GUIA DOS MÉTODOS DE REFERÊNCIA

(1)

GUIA DOS MÉTODOS DE

REFERÊNCIA

(2)

SUMÁRIO:

Bacillus cereus presuntivo Contagem Página 4

Bacillus cereus Pesquisa e Contagem Página 5-6

(suspeito em pequena quantidade)

Campylobacter spp. Pesquisa e Contagem – Parte 1 Página 7

Campylobacter spp. Pesquisa e Contagem – Parte 3 Página 8

Clostridium perfringens Contagem Página 9

Coliformes (Contagem de colônias) Contagem Página 10

Coliformes Pesquisa e Contagem Página 11

(suspeito em pequena quantidade)

Coliformes presuntivo Contagem Página 11

Coliformes termorresistentes Contagem Página 12

Enterobacteriaceae Pesquisa e Contagem – Parte 1 Página 13

(com pré-enriquecimento)

Enterobacteriaceae Pesquisa e Contagem – Parte 2 Página 14

Enterobacteriaceae presuntivo Contagem Página 14

Escherichia coli β-glicuronidase + Contagem – Parte 1 Pagina 15

“BIOKAR Diagnóstico coloca o seu conhecimento à sua disposição para fornecer

soluções simples e rápidas para atender suas necessidades.

Os laboratórios de microbiologia devem obedecer os critérios regulamentares que estão

em constante evolução, e é por isso que nós oferecemos este guia de métodos de

referência para ajudá-lo diariamente na aplicação das normas às suas atividades.”

B:

C:

(3)

Escherichia coli β-glicuronidase + Contagem – Parte 3 Pagina 16

Escherichia coli O157 Pesquisa Pagina 17

Escherichia coli presuntivo Contagem Pagina 18

Leveduras e fungos Contagem Página 19

Leveduras e fungos Contagem Página 20

(produtos com atividade de água superior à 0,95)

Leveduras e fungos Contagem Página 21

(produtos com atividade de água inferior à 0,95)

Listeria monocytogenes Pesquisa – Emenda 1 Página 22-24

Listeria monocytogenes Contagem – Emenda 1 Página 25-26

Salmonella spp. Pesquisa – Emenda 1 Página 27-28

Shigella spp. Pesquisa Página 29-30

Staphylococcus coagulase + Contagem – Parte 1 – Emenda 1 Página 31

Staphylococcus coagulase + Contagem – Parte 2 – Emenda 1 Página 32

(ágar com fibrinogênio plasma de coelho)

Staphylococcus coagulase + Contagem – Parte 2 Página 33-34

(carga bacteriana baixa)

Vibrio parahaemolyticus e cholerae Pesquisa – Parte 1 Página 35

Vibrio spp. Pesquisa – Parte 2 Página 36

(outras espécies que não parahaemolyticus e cholerae)

Yersinia enterolitica patogênica presuntiva Pesquisa Página 37-38

L:

S:

V:

(4)

NORMAS GERAIS:

Contagem das bactérias anaeróbicas sulfito-redutoras

Página 39

Contagem das bactérias mesófilas láticas

Página 39

Contagem das bactérias sulfito-redutoras

Página 40

Contagem dos microrganismos

Página 40

Contagem dos microrganismos (método espiral)

Página 41

Contagem dos microrganismos psicrotróficos

Página 41

Preparação das amostras, da suspensão mãe e das diluições

decimais em razão das análises microbiológicas – Parte 1: regras

gerais para a preparação da diluição mãe e das diluições decimais

Página 42

Preparação das amostras, da suspensão mãe e das diluições

decimais em razão das análises microbiológicas – Parte 2: regras

específicas para a preparação de produtos de carne e derivados.

Página 42

Preparação das amostras, da suspensão mãe e das diluições

decimais em razão das análises microbiológicas – Parte 3: regras

específicas para a preparação de produtos de peixe.

Página 43

Preparação das amostras, da suspensão mãe e das diluições

decimais em razão das análises microbiológicas – Parte 4: regras

específicas para a preparação de produtos que não sejam derivados

de leite, carne e peixe.

Página 43

Preparação das amostras, da suspensão mãe e das diluições

decimais em razão das análises microbiológicas – Parte 5: regras

específicas para a preparação de produtos de leite e derivados.

Página 44

MÉTODOS DE ROTINA:

Métodos de rotina para a contagem de Staphylococcus coagulase

positiva (+) para a contagem de colônias à 37ºC – Parte 1: técnica

com confirmação das colônias.

Página 45

Enumeração de fungos e leveduras por contagem de colônias à 25ºC

Página 46

ANEXOS:

Anexo A: outras normas de referência em microbiologia de alimentos

Página 47

Anexo B: métodos alternativos rápidos em microbiologia de alimentos

Página 48-51

Para maiores informações entre em contato com a gente.

(5)

Princípios: - Semeadura em superfície.

- Incubação em anaerobiose à 30ºC por 18 à 48 horas.

- Confirmação pelos ensaios específicos.

Meio de Cultura BIOKAR Diagnóstico Conformidade

Diluente

Se refere à parte da norma NF EN ISO 6887 correspondente ao produto à ser analisado.

Meios ágar

Meio base

Solução de polimixina B Emulsão de gema de ovo

Meio completo (ágar-ágar MYP)

Ágar seletivo para B. Cereus

(base segundo MOSSEL) BK116HA – frasco 500g

Suplemento Seletivo Polimixina B BS00708 – 10 flaconetes

Emulsão estéril de gema de ovo com polimixina B

BS05508 – 10 flaconetes 50 mL

(base segundo MOSSEL) BM03808 – 20 placas Ø 90 mm Total (1) Total Total Total

Meios de

confirmação

Meio base: base sangue nº2

Sangue de carneiro desfibrinado

Ágar Triptona-Soja

(base para ágar sangue) BK028HA – frasco 500g

-Equivalente -(1) A triptona é uma peptona obtida por digestão pancreática da caseína.

V08-023 Método horizontal para a contagem de Bacillus cereus presuntivo

Técnica por contagem de colônias à 30ºC

(Julho 2005)

(6)

Princípios: - Enriquecimento seletivo dos meios simples para dupla concentração à 30ºC

por 48 horas para o método de contagem.

- Enriquecimento seletivo à 30ºC por 48 horas para o método de pesquisa.

- Isolamento seletivo em meio PEMBA à 37ºC por 18 à 48 horas.

- Confirmação das colônias suspeitas por teste de hemólise ou por exame

microscópico.

Diluente

Meio

enriqueci-mento

seletivo

Meio base – Caldo de triptona, soja e polimixina (TSPB)

Solução de polimixina B

Caldo Triptona-Caseína de soja

BK046HA – frasco 500g BK046GC – embalagem 5 Kg Suplemento Seletivo Polimixina B BS00708 – 10 flaconetes

Total (1)

Total

Meio seletivo

sólido

Meio de base PEMBA Solução de Polimixina B Emulsão de gema de ovo

-Suplemento Seletivo Polimixina B BS00708 – 10 flaconetes

Emulsão estéril de gema de ovo

Emulsão estéril de gema de ovo com polimixina B BS05508 – 10 flaconetes 50 mL -Total Total Total

Outros meios

seletivos

sólidos

Meio de base MYP

Solução de Polimixina B Emulsão de gema de ovo

Meio completo (ágar MYP)

(base segundo MOSSEL) BK116HA – frasco 500g

Suplemento Seletivo Polimixina B BS00708 – 10 flaconetes

Emulsão estéril de gema de ovo

Emulsão estéril de gema de ovo com polimixina B

(base segundo MOSSEL) BM03808 – 20 placas Ø 90 mm Total (1) Total Total Total Total

Reagentes

para a

identificação

em

microscópico

Solução oxalato verde malaquita Solução preto Sudan B

Xileno

-NF EN ISO 21871

V08 - 063 Métodos horizontais para a contagem de Bacillus cereus presuntivo

com baixa carga bacteriana

Técnica do número mais provável e método de pesquisa

(Julho 2006)

(7)

confirmação

Sangue de carneiro desfibrinado estéril

(base para ágar sangue) BK028HA – frasco 500g

-Equivalente

-(1) A triptona é uma peptona obtida por digestão pancreática da caseína. *Disponíveis no Brasil os meios desidratados.

