Componentes Carboidratados do Líquen

Texto

(1)

MARIA DE LOURDES CORRADI CUSTÓDIO DA SILVA

Componentes Carboidratados do Líquen Sticta damaecornis (Sw.) Ach.

Tese apresentada ao curso de Pós-Gradua­

ção em Bioquímica da Universidade Fede­

ral do Paraná, para obtenção do grau de Mestre em Bioquímica.

C U R I T I B A

1 9 8 6

(2)

C O - O R I E N T A D O R : Prof. Dr. M a r c e l l o I a c o m i n i .

II

(3)

D E D I C A T Ó R I A

C o m c a r i n h o ao meu m a r i d o J o ã o F e r n a n d o

III

(4)

Aos p r o f e s s o r e s Dr. P h i l i p A l b e r t J a m e s G o r i n - o r i e n t a d o r e Dr. M a r c e l l o I a c o m i n i - c o - o r i e n t a d o r , pe lo i n c e n t i v o e s e m p r e d e d i c a d a a t e n ç ã o .

Aos p r o f e s s o r e s d o u t o r e s J o ã o B a t i s t a C h a v e s C o r r ê a , J o s e H a z e n c l e v e D u a r t e , F a n y R e i c h e r e J o s é D o m i n g o s F o n t a n a pela cci l a b o r a ç ã o nas a n á l i s e s de c r o m a t o g r a f i a 1T q u i d a - g a s o s a .

As a m i g a s M o n i c a H. C a v i c h i o l o G r o c h o c k i , S t e l a M. R o m a ­ nowski e M i r i a m Blümel p e l o e s p T r i t o de c o l e g u i s m o e g r a n d e amj_

zade.

A c o l e g a e a m i g a M a d a l e n a B a r o n p e l a s s u g e s t õ e s o f e r e c i ­ das d u r a n t e e s t e t r a b a l h o e as m o n i t o r a s T e r e z a C r i s t i n a Leal B r a n d ã o e E l i a n e de O l i v e i r a pela v a l i o s a a j u d a .

Aos p r o f e s s o r e s Dr. M a r c o A u r é l i o L a c o m b e F e i j Õ , M a r i a Eij

g e n i a R a b e l l o D u a r t e , G i s s e l i a R a b e l l o D u a r t e e c o l e g a s de estiu do S a n d r a M a r i a W a r u m b y Za nin, G e n y A p a r e c i d a C a n t o s , L u T s Pe - reira R a mo s, R o b e r t o P o n t a r o l o , E l i s a R a b e l l o D u a r t e e M a r i a Rj^

ta S i e r a k o w s k i pelo a g r a d á v e l c o n v í v i o no s e t o r de q u í m i c a de c a r b o i d r a t o s .

A J u l i e t a Pie pela p a c i ê n c i a e e x c e l e n t e s e r v i ç o de dati^

l o g r a f i a .

Ao L a u r o N o v a k pela a j u d a na c o n f e c ç ã o dos d e s e n h o s a p r e s e n t a d o s n e s t e t r a b a l h o .

IV

(5)

A todos os p r o f e s s o r e s e f u n c i o n á r i o s do D e p a r t a m e n t o de B i o q u í m i c a que, d i r e t a ou i n d i r e t a m e n t e , c o n t r i b u í r a m p a r a a r e ­ a l i z a ç ã o d e s t e t r a b a l h o .

Ao p r o f e s s o r E s t e f a n o F r a n c i s c o J a b l o n s k i , da PUC do Pana n a , pela a j ud a na c o l e t a do lí q u e n Sti-ata d a m a e c o r n i s .

Ao Dr. B e n g t L i n d b e r g , da U n i v e r s i d a d e de E s t o c o l m o - S u e - cia, pela d o a ç ã o e r á p i d o e n v i o do p a d r ã o v o l e m i t o l .

Aos Drs. M. M a z u r e k e L. H o g g e , of P l a n t B i o t e c h n o l o g y In stitute, N a t i o n a l R e s e a r c h C o u n c i l , S a s k a t o o n , C a n a d a , pe la s

- 13

an a l i s e s de C . n . m . r . e g . l . c . - m . s .

A e q u i p e da B i b l i o t e c a do S e t o r de C i ê n c i a s B i o l ó g i c a s .

A C A PES pe lo s u p o r t e f i n a n c e i r o .

V

(6)

PflGINA L i s t a de t a b e l a s ... VIII Li st a de f i g u r a s ... X L i st a de s i g l a s ... XI R e s u m o ... XIII Surtimary ... XV

I n t r o d u ç ã o ... 1

M a t e r i a i s e m é t o d o s ... 19

1. M é t o d o s g e r a i s ... 19

2. C a r a c t e r í s t i c a s g e r a i s do lí q u e n S t i c t a d a m a e c o r n i s (Sw.) A c h ... 22

3. I s o l a m e n t o dos a l d i t õ i s , o l i g o s s a c a r í d e o s e p o l i s - s a c a r í d e o s do lí q u e n S ti c t a d a m a e c o r n i s ( S w . ) A c h . . 23

3.1 E x t r a ç ã o b e n z e n o - e t a n o l ... 23

3.2 E x t r a ç ã o m e t a n o l - ã g u a ... 23

3.3 E x t r a ç ã o a q u o s a ... 25

3.4 E x t r a ç ã o a l c a l i n a ... 28

4. M e t i l a ç ã o dos o l i g o s s a c a r í d e o e p o l i s s a c a r í d e o s o b t i d o s do l í q u e n S ti ct a d a m a e c o r n i s (Sw.) A c h 32 4.1 M e t i l a ç ã o do ol i g o s s a c a r í d e o o b t i d o na e x t r a ç ã o me? t a n o l - a g u a ... 32

4.2 M e t i l a ç ã o dos p o l i s s a c a r í d e o s o b t i d o s na e x t r a ç ã o a q u o s a e a l c a l i n a ... 33

5. A n a l i s e dos p r o d u t o s de h i d r ó l i s e a c i d a d o s o l i g o ^ s a c a r í d e o s na f o r m a de a c e t a t o s de a l d i t õ i s ... 34

VI

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6. D e g r a d a ç ã o tipo Sm ith do p o l i s s a c a r T d e o ... 34

7. H i d r ó l i s e p a rc ia l do p o l i s s a c a r T d e o p r e c i p i t a d o em pH 8,5 o b t i d o do p r e c i p i t a d o de F e h l i n g da e x t r a ç ã o a l c a l i n a ... 35

