, sendo o agente preferido para inclusão de medicamentos na indústria farmacêutica (MENEZES et al., 2012; SERAFINI et al., 2012). Ultimamente as ciclodextrinas (CDs) têm sido utilizadas na indústria farmacêutica principalmente como agentes de complexação para aumentar a solubilidade aquosa de fármacos fracamente solúveis com o objetivo de.

(15) aumentar a sua biodisponibilidade e estabilidade (Menezes et al., 2012). Além disso, alguns trabalhos têm relatado que a formação do complexo de inclusão pode prolongar e aumentar a duração e a intensidade das drogas (FRANCO DE LIMA et al., 2012; KEMELBEKOV et al., 2010). Recentemente, o nosso grupo demonstrou que monoterpenos complexados com β-CD, inclusive o linalol, melhorou o perfil biológico e, aparentemente, aumentou a biodisponibilidade, quando comparada com o monoterpeno isolado (QUINTANS et al, 2013; QUINTANS-JÚNIOR et al, 2013).. Figura 1 – Estrutura química plana da β-ciclodextrina (A), extraída de Botelho et al., 2011; e estrutura química do (–)-linalol (B), extraída de Guimarães et al., 2013. Neste estudo, utilizou-se o LIN, isolado e incluso com β-CD, e foi avaliada sua ação terapêutica no modelo animal de fibromialgia. Os modelos animais de estados de doença são ferramentas valiosas para o desenvolvimento de novos tratamentos, bem como para examinar mecanismos subjacentes (SLUKA, 2009). Foi desenvolvido e caracterizado um modelo animal de hiperalgesia muscular crônica induzida por duas injeções intramusculares de salina ácida (SLUKA, KALRA e MOORE, 2001). Este modelo é único em relação a outros modelos de dor muscular, por que: 1) Há hiperalgesia bilateral mecânica de longa duração da pata, músculo e vísceras, 2) não há danos nos tecidos periféricos e 3) a hiperalgesia é mantida por alterações no sistema.

(16) nervoso central (SNC) (SKYBA, KING e SLUKA, 2002; SKYBA, LISI e SLUKA, 2005; SLUKA, KALRA e MOORE, 2001; TILLU, GEBHART e SLUKA, 2008; YOKOYAMA et al., 2007). Além disso, tal como relatado por Nagakura e colaboradores, este modelo é sensível a antidepressivos e anticonvulsivantes. (DESANTANA e SLUKA, 2008). Até o presente momento, não foram encontrados estudos sobre o possível efeito antinociceptivo do LIN ou de seu complexo com β-CD (LIN/β-CD), em modelos de fibromialgia experimental em roedores. Desta forma, o presente estudo buscou, pela primeira vez na literatura, determinar os possíveis efeitos antinociceptivos do LIN e LIN/β-CD, assim como sua ação no SNC, frente à nocicepção fibromiálgica em roedores,. podendo,. futuramente,. se. tornar. uma. molécula. promissora. no. desenvolvimento de novas propostas terapêuticas para o tratamento da dor. A presente dissertação encontra-se dividida em três capítulos; no primeiro foi apresentado o artigo de revisão publicado pela Evidence Based Complementary and Alternative Medicine (ISSN: 1741-427X), uma revisão sistemática sobre a eficácia e segurança da utilização de plantas medicinais e relacionados a produtos naturais como abordagem terapêutica na fibromialgia; no segundo, o artigo publicado na Revista GEINTEC (ISSN: 2237-0722), referente à prospecção de patentes; no terceiro capítulo foi apresentado o artigo submetido ao The Journal of Pain (ISSN: 1526-5900), apresentando o estudo experimental da atividade antinociceptiva produzida por LIN e LIN/β-CD na nocicepção inflamatória não inflamatória..