(8)

Princípios: - Enriquecimento seletivo em atmosfera microaerófila à 37ºC por 4 à 6 horas,

em seguida 41,5ºC por 44 ± 4 horas.

- Isolamento seletivo em dois meios em atmosfera microaerófila por 41,5ºC por

44 ± 4 horas.

- Confirmação por repique em meio não seletivo, em seguida exames

microscópicos e ensaios bioquímicos e de crescimento apropriado.

Meio

de

enriqueci-mento

Caldo de Bolton -

-Primeiro

meio de

isolamento

Ágar modificado cefoperazona, com carbono e desoxicloreto (mCCD)

-

-Segundo

meio de

isolamento

A escolha pode ser feita pelo laboratório de análise.

Meios e

reagentes

para

confirmação

e

identificação

Meio base – Ágar Columbia com sangue

Caldo Brucella

Reagente para a pesquisa de oxidase

Solução de peróxido de hidrogênio à 3%

Reagentes para a pesquisa da hidrólise de hipurato

Meio de base – Ágar Mueller Hinton com sangue

Discos impregnados de ácido nalidixico (30 μg), cefalotina (30 μg) e acetato de indoxila

Ágar Columbia (base)

BK019HA – frasco 500g -Ágar MULLER-HINTON BK048HA – frasco 500g -Parcial (1) -Parcial (2)

-(1) Presença de polipeptona (17g), de peptona pancreática de coração (3g) e de extrato autolítico de levedura (3g) em vez de extrato enzimático de tecidos animais (23g).

(2) Presença de infusão de carne (2g) ao invés de extrato enzimático de tecidos animais (6g) e de amido solúvel (1,5g).

NF EN ISO 10272-1

V08 - 026-1 Método horizontal para a pesquisa e contagem de Campylobacter spp.

Parte 1: Método de pesquisa.

(9)

Princípios: - Enriquecimento seletivo em atmosfera microaerófila à 37ºC por 4 à 6 horas,

em seguida 41,5ºC por 44 ± 4 horas.

- Isolamento seletivo em dois meios em atmosfera microaerófila por 41,5ºC por

44 ± 4 horas.

- Confirmação por repique em meio não seletivo, em seguida exames

microscópicos e ensaios bioquímicos e de crescimento apropriado.

Meio

de

enriqueci-mento líquido

Caldo de Bolton -

-Primeiro

meio de

isolamento

Ágar modificado cefoperazona, com carbono e desoxicloreto (mCCD) -

-Meios e

reagentes

para

confirmação

e

identificação

Meio base – Ágar Columbia com sangue

Caldo Brucella

Solução de peróxido de hidrogênio à 3%

Reagentes para a pesquisa da hidrólise de hipurato

Meio de base – Ágar Mueller Hinton com sangue

Discos impregnados de ácido nalidixico (30 μg), cefalotina (30 μg) e acetato de indoxila

Ágar Columbia (base)

BK019HA – frasco 500g -Ágar MULLER-HINTON BK048HA – frasco 500g -Parcial (1) -Parcial (2)

-(1) Presença de polipeptona (17g), de peptona pancreática de coração (3g) e de extrato autolítico de levedura (3g) em vez de extrato enzimático de tecidos animais (23g).

(2) Presença de infusão de carne (2g) ao invés de extrato enzimático de tecidos animais (6g) e de amido solúvel (1,5g).

V08 - 026-3 Método horizontal para a pesquisa e contagem de Campylobacter spp.

Parte 3: Método de semi-quantitativo.

(10)

Princípios: - Semeadura da massa em uma camada dupla.

- Incubação por 20 ± 2 horas à 37ºC.

- Confirmação pela adição de um meio Lactose Sulfito (A); ou pela adição

de um meio nitrato motilidade e de um meio lactose à gelatina (B).

Diluente

Meio de

cultura

Meio de base – Ágar triptona-sulfito com cicloserina (SC) Solução de D-cicloserina Ágar TSC (base) BK031HA – frasco 500g BK031GC – embalagem 5 Kg Suplemento Seletivo D-cicloserina 200mg BS00608 – 10 flaconetes qsp 500mg Total (1) Total

Reagente de

confirmação

(A)

Meio tioglicolato líquido Caldo tioglicolato com resazurina

BK017HA – frasco 500g BK017GC – embalagem 5 Kg BM08208 – 50 tubos 10 mL

Total (1)

Meio lactose sulfito

Solução de bissulfito dissódico anidro

Solução de citrato de ferro III amoniacal

Sangue desfibrinado de cavalo ou de ovelha Caldo Lactose-Sulfito BK140HA – frasco 500g -Total (1)

-Reagente de

confirmação

(B)

Meio nitrato motilidade -

-Reagente para a pesquisa de nitrito

Solução de ácido 5-amino-2-naftaleno-sulfônico (5-2-ANSA) Solução de ácido sulfanílico Zinco pulverizado

Meio lactose à gelatina

-(1) A triptona é uma peptona obtida por digestão pancreática da caseína.

NF EN ISO 7937

V 08 - 019 Método horizontal para a contagem de Clostridium perfringens

Técnica por contagem de colônias

(11)

Princípios: - Incubação à 30 ou 37ºC por 24 horas.

- Confirmação se necessário do número de colônias por fermentação da

lactose à 30 ou 37ºC por 24 horas.

Diluente

Meio seletivo

sólido

Ágar lactose bile com cristal violeta e vermelho neutro (VRBL)

Ágar Bile Vermelho Violeta (VRBL) BK152HA – frasco 500g BK152GC – embalagem 5 Kg BM03408 – 10 flaconetes 100 mL BM03508 – 10 flaconetes 200 mL Total

Meio de

confirmação

Caldo lactose bile verde brilhante Caldo lactose bile verde brilhante (BLBVB)

BK002HA – frasco 500g

BM01108 – 50 tubos 10 mL com cloro

Total

(1) A triptona é uma peptona obtida por digestão pancreática da caseína.

T 08-015 Método horizontal para a contagem de coliformes

Método por contagem de colônias

(Julho 2006)

(12)

Princípios: - Enriquecimento seletivo à 30 ou 37ºC por 24 à 48 horas.

- Semeadura de um meio de confirmação a partir da cultura com desordem

e/ou uma produção de gás seguida de incubação à 30 ou 37ºC por 24 à 48 horas.

Diluente

Meio de

enrique-cimento

Caldo com triptose e lauril sulfato Caldo Laurilsulfato-Triptose

BK010HA – frasco 500g com cloro BM09708 – 50 tubos 10 mL com cloro (concentração simples)

BM09808 - 50 tubos 10 mL com cloro (concentração dupla)

Total (1)

Meio de

confirmação

Caldo lactose bile verde brilhante Caldo lactose bile verde brilhante (BLBVB)

BM01108 – 50 tubos 10 mL com cloro

Total (2)

(1) Presença de uma Triptona ao invés de digestão enzimática de leite e proteínas animais. (2) A triptona é uma peptona obtida por digestão pancreática da caseína.