R e s u l t a d o s e D i s c u s s ã o ... 37

1. C o m p o n e n t e s s o l ú v e i s no e x t r a t o m e t a n o l - a g u a ... 39

1.1 C a r a c t e r i z a ç ã o dos a l d i t Õ i s a r a b i n i t o l e m a n i t o l ... 39

1.2 C a r a c t e r i z a ç ã o do v o l e m i t o l ... 41

1.3 F r a c i o n a m e n t o dos c o m p o n e n t e s o l i g o s s a c a r i d e o s .... 44

1.4 C a r a c t e r i z a ç ã o da l a c t o s e ... 45

1.5 E s t u d o s p r e l i m i n a r e s das f r a ç õ e s D2 e D ^ ... 50

2. P o l i s s a c a r T d e o s da e x t r a ç ã o a q u o s a ... 54

2.1 P o l i s s a c a r T d e o s o b t i d o s do p r e c i p i t a d o de F e h l i n g .. 56

2 . 2 P o l i s s a c a r T d e o s o b t i d o s do s o b r e n a d a n t e de F e h l i n g . . 56

2.2 . 1 E s t u d o da f r a ç ã o p o l i s s a c a r T d i c a E ... 56

3. P o l i s s a c a r T d e o s da e x t r a ç ã o a l c a l i n a ... 60

3.1 P o l i s s a c a r T d e o s o b t i d o s do p r e c i p i t a d o de F e h l i n g .. 63

3.2 P o l i s s a c a r T d e o s o b t i d o s do s o b r e n a d a n t e de F e h l i n g . . 63

3.2 . 1 Es t u d o da f r a ç ã o p o l i s s a c a r T d i c a 6 ... 64

3 . 2.2 E s t u d o da f r a ç ã o p o l i s s a c a r T d i c a H ... 68

3.2.3 E s t u d o da f r a ç ã o p o l i s s a c a r T d i c a F ... 72

C o n c l u s ã o ... 78

R e f e r e n c i a s b i b l i o g r á f i c a s ... 79

VII

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T A B E L A P A G I N A 1 A n a l i s e por g. l.c. do e x t r a t o m e t a n o l - ã g u a 4:1 do

1 T q u e n S. dam a e c o r n i s ... 40 2 A n á l i s e por g.l.c. dos h i d r o l i s a d o s p r o v e n i e n t e s

dos o l i g o s s a c a r í d e o s o b t i d o s do l í q u e n S. d a ma e -

cornis ... 46

3 A n á l i s e por g . l . c . - m . s . dos a c e t a t o s de a l d i t Õ i s p a r c i a l m e n t e 0- m e t i l a d o s o b t i d o s do o l i g o s s a c a r í -

deos D-j ... 47 4 S i n a i s de 13C - n . m . r . e suas a t r i b u i ç õ e s p a r a o

d i s s a c a r í d e o l a c t o s e ... 48 5 A n á l i s e por g . l. c. dos a c e t a t o s de a l d i t Õ i s o b t i ­

dos dos p o l i s s a c a r í d e o s i s o l a d o s do c o m p l e x o

c ú p r i c o i n s o l ú v e l e do s o b r e n a d a n t e de F e h l i n g .. 55 6 A n á l i s e por g . l . c . dos a c e t a t o s de a l d i t Õ i s o b t i ­

dos da f r a ç ã o p o l i s s a c a r í d i c a E, e n c o n t r a d a no

s o b r e n a d a n t e de F e h l i n g da e x t r a ç ã o a q u o s a ... 57 7 A n á l i s e por g . l . c . - m . s . dos a c e t a t o s de a l d i t Õ i s

p a r c i a l m e n t e ^ - m e t i l a d o s o b t i d o s da f r a ç ã o p o l i s -

s a c a r í d i c a E, t o t a l m e n t e m e t i l a d a ... 59 8 A n á l i s e por g . l . c . - m . s . dos a c e t a t o s de a l d i t Õ i s

o b t i d o s dos p o l i s s a c a r í d e o s i s o l a d o s do c o m p l e x o

c ú p r i c o i n s o lú ve l e do s o b r e n a d a n t e de F e h l i n g 62 9 A n á l i s e por g. l . c . dos a c e t a t o s de a l d i t Õ i s o b t i ­

dos das f r a ç õ e s pol i s s a c a r í d i cas G e H do sobrena_

d a n t e de F e h l i n g da e x t r a ç ã o a l c a l i n a ... 65 VIII

(9)

10 A n a l i s e por g . l . c . - m . s . dos a c e t a t o s de a l d i t o i s p a r c i a l m e n t e ()-metilados o b t i d o s da f r a ç ã o G, t £

t a l m e n t e m e t i l a d a ... 66 11 A n á l i s e por g . l . c . - m . s . dos a c e t a t o s de a l d i t o i s

p a r c i a l m e n t e 0- m e t i l a d o s o b t i d o s da f r a ç ã o polijs

s a c a r T d i c a H, t o t a l m e n t e m e t i l a d a ... 70 12 A n á l i s e por g . l . c . - m . s . dos a c e t a t o s de a l d i t o i s

p a r c i a l m e n t e ^ - m e t i l a d o s o b t i d o s da f r a ç ã o polis^

s a c a r T d i c a F, t o t a l m e n t e m e t i l a d a ... 73

IX

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F I G U R A P A G I N A

13 -

1 E s p e c t r o s de C - n . m . r . dos a l d i t o i s v o l e m i t o l ob - tidos dos l i q u e n s S. d a m a e c o r n i s e D e r m a t o c a r p o n

m i n i a t u m ... 42 2 C r o m a t o g r a m a s o b t i d o s por g. l . c . dos p r o d u t o s de

a c e t i l a ç ã o d o v o l e m i t o l o b t i d o da S. d a m a e c o r n i s e

D. m i n i a t u m ... 43

13 -r

3 E s p e c t r o de C - n . m . r . do o l i g o s s a c a r T d e o l a c t o s e

do l í q u e n S. d a m a e co rn i s ... 49 4 E s p e c t r o de 1 3C - n . m . r . do c o m p o n e n t e o b t i d o da

S. d a m a ec or ni s ... 52 5 E s p e c t r o de 1 3C - n . m . r . do c o m p o n e n t e Dg o b t i d o da

S. d a m a e c o r n i s ... 53 6 E s p e c t r o de 1 3C - n . m . r . da f r a ç ã o p o l i s s a c a r í d i c a E

do l í q u e n S. d a m a ec or n is ... 61

13 -r

7 E s p e c t r o de C - n . m . r . da f r a ç ã o p o l i s s a c a r í d i c a G

o b t i d a do l í q u e n S. d a ma e c o r n i s ... 67

13

8 E s p e c t r o de C - n . m . r . da f r a ç ã o p o l i s s a c a r í d i c a H

do lí q u e n S. d a m a e co rn is ... '... 71

13

9 E s p e c t r o de C - n . m . r . da f r a ç ã o p o l i s s a c a r í d i c a F

do l í q u e n S. d a m a e c o r n i s ... 74

X

(11)

L I S T A D E S I G L A S

alc.

c.

C e t a v l o n cm

cm 13

3

C - n . m . r.

c. p.

d . i.

d2o

9

g .1.c.

g. 1. c .- m . s

h H z L M m m/e mg min mL mm nm p/p p . p.m.