(17) 1.1 REFERÊNCIAS BAKKALI, F. et al. Biological effects of essential oils – A review. Food and Chemical Toxicology, v. 46, n. 2, p. 446-475, 2// 2008. BATISTA, P. A. et al. The antinociceptive effect of (-)-linalool in models of chronic inflammatory and neuropathic hypersensitivity in mice. J Pain, v. 11, n. 11, p. 1222-9, Nov 2010. BERLIOCCHI, L. et al. (-)-Linalool attenuates allodynia in neuropathic pain induced by spinal nerve ligation in c57/bl6 mice. Int Rev Neurobiol, v. 85, p. 221-35, 2009. CASANUEVA, B. et al. Short-term efficacy of topical capsaicin therapy in severely affected fibromyalgia patients. Rheumatol Int, Jul 28 2012. CAVALCANTE, A. B. et al. The prevalence of fibromyalgia: a literature review. Revista Brasileira de Reumatologia, v. 46, n. 1, p. 40-48, 2006. CHALLA, R. et al. Cyclodextrins in drug delivery: an updated review. Aaps Pharmscitech, v. 6, n. 2, p. E329-E357, 2005. CIOBANU, A. et al. Inclusion interactions of cyclodextrins and crosslinked cyclodextrin polymers with linalool and camphor in< i> Lavandula angustifolia</i> essential oil. Carbohydrate Polymers, v. 87, n. 3, p. 1963-1970, 2012. DADABHOY, D. et al. Evidence-based biomarkers for fibromyalgia syndrome. Arthritis Res Ther, v. 10, n. 4, p. 211, 2008. DESANTANA, J. M.; SLUKA, K. A. Central mechanisms in the maintenance of chronic widespread noninflammatory muscle pain. Current pain and headache reports, v. 12, n. 5, p. 338-343, 2008. EDDOUKS, M. et al. Medicinal plants in the prevention and treatment of chronic diseases. Evidence-based Complementary and Alternative Medicine: eCAM, v. 12, 2012..

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(21) 2 OBJETIVOS. 2.1 OBJETIVO GERAL ₋ Avaliar os possíveis efeitos antinociceptivos do ()linalol, isolado (LIN) e incluso em β-ciclodextrina (LIN/β-CD) no modelo animal de hiperalgesia muscular nãoinflamatória em roedores.. 2.2 OBJETIVOS ESPECÍFICOS ₋ Avaliar o possível efeito antinociceptivo (central ou periférico) do LIN e LIN/β-CD no modelo animal de hiperalgesia muscular não-inflamatória em roedores; ₋ Avaliar o tratamento dos complexos e seu efeito na atividade motora (coordenação e força muscular). ₋ Avaliar o possível efeito de LIN e LIN/β-CD sobre o Sistema Nervoso Central (SNC) através do protocolo de imunofluorescência..

(22) 3 DESENVOLVIMENTO.

(23) 3.1 ARTIGO 1: EFFICACY AND SAFETY OF MEDICINAL PLANTS OR RELATED-NATURAL PRODUCTS FOR FIBROMYALGIA: A SYSTEMATIC REVIEW. Artigo publicado pelo periódico: Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine Fator de impacto no Journal Citation Reports (JCR): 4,774 ISSN: 1741-427X.

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(34) 3.2. ARTIGO. 2:. UTILIZAÇÃO. DE. PLANTAS. MEDICINAIS. NO. TRATAMENTO DA FIBROMIALGIA: UMA PROSPECÇÃO TECNOLÓGICA. Artigo publicado na: Revista GEINTEC: Gestão, Inovação e Tecnologias. ISSN: 2237-0722.

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(43) 4 PARTE EXPERIMENTAL 4.1. ARTIGO. 3:. LINALOOL. AND. LINALOOL-COMPLEXED. IN. Β-. CYCLODEXTRIN PRODUCE ANTINOCICEPTIVE ACTIVITY IN CHRONIC NON-INFLAMMATORY MUSCLE PAIN MODEL WITH INVOLVEMENT OF DESCENDING PAIN-INHIBITORY MECHANISMS. Artigo submetido ao periódico: The Journal of Pain Fator de impacto no Journal Citation Reports (JCR): 4.926 ISSN: 1526-5900.

(44) Linalool and linalool-complexed in β-cyclodextrin produce antinociceptive activity in chronic non-inflammatory muscle pain model with involvement of descending paininhibitory mechanisms. Simone de Souza Nascimentoa, Josimari Melo DeSantanab, Paula Passos Menezesc, Enilton Aparecido Camargoa, Waldecy de Lucca Júniord, Ricardo Luís Cavalcante de Albuquerque-Júniore, Leonardo Rigoldi Bonjardimf, Adriano Antunes de Souza Araújoc, Lucindo José Quintans-Júniora,*. a. Department of Physiology, bDepartment of Physical Therapy, cDepartment of Pharmacy, dDepartment of Morphology. Federal University of Sergipe (DFS/UFS), Aracaju, SE, Brazil eInstitute of Technology and Research. Tiradentes University. Aracaju, SE, Brazil. f Department of Biological Sciences, Bauru School of Dentistry, University of São Paulo, São Paulo, Brazil.. *Author for correspondence: Lucindo J. Quintans-Júnior, Department of Physiology, Federal University of Sergipe, Av. Marechal Rondom, s/n, São Cristóvão, Sergipe, Brazil. fax +55-79-3212-6640. E-mail lucindojr@gmail.com; lucindo@pq.cnpq.br..