Princípios: - Semeadura em profundidade.

- Incubação à 30ºC por 24 ± 2 horas.

Diluente

Meio de

cultura

NF ISO 4831/FIL 73B

V 08-016 Método horizontal para a pesquisa e a contagem de coliformes

Técnica do número mais provável

(Outubro 2006)

NF V 08 - 050

V 08 - 050 Contagem de coliformes presuntivos por contagem de colônias obtidas à 30ºC

(Abril 2009)

*Disponíveis no Brasil os meios desidratados.

(13)

Princípios: - Semeadura em profundidade.

- Incubação à 30ºC por 24 ± 2 horas.

Diluente

Meio de

cultura

V 08 - 060 Enumeração dos coliformes termorresistentes por contagem

de colônias obtidas à 44ºC

(Abril 2009)

(14)

Princípios: - Pré-enriquecimento em meio não seletivo líquido à 37 ou 30ºC (1) por 18 ±

2 horas.

- Enriquecimento seletivo líquido à 37 ou 30ºC (1) por 18 ± 2 horas.

- Isolamento seletivo à 37 ou 30ºC (1) por 18 ± 2 horas.

- Confirmação por repique em meio não seletivo, testando a fermentação de

glicose e pesquisa de oxidase.

Diluente

_{Solução de água peptonada} tamponada EPT (20g/L) (2) BK131HA – frasco 500g BK131GC – embalagem 5 Kg EPT (25g/L) (3) BK018HA – frasco 500g BK018GC – embalagem 5 Kg BM01008 – 10 flaconetes 225 mL BM05608 – 50 tubos 9 mL BM05708 – 10 flaconetes 90 mL BM13108 – 3 embalagens 3 L BM13208 – 2 embalagens 2 L Total

Meio líquido

de

enrique-cimento

seletivo

Caldo tamponado bile, verde

brilhante com glicose (meio EE) Caldo de enriquecimento para Enterobactérias (EE segundo MOSSEL)

BK127HA – frasco 500g Parcial (4)

Meio seletivo

sólido

Ágar bile, cristal violeta e glicose Ágar VRBG

BK011HA – frasco 500g BK011GC – embalagem 5 Kg BM07508 – 10 flaconetes 200 mL Total

Meios e

reagentes de

confirmação

Ágar Nutriente Dicloridrato de N, N, N',N-tetrametil-p-fenileno diamina Ágar Nutriente à 2% BK185HA – frasco 500g BM11808 – 50 tubos 18 mL -Equivalente

-Meio de

confirmação

Ágar glicose Ágar Glicose

BM09908 – 50 tubos 10 mL Total (5) (1) A temperatura de 30ºC pode ser escolhida quando a contagem das enterobactérias é realizada num contexto de um procedimento tecnológico e compreende as enterobactérias psicotróficas.

(2) Fórmula inclui 9,0 g/L de fosfato dissódico dodecaidratado (massa molar 358,14). (3) Fórmula inclui 3,56 g/L de fosfato dissódico anidro (massa molar 141,96).

(4) Fórmula contém 10 g/L de peptona pancreática de carne ao invés de digestão enzimática de tecidos animais descritos e 15 mg/L de Verde Brilhante ao invés de 0,0135 g/L descrito.

NF ISO 21528-1

V 08 - 039-1 Método horizontal para a pesquisa e contagem de Enterobacteriaceae

Parte 1: pesquisa e contagem através da técnica NPP com

enriquecimento.

(15)

Princípios: - Isolamento seletivo à 37 ou 30ºC (1) por 18 ± 2 horas.

- Confirmação por repique em meio não seletivo, testando a fermentação de

glicose e pesquisa de oxidase.

Diluente

Meio seletivo

sólido

Ágar bile, cristal violeta e glicose Ágar VRBG

BK011HA – frasco 500g BK011GC – embalagem 5 Kg BM07508 – 10 flaconetes 200 mL Total

Meios e

reagentes de

confirmação

Ágar Nutriente Dicloridrato de N, N, N',N-tetrametil-p-fenileno diamina Ágar Nutriente à 2% BK185HA – frasco 500g BM11808 – 50 tubos 18 mL -Equivalente

-Meio de

confirmação

Ágar Glicose Ágar Glicose

BM09908 – 50 tubos 10 mL Total (5) (1) A temperatura de 30ºC pode ser escolhida quando a contagem das enterobactérias é realizada num contexto de um procedimento tecnológico e compreende as enterobactérias psicotróficas.

Princípios: - Semeadura em profundidade.

- Incubação à 30 ou 37ºC por 24 ± 2 horas.

Diluente

Meio de

cultura

Ágar bile com cristal violeta e glicose (VRBG)

Ágar VRBG

BK011HA – frasco 500g BK011GC – embalagem 5 K

BM07508 – 10 flaconetes 200 mL Total

NF V 08 - 054 Pesquisa e Contagem dos esporos de microrganismos

V 08 - 054 anaeróbicos sulfito- redutase (Clostridia)

Parte 1: Método através de filtração por membrana

(Abril 2009)

V 08 - 039-1 Método horizontal para a pesquisa e contagem de Enterobacteriaceae

Parte 2: método para contagem de colônias.

(Dezembro 2004)

(16)

Princípios: - Semeadura em membrana de celulose posto sobre o meio MMGA e

incubação por 4 horas à 37ºC.

- Isolamento por transferência da membrana sobre meio TBX, e incubação

por 18 à 24 horas à 44ºC.

Diluente

Meio de

cultura

Meio com glutamato modificado -

-Meio seletivo

Meio triptona-bile-glicuronato (TBX) Ágar TBX

BK146HA – frasco 500g BK146HM – frasco 100g

BM06908 – 10 flaconetes 100 mL BM17108 – 10 flaconetes 200 mL

Total (1)

Princípios: - Semeadura em profundidade.

- Incubação à 44ºC por 18 à 24 horas.

Diluente

Meio seletivo

Total (1)

NF ISO 16649-1

V 08 - 031-1 Método horizontal para a contagem de Escherichia coli β-glicuronidase +

Parte 1: técnica da contagem de colônias à 44ºC através de membranas e de

5 bromo-4-cloro-3-indolil β-D-glicuronato

(Agosto 2001)

NF ISO 16649-2

V 08 - 031-2 Método horizontal para a contagem de Escherichia coli β-glicuronidase +

Parte 2: técnica da contagem de colônias à 44ºC através de 5

bromo-4-cloro-3-indolil β-D-glicuronato

(Julho 2001)

(17)

Princípios: - Enriquecimento seletivo à 37 por 24 ± 2 horas.

- Para cada tubo que apresentar uma produção ácida, colocar em sub-cultura

à 44ºC por 20 à 24 horas.

Diluente

Meio de

cultura

Meio com glutamato modificado Caldo de glutamato

BK186HA – frasco 500g Total

Meio seletivo

Total (1)

V 08 - 031-3 Método horizontal para a contagem de Escherichia coli β-glicuronidase +

Parte 3: técnica do número mais provável utilizando 5 bromo-4-cloro-3-

indolil β-D-glicuronato

(Dezembro 2005)

(18)

Princípios: - Enriquecimento à 41,5 ± 1ºC por 6 horas seguido por repetição de 12 à 18

horas.