Al cali n o . C o n c e n t r a ç ã o .

B r o m e t o de h e x a d e c i 1 t r i m e t i 1 a m Ô n i o . C e n t í m e t r o .

C e n t í m e t r o c ú b i c o

R e s s o n â n c i a n u c l e a r m a g n é t i c a de c a r b o n o tr ez e C r o m a t o g r a f i a em p a p e l .

D i â m e t r o in terno.

O x i d o de d e u t é r i o . G r a m a .

C r o m a t o g r a f i a 1 í q u i d a - g a s o s a .

C r o m a t o g r a f i a 1í q u i d a - g a s o s a e e s p e c t r o m e t r i a de mass a.

Hora H e r t z Li tro

M o l a r idade M e t r o

M a s s a / c a r g a . Mi 1 igra ma Mi nuto Mi 1 i 1 i tro Mi 1 í m e t r o N a n ô m e t r o P e s o / p e s o

P a r t e por m i l h ã o XI

(12)

r.p.m.

R I s.

s o b r e n . T

TMS v/v a 3 6

R o t a ç ã o por m i n u t o .

M o b i l i d a d e r e l a t i v a ao i n o s i t o l S e g u n d o .

S o b r e n a d a n t e . T e m p o de r e t e n ç ã o . T e t r a m e t i 1 s i 1 ano V o l u m e / v o l u m e Alfa.

Beta Del ta

XII

(13)

R E S U M O

O a s c o l T q u e n S ti c t a ã a m ae co rnis c o n t e m a l d i t õ i s , oligossa^

ca r T d e o s e p o l i s s a c a r í d e o s . Os o l i g o s s a c a r T d e o s , a s s i m c o m o os al d i t õ i s a r a b i n i t o l , m a n i t o l e v o l e m i t o l , f o r a m o b t i d o s p o r ex - tr aç ão m e t a n o l - a g u a s e n d o a m i s t u r a f r a c i o n a d a em c o l u n a s de c a £ v ã o - C e l i t e e c e l u l o s e . 01 i g o s s a c a r í d e o s com Rj 1,17; 0,51 (0,74) e 0,25 f o r a m o b t i d o s com r e n d i m e n t o s de 0 , 2 1 % , 0 , 1 1 % e 0, 0 4 % , r e s p e c t i v a m e n t e . 0 c o m p o n e n t e com Rj 1,17 (D-j) c o n t é m g a l a c t o s e e g l u c o s e na p r o p o r ç ã o m o l a r 1 :1 , e s t a n d o a g a l a c t o s e na extrern^

dade terminal não r e d u t o r a , li g a d a (1 4) a g l u c o s e . A t r a v é s de

13 ~ ~

C - n . m . r . , g . l . c . - m . s . , p o nt o de f u s a o e p o n t o de f u s a o da m i s ­ tura, esse c o m p o n e n t e foi i d e n t i f i c a d o co mo l a c t o s e ( 4 - 0 - 3 - g a l a £ topi ranos i 1 -J)-gl u c o s e ). 0s o u t r o s dois ol i goss a c a r T d e o s s ã o cons^

ti tu T d o s de uma e l e v a d a p r o p o r ç ã o de g l u c o s e l i g a d a s (1 -* 2).

Uma f r a ç ã o p o l i s s a c a r T d i c a o b t i d a por e x t r a ç ã o a q u o s a (E) foi solúvel em s o l u ç ã o de F e h l i n g e i s o l a d a c o m o s o b r e n a d a n t e do pH 12, q u a n d o t r a t a d a por C e t a v l o n . Com r e n d i m e n t o de 0 , 1 0 % es t e c o m p o n e n t e c o n t i n h a a r a b i n o s e (1 2%), m a n o s e (1 2%) g a l a c t o s e

(49%) e g l u c o s e (27%).

0 m a t e r i a l r e m a n e s c e n t e foi s u b m e t i d o a e x t r a ç ã o c o m ãlca^

li a 1009 e o e x t r a t o foi t r a t a d o com s o l u ç ã o de F e h l i n g . A f r a ­ ção p o l i s s a c a r T d i c a , solú ve l em F e h l i n g e i s o l a d a co mo s o b r e n a - dant e do pH 12 (rend. 0, 16 %, H) q u a n d o t r a t a d a por C e t a v l o n ,apre sentou a r a b i n o s e (15%), m a n o s e (5%), g a l a c t o s e (56%) e g l u c o s e

(24%). E s t e c o m p o n e n t e m o s t r o u a l g u m a s i m i l a r i d a d e com a q u e l e ob^

tido da e x t r a ç ã o a q u o s a (E), o que p o d e ser o b s e r v a d o a t r a v é s de

^ C - n . m . r . e pela p r e s e n ç a co mu m, de u n i d a d e s 3- g a l a c t o f u r a n o s T - XIII

(14)

ç ã o - g . 1 . c . -m. s .

Uma f r a ç ã o pol i s s a c a r i d i ca o b t i d a da e x t r a ç ã o alcalina,sjo lúvel em F e h l i n g p r e c i p i t o u em pH 8,5 (rend. 0 , 1 4 % , G) q u a n d o tr a t ad a com t a m p ã o b o r a t o e m o s t r o u - s e c o n s t i t u T d a de m a n o s e (22%), g a l a c t o s e (56%) e g l u c o s e (22%). E s t a f r a ç ã o se caracteri_

zou pela e l e v a d a p r o p o r ç ã o de u n i d a d e s a - g a1a c t o f u r a n o s í d i c a s , de a c o r d o com da dos de 13C - n . m . r . e m e t i l a ç a o .

A f r a ç ã o p o l i s s a c a r T d i c a F (rend. 1, 0 4 % ) o b t i d a da e x t r a ­ ção a l c a l i n a e in s o l ú v e l em s o l u ç ã o de F e h l i n g , foi p r e c i p i t a d a em pH 8,5 q u a n d o t r a t a d a por t a m p ã o b o r a t o e m o s t r o u - s e consti - tuída de m a n o s e (63%), g a l a c t o s e (21%) e g l u c o s e (16%). Es t u d o s da d e g r a d a ç ã o de S m i t h , i n d i c a r a m uma e l e v a d a p r o p o r ç ã o de g l i c £ rol (81%). Por h i d r ó l i s e acid a p a r c i a l , e s t e p o l i s s a c a r T d e o ap r e s e n t o u m a n o s e (71%), g a l a c t o s e (12%) e g l u c o s e (17%) e ap ós metj_

lação m o s t r o u co mo m a i o r c o m p o n e n t e o 2 , 3 , 4 - t r i -0- m e t i1 m a n i t o l , i n d i c a n d o p r e d o m i n a n t e m e n t e l i g a ç õ e s (1 6), no n ú c l e o da m a n a -

13 -

na. Com e s t u d o s de g . l . c . - m . s . , C - n . m . r . , d e g r a d a ç a o de Sm i t h e h i d r ó l i s e a c i d a parei a 1 -meti 1 a ç ã o , pode se r p r o p o s t a a galactc) m a n a n a uma e s t r u t u r a cujo n ú c l e o s e r i a c o n s t i t u í d o de m a n o s e l i ­ gada (1 6), parei a l m e n t e s u b s t i t u i d a com u n i d a d e s 6-D-gal acto- p i r a n o s i l , m a n o p i r a n o s i 1 e m a n o b i o s i l l i g a d a s em 4-C^-e/ou 2-_0 da ca d e i a p r i n c i p a l , c o n f o r m e E s t r u t u r a s 8-11 ( p á g i n a s 7 5 - 7 6 ) .