(45) Abstract: The analgesic activity of ()-linalool (LIN), an enantiomer monoterpene, has been demonstrated in rodents. As a short half-life is a limitation for the LIN application, the employment of drug-delivery systems is one of the approaches that have been used to improve pharmaceutical properties of monoterpenes. Herein, we investigated the antinociceptive effect of LIN, isolated or in β-cyclodextrin complex (LIN/β-CD), in an animal model of chronic non-inflammatory muscle pain, as well as its effect on the central nervous system (CNS). Male Swiss mice were subjected to two injections of acidic saline (pH 4; 20 µL/gastrocnemius) and were treated on alternate days, with LIN/β-CD (25, 50 or 100 mg/kg, p.o.), LIN (25 mg/kg, p.o.), tramadol (TRM 4 mg/kg, i.p.) or vehicle (neutral saline). After sixty minutes, they were screened for mechanical hyperalgesia (von Frey), motor coordination (Rota Rod) and muscle strength (Grip Strength Meter) for 27 days. The CNS pathways involved in the effect were evaluated by immunofluorescence. LIN or LIN/β-CD, at all doses, produced a significant reduction (p < 0.001) of mechanical hyperalgesia, which remained for 24 h only to LIN/β-CD; no significant changes were observed in tests for motor coordination and muscle strength; LIN or LIN/β-CD significantly activated neurons of the locus cerulleus, nucleus raphe magnus and periaqueductal gray (p<0.05), suggesting analgesic activity in this model, with a probable involvement of descending pain pathways. Keywords: Linalool, β-ciclodextrin, chronic muscle pain, fibromyalgia, Fos protein. Perspective: The article presents information about antinociceptive properties of ()linalool in chronic non-inflammatory muscle pain, providing evidence to propose that LIN/β-CD improved analgesic effects of LIN. It also indicates that ()-linalool might be potentially interesting in the development of new clinically relevant drugs for the management of chronic pain..

(46) 5 CONCLUSÕES. Os dados apresentados no presente estudo nos permitem sugerir que:. - o tratamento com (–)-linalol ou (–)-linalol/β-Ciclodextrina apresentou atividade antinociceptiva no modelo animal de hiperalgesia muscular crônica não-inflamatória em camundongos roedores, em todas as doses testadas; - o tratamento com linalol incluso em β-Ciclodextrina apresentou atividade antinociceptiva prolongada em relação a substância isolada, confirmando a possibilidade de melhora significativa na ação terapêutica por um possível aumento da estabilidade e /ou da biodisponibilidade;. - o tratamento com (–)-linalol e (–)-linalol/β-Ciclodextrina não induziu incoordenação motora nem alteração da força muscular;. - o tratamento com o (–)-linalol e (–)-linalol/β-Ciclodextrina apresentou ação no SNC, atuando no encéfalo, visto que o córtex restroesplenial e a substância cinzenta periaquedutal são estruturas centrais intimamente relacionadas com os mecanismos modulatórios da dor.. Outros estudos são necessários visando elucidar os mecanismos de ação, tanto centrais quanto periféricos, dos compostos, assim como a ação do linalol em doenças que apresentam, como característica clínica principal, dor, podendo-se, assim, entender melhor tal perfil analgésico sugerido para o linalol..

(47) 6 PERSPECTIVAS. Para o nosso conhecimento, este é o primeiro estudo que relatou os efeitos antinociceptivos do (–)-linalol no modelo animal de fibromialgia em camundongos roedores; com base nos resultados obtidos, são propostas as seguintes perspectivas para a continuação deste estudo:. - aprofundar estudos e testes experimentais relacionados ao desenvolvimento biotecnológico de formulações contendo (–)-linalol em sua composição, podendo ser a inclusão em ciclodextrina um meio para melhorar a estabilidade e solubilidade de fármacos;. - avaliar e caracterizar, de forma pré-clínica, os possíveis efeitos tóxicos a partir de exames hematológicos, bioquímicos e análise macroscópica dos principais órgãos, no modelo e tempo de tratamento propostos neste estudo experimental, visando a produção de novos fármacos pela indústria farmacêutica;. - estudar os mecanismos envolvidos na atividade antinociceptiva central do (–)-linalol neste modelo, identificando circuitarias neurais, neurotransmissores e receptores, a partir da utilização de agonistas e antagonistas dos principais sistemas de controle central da dor..

(48) ANEXO 1 – PROTOCOLO DE SUBMISSÃO DO ARTIGO AO PERIÓDICO THE JOURNAL OF PAIN.

(49) ANEXO 2 – NORMAS DE SUBMISSÃO AO PERIÓDICO THE JOURNAL OF PAIN.

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(53) ANEXO 3 – PROTOCOLO DE APROVAÇÃO NO COMITÊ DE ÉTICA EM PESQUISA ANIMAL DA UNIVERSIDADE FEDERAL DE SERGIPE.

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