- Separação e concentração dos microrganismos através de anticorpos bile

imunomagnéticos revestidos por anti-E. Coli O157.

- Isolamento por cultura secundária de bile imunomagnéticos com captura de

bactérias em ágar MacConkey com sorbitol-cefixime telurito (CT-SMAC) e, a escolha do

laboratório, um segundo ágar de isolamento seletivo.

- Confirmação das colônias sorbitol negativas isoladas por CT-SMAC e das

colônias características de E. coli O157 isoladas no segundo meio de isolamento, para a

pesquisa de produção de indol e de aglutinação em soro anti-E. coli O157.

Meio de

enrique-cimento

Caldo Triptona de soja modificado (mTSB)

Solução de Novobiocina

Caldo Triptona de Soja modificado (mTSB base) BK150HA – frasco 500g BK031GC – embalagem 5 Kg Suplemento Seletivo Novobiocina (10 mg) BS03308 – 10 flaconetes Suplemento Seletivo Novobiocina (40 mg) BS05608 – 8 flaconetes Total (1) Total

Separação

imuno-magnética

(IMS)

Bile imunomagnético anti-E. coli O157

Tampão fosfato modificado 0,01 ml/L pH 7,2

-Primeiro

meio de

isolamento

seletivo

Meio de base

Solução de bissulfito dissódico anidrotelurito de potássio

Solução de cefixima

Ágar MacConkey Sorbitol (CT-SMAC base)

BK147HA – frasco 500g (1)

Suplemento cefixima-telurito para ágar CT-SMAC

BS03708 – 10 flaconetes qsp 500 mL Total (1)

-Segundo

meio

À escolha do laboratório

Meio de

sub-cultura

Ágar nutriente Ágar Nutriente à 2%

BK18508 – frasco 500g

BM11808 – 50 tubos 18 mL Total (1)

Confirmação

Meio triptona/triptofano Caldo com Triptofano

BM07608 – 50 tubos 3 mL Total

Confirmação

Reagente de Kovacs para

pesquisa de indol -

-Identificação

sorológica

Solução salina

Soro anti-E. coli O157 -- -

NF EN ISO 16654

V 08 - 032 Método horizontal para a pesquisa de Escherichia coli O157

(Julho 2001)

(19)

Princípios: - Enriquecimento seletivo à 37 por 48 horas para o método de pesquisa.

- Enriquecimento seletivo dos meios simples e dupla concentração para o

método de contagem.

- Para cada tubo que apresentar um aspecto turvo, opaco ou degeneração

gasosa, fazer uma sub-cultura em meio seletivo líquido à 44ºC por 48 horas.

- Se uma degeneração de gás for observada, realizar uma sub-cultura com

água peptonada livre de indol à 44ºC por 48 horas.

- Exame da produção de indol resultante da degradação do triptofano dos

constituintes das peptonas.

Diluente

Meio de

enrique-cimento

seletivo

Caldo lauril sulfato Caldo Laurilsulfato-Triptose

BM09708 – 50 tubos 10 mL com cloro (concentração simples)

BM09808 - 50 tubos 10 mL com cloro (concentração dupla)

Total (1)

Meio seletivo

Caldo EC Caldo EC

BK162HA – frasco 500g Total (1)

Exame para

a produção

de indol

Água peptonada sem indol Água Peptonada sem indol

Exame para

a produção

de indol

Reagente de Kovacs para

pesquisa de indol -

V 08 - 020 Método horizontal para a pesquisa e contagem de Escherichia coli presuntiva

Técnica do número mais provável

(Julho 2005)

(20)

Princípios: - Semeadura em profundidade.

- Incubação à 25ºC por 5 dias.

Diluente

Se refere à parte da norma NF EN ISO 6887 correspondente ao produto à ser analisado. (1)

Meio de

cultura

Meio dicloran à 18% com glicerina

(DG) Meio Dicloran-Glicerina (DG 18) (base)

BM10908 – 10 flaconetes 100 mL Total (2) (3)

(1) A adição de Tween 80 ao meio líquido de diluição escolhido, a uma concentração de 0,033 g/L, pode facilitar a enumeração dos fungos.

(2) A forma desidratada necessita da adição de 220 g de glicerina por litro de ágar base. (3) A triptona é uma peptona obtida por digestão pancreática da caseína.

NF V08-036

V 08 - 036 Método horizontal para a contagem de leveduras e fungos que

se desenvolvem em produtos com baixa atividade de água

(Maio 2003)

(21)

Princípios: - Semeadura em superfície.

- Incubação à 25 ± 1ºC por 5 dias em anaerobiose.

Diluente

Se refere à parte da norma NF EN ISO 6887 correspondente ao produto à ser analisado. (1) (2)

Água peptonada 0,1% Água Peptonada

BM16408 – 2 embalagens 5 L Total (3)

Meio de

cultura

Meio dicloran-rosa bengala-cloranfenicol

Adição facultativa de cloridrato de clortetraciclina (4)

Adição facultativa de elementos traço (5)

Adição facultativa de Tergitol (6)

Ágar Dicloran-Rosa Bengala-Cloranfenicol BK198HA – frasco 500g BM14208 – 10 flaconetes 200 mL (7) -Total

-(1) A adição de Tween 80 ao meio líquido de diluição escolhido, a uma concentração de 0,033 g/L, pode facilitar a enumeração dos fungos.

(2) Exceto em casos de uma preparação específica de amostra para o ensaio, é recomendado a utilização de água peptonada à 0,1% (concentração em massa) como diluente.

(4) Quando a proliferação bacteriana pode representar um problema, é recomendada a utilização de cloranfenicol (50 mg/L) e clortetraciclina (50 mg/L).

(5) Para que os fungos apresentem toda a sua morfologia, 1 mL de uma solução de elementos traço (ZnSO4.7H2Og; CuSO4.5H2Og; qsp 100 mL H2O) pode ser adicionada à 1L de meio.

(6) Afim de evitar a proliferação de certos microrganismos (Mucoraceae) é recomendada a adição de Tergitol (1 mL/L) ao meio de cultura.

(7) A fórmula completa inclui 50 mg/L de cloranfenicol, 50 mg/L de cloridrato de clortetraciclina, 1 mg/L de ZnSO4.7H2Og; CuSO4.5H2Og e 1mL/L de tergitol.

V 08 - 040-1 Método horizontal para a contagem de leveduras e fungos

Parte 1: Técnica para contagem de colônias em produtos

com atividade de água superior à 0,95

(Novembro 2008)

(22)

Princípios: - Semeadura em superfície.

- Incubação à 25 ± 1ºC por 5 à 7 dias em anaerobiose.

Diluente

Se refere à parte da norma NF EN ISO 6887 correspondente ao produto à ser analisado. (1) (2) (3)

Água peptonada 0,1% Água Peptonada

BM16408 – 2 embalagens 5 L Total (4)

Meio de

cultura

Meio dicloran à 18% com glicerina (DG)

Adição facultativa de cloridrato de clortetraciclina (6)

Adição facultativa de elementos traço (7) Meio Dicloran-Glicerina (DG 18) (base) BK170HA – frasco 500g BM10908 – 10 flaconetes 100 mL -Total (4) (5)

-(1) A adição de Tween 80 ao meio líquido de diluição escolhido, a uma concentração de 0,033 g/L, pode facilitar a enumeração dos fungos.

(2) A utilização de um diluente que comporte uma quantidade suficiente de soluto (20 à 30% de glicerina ou de D-glicose) é recomendada para reduzir o choque osmótico dos fungos xerófilos e das leveduras osmófilas quando as diluições em série são realisadas.