XIV

(15)

S U M M A R Y

The ascoli chen S ticta d a m a e c o r n i s c o n t a i n s a l d i t o i s and ol ig o- and p o l y s a c c h a r i d e s . Th e o l i g o s a c c h a r i d e s , 1 ike the alditois a r a b i n i t o l , m a n n i t o l , and v o l e m i t o l , w e r e o b t a i n e d by m e t h a n o l - w a t e r e x t r a c t i o n f o l l o w e d by s u c c e s s i v e f r a c t i o n a t i o n s on c o l u m n s of c h a r c o a 1 - C e 1 ite and cel 1 ul o s e . 0 1 i g o s a c c h a r i d e f r a c t i o n s havi ng Rj 1.17, 0.51 ( c o n t a m i n a t e d w i t h 0. 7 4 ) , and 0 . 2 5 w e r e i s o l a t e d in y i e l d s of 0.21, 0.11, and 0 . 0 4 % r e s p e c t i v e l y . T h a t w i t h Rj 1.17 c o n t a i n e d g l u c o s e and g a l a c t o s e in an e q u i m o l a r r a t i o wi th g1uc o s e as the r e d u c i n g end. Methyl a t i o n - g . 1 . c .- m . s . a n a l y s i s of the d i s a c c h a r i d e i n d i c a t e d th at g a l a c t o p y r a n o s y l u n i t s w e r e l i n k e d (1 -*• 4) to g l u c o s e and 13C - n . m . r . data w e r e c o n s i s t e n t w i t h a 8 - g l y c o s i d i c l i n k a g e and to the s t r u c t u r e of l a c t o s e (4-()-g-D-galatc- p y r a n o s y l - a g - D - g l u c o s e ) . This was c o n f i r m e d by the m . p . a n d m i x e d m.p. of a c r y s t a l l i n e p r e p a r a t i o n . T h e o l i g o s a c c h a r i d e s c o u l d not be p u r i f i e d by crys ta l 1 i zati on ,bu.t 13C - n . m . r . e v i d e n c e s h o w e d that they c o n t a i n e d , in a hi gh p r o p o r t i o n , (1 2 ) - l i n k e d g l u c o - py ranosyl s t r u c t u r e s wi th both a and 8- c o n f i g u r a t i o n s .

A p o l y s a c c h a r i de F r a c t i o n E, o b t a i n e d via h o t aqueous extrac^

tion, was solub.Te in F e h l i n g s o l u t i o n and. p u r i f i e d by v i r t u e of its s o l u b i l i t y at pH 12 in the p r e s e n c e of b o r a t e a n d C e t a v l o n . The

m a te ri al (0.1 0% y i e l d ) c o n t a i n e d a r a b i n o s e (1 2%), m a n n o s e (1 2% ), g a l a c t o s e (49%), and g l u c o s e (27%). The r e s i d u a l l i c h e n was e x t r a c t e d w i t h hot a q u e o u s alkali and s i m i l a r l y f r a c t i o n a t e d to give F r a c t i o n H (0.16% y i e l d ) c o n t a i n i n g a r a b i n o s e (15%), m a n n o s e (5%), g a l a c t o s e (56%), and g l u c o s e ( 2 4 % ) . It a l s o r e s e m b l e d c l o s e l y

13

F r a c t i o n E, by v i r t u e of t h e i r C - n . m . r . s p e c t r a and p r o d u c t s XV

(16)

p r o p o r t i o n s of £-gal a c t o f u r a n o s yl arid a - a r a b i nof u r a n o s y l unit s.

A p o l y s a c c h a r i d e F r a c t i o n G ( 0 . 1 4 % y i e l d ) p r e p a r e d via s u c c e s s i v e a l k a l i n e e x t r a c t i o n , t r e a t m e n t w i t h F e h l i n g s o l u t i o n , i s o l a t i o n fr om the s u p e r n a t a n t , and p r e c i p i t a t i o n w i t h C e t a v l o n at pH 8.5 in the p r e s e n c e of b o r a t e , was c o m p o s e d of m a n n o s e (22%), g a l a c t o s e (56%), and g l u c o s e (22%). ^ C - n . m . r . an d m e t h y - l a t i o n - g .1 .c .- m .s . da ta i n d i c a t e d th at it c o n t a i n e d a high p r o p o r t i o n of a - g a l a c t o f u r a n o s y l unit s.

A n o t h e r F r a c t i o n F (1 .04% y i e l d ) was i s o l a t e d , f o l l o w i n g a l k a l i n e e x t r a c t i o n and p r e c i p i t a t i o n of its i n s o l u b l e c o p p e r c o m p l e x f o r m e d w i t h F e h l i n g s o l u t i o n , by p r e c i p i t a t i o n with C e t a v l o n at pH 8.5 in the p r e s e n c e of b o r a t e . It c o n t a i n e d m a n n o s e (63%), g a l a c t o s e (21%), and g l u c o s e (16%) and a Sm i t h d e g r a d a t i o n (strong h y d r o l y t i c c o n d i t i o n s ) g a v e 7% of tetri toi c o r r e s p o n d i n g to the p r e s e n c e of 4-0- a n d / o r 4 ,6-di -jO-subs ti t u t e d h e x o p y r a n o s y l r e s i d u e s . Parti a l ' h y d r o l y s is of F r a c t i o n F g a v e a core p o l y s a c c h a r i d e c o n t a i n i n g m a n n o s e (71%), g a l a c t o s e ( 12%), and g l u c o s e (17%), w h i c h gave, on m é t h y l a t i o n a n a l y s i s , 2, 3, 4, - tri-i0-m e t h y I m a n n i toi a c e t a t e in a high y i e l d i n d i c a t i n g a m a i n chain w i t h p r e d o m i n a n t (1 6) - l i n k e d m a n n o p y r a n o s y 1 r e s i d u e s . T h es e s t u d i e s , c o m b i n e d w i t h t h o s e of m é t h y l a t i o n a n a l y s i s and 1 3C - n. m. r. s p e c t r o s c o p y c a r r i e d out on F r a c t i o n F, s h o w t h a t it is c o m p o s e d p r i n c i p a l l y of a g a l a c t o m a n n a n w i t h the a b o v e m a n n a n m a i n - c h a i n p r o b a b l y p a r t i a l l y s u b s t i t u t e d w i t h s i d e c h a i n s c o n t a i n i n g 8- D - g a l a c t o p y r a n o s y1 , m a n n o p y r a n o s y l , and m a n n o b i o s y l

\

units, as d e p i c t e d in S t r u c t u r e 8-11 (page 7 5 - 7 6 ) .

XVI

(17)

I N T R O D U Ç Ã O

A v e r d a d e i r a n a t u r e z a dos l i q u e n s sÓ foi r e c o n h e c i d a em 1868, q u a n d o o b i ó l o g o suic o S C H W E N D E N E R d e m o n s t r o u t r a t a r - s e de uma s i m b i o s e e n t r e alga e fu ngo, a s s o c i a d o s de tal f o r m a qu e p a ­ re ci am c o n s t i t u i r um ú n i c o v e g e t a l . 0 f u n g o q u a s e s e m p r e e n v o l v e 0 c o m p o n e n t e algal da a s s o c i a ç ã o e do c r e s c i m e n t o de a m b o s resul^

ta um talo, de f o rm a e e s t r u t u r a i n t e r n a c o n s t a n t e s e d e f i n i d a s , que p e r m i t e m o r e c o n h e c i m e n t o de g ê n e r o s e e s p é c i e s . A s a l g a s são se mp re c l o r o f T c e a s ou c i a n o f T c e a s e o f u n g o p o d e ser f i c o m i c e t o , a s c o m i c e t o , b a s i d i o m i c e t o ou um f u n g o i m p e r f e i t o ( 4 3).

Na m a i o r p a r t e dos e s t u d o s q u T m i c o s de i T q u e n s a a t e n ç ã o é v o l t a d a para dois g r u p o s de s u b s t a n c i a s : a) c o n s t i t u i n t e s car- b o i d r a t a d o s e p r o t e i c o s s o l ú v e i s em ag ua e b) os c h a m a d o s ãci - dos 1 i q u e n i cos (17).

D e n t r e os c o n s t i t u i n t e s c a r b o i d r a t a d o s s o l ú v e i s em agua e n c o n t r a m - s e os p o l i Õ i s , a l d o s e s e c e t o s e s , g l i c o s i l - a l d i t Ó i s , 01 i g o s s a c a r T d e o s não r e d u t o r e s e r e d u t o r e s e p o l i s s a c a r T d e o s .

S M I T H e c o l a b o r a d o r e s ( 4 7 , 7 7 ) e s t u d a r a m e x t e n s i v a m e n t e 0 m e t a b o l i s m o de c a r b o i d r a t o s em l i q u e n s e veri f i c a r a m qu e a i dejn ti da de do c a r b o i d r a t o , t r a n s f e r i d o c o m o n u t r i e n t e do f i c o b i o n t e ao m i c o b i o n t e , d e p e n d e do g ê n e r o de al ga p r e s e n t e . Em l i q u e n s c o n t e n d o c i n c o g ê n e r o s d i f e r e n t e s de c l o r o f T c e a s (algas v e r d e s ) , os c a r b o i d r a t o s p r o d u z i d o s por f o to s s í n t e s e sã o t r a n s f e r i d o s ao fu ngo como p o l i õ i s , s e nd o ribitol em T r e b o u x i a , M y r m e e i a e Coocomyxat er i t r i t o l em T r e n t e f o l i a e s q r b i t o l em H y a l o o o o o u s.Em al gu ns l i q u e n s cu jos f i c o b i o n t e s são c i a n o f T c e a s co mo N o s t o c ,

(18)

alga. U s a n d o t é c n i c a s com c a r b o n o r a d i o a t i v o , os a u t o r e s a c i m a e s t u d a r a m o m e t a b o l i s m o nos s i m b i o n t e s , i s o l a d a m e n t e , e descobrj^

ram que a J - g l u c o s e i n i c i a l m e n t e f o r m a d a no f i c o b i o n t e N o s t o o e liberada ao f u ng o e c o n v e r t i d a em JD-manitol, e n q u a n t o q u e o ribi^

tol f o r m a d o na alga v e rd e T r e b o u x i a é t r a n s f o r m a d o em J)-manitol e J)-arabi ni tol no f u n g o ( 77 ,78 ). Ma is r e c e n t e m e n t e , S H I B A T A e KOMIYA ( 44 ) e s t u d a r a m o m e t a b o l i s m o de p o l i õ i s em R a m a l i n a crassa e Ra m a l i n a s u b b r e v i u s c u l a, a s s i m co mo em seus f i c o b i o n t e s e m i c o b i o n t e s , a t r a v é s de c r o m a t o g r a f i a 1T q u i d o - g a s o s a ap os tri- f1u o r o a c e t i1 ação dos m e t a b o l i t o s .

L I N D B E R G e c o l a b o r a d o r e s (51 ) e x a m i n a r a m s e s s e n t a e s p é - cies de l i qu en s; to das a p r e s e n t a r a m J - m a n i t o l e 90% d e l a s tam - bém c o n t i n h a m J - a r a b i n i t o l , s e n d o que e s t e ú l t i m o po l i o l o c o r r e em todos os l i q u e n s da o r d e m G y m n o c a r p e a e e x a m i n a d o s , p o r é m não nos l i q u en s da o r d e m P y r e n o c a r p e a e . N I S H I K A W A e c o l a b o r a d o r e s (63) v e r i f i c a r a m que, a t r a v é s da a n á l i s e em c r o m a t o g r a f i a l T q u i d o - g a - sosa do e x t r a t o m e t a n o l - ã g u a a q u e n t e , de o i t o l i q u e n s e x a m i n a - dos, o c o n t e ú d o de a r a b i n i t o l p r e d o m i n a s o b r e o de m a n i t ó l em se te deles. Mais r e c e n t e m e n t e , G O RI N e I A C 0 M I N I ( 4 0 , 29) e n c o n t r a ­ ram as s e g u i n t e s p e r c e n t a g e n s de m a n i t o l e a r a b i n i t o l , r e s p e c t i ­ va me n t e , nos l i q u e n s : C l ad on ia a l p e s t r i s ( 0 , 3 2% , 1, 4 % ) , C l a d o n i a confusa (0,4%, 2 , 2 % ) , C l ad on ia a m a u r o c r a e a ( 0,4%, 1 , 5%) ,Actinogyra m u e hl en be r gii (0,6%, 1,2%), P e l t i g e r a a p h t h o s a (2,4%, 2 , 8 % ) ,

Usnea sp (0,04%, 4 , 0% ), L e t h a r i a v ul p i n a ( 0 ,4%, 2, 5% ). P a r m e l i a sulcata (0,3%, 2,5%) e S t e r e o c a u l o n p a s c h a l e ( 0 ,8%, 2 , 5 % ) . A l é m desses dois p o l i õ i s , ou t r o s t a m b é m f o r a m e n c o n t r a d o s e m l i q u e n s , como: g l i c e r o l , e r i t r i t o l , r i b i t o l , mi o-i nosi tol , s o r b i t o l , xili_

tol (12,73), s i f u l i t o l ( l - d e o x i - J ) - g l i c e r o - J ) - t a l o - h e p t i t o l ( 50 ) e vo l e m i t o l ( D - g l i c e r o - D - t a l o - h e p t i t o l ) (5 1 , 48)•

De n t r e os m o n o s s a c a r T d e o s li v r e s e n c o n t r a d o s em l i q u e n s estão: g l u c o s e , g a l a c t o s e , m a n o s e , f r u t o s e , t a g a t o s e , a r a b i n o s e . x i l o se , l i xo se e r a m n o s e ( 1 2 , 7 4 ).