(3) Exceto em casos de uma preparação específica de amostra para o ensaio, é recomendado a utilização de água peptonada à 0,1% (concentração em massa) como diluente.

(5) A apresentação comercial desidratada necessita da adição de 220 g de glicerina por litro de ágar abse. (6) Quando a proliferação bacteriana pode representar um problema, é recomendada a utilização de cloranfenicol (50 mg/L) e clortetraciclina (50 mg/L).

(7) Para que os fungos apresentem toda a sua morfologia, 1 mL de uma solução de elementos traço (ZnSO4.7H2Og; CuSO4.5H2Og; qsp 100 mL H2O) pode ser adicionada à 1L de meio.

NF ISO 21527-2

V 08 - 040-2 Método horizontal para a contagem de leveduras e fungos

Parte 2: Técnica para contagem de colônias em produtos

com atividade de água inferior à 0,95

(Novembro 2008)

(23)

Princípios: - Enriquecimento primário em meio seletivo com concentração reduzida de

agentes seletivos à 30ºC por 24 horas.

- Enriquecimento secundário em meio seletivo líquido com concentração

completa de agentes seletivos à 35 ou 37ºC por 48 horas.

- Isolamento seletivo à 30, 35 ou 37ºC e exame após 24 horas e, se

necessário, após 48 horas.

- Confirmação por meio de ensaios bioquímicos, fisiológicos e

morfológicos apropriados.

v

Meio de

enrique-cimento

seletivo

primário

Caldo Demi-Fraser (meio de base) Solução de cloreto de lítio

Solução de sal de sódio de ácido nalidíxico

Solução de cloridrato de acriflavina

Meio completo

Caldo Demi-Fraser (base sem citrato de ferro III amoniacal)

BK173HA – frasco 500g BK173GC – embalagem 5 Kg

Caldo Demi-Fraser (base sem citrato de ferro III amoniacal, nem ácido nalidíxico, nem acriflavina)

Suplemento Seletivo para Caldo Demi-Fraser

BS03008 – 10 flaconetes qp 500 mL

BS03208 – 8 flaconetes qsp 2,25L

Solução estéril de Citrato férrico amoniacal à 5%

BS05908 – 10 flaconetes 90 mL BS06208 – 7 tubos 10 mL

Caldo Demi-Fraser (pronto para uso) BM01608 – 10 flaconetes 225 mL BM13308 – 3 embalagens 3 L BM13408 – 2 embalagens 5 L Total (1) Total Total Total (1)

Meio de

enrique-cimento

seletivo

Caldo Fraser (meio de base) Solução de cloreto de lítio

Solução de sal de sódio de ácido nalidíxico

Solução de cloridrato de acriflavina

Caldo Fraser (base sem citrato de ferro III amoniacal)

Caldo Fraser (base sem citrato de ferro III amoniacal, nem ácido nalidíxico, nem acriflavina)

Suplemento Seletivo para Caldo

Total (1)

V 08 - 028-1 Método horizontal para a pesquisa e contagem de

Listeria monocytogenes

Parte 1: Método de pesquisa.

(Fevereiro 1997)

(24)

Meio completo

Solução estéril de Citrato férrico amoniacal à 5%

BS05908 – 10 flaconetes 90 mL BS06208 – 7 tubos 10 mL

Caldo Fraser (pronto para uso)

BM01308 – 50 tubos 10 mL Total Total (1)

Meio de

isolamento

seletivo

Primeiro meio: Ágar Oxford Suplemento para Ágar Oxford

Segundo meio: Ágar PALCAM Solução de sulfato de polimixina B Solução de cloridrato de acriflavina Solução de ceftazidima de sódio pentaidratada

Meio completo

Ágar OXFORD (base)

Suplemento Seletivo para Ágar OXFORD (CCCFA)

BS00308 – 10 flaconetes qsp 500 mL

Ágar PALCAM (base)

Suplemento Seletivo para Ágar PALCAM

BS04908 – 8 flaconetes qsp 2,25 L

Ágar PALMAN (pronto para uso)

BM02008 – 20 placas Ø 90 mm Total (2) Total Total (2) Total Total (2)

Confirmação

Ágar triptona de soja – extrato de levedura (TSYEA)

Caldo triptona de soja – extrato de levedura (TSYEB)

-Ágar sangue

de ovelha

Meio de base

Sangue desfibrinado de ovelha

Triptona Soja (base para ágar sangue) BK028HA – frasco 500g -Equivalente

-Caldo para a

utilização de

carboidratos

Meio de base Solução de carboidratos -Ágar motilidade -

-Meio e

cultura de

CAMP

Meio de base

Meio com sangue de ovelha

Triptona Soja (base para ágar sangue)

-Equivalente

-Solução de peróxido de hidrogênio -

-Tampão

PBS -

(25)

Meio de

isolamento

seletivo

Primeiro meio: Ágar Listeria segundo Ottaviani e Agosti.

Segundo meio: segundo o laboratório.

COMPASS®_{Listeria Ágar}

BM12308 – 20 placas Ø 90 mm BM12408 – 120 placas Ø 90 mm BT00808 – 6 flaconetes 200 mL + suplementos -Total (3)

-(1) A fórmula inclui 9,60 g/L de fosfato dissódico anidro ao invés de 12 g/L de L d'hidrogenofosfato dissódico diidratado descrito.

(3) ALOA é um exemplo de meio apropriado disponível no mercado. Esta informação é dada com a intenção de utilização da ISO 11290 e não significa que os meios não recomendados pela ISO que não foram citados acima não devem ser utilizados.

V 08 – 028-1/A1 NF EN ISO 11290-1 – Parte 1 – EMENDA 1:

Modificação dos meios de isolamento, para a pesquisa de hemólise

e introdução de dados sobre a precisão

(Fevereiro 2004)

(26)

Princípios: - Revivificação por 1 hora à 20ºC.

- Semeadura em meio sólido e incubação à 35 ou 37 ºC e avaliação em 24 e

48 horas.

- Confirmação das colônias presuntivas de L. monocytogenes.

Diluente

Meio de

enrique-cimento

seletivo

Solução de água peptonada tamponada

Caldo Demi-Fraser (meio de base)

Solução de citrato de ferro III amoniacal EPT (20g/L) (1) BK131HA – frasco 500g BK131GC – embalagem 5 Kg EPT (25g/L) (2) BK018HA – frasco 500g BK018GC – embalagem 5 Kg BM01008 – 10 flaconetes 225 mL BM05608 – 50 tubos 9 mL BM05708 – 10 flaconetes 90 mL BM13108 – 3 embalagens 3 L BM13208 – 2 embalagens 2 L

Caldo Demi-Fraser (base sem citrato de ferro III amoniacal)

Caldo Demi-Fraser (base sem citrato de ferro III amoniacal, nem ácido nalidíxico, nem acriflavina)

Solução estéril de Citrato férrico amoniacal à 5% BS05908 – 10 flaconetes 90 mL BS06208 – 7 tubos 10 mL Total (1) Total (2) Total

Meio de

isolamento

seletivo

Segundo meio: Ágar PALCAM Solução de sulfato de polimixina B Solução de cloridrato de acriflavina Solução de ceftazidima de sódio pentaidratada

Meio completo

Ágar PALCAM (base)

Suplemento Seletivo para Ágar PALCAM

BS04908 – 8 flaconetes qsp 2,25 L

Ágar PALMAN (pronto para uso)

BM02008 – 20 placas Ø 90 mm

Total (1)

Total

Total (1)

Confirmação

Ágar triptona de soja – extrato de levedura (TSYEA)

Caldo triptona de soja – extrato de levedura (TSYEB)

-Ágar sangue

de ovelha

Meio de base Triptona Soja (base para ágar

sangue) Equivalente

NF EN ISO 11290-2

V 08 - 028-2 Método horizontal para a pesquisa e contagem de

Listeria monocytogenes

Parte 2: Método de contagem.