(19)

-3-

A p a r t i r dos e x t r a t o s de L i c h i n a p y g m a e a 3 P a r m e l i a saxatilis e X a n t h o r i a 3 P U EYO ( 7 1 , 7 2 ) d e t e c t o u a g l u c o s e por cro m a t o g r a f i a em pa pel. S M IT H e c o l a b o r a d o r e s ( 4 7 , 7 7 ) r e g i s t r a r a m a p r e s e n ç a d e ss e a ç ú c a r nos f i c o b i o n t e s N o s t o o e Scy t on em a. Em 1973, N I S H I K A W A e ou t r o s ( 63 ), d e t e c t a r a m a g l u c o s e em m a i s se^

te e s p é c i e s de l i q u e n s a t r a v é s de c r o m a t o g r a f i a 1T q u i d o - g a s o s a . 0 m o n o s s a c a r í d e o g a l a c t o s e foi i d e n t i f i c a d o por P Ü E Y0( 71 72 ) nos liquens P. sa xa ti li s e U m b i l i o a r i a p u s t u l a t a e p o s t e r i ­ o r m e n t e em X an t h o r i a parientina. L E S T A N G - L A I S N E ( 4 6 ) a s s i n a l o u a p r e s e n ç a de ssa h e x o s e em L ic h i n a pygmaea. A c r o m a t o g r a f i a em papel foi o m é t o d o e m p r e g a d o para a a n á l i s e d e s s e a ç ú c a r . A ma- nose foi e n c o n t r a d a livre pela p r i m e i r a vez po r S O L D B E R G ( 8 3 ) , no lí qu en Le ca n o r a myrinii.

Um g r a n d e n ú m e r o de i n v e s t i g a ç õ e s tem m o s t r a d o a p r e s e n ­ ça de f r u t o s e l i vr e em li q u e n s . D e n t r e e s se s e n c o n t r a m - s e L. p y g m a e a 3 X . p a r i e t i n a 3 C et ra ri a i s l a n d i c a 3 C l a d o n i a c r i s p a t a 3 Cladonia r a n g i f e r i n a 3 Cladon ia s qu am os a 3 P. a p h t h o s a 3 P.

n i g r i p u n o t a t a s U m b i li oa r ia c a r o l i n i a n a e U s ne a r u b e s c e n s. A crc>

m a t o g r a f i a em papel e c r o m a t o g r a f i a 1T q u i d o - g a s o s a f o r a m os m é ­ todos a p l i c a d o s para a c o n f i r m a ç ã o d e s s e a ç ú c a r ( 7 1 , 7 2 , 4 6 , 8 4 .).

L I N D B E R G ( 4 8 ) e s t u d a n d o o l í q u e n R o c c e l l a l i n e a r i s 3 v e ­ r i f i co u que ele c o n t i n h a t a g a t o s e e g a l a c t o s e . A c e t o s e foi ideji t i f i c a d a por c r o m a t o g r a f i a em papel a t r a v é s de seu R ^ , p e l a c o r v e r m e l h a o b t i d a da r e v e l a ç ã o com r e s o r c i n o l - a c i d o c l o r i d i c o e pela cor a m a r e l a com f o s f a t o de p - a n i s i d i n a . A g a l a c t o s e foi i d e n t i f i c a d a na f o r m a d e r i v a t i z a d a de c r i s t a i s meti 1f e n i1h i d r a - zona, com po nto de f u s ã o e n t r e 1859 a 1879. E s s e s m o n o s s a c a r T - deos t a m b é m f o r a m d e t e c t a d o s por c r o m a t o g r a f i a em p a p e l , no l í ­ quen R o cc el la fucoformis.

E m b o r a haja r e g i s t r o s das p r e s e n ç a s de l i x o s e em St . paschale e r a m n o s e em R i v u l a r i a b u l l a t a (74 ) l i v r e s , e s t a s a i n ­ da d e v e m ser c o n f i r m a d a s .

(20)

0 p r i m e i r o g l i c o s i l - a 1 ditol i s o l a d o de l T q u e n foi a u m b i H cina ( 5 4 ) , c o m p o s t a de uma u n i d a d e de 3- D - g a l a c t o f u r a n o s e ( 5 5, 56, 57) em l i g a ç ã o (1 -> 2) com uma u n i d a d e de £ - a r a b i ni tol . 0 lí_

quen i n i c i a l m e n t e u s a d o para 0 i s o l a m e n t o d e s s e c o m p o s t o foi a U.

p u s t u l a t a, se ndo p o s t e r i o r m e n t e a m e s m a s u b s t â n c i a e n c o n t r a d a nos liqu en s Usnea vigida, H a e m a t o m m a v e n t o s u m e C. i s l a n d i o a (51). Re c e n t e m e n t e , em t r a b a l h o de tese ( 5 ) B A R O N i s o l o u a u m b i l i c i n a do S teveoe au lo n v am u l o s u m a p a r t i r do e x t r a t o m e t a n o l - ã g u a 4:1 . Pela p a s s a g e m d e s s e e x t r a t o em c o l u n a de c e l u l o s e , a s u b s t â n c i a foi o b t i d a com 0.8 6% de r e n d i m e n t o e teve sua e s t r u t u r a c o n f i r m a ­ da pela c o m p a r a ç ã o de seu e s p e c t r o de r e s s o n â n c i a n u c l e a r magnétj_

ca de c a r b o n o 13 ( 1 3C - n . m . r . ) com 0 e s p e c t r o da u m b i l i c i n a i s o l a ­ da do lí q u e n A. m u e h l e n b e v g i i ( 2 9 ) . Esta t é c n i c a é útil para uma i d e n t i f i c a ç ã o p r e l i m i n a r de c a r b o i d r a t o s em l i q u e n s .