(Agosto 1998)

(27)

Caldo para a

utilização de

carboidratos

Meio de base Solução de carboidratos -Ágar motilidade -

-Meio e

cultura de

CAMP

Meio de base

Meio com sangue de ovelha

Triptona Soja (base para ágar sangue)

-Equivalente

-Solução de peróxido de hidrogênio -

-Tampão

PBS -

-Meio de Cultura BIOKAR Diagnóstico Conformidade

Meio de

isolamento

seletivo

Primeiro meio: Ágar Listeria

segundo Ottaviani e Agosti. COMPASS

®_{Listeria Ágar} BM12308 – 20 placas Ø 90 mm BM12408 – 120 placas Ø 90 mm BT00808 – 6 flaconetes 200 mL + suplementos Total (3)

(2) A fórmula inclui 9,60 g/L de fosfato dissódico anidro ao invés de 12 g/L de L d'hidrogenofosfato dissódico diidratado descrito.

(3) ALOA é um exemplo de meio apropriado disponível no mercado. Esta informação é dada com a intenção de utilização da ISO 11290 e não significa que os meios não recomendados pela ISO que não foram citados acima não devem ser utilizados.

NF EN ISO 11290-1/A1

V 08 – 028-1/A1 NF EN ISO 11290-1 – Parte 2 – EMENDA 1:

Modificação do meio de isolamento

(Fevereiro 2004)

(28)

Princípios: - Pré-enriquecimento em meio não seletivo líquido à 37 ± 1ºC por 18 ± 2

horas.

- Enriquecimento em meio seletivo líquido à 41,5 ± 1ºC e 37 ± 1ºC por 24 ± 3

horas.

- Semeadura em dois meios sólidos, XLD e um outro meio sólido apropriado, em

complemento do XLD.

- Incubação do primeiro meio à 37 ± 1ºC por 24 ± 3 horas e do segundo meio

seletivo segundo as recomendações do fabricante.

- Confirmação por meio de ensaios bioquímicos e sorológicos apropriados.

Meio de

pré-enriquecimen

to não

seletivo

Solução de água peptonada

tamponada EPT (20g/L) (1)BK131HA – frasco 500g BK131GC – embalagem 5 Kg EPT (25g/L) (2) BK018HA – frasco 500g BK018GC – embalagem 5 Kg BM01008 – 10 flaconetes 225 mL BM05608 – 50 tubos 9 mL BM05708 – 10 flaconetes 90 mL BM13108 – 3 embalagens 3 L BM13208 – 2 embalagens 2 L Total

Primeiro

meio de

enriquecimen

to seletivo

Caldo Rappaport-Vassiliadis Soja

(Caldo RVS) Caldo Rappaport-Vassiliadis Soja (Caldo RVS)

BK148HA – frasco 500g BM07408 – 50 tubos 10 mL Total (3)

Primeiro

meio de

enriquecimen

to seletivo

Caldo Muller-Kauffmann com tetrationato novobiocina (MKTTn) (base)

Solução de iodo-iodeto Solução de Novobiocina

Meio completo

Caldo Muller-Kauffmann com tetrationato novobiocina (base MKTTn sem iodo, sem

novobiocina)

Caldo Muller-Kauffmann com tetrationato novobiocina (base MKTTn sem iodo) BK028HA – frasco 500g -Suplemento Seletivo Novobiocina (10 mg) BS03308 – 10 flaconetes qsp 250 mL Suplemento Seletivo Novobiocina (40 mg) BS05608 – 8 flaconetes qsp 1L

Caldo Muller-Kauffmann com tetrationato novobiocina (pronto para uso) Total (4) -Total Total

NF EN ISO 6579

V 08 - 013 Método horizontal para a pesquisa de Salmonella spp.

(Dezembro 2002)

(29)

isolamento

(XLD) BK168HA – frasco 500g

BM08708 – 20 placas Ø 90 mm O segundo meio é a escolha do laboratório.

Meio de

sub-cultura

Reagente de

confirmação

Ágar Nutriente

Ágar citrato de ferro com 3 açúcares (Ágar TSI)

Ágar Nutriente à 2% BK185HA – frasco 500g Bm11808 – 50 tubos 18 mL Ágar TSI BK059HA – frasco 500g Total (4) Total (4) (6) Ágar Uréia (Christensen) (base)

Solução de uréia

-Meio para descarboxilação de β

galactosidase - -Solução tampão Solução d'ONPG -Meio de Voges-Proskauer (VP) Solução de creatina

Solução de 1-naftol em etanol Solução de hidróxido de potássio

-Meio triptona-triptofano Reagente de Kovacs Caldo Triptofano BK163HA – frasco 500g BM07608 – 50 tubos 3 mL -Total (4)

Ágar nutriente semi-sólido -

-Solução salina fisiológica -

-(1) Fórmula inclui 9,0 g/L de fosfato dissódico dodecaidratado (massa molar 358,14). (2) Fórmula inclui 3,56 g/L de fosfato dissódico anidro (massa molar 141,96).

(3) Fórmula inclui cloreto de magnésio anidro ao invés da forma hexaidratada descrita. (4) A triptona é uma peptona obtida por digestão pancreática da caseína.

(5) Sua qualidade intrínseca deve ser complementada por aquelas do ágar XLD e permitir a detecção de

Salmonella lactose + (incluindo typhi e paratyphi).

(6) Triptose 14 g/L ao invés de 20 g/L de peptona descrito.

Meio de

Meio semi-sólido de Rappaport- Ágar MRSV (ISO 6579)

NF EN ISO 6579/A1

V 08 – 013/A1 NF EN ISO 6579 – EMENDA 1 – Anexo D:

Pesquisa de Salmonella spp. em fezes de animais e em amostras

ambientais em estado de produção primária

(30)

Princípios: - Enriquecimento seletivo em anaerobiose à 41,5 ± 1ºC por 16 à 20 horas.

- Isolamento em 3 meios de cultura diferentes à 37 ± 1ºC por 20 à 24 horas.

- Confirmação por ensaios bioquímicos e sorológicos apropriados.

Meio de

enrique-cimento

Caldo Shigella Solução de Novobiocina - Suplemento Seletivo Novobiocina (10 mg) BS03308 – 10 flaconetes qsp 250 mL Suplemento Seletivo Novobiocina (40 mg) BS05608 – 8 flaconetes qsp 1L -Total

Meio de

isolamento

Ágar MacConkey

Ágar Xilose Desoxicolato (XLD) Ágar Entérico Hektoen (HE)

Ágar MacConkey BK050HA – frasco 500g Ágar XLD (ISO 6579) BK168HA – frasco 500g Ágar Hektoen BK067HA – frasco 500g Total (1) Total Parcial

Reagentes

de

confirmação

(ensaios

bioquímicos)

Ágar Nutriente

Ágar Triplo Açúcar-Ferro (TSI) Ágar Nutriente semi-sólido Ágar Uréia (base)

Solução de Uréia

Meio de descarboxilação de L-lisina

Meio de descarboxilação de L-ornitina

Reagente para ensaio de indol Meio triptona/DL-triptofano Reagente indol de Kovacs Reagente β galactosidase Solução tampão Solução salina Ágar Nutriente à 2% BK185HA – frasco 500g Ágar TSI BK059HA – frasco 500g -Total (1) Parcial (1)(3) -*Disponíveis no Brasil os meios desidratados.