P U EY O (7 0 ) is ol ou o u t r o g l i c o s i l a l d i t o l do l í q u e n Peltigeva h o v i z o n t a l i s, 0 qual d e n o m i n o u pel t i g e r o s i deo . L I N D B E R G e c o l a b o r a d o r e s ( 5 3 ) e s c l a r e c e r a m a e s t r u t u r a d e s s e c o m p o s t o c o ­ mo 3 - 0 - 3 - £ - g a l a c t o f u r a n o s i 1 - £ - m a n i t o l ( p on to de f u s ã o = 1619 a 1639; {a>Q= -649). O u t r a s e s p é c i e s de P e l t i g e v a f o r a m e s t u d a d a s ( 5 3 ) , p o ré m ma is n e n h u m a a p r e s e n t o u e s s e c o m p o n e n t e . L I N D B E R G e c o l a b o r a d o r e s ( 5 3 ) , e s t u d a n d o 0 l í q u e n P. a p h t h o s a (L,) W i l l d . , i s o l a r a m o u t r o c a r b o i d r a t o de b a ix o pe so m o l e c u l a r c o n s t i t u í d o de g l u c o s e e m a n i t o l , s e n d o sua e s t r u t u r a e s c l a r e c i d a c o m o 3-_0-3-£ - g l u c o p i r a n o s i1- £ - m a n i t o l e c o m p r o v a d a a t r a v é s de s í n t e s e e p o s t e ­ rior r e d u ç ã o do 4 - 0 - 3 - D - g l u c o p i r a n o s i 1 - D - m a n o s e . Tal g l i c o s i l - a l - ditol t a m b é m foi e n c o n t r a d o em o u t r a s oi to e s p é c i e s de P e l t i g e v a

( 53 ) •

Duas o u tr as s u b s t â n c i a s f o r a m i s o l a d a s do l í q u e n X.

p avietina ( 22 ) : 0 - a - D - g a l ac to pi ranosi 1 -(1 -*■ 6) - £ -3-£-gal ac topi ra^

nosi 1 -(1 1 ) -D-gl icerol e 1 - 0 -3-D-gal ac topi ra n o s i 1 -D-ri bi tol . A pr im ei ra , por h i d r ó l i s e ac id a, p r o d u z i u £ - g a l a c t o s e e g l i c e r o l nas p r o p o r ç õ e s de 2:1, s e n d o seu p o nt o de f u s ã o ( 1 9 0 9 - 1 9 3 9 ) e infr a -

(21)

-5-

v e r m e l h o i d ê n t i c o s a uma a m o s t r a a u t ê n t i c a de 0-a-_D-gal ac to pi ra- nosil-(l -»• 6) - 0 - 8 - J - g a l a c t o p i r a n o s i 1 -(1 -* 1 ) -D-gl icerol , q u e ê um c o m p o n e n t e c o m u m em g 1 i c o l i p T d e o s ( 59 ). A s e g u n d a s u b s t â n c i a ({a}= -3 9), que por h i d r ó l i s e a c id a f o r n e c e u q u a n t i d a d e s e q u i m o - l e c u l a r e s de J)-galactose q ribitol,foi a n a l i s a d a por r . n . m ., oxi da^

ção com m e t a - p e r i o d a t o de s o d i o e f i n a l m e n t e t e v e sua e s t r u t u r a c o n f i r m a d a a t r a v é s de s T n t e s e .

Os d i s s a c a r í d e o s não r e d u t o r e s s a c a r o s e ( a - ^ - g l u c o p i r a n o s i1 (1 -»• 2 ) -8-D-f r u t o f u r a n o s e ) e t r e a l o s e (a-D-gl uc opi rano s i 1 - (1 1) a - D - g l u c o p i r a n o s e ) f o r a m i s o l a d o s de v á r i o s i T q u e n s . L I N D B E R G e ou tros (55 ) e s t u d a n d o a U. p u s t u l a t a i s o l a r a m em p e q u e n a s q u a n ­ tida de s a - a - t r e a l o s e e s a c a r o s e . E s sa s d u a s s u b s t â n c i a s não ti - nham sido, até en t ã o , i s o l a d a s de l i q u e n s , mas p e l o f a t o da saca_

rose o c o r r e r q u as e que u n i v e r s a l m e n t e no r e i n o v e g e t a l e a t r e a ­ lose ser um c o n s t i t u i n t e c o m u m dos f u n g o s , e s s e r e s u l t a d o não foi t o t a l m e n t e s u r p r e e n d e n t e aos a u t o r e s . E s se s dois a ç ú c a r e s ta m b é m f o r a m e n c o n t r a d o s em C. rangiferina, U m b i l i c a r i a r i g i d a , H. ventosum, C. i s l a n d i c a, L e c a n o r a atra (51 ) e D e r m a t o c a r p o n minia tu m (48 ). A s a c a r o s e foi a i nd a i s o l a d a do l í q u e n P.aphthosa

(52 ) e A. m u e h l e n b e r g i i (29 )• T r e a l o s e foi e n c o n t r a d o no S t. ramulosum ( 5 ), a s s i m co mo no b a s i d i o l í q u e n Cora p a v o n i a ( 92 ) , neste ú l t i m o em p e r c e n t a g e m e l e v a d a (4,4%) q u a n d o c o m p a r a d o as de o u tr os liqu en s.

Um d i s s a c a r í d e o e um t r i s s a c a r í d e o , a p a r e n t e m e n t e r e d u to re s, fo ra m is ol a d o s dos l i q u e n s R o o e e l l a h y p o m e c h a, R. linearis e R.

fucoformis (48 ), os qu ai s, por h i d r ó l i s e á c i d a , d e r a m d o i s a ç ú ­ cares r e d u t o r e s , uma a l d o s e e uma c e t o s e , i d e n t i f i c a d a s c r o m a t o - g r a f i c a m e n t e co mo g a l a c t o s e e t a g a t o s e . Pe la i n t e n s i d a d e dos

"spots", as p r o p o r ç õ e s a l d o s e : c e t o s e f o r a m e s t i m a d a s em 1 : 1 no d i s s a c a r í d e o e 2:1 no t r i s s a c a r í d e o . A c r e d i t a - s e que uma investj^

g a ção mais d e t a l h a d a , do p o n t o de v i s t a e s t r u t u r a l d e s s e s oligos^

(22)

s a c a r T d e o s , seja n e c e s s á r i a .

V a l i o s a a j ud a para o e s t u d o dos c o m p o n e n t e s q u í m i c o s dos liquens foi da da a t r a v é s de r e v i s õ e s e s c r i t a s po r C H I C I T A C U L B E R SON (1 2, 11,13 )> P U E Y O (7 3,7 4 , 7 5 ) e G O RI N e c o l a b o r a d o r e s (24).