NF EN ISO 21567

V 08 - 411 Método horizontal para a pesquisa de Shigella spp.

(Março 2005)

(31)

Ágar Citrato Christensen Caldo Mucato Caldo de ensaio Caldo controle -Anti-soro de Shigella spp. -

-(1) A triptona é uma peptona obtida por digestão pancreática da caseína. (2) Taxa de fucsina ácida à 40 mg/L, ao invés de 0,1g/L descrito.

(3) Taxa de triptona à 14 g/L ao invés de 20 g/L da peptona descrita.

(32)

Princípios: - Semeadura em superfície.

- Incubação à 35 ou 37ºC (1) e leitura dos resultados em 24 e 48 horas.

- Confirmação por pesquisa de coagulase.

Diluente

Ágar

Ágar Baird-Parker – meio base

Solução de telurito de potássio Emulsão de gema de ovo Solução de sulfametazina (sulfametazina, sulfadimidina) (3)

Meio completo

Ágar BAIRD-PARKER (base)

Emulsão de gema de ovo com telurito de potássio BS06008 – 10 flaconetes 50 mL Suplemento Seletivo Sulfametazina 25 mg BS02808 – 10 flaconetes qsp 500 mL

Meio completo BAIRD-PARKER gema de ovo telurito

BM01808 – 20 placas Ø 90 mm BM09108 – 120 placas Ø 90 mm Total (2) Total Total Total

Reagente de

confirmação

Caldo cérebro-coração Plasma de coelho Caldo Cérebro-Coração BK015HA – frasco 500g

Plasma de coelho liofilizado

BR00208 – 10 frascos / 20 reações

Parcial (4) Total

(1) A temperatura está sujeita a um acordo entre as partes interessadas e é indicada no relatório de ensaio. (2) A triptona é uma peptona obtida por digestão pancreática da caseína.

(3) Aditivo facultativo, justificado pela suspeita de presença de Proteus.

(4) Presença de peptona pancreática de gelatina ao invés de tecido animal digerido enzimaticamente.

NF EN ISO 6888-1

V 08 - 014-1 Método horizontal para a contagem de estafilococos coagulase +

(Staphylococcus aureus e outras espécies)

Parte 1: técnica utilizando ágar Baird-Parker

(Fevereiro 1999)

(33)

Princípios: - Semeadura em profundidade.

- Incubação à 35 ou 37ºC (1) e leitura por 18 à 24 horas e, se necessário,

prolongamento por mais 24 horas.

Diluente

Ágar

Meio de base – Ágar com plasma de coelho e fibrinogênio

Solução de telurito de potássio Solução de fibrinogênio bovino Solução de plasma de coelho e inibidor de tripsina

Meio completo

Suplemento Plasma de Coelho Fibrinogênio

Meio completo BAIRD-PARKER

BT00508 – kit 6 frascos 90 mL + 6 suplementos qsp 100 mL BT01008 - kit 6 frascos 190 mL + 6 suplementos qsp 200 mL BM06708 – 20 placas Ø 90 mm BM15908 – 20 placas Ø 55 mm Total (2) Total Total (2)

(1) A temperatura está sujeita a um acordo entre as partes interessadas e é indicada no relatório de ensaio. (2) A triptona é uma peptona obtida por digestão pancreática da caseína.

V 08 - 014-2 Método horizontal para a contagem de estafilococos coagulase +

(Staphylococcus aureus e outras espécies)

Parte 1: técnica utilizando ágar com plasma de coelho e fibrinogênio E

(Outubro 1999)

(34)

Princípios: - Enriquecimento seletivo em anaerobiose à 37ºC por 24 à 48 horas.

- Semeadura para meio seletivo depois de 24 horas a partir dos tubos que

apresentaram redução de telurito e depois de 48 horas para os outros.

- Incubação à 37ºC por 24 à 48 horas.

- Confirmação por uma reação de coagulase.

Diluente

Meio de

enrique-cimento

Caldo de Giolitti e Cantoni modificado – base concentração simples

Caldo de Giolitti e Cantoni modificado – base concentração dupla

Solução de telurito de potássio

Caldo GIOLITTI e CANTONI com Tween 80

Caldo GIOLITTI e CANTONI com Tween 80 BK159HA – frasco 500g -Total (1) Total (1)

-Ágar Solução

Ágar Solução (20 g/L)

Ágar bacteriológico tipo A

A1010HA – frasco 500g A1010GC – embalagem 5 Kg

Ágar bacteriológico tipo E

A1012HA – frasco 500g A1012GC – embalagem 5 Kg

Total Total

Ágar

Ágar Baird-Parker – meio base

Solução de telurito de potássio Emulsão de gema de ovo Solução de sulfametazina (sulfametazina, sulfadimidina) (3)

Meio completo

Emulsão de gema de ovo com telurito de potássio BS06008 – 10 flaconetes 50 mL Suplemento Seletivo Sulfametazina 25 mg BS02808 – 10 flaconetes qsp 500 mL

Meio completo BAIRD-PARKER gema de ovo telurito

BM01808 – 20 placas Ø 90 mm BM09108 – 120 placas Ø 90 mm Total (1) Total Total Total (1)

Reagente de

confirmação

Meio de base – Ágar com plasma de coelho e fibrinogênio

Solução de telurito de potássio Solução de fibrinogênio bovino Solução de plasma de coelho e

Suplemento Plasma de Coelho Fibrinogênio BS03408 – 8 flaconetes qsp 100 mL BS03808 – 1 flaconetes qsp 500 Total (1) Total

NF EN ISO 6888-3

V 08 - 014-3 Método horizontal para a contagem de estafilococos coagulase +

(Staphylococcus aureus e outras espécies)

Parte 3: pesquisa pelo método NPP para carga bacteriana baixa

(Junho 2003)

(35)

Meio completo BT00508 – kit 6 frascos 90 mL + 6 suplementos qsp 100 mL BT01008 - kit 6 frascos 190 mL + 6 suplementos qsp 200 mL BM06708 – 20 placas Ø 90 mm BM15908 – 20 placas Ø 55 mm Total (1)

Reagente de

confirmação

Caldo cérebro-coração Caldo Cérebro-Coração

Reagente de

confirmação

Plasma de coelho Plasma de coelho liofilizado

BR00208 – 10 frascos / 20 reações

Total

(1) A triptona é uma peptona obtida por digestão pancreática da caseína. (2) Aditivo facultativo, justificado pela suspeita de presença de Proteus.

(3) Presença de peptona pancreática de gelatina ao invés de tecido animal digerido enzimaticamente. *Disponíveis no Brasil os meios desidratados.

(36)

Princípios: - Enriquecimento seletivo à 37ºC por 6 ± 1 horas para produtos congelados

ou 41,5ºC para produtos frescos.

- Enriquecimento seletivo secundário à 41,5ºC por 18 ± 1 horas (1).

- Semeadura em dois meios sólidos, TCBS e um outro meio sólido apropriado,

em complemento do TCBS.

- Incubação do primeiro meio à 37ºC por 24 ± 3 horas e do segundo meio

seletivo segundo as recomendações do fabricante.

- Confirmação por meio de ensaios bioquímicos apropriados.

Meio de

enrique-cimento

Água salina peptonada alcalina

(EPAS) -

-Primeiro

meio de

isolamento

Ágar com tiossulfato, citrato, bile e

sacarose (TCBS) Ágar TCBSBK040HA – frasco 500g Total (2)

Meio de

sub-cultura

Ágar salino nutritivo (GNS) -

-Reagente

para

identificação

presuntiva

Reagente para a pesquisa de

oxidase -

-Reagente de

confirmação

Ágar salino com ferro e três

açúcares Ágar TSIBK059HA – frasco 500g Total

Meio salino para a detecção de

ornitina descarboxilase (ODC) -

-Meio salino para a detecção de

L-lisina descarboxilase (LDC) -

-Meio salino para a detecção de arginina diidrolase (ADH)

-

-Solução de ONPG Solução tampão

-

-Meio salino com triptofano Reagente de Kovacs

-

-Água peptona salina -

-Solução de cloreto de sódio -

-(1) A segunda etapa de enriquecimento é necessária para os produtos congelados, secos ou salinos.

(2) Os 8 g/L de bile de carne são decompostos da seguinte maneira: 5g/L de bile de carne bacteriológica e 3 g/L de cloreto de sódio.

NF ISO/TS 21872-1

V 08 - 064-1 Método horizontal para a pesquisa de Vibrio spp potencialmente

enteropatogênicos

Parte 3: pesquisa de Vibrio parahaemolyticus e Vibrio cholerae

(Junho 2007)

(37)

Princípios: - Enriquecimento seletivo à 37ºC por 6 ± 1 horas para produtos congelados

ou 41,5ºC para produtos frescos.

- Enriquecimento seletivo secundário à 41,5ºC por 18 ± 1 horas (1).

- Semeadura em dois meios sólidos, TCBS e um outro meio sólido apropriado,

em complemento do TCBS.

- Incubação do primeiro meio à 37ºC por 24 ± 3 horas e do segundo meio

seletivo segundo as recomendações do fabricante.

- Confirmação por meio de ensaios bioquímicos apropriados.

Meio de

enrique-cimento

Água salina peptonada alcalina (EPAS)

-

-Primeiro

meio de

isolamento

Ágar com tiossulfato, citrato, bile e

sacarose (TCBS) Ágar TCBSBK040HA – frasco 500g Total (2)

Meio de

sub-cultura

Ágar salino nutritivo (GNS) -

-Reagente

para

identificação

presuntiva

Reagente para a pesquisa de

oxidase -

-Reagente de

confirmação

Ágar salino com ferro e três

açúcares Ágar TSIBK059HA – frasco 500g Total

Meio salino para a detecção de ornitina descarboxilase (ODC)

-

-Meio salino para a detecção de L-lisina descarboxilase (LDC)

-

-Meio salino para a detecção de

arginina diidrolase (ADH) -

-Solução de ONPG Solução tampão

-

-Meio salino com triptofano Reagente de Kovacs

-

-Água peptona salina -

-Solução de cloreto de sódio -

-(1) A segunda etapa de enriquecimento é necessária para os produtos congelados, secos ou salinos.

V 08 - 064-2 Método horizontal para a pesquisa de Vibrio spp potencialmente

enteropatogênicos

Parte 2: pesquisa de outras espécies que não

Vibrio parahaemolyticus e Vibrio cholerae

(38)

Princípios: - Enriquecimento seletivo em dois meios: caldo PBS à 25ºC por 3 à 5 dias e

caldo ITC à 25ºC por 48 horas.

- Incubação dos dois meios à 30ºC, e análise depois de 24 e 48 horas.

- Confirmação por meio de ensaios bioquímicos, biotipagem, visando a

pesquisa de critérios de patogenicidade e de eventuais ensaios sorológicos apropriados.

Meio de

enrique-cimento

Caldo peptona, sorbitol e sais biliares

Caldo l'IrgasanTM_{, ticarcilina e} cloreto de potássio (ITC) – meio base

Solução de ticarcilina (1 mg/mL) Solução etanólica de l'IrgasanTM Solução de cloreto de potássio (100 mg/mL)

-Meio de

isolamento

Ágar cefsulodina, l'IrgasanTM_, novobiocina (CIN) – meio base Solução etanólica de l'IrgasanTM Solução de cefsulodina (15 mg/mL) Solução de novobiocina (2,5 mg/mL)

Ágar Salmonella/Shigella com desoxicolato de sódio e cloreto de cálcio (SSDC) Ágar Nutriente -Ágar Nutriente 2% BK185HA – frasco 500g -Total (1)

Meio e

reagentes de

identificação

Meio uréia-indol Reagente de Kovacs Ágar Kligler

Meio de descarboxilação de oxidase

Meio para descarboxilação de lisina

Meio para descarboxilação de

-Ágar de KLIGLER BK034HA – frasco 500g -Parcial (1)(2)

-NF EN ISO 10273

V 08 - 027 Método horizontal para a pesquisa de Yersinia enterocolitica

presumivelmente patogênica

(39)

(ramnose, sacarose, trealose ou xilose) à 100 mg/mL

Meio Citrato de Simmons Meio utilizado para os ensaios Tween-estearase

Ágar triptona-caseína-soja Ágar triptona-caseína-soja para a pesquisa de pirazinamidase Solução de sulfato de ferro III amoniacal para a revelação da pirazinamidase

Ágar triptona-caseína-soja com magnésio e oxalato – meio base Solução de cloreto de magnésio Solução de oxalato de sódio Solução de glicose

-Ágar tripto-caseína de soja (TSA)

BK047HA – frasco 500g -Total (1) -Total (1)

-Outros

reagentes

Solução de cloreto de sódio -

-Outros

reagentes

Solução de hidróxido de potássio e

solução de cloreto de sódio -

-Outros

reagentes

Caldo infusão de pele de bezerro -

-Outros

reagentes

Glicerina estéril -

(2) Presença de citrato férrico amoniacal (0,5 g/L) ao invés de sulfato de ferro (III) (0,2 g/L) preconizado; taxa de tiossulfato de sódio à 0,5 g/L ao invés de 0,3 g/L preconizado.

(40)

Princípios: - Semeadura das massas em placa ou tubos.

- Incubação em anaerobiose à 37 ± 1ºC por 24 e 48 horas (leitura final 48h).

Diluente

Se refere à parte da norma NF EN ISO 6887 correspondente ao produto à ser analisado. Solução peptona-salina Caldo Triptona-Sal

Total (1)

Ágar

Ágar Sulfito de Ferro Ágar TSC (base)

BK031HA – frasco 500g Total (1) (1) A triptona é uma peptona obtida por digestão pancreática da caseína.

(2) Se forem utilizados tubos, a incubação em jarra de anaerobiose não é necessária.

Princípios: - Semeadura em profundidade (eventualmente em superfície).

- Incubação em anaerobiose à 30ºC por 72 horas.

Diluente

Meio e

cultura

Meio MRS (de Man, Rogosa e

Sharpe) pH 5,7 Ágar MRSBK089HA – frasco 500g Parcial (1) (2) (1) De Man, J.C., Rogosa, M., and Sharpe, M.E. 1960. A medium for the cultivation of lactobacilli. J. App. Bacteriol., 23, (1): 130-135.

(2) Presença de polipetona (10 g/L) ao invés de caseína digerida enzimaticamente (10 g/L) preconizada e taxa de extrato (autolítico) de levedura à 5 g/L ao invés de 4 g/L preconizada.