D e sd e 0 t r a b a l h o p i o n e i r o de B E R Z E L I U S em 1815, v á r i o s pjo 1 i s s a c a r T d e o s de l i q u e n s f o r a m e s t u d a d o s . Os p o l i s s a c a r T d e o s sc) lúveis em ág ua são c l a s s i f i c a d o s q u i m i c a m e n t e em três g r u p o s : hei m o g l u c a n a s , h e t e r o g l i c a n a s e g l i c o p e p t i d e o s . As h o m o g l u c a n a s f o ­ ram as e s p é c i e s ma is e s t u d a d a s ; a p e s a r d i s s o , h e t e r o g l i c a n a s e g l i c o p e p t i deos t a m b é m e n c o n t r a m - s e d i s t r i b u í d o s em l i q u e n s .

A fim de d e t e r m i n a r a o r i g e m dos p o l i s s a c a r T d e o s na a s s o ­ ciação a l g a - f u n g o , T A K A H A S H I e col a b o r a d o r e s ( 8 7 ) em 1 979 , estjj d a r a m al g u n s iT q u e n s , a s s i m co mo seus m i c o b i o n t e s e f i c o b i o n t e s . At r a v é s de t é c n i c a s a d e q u a d a s el es s e p a r a r a m os d o i s o r g a n i s m o s da a s s o c i a ç ã o e os c u l t i v a r a m em m e i o s p r ó p r i o s . Ap os e s t u d o s de s o l u b i l i d a d e em água, i n f r a v e r m e l h o (I.V.), r o t a ç ã o e s p e c i f i c a e c o m p o s i ç ã o em a ç ú c a r e s ,v e r i f i c a r a m que as e s t r u t u r a s p a r c i a i s as^

sim d e t e r m i n a d a s , dos p o l i s s a c a r T d e o s i s o l a d o s dos m i c o b i o n t e s , a p r e s e n t a v a m s e m e l h a n ç a s com os p o l i s s a c a r T d e o s dos i T q u e n s o r i ­ ginais. No f u ng o c u l t i v a d o em l a b o r a t ó r i o , o b t i d o a p a r t i r do 1_T quen P a rm el ia c a p e r a t a, foi i s o l a d a uma g l u c a n a i n s o l ú v e l em água fria, i d ê n t i c a a a g l u c a n a c o n t e n d o l i g a ç õ e s (1 ■+ 3) e (1 -*

4) numa r e l a ç ã o m o l a r 1 :1 , e n c o n t r a d a no i T q u e n o r i g i n a l . A m e s ­ ma s e m e l h a n ç a foi o b s e r v a d a c o m as g l u c a n a s i n s o l ú v e l e solúvel o b t i da s do m i c o b i o n t e R am a l i n a c r a s s a, p r a t i c a m e n t e i d ê n t i c a s as gl u c a n a s do iT qu en o r i g i n a l . Por o u t r o lado, os p o l i s s a c a r T d e o s i s ol ad os dos f i c o b i o n t e s a p r e s e n t a r a m c a r a c t e r T s t i c a s b e m distiji tas d a q u e l e s dos i T q u en s o r i g i n a i s .

As p r i m e i r a s c o n s t a t a ç õ e s da p r e s e n ç a de p o l i s s a c a r T d e o s f o ra m f e i t a s q u a n d o B E R Z E L I U S e s t u d a n d o a C. i s l a n d i c a i s o l o u um p o l i s s a c a r T d e o a t r a v é s de sua p r e c i p i t a ç ã o por r e s f r i a m e n t o do

(23)

-7-

ex t r a t o a q u o s o a q u e n t e ( 6 ). Em 1947, M E Y E R e G U R T L E R ( 6 6) ve r i f i c a r a m que a l i q u e n a n a , a s s i m d e n o m i n a d a , c o n s t i t u í d a u n i c a - m e nte de £ - g l u c o s e , a p r e s e n t a v a .uma r o t a ç ã o e s p e c í f i c a de + 8 9 , c o n s i s t e n t e com a c o n f i g u r a ç ã o 6 e por a n á l i s e dos p r o d u t o s de m e t i l a ç ã o ap e n a s l i g a ç õ e s (1 3) e (1 4) m o s t r a v a m e s t a r p r e ­

sentes, as quais f o r a m c o n f i r m a d a s na p r o p o r ç ã o m o l o r de 3:7, pe^

los dados de o x i d a ç ã o q u a n t i t a t i v a co m p e r i o d a t o . Essa e s t r u t u r a foi c o m p r o v a d a por C H A N D A e c o l a b o r a d o r e s ( 10) que p u r i f i c a r a m a l i q u e n a n a ( E s t r u t u r a 1) via seu c o m p l e x o c ú p r i c o insolúvel,fo_r ma do com s o l u ç ã o de Fe h l i n g . A t r a v é s de h i d r ó l i s e á c i d a p a r c i a l , s e p a r a ç ã o e i d e n t i f i c a ç ã o dos o l i g o s s a c a r í d e o s r e s u l t a n t e s por coluna de c a r v ã o - c e l i t e . PEAT e c o l a b o r a d o r e s ( 67) s u g e r i r a m que a ca d e i a da l i q u e n a n a s e ri a c o n s t i t u í d a , p r e d o m i n a n t e m e n t e , de 3 u n i d a d e s de 6- D - g l u c o p i r a n o s e 4-0- s u b s t i t u idas r e g u l a r m e n t e

' “ \

i n t e r c e p t a d a s por uma l i g a ç ã o (1 -*• 3).

-3- D - G l c p - ( l -*• 3) -p-D-Gl cp - (1 + 4 ) -3-D-G1 c p - (1 + 4)-

E s t r u t u r a 1

PE RL IN e S U Z U K I (6 9 ) e s t u d a r a m a l i q u e n a n a p o r h i d r ó l i s e e n z i m ã t i c a u t i l i z a n d o as e n z i m a s c e l u l a s e e l a m i n a r i n a s e e verifi^

caram, pelos f r a g m e n t o s f o r m a d o s , que a c o n s t i t u i ç ã o b á s i c a da mo lécula era s e m e l h a n t e ã p r o p o s t a a c im a, o que t a m b é m foi confirina do pelos p r o d u t o s f o r m a d o s a t r a v é s da d e g r a d a ç ã o de S m i t h , i n c o r ­ p o r a n d o c o n d i ç õ e s h i d r o l í t i c a s s u a v e s ( 1 8 ).

E n q u a n t o M E Y E R e G U R T L E R e s t u d a v a m a l i q u e n a n a , v e r i f i c a - ram que na s o l u ç ã o s o b r e n a d a n t e h a v i a uma m i s t u r a de p o l i s s a c a r í - deos, que por h i d r ó l i s e á c i d a p r o d u z i a g l u c o s e , g a l a c t o s e e m a n o ­ se; esses dois ú l t i m o s a ç ú c a r e s em m e n o r e s q u a n t i d a d e s ( 61 ) • E s ­ sa m i s t u r a foi d e n o m i n a d a de i s o l i q u e n a n a . C H A N D A e c o l a b o r a d o r e s (1 0) s e p a r a r a m a i s o l i q u e n a n a da l i q u e n a n a por p r o c e s s o s repeti ti vos

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Referências

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